CC BY
91. Болезнь Ауески: дифференциация инфицированных и вакцинированных животных методом блокирующего ИФА на основе моноклональных антител / О.С. Моренков, Ю.А. Собко, В.А. Сергеев [и др.] // Вирусн. болезни с.-х. ж-ных: тез. докл. Всерос. науч.-практ. конф. Владимир, 1995. С. 211.
2. Болезнь Ауески свиней. Современная эпизоотическая ситуация и меры борьбы / А.А. Коломы-цев, И.В. Амирова, А.А. Стрижаков [и др.] // Ветеринарный консультант. 2007. №13. С.7-10.
3. Оценка эффективности различных методов концентрирования вируса болезни Ауески / Ж.Б. Кандыбаева, Л.В. Маликова, Б.Н. Хайруллин // Акт. пробл. вирус.: тез. докл. науч. конф. п. Гвардейский, 1994. Ч. 1. С.62.
4. Применение дифференцирующего ИФА при болезни Ауески свиней / О.П. Бъядовская, О.Г. Андреева, А.С. Оганесян [и др.] // Тр. Федерального центра охраны здоровья животных. Владимир, 2006. Т. 4. С. 225-232.
5. Получение и оценка диагностических сывороток
и иммуноглобулинов к вирусу болезни Ауески / ГА. Блотова, В.И. Диев, А.В. Константинов [и др.] // Акт. пробл. инфекц. пат. ж-ных: мат. Меж-дунар. науч. конф., посв. 45-летию ФГУ «ВНИ-ИЗЖ». Владимир, 2003. С. 203-208.
5. Теория и практика иммуноферментного анализа / А.М. Егоров, А.П. Осипов, Б.Б. Дзантиев, Е.М. Гаврилова. М.: Высш. шк., 1991. 288 с.
6. Усовершенствование технологии изготовления вакцин против болезни Ауески из маркированного штамма «ВК» / Т.И. Корпусова, В.А. Мищенко, А.П. Пономарев [и др.] // Вет. патология
7. Экологические особенности вируса болезни Ауес-
ки / А.В. Мищенко, Н.А. Яременко, В.М. Захаров [и др.] // Болезнь Ауески свиней: сб. науч. работ. Владимир, 2001. С. 43-45.
8. Pseudorabies virus mutants, vaccines containing same, methods for the production of same and methods for the use same: US Patent № 4,711,850. Malon Kit, Saul Kit, p. 6-7.
УДК 619:616.98:579.843.96:636.4
Д.А. Бирюченков, В.С. Русалеев, А.А. Фроловцева
КЛИНИЧЕСКИЕ И ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ АКТИНОБАЦИЛЛЕЗНОЙ ПЛЕВРОПНЕВМОНИИ СВИНЕЙ
Введение
Актинобациллезная плевропневмония свиней - инфекционное контагиозное заболевание свиней, характеризующееся септи-котоксемией, геморрагической и гнойно-некротизирующей пневмонией, а также се-розно-фибринозным плевритом, перикардитом и артритами. Заболевание вызывают бактерии семейства Ра^ЬеитеИасеае, рода ЛсйпоЪасШш, вида Л. рЬеиторпеишотае. Заболеванию наиболее подвержены поросята 2-4-месячного возраста.
Данное заболевание свиней широко распространено в мире, особенно в странах с развитым свиноводством [2, 4]. В Российской Федерации болезнь была впервые диагностирована М. Сидоровым и М. Ско-родумовым в 1975 году [1, 9].
Возбудитель актинобациллезной плевропневмонии - гемофильные бактерии ЛсНпоЬасШш рЬеиторпеишотае - мелкие (0,3-0,4х0,4-0,5 мкм), грамотрицательные, неподвижные палочки или коккобактерии. Спор не образуют. Вирулентные штаммы имеют капсулу. Обладают выраженным тропизмом к легочной ткани [1, 5].
Отсутствие общепризнанной методи-
ки определения вирулентности бактерий ЛсНпоЬасШш рЬеиторпеишотае затрудняет работу по отбору патогенных штаммов, необходимых для изготовления инактиви-рованных вакцинных препаратов против данного заболевания. Это обстоятельство побудило нас сопоставить различные методы экспериментального воспроизведения актинобациллезной плевропневмонии у поросят.
Из-за скудности информации в отечественной печати об этой инфекции практические ветеринарные специалисты мало знакомы с актинобациллезной плевропневмонией свиней, поэтому публикация материалов о ней вполне обоснована.
Материалы и методы
В работе использовали штамм Л. рЬеиторпеишотае «Ш-1», хранящийся в лаборатории микробиологии ФГУ «ВНИ-ИЗЖ». Бактериальную массу актиноба-цилл получали выращиванием в течение 16-18 часов на поверхности сывороточно-дрожжевого агара, приготовленного на основе бульона по Хоттингеру. Агаровую культуру возбудителя смывали стерильным фосфатно-буферным раствором с рН
Таблица
Результаты заражения поросят Л&тоЬаеШш р1еиторпеитоп1ае штаммом «Ш-1»
№ п/п Метод заражения Кол-во м.к./ в дозе (хМ9) Форма заболевания и исход Результаты обследования легких Характерное поражение конечностей
1 и/в1 2 острая геморрагии поражение суставов
2 и/в 2 острая, гибель4 геморрагии не обнаружено
3 и/в 1 кл. здоров5 патология не выявленаб не обнаружено
4 и/в 1 кл. здоров патология не выявлена не обнаружено
5 и/в 0,5 кл. здоров патология не выявлена не обнаружено
6 и/в 0,5 кл. здоров патология не выявлена не обнаружено
7 и/т2 10 сверхострая, гибель обширные геморрагии не обнаружено
8 и/т 10 сверхострая, гибель обширные геморрагии не обнаружено
9 и/т 5 сверхострая, гибель обширные геморрагии не обнаружено
10 и/т 5 острая, гибель геморрагии не обнаружено
11 и/т 1 острая, гибель геморрагии поражение суставов
12 и/т 1 острая, гибель геморрагии поражение суставов
13 и/т 0,5 хроническая форма болезни геморрагии поражение суставов
14 и/т 0,5 хроническая геморрагии не обнаружено
15 и/н3 10 сверхострая, гибель обширные геморрагии не обнаружено
16 и/н 10 сверхострая, гибель обширные геморрагии не обнаружено
17 и/н 5 сверхострая, гибель обширные геморрагии не обнаружено
18 и/н 5 сверхострая, гибель обширные геморрагии не обнаружено
19 и/н 1 сверхострая, гибель обширные геморрагии не обнаружено
20 и/н 1 острая, гибель обширные геморрагии поражение суставов
21 и/н 0,5 хроническая геморрагии поражение суставов
22 и/н 0,5 хроническая геморрагии поражение суставов
23 контроль -7 кл. здоров патология не выявлена не обнаружено
24 контроль - кл. здоров патология не выявлена не обнаружено
1 - (и/в) - интравенозный способ заражения;
2 - (и/т) - интратрахеальный способ заражения;
3 - (и/н) - интраназальный способ заражения;
4 - (гибель) - гибель животного сопровождалась характерными для данного заболевания клиническими и патологоанатомическими признаками;
5 - (кл. здоров) - клинические признаки заболевания не были выявлены;
6 - (патология не выявлена) - признаки заболевания проявлялись в стертой форме без видимых изменений;
7 - (-) подопытные животные заражению не подвергались
7,2-7,4. Концентрацию микробных клеток в суспензии определяли по оптическому стандарту мутности ГИСК им. Тарасевича, а количество живых микробных клеток устанавливали методом титрования на плотной питательной среде и выражали в коло-ниеобразующих единицах.
Клинико-анатомические особенности экспериментальной актинобациллезной плевропневмонии были изучены на поросятах 30-35-дневного возраста массой 89 кг, которые размещались в изолированном боксе с контролируемым температурным режимом и вентиляцией, на бетонном полу, со свободным доступом к воде и сухим типом кормления (специализирован-
ный комбинированный корм для свиней). Наличие специфических антител в сыворотках крови переболевших свиней определяли в реакции агглютинации [7]. Наблюдение за подопытными животными проводилось ежедневно в течение 22 дней: утром и вечером.
Результаты и обсуждение При экспериментальном заражении восприимчивых животных изолятом «Ш-1» возбудителя актинобациллезной плевропневмонии была воспроизведена клиническая картина и получены патолого-анатомические изменения, характерные для естественного течения болезни. В ходе опытов были отработаны три способа
заражения: интравенозное, интратрахеаль-ное и интраназальное [3, 6, 8]. Объем вводимой дозы на одно животное составлял 1, 5 и 2 см3, соответственно. При интрана-зальном заражении для подавления кашле-вого рефлекса и понижения эффекта сгла-тывания использовали 2% раствор лидока-ина в дозе 2 см3 на животное. Каждая заражающая доза инъецировалась двум животным. Данные по результатам заражения представлены в таблице.
Интравенозное введение оказалось малоэффективным. Характерную для ак-тинобациллезной плевропневмонии клиническую и патологоанатомическую картину, а также гибель поросят удалось воспроизвести только при заражающей дозе 2х109 м. к. Гибель лишь одного из зараженных животных подтверждает гипотезу о низком уровне диссеминации Actinobacillus pleuropneumoniae в крови. Отсутствие специального оборудования для фиксации животных, возможности подавления рефлекса сглатывания при интратрахеальном введении вело к попаданию части культуральной суспензии в желудок, травмированию кровеносных сосудов шеи, пищевода и трахеи подопытных поросят. Интраназальное заражение культурой штамма «Ш-1» Actinobacillus pleuropneumoniae в дозе 0,5х109 м.к. с предварительной обработкой поросят 2% раствором лидокаина приводило к развитию изменений, характерных для актино-бациллезной плевропневмонии свиней.
Проведенные нами наблюдения за экспериментально зараженными поросятами показали, что актинобациллезная плевропневмония свиней протекает в трех клинических формах: сверхострой, острой и хронической.
При сверхостром течении у животных резко повышалась температура тела до 42° С. Поросята были сильно угнетены, дыхание частое и затрудненное, наблюдалась рвота; кожа ушей, пятачка и живота имела сине-красное окрашивание. В агональной стадии отмечали истечение из носовых отверстий пенистой кровянистой жидкости.
Смерть наступала в течение 8-24 часов после появления первых клинических признаков болезни.
При вскрытии трупов наблюдали геморрагическое воспаление легких с выраженным отеком интерстициальной соединительной ткани. Указанный признак находил свое отражение в описании другими исследователями [2, 3, 4, 7, 9, 10] патолого-анатомических изменений, вызванных A.
р1еигорпеишотае. Пораженные участки легких были плотной консистенции, вишнево-красного цвета, выступали над поверхностью окружающей нормальной ткани, при надавливании с поверхности разреза стекала кровянистая жидкость. У павших животных фиксировали скопление жидкости темно-красного цвета в грудной полости в объеме до 200 мл, которая, по литературным данным, может иметь в своем составе фибрин [7]. У поросят, зараженных интратрахеально и интраназально, были выявлены фибринозный плеврит и перикардит, а также серозно-геморрагическое воспаление бронхиальных и средостенных лимфатических узлов. Было отмечено незначительное увеличение селезенки.
При острой форме болезни у свиней наблюдали повышение температуры тела до 41° С, одышку, приступы изнурительного кашля, пенистые истечения из носа. Животные погибали с симптомами асфиксии в течение 2-5 суток. При переходе заболевания в хроническую форму у некоторых животных отмечали появление отечности тканей вокруг суставов, преимущественно дистальных отделов конечностей.
Хроническое течение актинобациллез-ной плевропневмонии проявлялось в виде кратковременного (3-5 дней) повышения температуры тела, кашля, учащенного дыхания брюшного типа, бледности кожных покровов, отставания в росте и развитии.
На вскрытии трупов наблюдали лобар-ное, чаще одностороннее геморрагическое воспаление легких с выраженным отеком интерстициальной соединительной ткани. Пораженные участки легких были плотные, вишнево-красного цвета, выступали над поверхностью окружающей нормальной ткани, при надавливании с поверхности разреза стекала кровянистая жидкость. Отмечали признаки фибринозного плеврита и перикардита, а также серозно-геморраги-ческого воспаления лимфатических узлов.
При хроническом течении болезни па-тологоанатомические изменения проявлялись наличием инкапсулированных очагов некроза в легких, несколько выступающих над неповрежденными областями, фибринозным плевритом и перикардитом, спайками между легочной и костальной плеврой, а также скоплением в грудной полости небольшого количества мутноватой жидкости с примесью крови. Полученные данные согласуются с материалами исследований других авторов [7].
У павших и вынужденно убитых животных установлены различной величины
отечности и периартикулярные воспалительные очаги в области дистальных суставов конечностей, которые регистрировали у живых поросят через 5-7 суток после заражения. Зарубежные авторы трактовали подобные патологоанатомические изменения как артриты [10] и периартри-ты [7]. Кроме того, существуют упоминания об абсцессах, часто локализовавшихся возле суставов [11]. Внешне измененные суставы сохраняли функциональную способность и в большинстве случаев не были повреждены.
При проведении вивисекции для бактериологического исследования от всех животных были взяты образцы патологического материала, включая пробы суставной жидкости и околосуставных очагов воспаления. Выделение возбудителя из патологического материала и его идентификация в совокупности с положительными результатами заражения лабораторных животных явились прямым доказательством роли штамма «Ш-1» ЛсйпоЪасШш рЬеиторпеишотае в возникновении болезни у свиней.
Анализ приведенных данных свидетельствует о том, что заболевание сви-
ней протекает в трех клинических формах. Величина заражающей дозы существенно влияет на течение и исход заболевания. Наиболее ярко патоморфологическая картина, типичная для актинобациллезной плевропневмонии, проявляется при инт-ратрахеальном и интраназальном способах заражения.
Выводы
Результаты исследований показали, что наиболее удобным способом заражения свиней для воспроизводства актиноба-циллезной плевропневмонии является инт-раназальный метод.
Установлено, что актинобациллез-ная плевропневмония свиней протекает в трех клинических формах: сверхострой, острой и хронической, характеризующихся поражением органов дыхания. Основными патологоанатомическими изменениями у свиней при актинобациллезной плевропневмонии являются геморрагическое воспаление легких, фибринозный плеврит, перикардит, а также скопление кровянистой жидкости в грудной полости. При хроническом течении у большинства трупов в легких находят инкапсулированные очаги некроза.
РЕЗЮМЕ
В работе представлен материал по изучению клинических и патологоанатомических особенностей экспериментальной актинобациллезной плевропневмонии свиней. Животных заражали интравеноз-но, интратрахеально и интраназально. Типичную картину болезни удалось воспроизвести при всех способах заражения. Инкубационный период составлял 6-24 часа. Проведенные наблюдения за экспериментально зараженными поросятами показали, что данное заболевание свиней протекает в трех клинических формах: сверхострой, острой и хронической. При вскрытии трупов наблюдают геморрагическое воспаление легких, фибринозный плеврит и перикардит, а также скопление кровянистой жидкости в грудной полости. При хроническом течении у большинства трупов в легких находили инкапсулированные очаги некроза. Из проб внутренних органов павших и вынужденно убитых животных выделили культуру Actinobacillus pleuropneumoniae.
SUMMARY
Data on studying clinical and pathologianatomic peculiarities of experimental Actinobacillus pleuropneumoniae in pigs are shown in the paper. Animals were inoculated intravenously, intratracheally and intrana-sally. A typical disease pattern was successfully reproduced using all infection routes. The incubation period was 6-24 hours. Our observations of experimentally infected pigs showed that the disease had three clinical forms: superacute, acute and chronic. Hemorrhagic pneumonia, fibrinous pleurisy and pericarditis, as well as accumulation of bloody fluid in the respiratory cavity were observed at necropsy. In case of a chronic disease most carcasses showed encapsulated necrosis foci in the lungs. Actinobacillus pleuropneumoniae culture, used for inoculation, was isolated from viscera samples of dead and emergency slaughtered animals.
Литература
1. Сидоров, М.А. Гемофилезы животных / М.А. Сидоров, Д.И. Скородумов. М.: Агропромиздат, 1986. С. 29-31.
2. Sebunya, T. N. K. Haemophilus pleuropneumoniae infection in swine: a review / T. N. K. Sebunya, J. R. Saunders // J. Am Vet. Med. Assoc. 1983. Vol. 182. Р 1331-1337.
3. Dom, P. In vivo association of Actinobacillus pleuro-pneumoniae serotype 2 with the respiratory epithelium of pigs / P. Dom, IF Haesebrouck, R. Ducatelle, G. Charlier // Infect. Immun. 1994. Vol. 62. P. 1262-1267.
4. Maccines, J. I. Actinobacillus and Haemophilus. Pathogenesis of Bacterial Infections in Animals ed.: C. L. Gyles, C. O. Thoen, / J. I. Maccines, N. L. Smart. Ames: Iowa State University Press. 1993. Vol. 1.
P. 188-200.
4. Sidibö, M. Detection of Actinobacillus pleuropneumoniae in the porcine upper respiratory tract as a complement to serological tests / M. Sidibö, S. Messier, S. Lariviöre et al. //Can. J. Vet. Res. 1993. Vol. 57. P. 204-208.
5. Lechtenberg, K. F Characterization of an Actinobacillus pleuropneumoniae seeder pig challenge-exposure model / K. F Lechtenberg, T. R. Scryock, G. Moore // Am. J. Res. 1994. Vol. 55, №. 12. P. 201-209.
6. Janetshke, P. Beitrag zur experimentellen Hae-mophyilusinfektion (Haemophyilus paragemolyti-cus, Haemophyilus parasuis) bei SPF-Ferkeln / P. Janetshke, P. Kielstein, W Schonherr et al. // Arch. Exp. Vet. Med. 1977. Vol. 3. P. 347-357.
7. Rosendal, S. Comparative virulence of porcine Hae-mophyilus bacteria / S. Rosendal, D.A. Boyd, K.A. Gilbride // Can. J. Comp. Med. 1985. Vol. 49. P. 68-74.
8. Болезни свиней / В.А. Сидоркин, В.Г Гавриш, А.В. Егунова, С.П. Убираев. М.: Аквариум-принт, 2007. С. 385-388.
9. Udeze, FFA. Role of Haemophilus pleuropneumoni-ae lipopolisacharide endotoxin in the pathogenesis of porcine Haemophilus pleuropneumonia / FA. Udeze, K.S. Latimer, S. Kadis // J. Am Vet. Med. Assoc. 1987. Vol. 48, №. 5. P 768-773.
УДК 619:579.843.96:615.371
Д.А. Бирюченков, В.С. Русалеев, А.П. Пономарев
ИНАКТИВАЦИЯ ACTINOBACILLUS PLEUROPNEUMONIAE ФОРМАЛЬДЕГИДОМ
Введение
ЛсНпоЬасШш рЬеиторпеишотае является возбудителем актинобациллезной плевропневмонии свиней - инфекционного контагиозного заболевания, характеризующегося септикотоксемией, геморрагической и гнойно-некротизирующей пневмонией, а также серозно-фибринозным плевритом, перикардитом и артритами. Заболевание распространено на территории РФ, что создает необходимость его специфической профилактики [7]. При создании инактивированных антибактериальных вакцин главной задачей является получение полноценного бактериального сырья, качество которого во многом зависит от используемого инактиванта.
Формальдегид - высокореактивное соединение, естественный метаболит клеток тканей человека и животных [8]. Препараты формальдегида широко используются на практике в виде 0,06-0,5% раствора как инактивант при производстве антибактериальных, противовирусных и иных иммунобиологических препаратов. Особый интерес для науки и практики представляют особенности механизма этого явления в отношении бактерий и вирусов [1, 10, 12]. Однако информация по использованию формальдегида для инактивации Л. рЬеиторпеишотае скудна.
Общим признанием пользуется версия о том, что основное воздействие формальдегида распространяется на полинуклео-тиды и аминогруппы белка. Аминогруппы ЫН2- соединяются с одной или двумя молекулами формальдегида, а ЫН-груп-пы только с одной, с образованием вначале лабильных метилольных производных, а затем стабильных метиленовых соединений. Реакции формальдегида с белками и нуклеиновой кислотой приводят к образованию стабильных межмолекулярных по-
перечных связей между аминокислотами и основанием одной или двух нуклеиновых кислот. Этот механизм сопровождается первичными повреждениями, деспирали-зацией и инактивацией нуклеиновых кислот, существенными конформационными изменениями полипептидной цепи, а также стабилизацией макроструктуры биополимеров. Одновременно ингибируется токсичность и стабилизируются антигенные и иммуногенные свойства биополимеров, что лежит в основе производства иммунобиологических препаратов. Полученные препараты, как правило, безвредны, сохраняют высокую антигенность и иммуноген-ность и стабильны при длительном хранении [1, 3, 10, 11, 12, 13].
Существует иное обоснование механизма взаимодействия формальдегида с ДНК бактерий. По мнению авторов, деградация нуклеиновых кислот происходит под действием монометилольных производных, которые образуются в результате взаимодействия пула свободных аминокислот с формальдегидом. Образующиеся соединения модифицируют основания ДНК в деспирализованных участках бактерий с потерей аденина и деградацией нуклеиновых кислот [2, 5].
Цель работы: изучить процесс инактивации бактерий ЛсНпоЬасШш рЬеиторпеи-шотае формальдегидом и исследовать морфологию и ультраструктуру актиноба-цилл как основного сырья для изготовления вакцин.
Материалы и методы
В работе использовали два гетеро-логичных в серовариантном отношении штамма Л. рЬеиторпеишотае, полученных из Американской коллекции типовых культур (№ 27088 и № 33377) и два ге-терологичных в серовариантном отношении изолята бактерий Л. рЬеиторпеишот-
