CC BY
27
Клиническая онкогематология. 2019;12(3):243-6
Клиническая онкогематология. 2019;12(3):243-6
ЛИМФОИДНЫЕ ОПУХОЛИ
Клиническое наблюдение волосатоклеточного лейкоза и лимфоплазмоцитарной лимфомы, установленных одновременно методом клеточного биочипа
А.Н. Хвастунова1,2, Л.С. Аль-Ради3, О.С. Федянина12, С.А. Луговская4, С.А. Кузнецова1,2
1 ФГБУ «НМИЦ детской гематологии, онкологии и иммунологии
им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России, ул. Саморы Машела, д. 1, Москва, Российская Федерация, 117997
2 ФГБУН «Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН», ул. Косыгина, д. 4, Москва, Российская Федерация, 119991
3 ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России,
Новый Зыковский пр-д, д. 4а, Москва, Российская Федерация, 125167
4 ФГБОУ ДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Минздрава России,ул. Баррикадная, д. 2/1, Москва, Российская Федерация, 125993
РЕФЕРАТ
В работе представлено клиническое наблюдение сочетания волосатоклеточного лейкоза и лимфоплазмоцитарной лимфомы с секрецией PIgMK. С помощью клеточного биочипа, позволяющего одновременно исследовать иммунофенотип и проводить морфологический и цитохимический анализы лейкоцитов, в периферической крови у пациента с лейкопенией были обнаружены малые популяции ворсинчатых (3 % от общего числа лимфоцитов) и плазматических клеток (2 %), включая клетки Мотта (0,2 %). Результаты, полученные методом клеточного биочипа, способствовали быстрому установлению предварительного диагноза, который затем был подтвержден стандартными методами диагностики.
Ключевые слова: клеточный биочип, волосато-клеточный лейкоз, лимфоплазмоцитарная лим-фома, ворсинчатые клетки, плазматические клетки, клетки Мотта.
Получено: 12 ноября 2018 г. Принято в печать: 2 мая 2019 г.
Для переписки: Алина Николаевна Хвастунова, канд. биол. наук, ул. Саморы Машела, д. 1, Москва, Российская Федерация, 117997; тел.: +7(495)287-65-70; e-mail: [email protected]
LYMPHOID TUMORS
A Case of Hairy Cell Leukemia Diagnosed Simultaneously with Lymphoplasmacytic Lymphoma by Anti-CD Antibody Microarray Method
AN Khvastunova12, LS Al-Radi3, OS Fedyanina12, SA Lugovskaya4, SA Kuznetsova1,2
1 Dmitry Rogachev National Research Center of Pediatric Hematology, Oncology and Immunology, 1 Samory Mashela str., Moscow, Russian Federation, 117997
2 Center for Theoretical Problems of Physicochemical Pharmacology, 4 Kosygina str., Moscow, Russian Federation, 119991
3 National Medical Hematology Research Center,
4a Novyi Zykovskii pr-d, Moscow, Russian Federation, 125167
4 Russian Medical Academy of Postgraduate Education,
2/1 Barrikadnaya str., Moscow, Russian Federation, 1125993
ABSTRACT
The paper deals with a combined case of hairy cell leukemia and lymphoplasmacytic lymphoma with IgMK paraprotein secretion. The use of anti-CD antibody microarray enabled the simultaneous assessment of immunophenotype as well as morphological and cytochemical analysis. Small populations of hairy (3 % of total lymphocyte count) and plasma (2 %) cells including Mott cells (0.2 %) were found in the peripheral blood of a patient with leukopenia. The results obtained by the anti-CD antibody microarray method speeded up provisional diagnosis which was later confirmed by standard diagnostic methods.
Keywords: anti-CD antibody microarray, hairy cell leukemia, lymphoplasmacytic lymphoma, hairy cells, plasma cells, Mott cells.
Received: November 12, 2018 Accepted: May 2, 2019
For correspondence: Alina Nikolaevna Khvastunova, PhD in Biology, 1 Samory Mashela str., Moscow, Russian Federation, 117997; Tel.: +7(495)287-65-70; e-mail: [email protected]
© 2019 практическая медицина
243
Для цитирования: Хвастунова А.Н., Аль-Ради Л.С., Федянина О.С. и др. Клиническое наблюдение волосатоклеточного лейкоза и лимфоплазмоцитарной лимфомы, установленных одновременно методом клеточного биочипа. Клиническая онкогематология. 2019;12(3):243-6.
For citation: Khvastunova AN, Al-Radi LS, Fedyanina OS, et al. A Case of Hairy Cell Leukemia Diagnosed Simultaneously with Lymphoplasmacytic Lymphoma by Anti-CD Antibody Microarray Method. Clinical oncohematology. 2019;12(3):243-6 (In Russ).
doi: 10.21320/2500-2139-2019-12-3-243-246
doi: 10.21320/2500-2139-2019-12-3-243-246
ВВЕДЕНИЕ
Основные трудности морфологической диагностики волосатоклеточного лейкоза (ВКЛ) заключаются в лейкопении, из-за которой в крови пациента присутствует очень незначительное количество опухолевых клеток (ворсинчатых лимфоцитов). Ранее мы показали, что использование клеточного биочипа, прозрачной пластиковой подложки с иммобилизованными моноклональными антителами к антигенам лейкоцитов, позволяет рассортировать выделенные в градиенте плотности лейкоциты крови по их поверхностным антигенам для последующего морфологического и цитохимического исследований связавшихся клеток. С помощью этого метода можно проводить морфологическую диагностику ВКЛ и обнаруживать ворсинчатые лимфоциты даже в тех случаях, когда опухолевая популяция составляет 0,1 % от общего числа лимфоцитов [1-3]. Кроме того, клеточный биочип может быть использован для исследования иммунофенотипа клеток с характерной морфологией, в т. ч. ворсинчатых, двуядерных и плазматических клеток, включая клетки Мотта и др. [1-3].
Морфологически ворсинчатые клетки представляют собой лимфоциты среднего или крупного размера, имеющие широкую бледную цитоплазму с характерными ворсинками с изрезанным или фестончатым краем [4]. Могут встречаться клетки с умеренно базофильной цитоплазмой и тонкими короткими выростами, часто локализованные только на одном из полюсов клетки [5]. Наличие лимфоцитов с выростами цитоплазмы свойственно ВКЛ, вариантной форме ВКЛ, лимфоме из клеток маргинальной зоны селезенки (ЛКМЗС) и диффузной В-мелкоклеточной лимфоме из клеток красной пульпы селезенки [4-9].
Клетки Мотта — плазматические клетки, которые заполнены тельцами Рассела. Тельца Рассела — ок-сифильные внутриклеточные белковые агрегаты. Впервые данные клетки были описаны Ф. Моттом
МоИ) в 1905 г. [10] и названы в его честь. В последующих исследованиях выявили, что этот тип плазматических клеток содержит в основном иммуноглобулины класса М (^М) [11, 12]. Морфологические характеристики клеток Мотта могут различаться в зависимости от размера и количества телец Рассела [13]. Клетки Мотта встречаются при лимфопролифе-ративных заболеваниях, таких как множественная миелома, В-клеточные лимфомы, а также при тирео-идите Хасимото, ревматоидном артрите и язвенном колите [14-16]. В литературе тельца Рассела и клетки Мотта подробно описаны при экстранодальных лим-фомах из клеток маргинальной зоны, например при
MALT-лимфоме желудка. УЛ. Джулакян и соавт. [17] представили единичный случай ЛКМЗС, морфологически состоящей из пластов клеток Мотта (второй случай опухоли из клеток Мотта, описанный в России).
В данной статье представлено клиническое наблюдение, когда, несмотря на лейкопению, в крови пациента с помощью клеточного биочипа были обнаружены популяции ворсинчатых и плазматических клеток, в т. ч. клетки Мотта.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Изготовление клеточного биочипа подробно описано в нашей работе [1]. В панель биочипа входили антитела к следующим поверхностным антигенам лейкоцитов: CD2, CD3, CD4, CD5, CD7, CD8, CD10, CD11c, CD13, CD14, CD15, CD16, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD25, CD33, CD38, CD41, CD43, CD45, CD45RA, CD45R0, CD56, CD85j, CD103, CD123, CD200, CD235a, HLA-DR, IgM, к- и Я-легким цепям иммуноглобулина, а также смесь мышиных IgG. На рис. 1, А представлена схема расположения антител на биочипе, где цифрами обозначены номера CD-антигенов, антитела к которым иммобилизованы на подложке в соответствующей области. Суспензия мононуклеарных клеток, выделенная из крови путем центрифугирования в градиенте плотности Histopaque-1077, исследовалась в соответствии с протоколом, описанным ранее в наших работах [2, 9]. Два биочипа инкубировали с суспензией мононуклеарных клеток крови пациента (5 х 106 клеток/мл в PBS с 1 % BSA и 20 % эмбриональной телячьей сыворотки) без перемешивания в течение 30 мин при температуре 4 °С, затем отмывали от неспецифически связавшихся клеток и высушивали. После этого один биочип окрашивали по Паппенгейму для последующего морфологического анализа (рис. 1, Б), на втором — исследовали активность тартрат-резистентной кислой фосфатазы по методу Гольдберга—Барки с добавлением тартрата натрия [2].
КЛИНИЧЕСКОЕ НАБЛЮДЕНИЕ
У больного А., 60 лет, во время лечения пневмонии выявлена панцитопения: гемоглобин — 100 г/л, эритроциты — 3 х 1012/л, тромбоциты — 90 х 109/л, лейкоциты — 2 х 109/л, лимфоциты — 76 %. При обследовании обнаружили незначительную сплено-мегалию, размер которой по данным УЗИ составлял 125 х 65 х 68 мм, и умеренную лимфаденопатию с увеличением внутригрудных лимфатических узлов до 16 мм, надключичных — до 14 мм.
http://bloodjournal.ru/
Клеточный биочип в диагностике ЛПЗ
245
Рис. 1. Результаты исследования крови пациента с помощью клеточного биочипа: А — схема расположения пятен антител на биочипе; Б — биочип со связавшимися мононуклеарами крови пациента, окраска по Пап-пенгейму; В-Ж — морфология лимфоцитов крови пациента, связавшихся в пятнах биочипа, окраска по Паппенгейму, *1000; В — ворсинчатая клетка в пятне анти-CD25-антитела (слева); Г — плазматическая клетка в пятне анти-CD45RA-антитела (справа); Д — двуядер-ная плазматическая клетка в пятне анти-CD19-антитела (вверху); Е — клетка Мотта в пятне анти-CD38-антитела (внизу); Ж — двуядерный лимфоцит в пятне IgM (вверху); З — ворсинчатая клетка, положительная по TRAP (внизу), окраска гематоксилином Майера, *1000
Fig. 1. The results of blood analysis using anti-CD antibody microarray method: A — layout of antibodies spotted on microarray; 5 — microarray with bound mononuclear cells of patient's blood, Pappenheim stain; B-X — morphology of lymphocytes bound on microarray spots, Pappenheim stain, *1000; B — a hairy cell captured by anti-CD25 spot (on the left); r — a plasma cell captured by anti-CD45RA spot (on the right); M — a binuclear plasma cell captured by anti-CD19 spot (at the top); E — a Mott cell captured by anti-CD38 spot (at the bottom); X — a binuclear lymphocyte captured by IgM spot (at the top); 3 — a hairy cell, TRAP positive (at the bottom), Mayer hematoxylin stain, *1000
Лимфоциты крови пациента были исследованы с помощью клеточного биочипа. Субпопуляционный состав лимфоцитов был в пределах нормы, определенной нами для биочипа [1]: CD3 — 76 %, CD4 — 47 %, CD8 — 29 %, CD16+CD56+ — 9 %, CD19 — 15 %, CD20 — 15 %. Наблюдалось повышенное число связавшихся клеток на антителах к опухолеспецифическим маркерам: CD11c — 7 %, CD103 — 5 %, CD123 — 5 %. При морфологическом исследовании были обнаружены ворсинчатые лимфоциты (рис. 1, В) с иммунофено-типом CD19+CD20+CD22+CD103+CD25+CD11c+CD12 3+CD200+HLA-DR+K+CD10-CD5-CD23-, которые составляли 3 % от общего числа лимфоцитов. Реакция TRAP была резко положительной в 3 % лимфоцитов и выявлялась в виде гранул ярко-красного цвета в цитоплазме клетки (рис. 1, З). Таким образом, была выявлена моноклональная популяция В-лимфоцитов, соответствующая ВКЛ.
Помимо этого были обнаружены плазмоцито-идные клетки (рис. 1, Г) — популяция плазматических клеток малого размера с аберрантным иммунофено-типом CD38+CD45RA+CD19+CD56+/-, которая составляла 2 % всех лимфоцитов в формуле крови. Среди них присутствовали двуядерные плазматические клетки (рис. 1, Д), клетки Мотта с тельцами Рассела (рис. 1, Е) (0,2 % всех лимфоцитов). Таким образом, по данным исследования методом клеточного биочипа пациенту был установлен предварительный диагноз ВКЛ и
одновременно выявлены минимальные признаки второго зрелоклеточного лимфоплазмоцитарного заболевания.
Кроме того, среди В-лимфоцитов были найдены двуядерные клетки (рис. 1, Ж) с фенотипом CD19+CD20+CD22+IgM+HLA-DR+CD45RA+к+/-A+/- в количестве 6 % от всех В-клеток и 0,5 % всех лимфоцитов. Данные двуядерные формы обнаруживались как среди В-лимфоцитов с экспрессией легких цепей к, так и Я и, следовательно, не могут рассматриваться как показатель клональности. Двуядерные лимфоидные клетки неопухолевой природы могут появиться в крови в ответ на опухоль или вирусы [4]. В литературе описаны случаи, когда двуядерные лимфоциты с данным иммунофенотипом встречались при персистентном поликлональном В-клеточном лимфоцитозе [18].
При последнем иммунофенотипическом исследовании лимфоцитов крови методом проточной цито-метрии была выявлена моноклональная популяция В-лимфоцитов с фенотипом CD19k+CD20+CD103+CD2 5+CD11c+LAIR-1+. Диагноз ВКЛ был подтвержден выявлением гетерозиготной мутации ВRAF, приводящей к аминокислотной замене V600E и лимфоидной пролиферации, морфологически типичной для ВКЛ, в трепанобиоптате и миелограмме (75 %).
Дополнительно при иммунофенотипировании лимфоцитов костного мозга выявлена популяция плаз-
матических клеток с аберрантным иммунофенотипом CD138+CD38+CD45lowCD19-CD56+/-CD117-CD28-. Им-мунохимическое исследование белков сыворотки показало моноклональную секрецию парапротеина ^Мк (5,7 г/л). В миелограмме также обнаружено умеренное увеличение плазматических клеток — 4,5 %.
На основании перечисленных выше данных пациенту был установлен диагноз ВКЛ и лимфоплазмоци-тарной лимфомы с секрецией Р^Мк.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Клеточный биочип представляет собой чрезвычайно удобный инструмент для быстрой постановки предварительного диагноза. При этом используется только одна пробирка крови, а высокая поверхностная концентрация клеток на биочипе позволяет обнаружить редко встречающиеся опухолевые клетки даже при лейкопении. Биочип может использоваться для разработки новых методов диагностики онкогемато-логических заболеваний. Это особенно важно в ситуациях, когда для установления диагноза необходимо определить иммунофенотип клеток конкретной морфологии, при нетипичной морфологии и аберрантном иммунофенотипе, а также для диагностики случаев с сочетанием двух онкогематологических заболеваний.
КОНФЛИКТЫ ИНТЕРЕСОВ
Авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.
ИСТОЧНИКИ ФИНАНСИРОВАНИЯ
Работа поддержана грантом Российского фонда фундаментальных исследований № 18-015-00272 и стипендией президента СП-1929.2016.4.
ВКЛАД АВТОРОВ
Концепция и дизайн: все авторы. Сбор и обработка данных: все авторы. Предоставление материалов исследования: все
авторы.
Анализ и интерпретация данных: все авторы. Подготовка рукописи: все авторы. Окончательное одобрение рукописи: все авторы.
БЛАГОДАРНОСТИ
Авторы признательны д-ру биол. наук А.Б. Сударикову (ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России) за
предоставленные данные по наличию мутации BRAF V600E в опухолевых клетках пациента.
ЛИТЕРАТУРА/REFERENCES
1. Khvastunova AN, Kuznetsova SA, Al-Radi LS, et al. Anti-CD antibody microarray for human leukocyte morphology examination allows analyzing rare cell populations and suggesting preliminary diagnosis in leukemia. Sci Rep. 2015;5(1):12573. doi: 10.1038/srep12573.
2. Хвастунова А.Н., Аль-Ради Л.С., Капранов Н.М. и др. Использование клеточного биочипа в диагностике волосатоклеточного лейкоза. Онкогематология. 2015;10(1):37-45. doi: 10.17650/1818-8346-2015-1-37-45.
[Khvastunova AN, Al-Radi LS, Kapranov NM, et al. Cell-binding microarray application in diagnosis of hairy cell leukemia. Oncohematology. 2015;10(1):37-45. doi: 10.17650/1818-8346-2015-1-37-45. (In Russ)]
3. Khvastunova AN, Al-Radi LS, Fedyanina OS, Kuznetsova SA. Simultaneous finding of chronic lymphocytic leukemia and residual hairy cell leukemia using a lymphocyte-binding anti-CD antibody microarray. Clin Case Rep. 2018;6(4):753-5. doi: 10.1002/ccr3.1416.
4. Bain BJ. Leukemia Diagnosis. 4th edition. Singapore: Blackwell Publishing; 2010. doi: 10.1002/9781444318470.
5. Луговская С.А., Почтарь М.Е. Гематологический атлас. М. - Тверь: Триада, 2011. 368 с.
[Lugovskaya SA, Pochtar ME. Gematologicheskii atlas. (Hematology atlas.) Moscow - Tver: Triada Publ.; 2011. 368 р. (In Russ)]
6. Shao H, Calvo KR, Gronborg M, et al. Distinguishing hairy cell leukemia variant from hairy cell leukemia: Development and validation of diagnostic criteria. Leuk Res. 2013;37(4):401-9. doi: 10.1016/j.leukres.2012.11.021.
7. Robak T. Hairy-cell leukemia variant: recent view on diagnosis, biology and treatment. Cancer Treat Rev. 2011;37(1):3-10. doi: 10.1016/j.ctrv.2010.05.003.
8. Traverse-Glehen A, Baseggio L, Callet-Bauchu E, et al. Splenic red pulp lymphoma with numerous basophilic villous lymphocytes: a distinct clinicopathologic and molecular entity? Blood. 2008;111(4):2253-60. doi: 10.1182/blood-2007-07-098848.
9. Хвастунова А.Н., Аль-Ради Л.С., Федянина О.С. и др. Особенности морфологии и иммунофенотипа опухолевых клеток лимфомы из клеток маргинальной зоны селезенки (исследование с помощью клеточного биочипа). Онкогематология. 2017;12(1):71-7. doi: 10.17650/1818-8346-2017-12-1-71-77.
[Khvastunova AN, Al-Radi LS, Fedyanina OS, et al. Determination of morphology and immunophenotype of circulating lymphoma cells in patients with splenic marginal zone lymphoma using an anti-CD antibody microarray. Oncohematology. 2017;12(1):71-7. doi: 10.17650/1818-8346-2017-12-1-71-77. (In Russ)]
10. Mott F. Observations on the brains of men and animals infected with various forms of trypanosomes. Preliminary note. Proc Royal Soc London B. 1905;76(509):235-42. doi: 10.1098/rspb.1905.0016.
11. Jacob H, Lutcke A. Subakute sklerosierende leukoencephalitis unter dem initialbild einer akuten epidemischen encephalitis (akute parkinsonistische encephalitis) mit ausgepragter entwicklung von Maulbeerzellen und Russell-Korperchen. J Neurol Sci. 1971;12(2):137-53. doi: 10.1016/0022-510X(71)90045-1.
12. Greenwood BM, Whittle HC. Cerebrospinal fluid IgM in patients with sleeping sickness. Lancet. 1973;302(7828):525-7. doi: 10.1016/s0140-6736(73)92348-9.
13. Alanen A, Pira U, Lassila O, et al. Mott cells are plasma cells defective in immunoglobulin secretion. Eur J Immunol. 1985;15(3):235-42. doi: 10.1002/ eji.1830150306.
14. Posnett DN, Mouradian J, Mangraviti DJ, Wolf DJ. Mott cells in a patient with a lymphoproliferative disorder. Differentiation of a clone of B lymphocytes into Mott cells. Am J Med. 1984;77(1):125-30. doi: 10.1016/0002-9343(84)90446-7.
15. El-Okda M, Hyeh Y, Xie SS, Hsu SM. Russell bodies consist of heterogeneous glycoproteins in B-cell lymphoma cells. Am J Clin Pathol. 1992;97(6):866-71. doi: 10.1093/ajcp/97.6.866.
16. Kurihara K, Sakai H, Hashimoto N. Russell body-like inclusions in oral B-lymphomas. J Oral Pathol.1984;13(6):640-9. doi: 10.1111/j.1600-0714.1984.tb01466.x.
17. Джулакян У.Л., Двирнык В.Н., Менделеева Л.П. Селезеночная В-клеточная лимфома из клеток маргинальной зоны с выраженной плазмо-клеточной дифференцировкой: вариант опухоли из клеток Мотта? Онкоге-матология. 2015;10(4):34-7. doi: 10.17650/1818-8346-2015-10-4-34-37.
[Dzhulakyan UL, Dvirnyk VN, Mendeleeva LP. Splenic B-cell marginal zone lymphoma with marked plasmocytic differentiation: tumor variant from Mott cells? Oncohematology. 2015;10(4):34-7. doi: 10.17650/1818-8346-2015-10-4-34-37. (In Russ)]
18. Mossafa H, Malaure H, Maynadie M, et al. Persistent polyclonal B lym-phocytosis with binucleated lymphocytes: a study of 25 cases. Br J Haematol. 1999;104(3):486-93. doi: 10.1046/j.1365-2141.1999.01200.x.
