Клинико-генетические аспекты метаболизма оксида азота у детей с пищевой аллергией Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

ЭКСПЕРЕМЕНТАЛЬНАЯ И КЛИНИЧЕСКАЯ АЛЛЕРГОЛОГИЯ

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2017 УДК 616.056.43-02:613.2]-078.33

Шуматова Т.А., Приходченко Н.Г., Ни А.Н., Катенкова Э.Ю., Зернова Е.С., Григорян Л.А., Шишацкая С.Н.

КЛИНИКО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МЕТАБОЛИЗМА ОКСИДА АЗОТА У ДЕТЕЙ С ПИЩЕВОЙ АЛЛЕРГИЕЙ

Тихоокеанский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации, 690002, г Владивосток, Россия

С целью оценки фекального уровня NO у детей с пищевой аллергией (ПА) и определения значения полиморфизмов G894T и Т786С в гене eNOS в развитии ПА у детей проведено клинико-лабораторное обследование детей с ПА к белку коровьего молока (n = 39). Группу сравнения составили здоровые дети (n = 30). В ходе исследования все пациенты были разделены на 2 подгруппы: пациенты с IgE-зависимой ПА (n = 18), имеющие повышенный уровень IgE (Me = 88,25; 95% CI: 52,18—184,98) и специфические IgE к БКМ; пациенты с IgE-независимой ПА (n = 21), у которых уровень общего и специфических IgE был сопоставим с контрольной группой и достоверно ниже, чем в подгруппе 1А (Me = 15; 95% CI: 7,91—23). Полученные нами данные убедительно свидетельствуют об активном участии нитрокси-дергических механизмов в развитии ПА у детей. Исследование показало, что фекальный уровень метаболитов NO у детей с IgE-зависимой ПА достоверно превышал показатели контрольной группы (336,61 ± 0,89 мкмоль/л и 270,42 ± 0,89 мкмоль/л, p = 0,0164), у детей с IgE-независимой ПА метаболиты NO были достоверно ниже (226,32 ± 0,89 мкмоль/л, p = 0,0074). Достоверной ассоциации развития IgE-зависимой и IgE-независимой Па с наличием аллеля Т генотипа G894T в гене eNOS выявлено не было. Проведенное нами исследование выявило ассоциацию полиморфных локусов СС 786 eNOS и TC 786 в гене eNOS с увеличением риска развития пищевой аллергии у детей (OR — 7,846 (95% ДИ; 1,897—32,45), p = 0,598). При этом носительство гомозиготного варианта (СС) 786 eNOS увеличивает риск развития IgE-независимой ПА в 8,8 раза и не влияет на риск IgE-зависимой ПА у детей.

Ключевые слова: оксид азота; эндотелиальная нитроксидсинтаза; полиморфизмы eNOS; пищевая аллергия; кишечник; дети.

Для цитирования: Шуматова Т.А., Приходченко Н.Г., Ни А.Н., Катенкова Э.Ю., Зернова Е.С., Григорян Л.А., Шишацкая С.Н. Клинико-генетические аспекты метаболизма оксида азота у детей с пищевой аллергией. Иммунология. 2017; 38(5): 252-255. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2017-38-5-252-255

Shumatova T.A., Prihodchenko N.G., Ni A.N., Katenkova E.Yu., Zernova E.S., Grigoryan L.A., Shishatskaya S.N. CLINICAL AND GENETIC ASPECTS OF NITRIC OXIDE METABOLISM IN CHILDREN WITH FOOD ALLERGY Pacific State Medical University, 690002, Vladivostok, Russia

To assess the fecal level of NO in food allergy (FA) children and the determination of the value of polymorphism G894T and T786S in eNOS gene in the development of FA children held clinical-laboratory examination of 39 children with the cow's milk allergy. The comparison group consisted of 30 healthy children. During the study, all patients were divided into 2 subgroups: patients with IgE-dependent FA (n = 18) with elevated IgE levels (Me = 88.25; 95% CI: 52.18—184.98); patients with IgE- independent PA (n = 21) in which the level of total and specific IgE was comparable to the control group (Me = 15.0; 95% CI: 7.91—23.0). Our data strongly suggest the active participation NO in the development of FA children. The study showed that fecal levels of NO metabolites in children with IgE-dependent FA was significantly higher than the control group (336.61 ± 0.89 mmol/l and 270.42 ± 0.89 mmol/l, p = 0.0164), in IgE independent FA children NO metabolites were significantly lower (226.32 ± 0.89 mmol/l, p = 0.0074). No significant association of IgE-dependent and IgE independent FA with the presence of the T allele genotype of G894T in the eNOS gene was identified. Our study revealed an association of polymorphic loci eNOS CC 786 and Tc 786 in the eNOS gene with an increased risk of food allergies in children (OR — 7,846 [95% CI; 1.897—32.450], p = 0.598). This carrier variant homozygous (CC) 786 eNOS increases the risk of IgE independent FA in 8.8 times and does not affect the risk of IgE-dependent FA children.

Keywords: nitric oxide, endothelial nitric oxide synthase, the eNOS polymorphisms, food allergy, intestinum, children.

For citation: Shumatova T.A., Prihodchenko N.G., Ni A.N., Katenkova E.Yu., Zernova E.S., Grigoryan L.A., Shishatskaya S.N. Clinical and genetic aspects of nitric oxide metabolism in children with food allergy. Immunologiya. 2017; 38(5): 252255. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/0206-4952-2017-38-5-252-255

For correspondence: Prikhodchenko Nelli G., Candidate of Medicine, Associate Professor of Institute of Pediatrics of Pacific State Medical University, E-mail: [email protected] Information about authors:

Shumatova T.A., http://orcid.org/0000-0003-2668-8483 Prikhodchenko N.G., http://orcid.org/0000-0002-2106-2572

conflict of interest. The authors declare no conflict of interest.

Acknowledgments. The study had no sponsorship.

Received 10.0317 Accepted 14.04.17

Для корреспонденции: Приходченко Нелли Григорьевна, канд. мед. наук, доцент Института педиатрии ФГБОУ ВО ТГМУ МЗ РФ, E-mail: [email protected]

ORIGINAL ARTICLE

Введение

Пищевая аллергия (ПА) принадлежит к числу наиболее частых аллергических состояний у детей первых лет жизни и относится к мультифакториальным заболеваниям, на течение и развитие которых воздействует множество обстоятельств [1], в том числе генетически детерминированная предрасположенность организма, несостоятельность кишечного барьера, чрезмерное воздействие антигенов на кишечник и др. [1—3]. Оксид азота (N0) — один из наиболее важных биологических медиаторов, который вовлечен во множество физиологических и патофизиологических процессов. Он представляет собой уникальный по своей природе и механизмам действия вторичный мессенджер в большинстве клеток организма [4]. В частности, оксид азота участвует в реализации многих важных физиологических функций, таких как вазодилатация, ней-ротрансмиссия, снижение агрегации тромбоцитов [5], реакции иммунной системы [6], регуляция тонуса гладких мышц, состояние памяти и др., а также некоторых патологических процессов [7, 8]. Влияние N0 на систему пищеварения изучено менее подробно. Известно, что N0 регулирует моторику пищеварительного тракта, желудочную секрецию, микроциркуляцию [9], стимулирует секрецию слизи и в физиологических условиях оказывает цитопротективное действие [10]. Кроме того, благодаря вазодилатирующему эффекту N0 повышается уровень выделения гликопротеинов клетками слизистой оболочки, что обеспечивает состоятельность надэпителиального барьера кишечника [10]. Нормально функционирующий эндотелий отличает непрерывная базальная выработка оксида азота (N0) с помощью эндотелиальной N0-синтазы (eNOS) из L-аргинина [1, 11]. Это необходимо для поддержания нормального базального тонуса сосудов ЖКТ и обеспечения её барьерных функций. Мутация некоторых аллелей гена eNOS приводит к нарушению его экспрессии и в свою очередь к уменьшению выработки N0 [12]. Наиболее изучены G894T полиморфизм 7-го экзона и Т786С полиморфизм промотора гена эндотелиальной N0-синтазы [12—14]. Большинство работ посвящено влиянию генетических детерминант на функцию эндотелия сосудов у пациентов с сердечно-сосудистой патологией. Работы по изучению полиморфизмов гена eNOS у пациентов с ПА в доступной нам литературе отсутствуют.

Цель работы — оценить уровень N0 по содержанию его стабильных метаболитов в копрофильтрате у детей с ПА и определить значение полиморфизмов G894T и Т786С в гене eNOS в развитии ПА у детей.

Материал и методы

Проведено клинико-лабораторное обследование детей с ПА к белку коровьего молока в возрасте от 6 мес до 3 лет (п = 39, группа 1). Диагноз был выставлен в соответствии с федеральными клиническими рекомендациями (2015), рекомендациями Европейского общества детских гастроэнтерологов, гепатологов и нутрициологов (ESPGAN, 2012), Европейской академии аллергологии и клинической иммунологии (ЕААС1, 2014). Группу сравнения (п = 30, группа 2) составили дети, сопоставимые по полу и возрасту, с неотягощенным аллер-гологическим анамнезом. Критериями исключения стали наличие сердечно-сосудистой патологии, сахарного диабета и других хронических заболеваний, пороков развития. В ходе исследования все пациенты были разделены на 2 подгруппы: 1А — пациенты с IgE зависимой ПА (п = 18), имеющие повышенный уровень ^Е (Ме = 88,25; 95% С1: 52,18—184,98) и специфические ^Е к БКМ; 1Б — пациенты с ^Е-независимой ПА (п = 21), у которых уровень общего и специфических ^Е был сопоставим с контрольной группой и достоверно ниже, чем в подгруппе 1А (Ме = 15; 95% С1: 7,91—23). Все пациенты дали письменное согласие на участие в исследовании. Исследова-

ние проведено с учётом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Министерства РФ от 19.06.2003, № 266.

Концентрацию метаболитов NO в копрофильтратах определяли с помощью иммуноферментного анализа (ИФА) и набора Total Nitric Oxide and Nitrate/Nitrite Parameter Assay Kit (R&D Systems, США). Полиморфизмы G894T и Т786С в гене eNOS тестировали с помощью методик, основанных на полимераз-ной цепной реакции в режиме реального времени со специфичными зондами (синтезированы в ООО ДНК-Синтез).

Статистическую обработку материала выполняли с помощью специализированных пакетов прикладных программ для исследований (Excel-2010 и Statstica 10.0 for Windows). Описательная статистика исследуемых качественных признаков представлена абсолютными значениями, процентными долями и их стандартными ошибками. Сравнительный анализ частот аллелей и полиморфизмов гена eNOS у больных с ПА и группой сравнения выполнялся с использованием критерия %2 с поправкой на непрерывность. Различия оценивали, как статистически значимые, начиная со значения p < 0,05. Для определения связи ПА с одним из генотипов гена eNOS рассчитывали отношение шансов (odd sratio, OR), характеризующее относительный риск развития заболевания у обследуемых с одним из вариантов генотипа, учитывали доверительный интервал отношения шансов (ДИ OR):

OR = A^C/B^D,

где A — число детей с одним из вариантов генотипа в основной группе; B — число обследуемых с аналогичным вариантом генотипа в группе сравнения; C — число детей основной группы, не имеющих данного варианта генотипа в основной группе; D — число наблюдаемых группы сравнения с другими вариантами генотипа.

Результаты исследования

При оценке анамнеза чёткие указания на аллергические реакции, связанные с белком коровьего молока (БКМ), отмечены у 37 (94,7%) детей. Так, у большинства из них (89,7%) начало заболевания совпало с введением в питание детских молочных смесей и проявлялось в виде кожных высыпаний или гастроинтестинальный симптомов (колики, срыгива-ния, неустойчивый стул). У детей, находившихся на грудном вскармливании, во всех случаях выявлен докорм молочными смесями, а также употребление матерью значительного количества молокосодержащих продуктов во время лактационного периода. У 26 детей (66,6%) дебют заболевания ассоциировался с развитием гастроинтестинального синдрома, в 33,4% случаев впервые возникшие проявления аллергии носили характер сочетанной кожно-гастроинтестинальной симптоматики. У детей регистрировали: учащенный стул водянистого характера, пенистый, с кислым запахом (100%), срыгивания у 24 (85,7%), рвоту у 4 (14,28%). Для пациентов были характерны метеоризм (92,16% случаев), флатуленция (87,04%), кишечные колики (92,16%). Копрологические нарушения были умеренно выражены: смешанная стеаторея у 15 детей (53,57%), стеаторея II типа у 14 (46,08%), амилорея у 27 (94,72%), креа-

Таблица 1

Фекальный уровень метаболитов оксида азота у детей с ПА

Группа 1А Группа 1Б Группа 2 (контроль) Р1 P2

E Nitrite 18,21 ± 0,89 9,94 ± 0,89 22,68 ± 0,89 0,0098 0,4187

Nitrate/Nitrite Assay 336,61 ± 0,89 226,32 ± 0,89 270,42 ± 0,89 0,0074 0,0146

Примечание. р1 — критерий достоверности между подгруппами 1А и 1Б, р2 критерий значимости между подгруппами детей с ПА и контрольной.

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ

Таблица 2

распределение частот аллелей и генотипов G894T и Т786с в гене eNOS

Таблица 3

распределение частот аллелей и генотипов G894T и Т786с в гене eNOS

Генотип, аллель Группа 1 (п = 39) Группа 2 (п = 30)

П % п %

GG 894 eNOS 30 76,9 17 56,7

GТ 894 eNOS 7 17,9 10 33,3

ТТ 894 eNOS 2 6,2 3 10

P 0,365

Аллель G 67 85,89 44 73,34

Аллель Т 11 14, 11 16 26,66

P 0,37

0И; 95% ДИ 0,392; 0,139— 1,107

ТТ 786 eNOS 12 30,7 17 56,67

ТС 786 eNOS 19 48,7 10 33,33

СС 786 eNOS 8 20,3 3 10

P 0,032

Аллель Т 43 55,12 44 73,33

Аллель С 35 44, 88 16 26,67

P 0,011

0И; 95% ДИ 2,942; 1,191— -7,934

Примечание. p — критерий достоверности при сравнении частоты встречаемости генотипов среди больных ПА с показателями группы контроля.

торея — у 14 (46,08%), переваримая клетчатка у 19 (58,9%), йодофильная флора у 24 (87,04%) детей; рН кала составлял 5,47 ± 0,32. Выраженность проявлений атопического дерматита на момент обследования оценивали по индексу SC0RAD. Лёгкие проявления АД (SCORAD < 20) отмечали у 12 больных (30,7%), средне-тяжелые (SCORAD — 20—60) у 18 детей (46,1%) и тяжелые (SCORAD > 60) — у 9 детей (23,2%). Подгруппы 1А и 1Б по уровню SCORAD не различались.

Исследование показало, что фекальный уровень эндогенного нитрита детей группы 1 составил 14,05 ± 0,89 мкмоль/л, что было ниже показателей контрольной группы в 1,6 раза (22,61 ± 4,62 мкмоль/л, p = 0,0164). Суммарный уровень метаболитов оксида азота достоверно не отличался у детей обеих групп и составил 280,45 ± 23,52 мкмоль/л у детей группы 1 и 270,42 ± 21,86 мкмоль/л у детей группы 2 ^ = 0,0749).

При анализе содержания метаболитов N0 у детей с ^Е-зависимой и с ^Е-независимой ПА были обнаружены разнонаправленные изменения продукции оксида азота у разных подгрупп, результаты приведены в табл. 1.

По результатам генотипирования получено следующее распределение генотипов в группе обследуемых детей (см. табл. 1). Наблюдаемые частоты генотипов и аллелей находятся в пределах вариабельности этих признаков в популяциях европеоидов по данным литературы. При изучении полиморфизма G894T гена eNOS в группе 1 показано снижение встречаемости редких гомозигот ТТ (см. табл. 1). Частоты встречаемости генотипов в группе детей с ПА составили для распространенного гомозиготного генотипа GG — 76,9%, гетерозиготного генотипа СТ — 17,9% и редкого гомозиготного генотипа ТТ — 6,2%. В контрольной группе частоты генотипов составили 56,7, 33,3 и 10% соответственно. У больных ПА частота аллеля Т была ниже, чем в контрольной группе, но статистически значимых различий получено не было (0R — 0,392 (95% ДИ; 0,139—1,107), p = 0,196) (табл. 2).

Анализ частоты генотипов и аллелей по Т786С полиморфизму гена eNOS показал, что в основной группе достоверно реже встречался благоприятный гомозиготный генотип (ТТ) — 30,7%, в то время как в контроле — 56,676 ф < 0,05). Частота гомозигот по С аллели (СС) в основной группе со-

Генотип, аллель Подгруппа 1А (п = 18) Подгруппа 1Б (п = 21)

П % п %

GG 894 е:Ы08 15 83,3 15 71,44

GТ 894 е:Ы08 3 16,7 4 19,04

ТТ 894 е:Ы08 0 0 2 9,52

P 0,045

Аллель G 33 91,66 34 80,9

Аллель Т 3 8, 44 8 19,1

P 0,032

0И; 95% ДИ 0,262; 0,062 —1,098 0,523; 0,159—1,721

ТТ 786 е:Ы08 9 50 3 14,28

ТС 786 е:Ы08 8 44,4 11 52,38

СС 786 е:Ы08 1 5, 6 7 33,33

P 0,032

Аллель Т 26 55,12 17 73,33

Аллель С 10 44, 88 25 26,67

P 0,011

0И; 95% ДИ 1,308; 0,405—4,225 7,846; 1,897—32,45

ставила 20,3%, что более чем в 2 раза выше аналогичного показателя у здоровых детей — 10 Ф < 0,05).

В группе детей с ПА достоверно преобладала частота встречаемости неблагоприятного аллеля С в 1,7 раза (44,88 и 26,67% соответственно). У детей контрольной группы превалировала частота встречаемости благоприятного аллеля Т 786 гена eNOS над частотой аллели С в 1,3 раза (73,33 и 55,12% соответственно). 0R для развития ПА у носителей генотипа СС было 2,942 (ДИ 95% — в интервале от 1,191 до 7,934).

Нами также проведен анализ частоты встречаемости аллелей и генотипов G894T и Т786С у детей с ^Е-зависимой и с ^Е-независимой ПА (табл. 3).

Достоверной ассоциации развития ^Е-зависимой и IgE-независимой ПА с наличием аллеля Т генотипа G894T в гене eNOS выявлено не было. При анализе встречаемости частот аллеля С генотипа Т786С в гене eNOS в подгруппе 1А статистически значимых различий получено не было (0R — 1,308 (95% ДИ; 0,405—4,225), р = 0,598) (см. табл. 3). В подгруппе 1Б достоверно чаще встречался патологический генотип (СС) — ^ — 7,846 (95% ДИ; 1,897—32,450), p = 0,598). При этом выявлено, что носительство гомозиготного варианта (СС) 786 eNOS увеличивает риск развития IgE-независимой ПА в 8,8 раза и не влияет на риск IgE-зависимой ПА у детей.

Обсуждение

В последние годы значительно расширились представления о роли N0 и его метаболитов в различных физиологических и патологических процессах, в патогенезе различных заболеваний, в том числе и желудочно-кишечного тракта [4, 6, 15, 16]. Среди физиологических функций N0 в отношении пищеварительной системы наиболее важно обеспечение моторной функции желудочно-кишечного тракта, а также регуляции поступления желчи в кишечник [9]. Кроме того, N0 следует отнести к числу главных факторов защиты слизистой ЖКТ [13]. Его влияние осуществляется путем воздействия на кровоснабжение слизистой. N0 при этом может выполнять регуляторные и эффекторные функции, оказывая протектив-ный или тканеповреждающий эффект на разных стадиях иммунного ответа [6]. Полученные нами данные убедительно свидетельствуют об активном участии нитроксидергических механизмов в развитии ПА у детей. Очевидно, что как недостаток, так и избыток этого свободного радикала играет зна-

чимую роль в повреждении тканей, развитии целого каскада иммунопатологических реакций и других нарушений.

Блокада синтеза NO, обнаруженная нами при развитии IgE-независимой ПА, значительно уменьшает кровоток в сосудах слизистой, косвенно это сказывается на секреторной функции ЖКТ, на способности его слизистой противостоять воздействию на нее факторов агрессии, на развитии клеточных реакций, возникновении повреждения слизистой оболочки и нарушении ее репарации [16]. Кроме того, в ранней фазе иммунного ответа NO выполняет эффекторные и важные регуляторные функции, снижение эндогенного NO увеличивает апоптоз NK клеток, поддерживает их цитоли-тическую способность, а также препятствует продукции ими ИФНу [17, 18]. Гиперпродукция NO, выявленная при IgE-зависимой ПА, вероятно, служит защитной реакцией, направленной на адаптацию к изменившимся условиям существования клетки, активации цитокинового каскада, развития гипериммуноглобулинемии E и с переходом клеток кишечника на более экономный (нитритный) путь дыхания. С другой стороны, образовавшиеся биологически активные молекулы — NO, пероксинитрит, активные формы кислорода — токсически воздействуют на эпителиоциты кишечника, их ферментативные системы, нарушают внутриклеточный этап пищеварения, усугубляют воспалительные изменения слизистой оболочки при длительном течении процесса [3]. Обнаруженные нами разнонаправленные изменения продукции NO при IgE-зависимой и IgE-независимой ПА, возможно, обусловлены различной активностью конститутивных форм нитроксидсинтаз, поддерживающих базисную продукцию NO. По данным проведенных исследований [11, 17], наличие аллеля C в положении 786 промотора гена eNOS приводит к снижению активности фермента eNOS вполовину, а формирующийся в результате этого его недостаток служит причиной снижения синтеза и высвобождения оксида азота и дисфункции эндотелия слизистой оболочки.

Таким образом, проведенное нами исследование выявило ассоциацию полиморфных локусов СС 786 eNOS и TC 786 в гене eNOS с увеличением риска развития пищевой аллергии у детей. При этом носительство гомозиготного варианта (СС) 786 eNOS увеличивает риск развития IgE-независимой ПА в 8,8 раза и не влияет на риск IgE-зависимой ПА у детей. Полученные результаты могут говорить о разном вкладе изученных полиморфизмов в развитие IgE-зависимой и IgE-независимой ПА у детей и подтверждают, что нитроксидергические механизмы оказывают большое влияние на формирование иммунологической оральной толерантности. Внедрение данных клинико-генетических исследований в клиническую практику позволит специалистам различного профиля своевременно формировать группы повышенного риска возникновения ПА, проводить дифференциальную диагностику, разрабатывать и индивидуализировать мероприятия по профилактике и коррекции ПА.

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

ЛИТЕРАТУРА (пп 3-8, 11-15, 17-18 см. REFERENCES

1. Лусс Л.В. Пищевые аллергены и пищевые добавки: роль в формировании пищевой аллергии и пищевой непереносимости. Эффективная фармакотерапия. 2014; 33: 12—9.

2. Шуматова Т.А., Приходченко Н.Г., Григорян Л.А., Павлова Я.Е. Нитроксидергические механизмы в патогенезе перси-стирующих диарей у детей первого года жизни. ТМЖ. 2010; 2: 54—7.

9. Панова И.В., Дудникова Э.В. Оксид азота и эндотелин-1 при па-

ORIGINAL ARTICLE

тологии органов пищеварения у детей. Вопросы современной педиатрии. 2012; 11(5): 56—62.

10. Животова Е.Ю., Масленникова Н.В, Флейшман М.Ю., Лебедько О.А., Сазонова Е.Н., Тимошин С.С. Система NOS-NO — универсальное звено в реализации гастропротективных эффектов опиоидных пептидов. ДМЖ. 2011; 4: 83—6.

16. Колесов С.А., Жукова Е.А., Коркоташвили Л.В., Федулова Э.Н., Тутина О.А., Толкачева Н.И. Метаболиты оксида азота, белок теплового шока 70 и провоспалительные цитокины у детей с заболеваниями кишечника. Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. 2014; 4:75—8.

REFERENCES

1. Luss L.V. Pishhevye allergeny i pishhevye dobavki: rol' v formiro-vanii pishhevoj allergii i pishhevoj neperenosimosti. Effektivnaya farmakoterapiya. 2014; 33: 12—9. (in Russian)

2. Scurlock A.M., Vickery B.P., Hourihane J.O., Burks A.W. Pediatric food allergy and mucosal tolerance. Mucosal Immunol. 2010; 3(4): 345—54.

3. Shumatova T.A., Prikhodchenko N.G., Grigoryan L.A., Pavlova Ya.E. Nitroxidergic mechanisms in the pathogenesis of persistent diarrhea in children the first year of life. TMZh. 2010; 2: 54—7. (in Russian)

4. Stepanova EI, Skvarskaia EA. Role of polymorphism NO-synthase gene in the pathogenesis of multifactorial diseases. Lik Sprava. 2014; 5-6: 47—55. (in Russian)

5. Lee J., Bae EH, Ma SK, Kim SW. Altered Nitric Oxide System in Cardiovascular and Renal Diseases. Chonnam. Med. J. 2016; 52(2): 81—90.

6. Bogdan C. Nitric oxide synthase in innate and adaptive immunity: an update. Trends Immunol. 2015; 36(3): 161—78.

7. Vannini F., Kashfi K., Nath N. The dual role of iNOS in cancer. Redox Biol. 2015; 6: 334—43.

8. Yazji I., Sodhi C.P., Lee E.K., Good M., Egan C.E., Afrazi A. et al. Endothelial TLR4 activation impairs intestinal microcirculatory perfusion in necrotizing enterocolitis via eNOS-NO-nitrite signaling. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2013; 110(23): 9451—6.

9. Panova I.V., Dudnikova Je.V. Nitric oxide and endothelin-1 in the pathology of digestive organs in children. Voprosy sovremennoj pe-diatrii. 2012; 11(5): 56—62. (in Russian)

10. Zhivotova E.Yu., Maslennikova N.V., Flejshman M.Yu., Lebed'ko O.A., Sazonova E.N., Timoshin S.S. System NOS-NO — universal part of achieving gastroprotective effects of opioid peptides. DMZh. 2011; 4: 83—6. (in Russian)

11. Mattila J.T., Thomas A.C. Nitric oxide synthase: non-canonical expression patterns. Front Immunol. 2014; 9(5): 478.

12. Kumar A., Misra S., Kumar P., Prasad K., Pandit A.K., Chakravarty K. et al. Association between endothelial nitric oxide synthase gene polymorphisms and risk of ischemic stroke: A meta-analysis. Neurol India. 2017; 65(1): 22—34.

13. Rosalind Lai P.M., Du R. Role of Genetic Polymorphisms in Predicting Delayed Cerebral Ischemia and Radiographic Vasospasm After Aneurysmal Subarachnoid Hemorrhage: A Meta-Analysis. World Neur. 2015; 84(4): 933—41.

14. Good M., Sodhi C.P., Yamaguchi Y., Jia H., Lu P., Fulton W.B. et al. The human milk oligosaccharide 2'-fucosyllactose attenuates the severity of experimental necrotising enterocolitis by enhancing mes-enteric perfusion in the neonatal intestine. Br. J. Nutr. 2016; 116(7): 1175—87.

15. Velickovic K., Markelic M., Golic I., Otasevic V., Stancic A., Jankovic A et al. Long-term dietary L-arginine supplementation increases endothe-lial nitric oxide synthase and vasoactive intestinal peptide immunoexpression in rat small intestine. Eur. J. Nutr. 2014; 53(3): 813—21.

16. Kolesov S.A., Zhukova E.A., Korkotashvili L.V., Fedulova E.N., Tutina O.A., Tolkacheva N.I. Metabolites of nitric oxide, heat shock protein 70 and proinflammatory cytokines in children with bowel disease. Mezhdunarodnyy zhurnal prikladnykh i fundamental'nykh issledovaniy. 2014; 4: 75—8. (in Russian)

17. Berin M.C., Sampson H.A. Mucosal immunology of food allergy. Curr. Biol. 2013; 6(23): 389—400.

18. Steele L., Mayer L., Berin M.C. Mucosal immunology of tolerance and allergy in the gastrointestinal tract. Immunol Res. 2012; 54(1): 75—82.

Поступила 10.03.17 Принята в печать 14.04.17