CC BY
41
вых факторов, в частности, фактор роста гепатоцитов (НОР), преобразовывающий фактор роста альфа (ТОРа), гепаринсвя-зывающий эпидермальный фактор роста (НВ-ЕОР). Стимуляторами роста гепатоцитов в культуре являются НОР и ТОРа, НОР продуцируется непаренхиматозными клетками в печени и воздействует на гепатоциты с помощью паракринных и эндокринных механизмов. ТОРа и НВ-ЕОР относятся к семейству эпидермальных ростовых факторов и воздействуют через рецепторы на окислительное фосфорилирование, ведущее к репликации ДНК. ТОРа продуцируется гепатоцитами и осуществляет функционирование через аутокринный механизм, так как гепатоциты продуцируют лиганды и содержат подходящие рецепторы для связывания. НВ-ЕОР связывает начало и прогрессию регенерации печени. Эти три фактора роста оказывают уникальный эффект на репликацию и выживаемость гепатоцитов, а также необходимы для оптимальной регенерации. На фоне восстановления функциональных свойств клеток печени снижается токсическое действие аммиака, меркоптанов и ароматических аминокислот. На фоне снижения интоксикации улучшается психоэмоциональный фон, повышается физическая активность, что отражается на самостоятельной оценке пациентов своего здоровья.
УДК 616.369-002.28
КЛЕТОЧНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ ПРИ ВИРУСНЫХ ПОРАЖЕНИЯХ ПЕЧЕНИ
Д. В. ИВАНОВ*
Ключевые слова: вирусные поражения печени
Подсчитано, что 40% населения земли имели контакт или являются носителями вируса гепатита В (ВГБ). В разных регионах мира инфицированность ВГБ колеблется от 0,1% до 20%, в России эта цифра составляет около 3 млн. человек - чуть больше 2%. Такой разброс связан с различием в возрастной инфициро-ванности, которая четко коррелирует с хронизацией процесса. Наибольшее количество инфицированности происходит в раннем возрасте. В развитых странах инфицированность уменьшается, что связано с проведением вакцинации. Однако, имеющиеся сведения из-за бессимптомного протекания ВГБ не достаточно достоверны. По данным инфицирование ВГБ в перинатальном периоде составляет приблизительно 90%, в возрасте от 1 до 5 лет - 20-50%. Ежегодно погибает около 1 миллиона населения планеты от причин, связанных с ВГБ.
В мире насчитывается около 500 млн. инфицированных вирусным гепатитом С (ВГЦ). По частоте ВГЦ стоит на первом месте среди всех инфекций, передающихся через кровь. Из них ежегодно умирает 8 - 10 тыс. больных. Большинство трансплантаций печени выполняется также больным ВГЦ. На VIII Всероссийском съезде эпидемиологов особо выделена проблема неуклонного роста ВГЦ в стране, отсутствие соответствующей вакцины, и ВОЗ прогнозирует, что к 2010 г. показатель заболеваемости ВГЦ может утроиться. К тому же в течение длительного времени у большинства инфицированных не отмечается каких-либо симптомов заболевания. Однако более чем у 50% инфицированных ВГС людей в конечном итоге возникает хронический гепатит С (ХГЦ). При этом у каждого 5-го из них развивается цирроз печени (ЦП), а у каждого 20-го - гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК).
Цель работы — изучение эффективности применения клеточных технологий у больных вирусным гепатитом В и С.
Объект и методы исследования. Были выбраны именно ВГБ и ВГЦ, так как вирус гепатит А очень редко (<2% случаев) переходит в хроническую форму и вызывает ЦП. Вирус гепатита Д, как правило, сопровождает ХГБ. Встречаемость вируса гепатита Е в настоящее время крайне мала. Так как эти вирусы имеют внепеченочные источники локализации, мы не использовали у пациентов аутологичные клетки и применяли только аллогенные клетки. В качестве алло-генных клеток использовались фетальные клетки. Материалом для получения клеток служила фетальная печень 2-го триместра гестации. Весь клеточный материал проходил проверку для исключения вирусной, бактериологической и микологической контаминации. В дальнейшем клеточный материал криоконсервировался. Непосредст-
венно перед введением клетки размораживали и проверяли жизнеспособность, которая составляла не менее 92%.
В исследование включены пациенты, которые не могли пройти полностью курс лечения пегилированными интерферона-ми и прервали его из-за осложнений (депрессии, лейкопении, диспепсии, аритмии, аллопеции). В группе было 25 человек из которых 5 человек (2 женщины и 3 мужчины) - контрольная группа, и 20 человек, из которых 18 мужчин и 2 женщины -основная. Возраст в основной группе составил 43±7 лет. В анамнезе у каждого было >2 попыток проведения курса лечения пегилированными интерферонами. 15 пациентов - с ХГЦ, с подтипом 3Ь, 5 пациентов - с подтипом вируса 1а. Клетки вводили при постоянном мониторинге витальных функций. Осложнений при введении и наблюдении не было. Перед введением клетки реконсервировали, в асептических условиях подготавливалиь, вводили минимум за месяц до курса противовирусной терапии.
Результаты оценивали ежемесячно. Все пациенты смогли пройти курс противовирусной терапии. Отмены препаратов не понадобилось. Пациентами отмечено, что курс противовирусной терапии они перенесли намного лучше, чем попытки предыдущих курсов. У пациентов с ВГЦ 1а после завершения курса противовирусной терапии в периферической крови при повторных измерениях вирус не обнаруживался, что позволило установить излечение. У больных с ВГЦ (генотип 3Ь) положительного результата удалось достигнуть у 50%. В ситуации с ВГБ, который протекал совместно с гепатитом Д, излечения не достигнуто, но отмечено выраженное уменьшение синдрома цитолиза.
Результаты проведенной работы объясняются следующими механизмами: восстановление гепатоцитов. Длительно существующее инфицирование вирусом гепатоцитов приводит их к гибели, выходу вируса в кровь и внедрение его в новые клетки. Поврежденные клетки заменяются новыми или соединительной тканью. Вводимая суспензия аллогенных (фетальных) клеток содержит печеночные прогениторы, которые стимулируют образование и дифференциацию клеток. Интерфероны вырабатываются при повреждении клетки вирусом (защитный механизм). Подразделяются на а, р, X. Интерферон-р - ключевой компонент семейства интерферонов в клеточной защите против ХГЦ, благодаря паракринному эффекту ограничивает распространение вируса от клетки к клетке. Определяется через 2 недели после инфицирования и держится в течение 2 месяцев.
Стимуляция иммунной системы проходит через опосредованные эффекты. В гетерогенной суспензии находятся гемопо-этические стволовые клетки. Печень выполняет кроветворную и иммунную функцию, стволовые клетки стимулируют активизацию внутренних макрофагов печени, клетки Купфера.
Депонирование в нишах стволовых клеток. Сохранение в нишах прогениторных клеток, присутствующих в суспензии, позволяет перенести курс тяжелой противовирусной терапии.
Каскад ауто- и паракринных эффектов. При запуске данного механизма идет активная борьба между отложением нитей фибрина и резорбцией нитей коллагена. В данном механизме активное участие принимают клетки Ито (звездчатые), а также матриксные металлопротеиназы, цитокины и ростовые факторы.
УДК 616.153.922
КЛЕТОЧНЫЕ ТЕХНОЛОГИИ ПРИ ГИПЕРЛИПИДЕМИЯХ Д. В. ИВАНОВ*
Ключевые слова: поражения печени при гиперлипидемиях
Гиперлипидемия (гиперлипопротеинемия, дислипидемия) -аномально повышенный уровень липидов и/или липопротеинов в крови человека. Нарушение обмена липидов и липопротеинов встречается довольно часто в общей популяции. Гиперлипидемия является важным фактором риска развития сердечно-сосудистых заболеваний в основном в связи со значительным влиянием холестерина на развитие атеросклероза.
Объект и методы. При отборе пациентов с различными заболеваниями печени (чаще невирусного поражения), сердечнососудистыми заболеваниями и сахарными диабетом установлено,
* Тульский государственный университет, Медицинский институт
* Тульский государственный университет, Медицинский институт
что у пациентов с высоким содержанием в периферической крови липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП), триглицеридов, холестерина (ХС), через определенное время происходили процессы стабилизации данных показателей. В эту группу вошли 54 пациента (9 женщин и 45 мужчин), их средний возраст составил 54±6 лет.
У 49 пациентов проводилось внутривенное введение алло-генных (фетальных) клеток в дозе 100 млн., под контролем основных витальных функций, 5 пациентам внутривенно вводились аутологичные клетки, полученные при пункции костей таза, с последующими культуральными работами. Количество введенных аутологичных клеток было не менее 120 млн. Осложнений при заборе аутологичных клеток и после их введения отмечено не было. От всех пациентов получено информированное согласие на применение клеточных технологий в лечении их болезней.
Тестирование пациентов проводилось через месяц после первичного введения клеток (аллогенных и аутологичных).
Результаты. Отмечено, что у всех пациентов происходило не только снижение уровня ЛПНП, холестерина, но и повышение уровня липопротеинов высокой плотности (ЛПВП). В среднем снижение ЛПНП, холестерина в течение первого месяца составляло 14,8%, повышение ЛПВП <10%. В дальнейшем группе пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями выполнялись повторные введения клеток. Достоверно показано, что корректировка дислипидемии происходит в течение первого месяца и наиболее выражена у пациентов с применением аллогенных, а не аутологичных клеток. После первичного однократного введения эффекты снижения и нормализации дислипидемии длились в течение 3-х месяцев. Затем происходила стабилизация процесса.
Клинический эффект объясняется органотропностью алло-генных клеток, способностью их тканеспецифично заселять печень, нормализовать метаболизм ЛПОНП, ЛПНП и ХС повреждённых клеток, а также способствовать восстановлению нормальной рецепции липопротеидов на поверхности гепатоцитов. Другой возможный механизм их действия - неспецифический. Введёные клетки, будучи малодифференцироваными, с помощью биологически активных веществ (цитокинов, факторов роста) активизируют собственные эндогенные механизмы регуляции восстановительных процессов в печени, путём регуляции диффе-ренцировки клеток макрофагально-моноцитарного ряда и выделения ими собственных (эндогенных) регуляторных пептидов. Регуляторные свойства аллогенных клеток могут быть воспроизведены аутологичными клетками костного мозга, в популяции которых присутствуют плюрипотентные клетки.
Заключение. Клеточные технологии позволяют осуществлять коррекцию дислипидемий различного генеза.
УДК 615.34:599.745, 665.215
ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ЛИПОСОМАЛЬНЫХ СРЕДСТВ ИЗ ПРИРОДНЫХ ЛИПИДОВ
Г.П. ЛАМАЖАПОВА, С.Д. ЖАМСАРАНОВА, А.Ц. ХАНДАЕВА*
Благодаря широкому использованию биотехнологических подходов при конструировании лекарственных, лечебнопрофилактических и косметических средств, современный рынок насыщен различными их формами. Тем не менее, далеко не все задачи решены положительно или с максимальной результативностью. В последнее время широкое распространение получило направление, связанное с конструированием лекарственных средств на основе наночастиц. Одним из представителей нанокапсул, широко применяемых в медицине и фармакологии, являются липосомы как контейнеры для доставки лекарственных средств. Липосомы формируют как из природных, так и синтетических индивидуальных фосфолипидов, а также из смеси фосфолипидов. Имеющиеся методы получения липосом позволяют заключать в полость фосфолипидных везикул водорастворимые лекарственные препараты и встраивать в мембраны липофильные биологически активные вещества [1]. Ранее нами были разработаны способы получения липосомальных структур на основе
Восточно-Сибирский государственный технологический университет, 670013, г. Улан-Удэ, ул. Ключевская, 40В, стр. 1, тел. (3012) 373433, факс (3012) 431415, E-mail: [email protected]
смеси яичных фосфолипидов [2] и фосфолипидов печени байкальской нерпы [3] с добавлением триацилглицеролов жира нерпы. Экспериментально было показано, что полученные липо-сомальные средства обладают активностью в отношении иммунной и гепатобилиарной систем организма на фоне их угнетения.
Цель исследования - оценка противовоспалительных свойств разработанных липосом.
Материал и методы. Липосомальные средства готовили из смеси яичных фосфолипидов, а также фосфолипидов печени с добавлением жира байкальской нерпы в концентрации 60% по разработанным способам [2, 3]. Экспериментальная работа выполнена на белых беспородных крысах обоего пола массой 150250 г. Противовоспалительную активность липосом оценивали в экспериментах, проведенных на белых беспородных крысах с использованием двух моделей острого перитонита. В первом случае острый перитонит вызывали внутрибрюшинным введением крысам 1 мл 0,2% раствора нитрата серебра [4]. Липосомальные средства вводили за 30 минут и через 1 час после инъекции нитрата серебра. Через 3 часа после введения флотогенного агента животных декапитировали. Определяли объем экссудата в брюшной полости. Брыжейку фиксировали смесью Карнуа и окрашивали 0,05% раствором толуидинового синего. Осуществляли подсчет количества дегранулированных тучных клеток в 100 окнах полей зрений при увеличении (7x20). Влияние на сосудистую проницаемость определяли на модели острого перитонита, вызванного введением внутрибрюшинно 5,0 мл 0,05% раствора уксусной кислоты на 0,85% изотоническом растворе хлорида натрия, нагретого до 38°С. Через 30 с в хвостовую вену крыс вводили 0,5 мл 1% раствора метиленового синего [5]. Через 1 час животных декапитировали, собирали перитонеальную жидкость, центрифугировали и определяли интенсивность окраски экссудата фотометрически при длине волны 540 нм. Средства вводили превентивно за 1 час до введения р-ра уксусной кислоты.
В обоих случаях липосомальные средства вводили животным внутрижелудочно в дозе 1.5 мг/кг (в пересчете на жир нерпы). Активность липосомальной формы на основе фосфолипидов печени с добавлением жира нерпы сравнивали с активностью липосом на основе смеси яичных фосфолипидов с добавлением жира нерпы, а также смеси фосфолипидов печени нерпы с добавлением фармакопейного препарата «Рыбий жир». Животным контрольной группы вводили эквивалентный объем физиологического раствора. Полученные в ходе экспериментов данные статистически обработаны общепринятыми методами с определением средней величины (М) и средней арифметической ошибки (м). Достоверность результатов оценивалась с применением критерия Стьюдента. Различие считали достоверным при вероятности 95% (Р < 0,05).
Результаты. Критерием развития и выраженности перитонита являлись объем экссудата в брюшной полости и процент дегранулированных тучных клеток в брыжейке. Полученные данные представлены в табл. 1.
Таблица 1
Влияние липосомальных средств на экссудацию в брюшной полости и дегрануляцию брыжеечных тучных клеток при остром перитоните (п=10)
Группа животных Объем внутрибрюшной жидкости, мл Процент дегранули- рованных тучных клеток
Интактная Не определяется 8,0±0,2
Контрольная 6,4±0,4* 93,0±1,0*
ЛС из яичных фосфолипидов с жиром нерпы - лс (яф+жн) 3,0±0,5** 32,0±0,03**
ЛС из фосфолипидов печени с жиром нерпы - лс (фн+жн) 1,5±0,5**’ *** 36,7±2,5**
ЛС из фосфолипидов печени нерпы с рыбьим жиром - лс (фн+жр) 3,75±0,75** 36,7±1,8**
Примечание: * - достоверное отклонение значения в контрольной группе от значения в интактной группе животных; ** - достоверное отклонение значения в соответствующих группах от значения в контрольной группе животных; ***- достоверное отклонение значения в группе лс (фн+жн) от значения в группах лс (яф+жн) и лс (фн+жр).
