CC BY
32
УДК: 579.672 DOI: 10.21323/2071-2499-2018-2-39-43 Табл. 3. Ил. 2. Библ. 14.
КАЧЕСТВО ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД — ЗАЛОГ ДОСТОВЕРНОСТИ И ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Батаева Д.С., канд. техн. наук, Панфилова Е.П.
ФНЦ пищевых систем им. В.М. Горбатова
Ключевые слова: Campylobacter spp., Listeria monocytogenes, Listeria spp., Salmonella spp., питательные среды, FEPAS
Реферат
Ключевым аспектом получения достоверных результатов микробиологического анализа является высокое и стабильное качество питательных сред. Качество питательных сред характеризуется тремя основными показателями - производительностью, селективностью и специфичностью. Оценку этих характеристик проводили согласно ГОСТ ISO 11133-2016. Представленные нами результаты исследования питательных сред доказали их пригодность для микробиологических исследований. Участие в международных сличительных микробиологических испытаниях с использованием протестированных питательных сред дало возможность на международном уровне доказать достоверность результатов собственных исследований среди сотни участников.
THE QUALiTY OF THE CULTURE MEDiUMS
iS A KEY TO THE VALiDiTY AND REPRODUCiBiLiTY RESULTS
OF MiCROBiOLOCiCAL ASSAYS
Bataeva D.S., Panfilova E.P.
Gorbatov Research Center for Food Systems
Key words: Campylobacter spp,, Listeria monocytogenes, Listeria spp,, Salmonella spp,, culture medium, FEPAS
Summary
The high quality of the culture mediums is a crucial dimension to have reliable results of microbiological assays. Quality of the culture mediums is characterized by three main indicators: productivity, selectivity and specificity. The evaluation of these was conducted in according to GOST ISO 11133-2016. Presented research findings of culture mediums show their suitability for microbiological assays. Participation in international benchmarking using tested culture mediums prove the reliability of one's own research among hundreds of participants at the international level.
Введение
Для получения достоверных высокоточных результатов исследований в лабораторную практику должна быть внедрена процедура регулярного мониторинга правильности выполнения исследований и качества получаемых результатов, например, участием в межлабораторных сличительных испытаниях [1].
Участие в программах проверки квалификации посредством международных сличительных испытаний (МСИ) является наиболее эффективной формой контроля и подтверждения профессиональных качеств испытателя, а также оценка эксплуатационных характеристик питательных сред.
Питательные среды являются важнейшим элементом микробиологических исследований. Питательная среда (culture medium) представляет собой смесь веществ в жидком, полутвердом или твердом состоянии, в которую входят природные и/или синтетические ингредиенты, предназначенные для поддержания размножения (с ингиби-рованием роста определенных микроорганизмов или без него), идентификации или сохранения жизнеспособности микроорганизмов [2]. Приемлемость каждой партии среды, а также пригодность ее для конкретной цели и способность обеспечивать получение достоверных результатов оценивается путем их испытаний. Промышленное производство питательных сред осуществляется в соответствии с регулиру-
ющими нормативно-правовыми актами, действие которых распространяется на все этапы их получения: непосредственно производство, контроль их качества, порядок государственной регистрации и лицензирования производства, а также порядок сертификации готовых питательных сред и их компонентов [3, 4].
Каждая лаборатория, которая изготавливает среды для собственного использования, обязана регулярно проводить испытания, т.к. очень сложно обеспечить стандартизацию приготовления питательных сред. Достоверность и воспроизводимость результатов во многом зависят от функциональности питательных сред. Таким образом, соответствие питательных сред установленным эксплуатационным критериям является предварительным условием надежности любой работы в области микробиологии. Для оценки пригодности питательных сред для проведения микробиологических исследований необходимо провести исследование функциональности каждой среды по следующим критериям: производительность, селективность, специфичность.
Производительность питательной среды - это степень роста целевого микроорганизма на питательной среде при определенных условиях.
Селективность питательной среды -это степень ингибирования нецелевого микроорганизма на/в селективной питательной среде при определенных условиях.
Специфичность питательной среды -это демонстрация при определенных условиях того, что нецелевые микроорганизмы не проявляют те же визуальные характеристики, что целевые микроорганизмы.
До 01.07.2017 первоочередные требования к питательным средам, предназначенных для исследования пищевых продуктов, воды и кормов для животных, были описаны в ГОСТ IS0/TS11133-1-2014 и ГОСТ ISO 11133-2-2011 [5, 6], после этой даты в ГОСТ ISO 11133-2016 [2].
Целью настоящего исследования является оценка качества питательных сред и результатов международных сличительных испытаний FEPAS®, полученных с их использованием.
FEPAS® - схема профессионального тестирования микробиологических лабораторий, занятых в сфере исследований пищевых продуктов, которая стартовала в 1997 году. К схеме подключены свыше 500 участников из 65 стран мира. FEPAS® включает контрольные задачи для количественного подсчета и/или детекции микроорганизмов в образцах продовольственного сырья, пищевых продуктов (говядина, курица, рыба, детское питание, сухое молоко, яйца, мука, салат, какао, шоколад, рис, специи, зелень и т.д.) и кормов. В контрольных материалах требуется определить микроорганизмы порчи, санитарно-пока-зательные, условно-патогенные и/или патогенные микроорганизмы. Наличие в контрольных материалах нецелевой микрофлоры обеспечивает реалистичность задачи [7].
Материалы и методы
При подсчете бактерий семейства Enterobacteriaceae, а также бактерий группы кишечных палочек (БГКП) и E. coli использовали селективные жидкие среды: бульон для накопления энтеробакте-рий (Бульон Мосселя), Бриллиантовый зеленый лактозный желчный бульон (Brilla бульон) и EC бульон с новобиоцио-ном, а также селективные плотные среды для выделения: Эндо агар и хромогенный агар для E. coli и колиформных бактерий. В зависимости от метода подсчета микроорганизмов выбирали метод контроля питательных сред. Для подсчета выше перечисленных микроорганизмов был выбран метод наиболее вероятного числа (НВЧ). Плотные среды для выделения использовали для подтверждения роста искомых бактерий в жидких селективных средах. Таким образом, жидкие и плотные питательные среды на производительность и селективность исследовали только качественным методом.
Для подсчета дрожжей и плесневых грибов использовали метод посева в агар Сабуро с хлорамфениколом. Производительность этой плотной селективной среды контролировали количественным методом, в тоже время селективность ее оценивали качественным методом. Коэффициент продуктивности для селективных сред должен быть PR > 0,5.
Для выявления Грамотрицательных бактерий Campylobacter spp. использовали: селективный бульон Болтона, агар для кампилобактерий, селективный агар CCDA для кампилобактера без крови (MCCDA-Preston), кровяной агар и бульон Brucella. Оценка этих питательных сред проводилась качественным методом, т.к. было необходимо установить наличие этих бактерий, а не их количество.
Бактерии Listeria monocytogenes относятся к роду Listeria и являются одним из его 6 видов. Для человека патогенными являются только бактерии Listeria mono-cytogenes, а для животных еще и Listeria ivanovii. Только эти 2 вида из 6 обладают фосфатидилинозитолфосфолипазной С активностью, что является их отличием от остальных видов бактерий рода Listeria при росте на средах, содержащих лецитин. Одна из них - хромогенный агар для выделения листерий по Оттави-ани-Агости, специфичность которой изучали качественным методом. Все среды, использованные в линейке выявления листерий, такие как UVM I, бульон Фрай-зера, питательный агар для выделения листерий (ПАЛ), трипказо-соевый агар (TSA) и хромогенный агар для выделения листерий по Оттавиани-Агости, контролировали по критериям производитель-
ности и селективности качественным методом.
К роду Salmonella относится более 2000 сероваров, наличие которых в различных объектах ограничено. Поэтому для их селективного накопления используется не менее двух сред: среда Раппапорта-Вассилиадиса с соей (RVS-бульон) и тетратионатная среда Мюллер-Кауфмана (МКТТ-бульон), а для восстановления поврежденных различными технологическими воздействиями клеток еще и забуференная пептоная вода. Плотными средами для выделения бактерий Salmonella spp. являются кси лозо-л изи новы й дезоксихолатны й агар (XLD-агар) и висмут-сульфитный агар (BCA). У всех этих сред определяли производительность и селективность качественным методом.
При изучении продуктивности, селективности и специфичности питательных сред были использованы целевые и нецелевые тест-штаммы микроорганизмов: Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Bacillus subtilis ATCC 6633/NCTC 10400, Candida albicans ATCC 10231, Сampy-lobacter jejuni 70.2T, Citrobacter freun-dii АТСС 43864, Enterococcus faecalis АТСС 29212, Escherichia coli АТСС 25922, Listeria innocua ATCC 33090, Listeria monocytogenes ATCC 35152, Proteus mirabilis ATCC 35659, Saccharomyces cerevisi-ae ATCC 9763, Salmonella enteritidis 11272, Salmonella typhimurium ATCC 14028.
Микробиологические исследования, проведенные с использованием пита-
тельных сред лаборатории, осуществляли на контрольных образцах, охарактеризованных в таблице 1. Они характеризуются не только различной матрицей, но и различной целевой, и нецелевой микрофлорой.
Для определения количества микроорганизмов порчи, таких как дрожжи и плесневые грибы, санитарно-показа-тельных Enterobacteriaceae, БГКП и E. coli и выявления патогенных бактерий рода Salmonella, Listeria monocytogenes и Campylobacter jejuni в контрольных образцах, использовали методы, изложенные в следующих ГОСТ.
1. Enterobacteriaceae согласно ГОСТ 32064-2013 [8];
2. БГКП согласно ГОСТ 31747-2012 [9];
3. E. coli согласно ГОСТ 30726-2001 [10];
4. Дрожжи и плесени согласно ГОСТ 10444.12-2013 [11];
5. Бактерий рода Salmonella согласно ГОСТ 31659-2012 [12];
6. Listeria monocytogenes согласно ГОСТ 32031-2012 [13];
7. Campylobacter jejuni согласно ГОСТ ISO 10272-1-2013 [14].
Результаты и обсуждение
Оценка качества питательных сред, используемых в лабораторной практике
Оценку производительности жидких и плотных питательных сред в зависимости от метода исследования целевого микроорганизма проводили количе-
Таблица 1
Характеристика состава микрофлоры контрольных образцов
Наименование матрицы Определяемые показатели в матрице Нецелевая микрофлора* образца Целевой штамм* образца
Говядина Количественный подсчет Enterobacteriaceae, БГКП и E. coli Kocuria rhizophila, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus Escherichia coli
Мясо птицы Выявление бактерий Campylobacter spp. Proteus mirabilis, Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa Отсутствует
Мясо птицы Выявление бактерий Campylobacter spp. Proteus mirabilis, Bacillus cereus, Ps. aeruginosa Campylobacter jejuni
Говядина Количественный подсчет дрожжей и плесеней Kocuria rhizophila, Lactobacillus plantarum Saccharomyces cerevisiae
Мясо птицы Выявление Listeria monocytogenes / Listeria spp. Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Proteus mirabilis Listeria monocytogenes
Мясо птицы Выявление Listeria monocytogenes /Listeria spp. Escherichia coli, Staphylococcus aureus Listeria ivanovii
Сухое молоко Выявление Salmonella spp. Bacillus coagulans, Lactobacillus plantarum, Ps. aeruginosa Salmonella cerro
Сухое молоко Выявление Salmonella spp. B.coagulans, L. plantarum, Ps.aeruginosa Отсутствует
* Информация была предоставлена нам только после окончания исследований, их оценки в отчете по результатам исследований
ственным или качественным методами. Например, коэффициент производительности агара Сабуро с хлорамфениколом для Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 и Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763 был равен 1,0, для Candida albicans ATCC 10231-0,9, что позволит использовать данный агар для достоверного подсчета дрожжей и плесневых грибов.
Бульон для подсчета энтеробактерий (бульон Мосселя), бриллиантовый зеленый лактозный желчный бульон (Brilla бульон) для БГКП и EC бульон с новобио-ционом для E. coli оценивали с использованием целевого штамма Escherichia coli АТСС 25922. Данный тест-штамм при различных температурах культивирования за счет образования кислоты и газа при расщеплении глюкозы или лактозы продемонстрировал продуктивность этих сред. Этот же микроорганизм на плотных средах Эндо агаре и хромогенном агаре для E. coli и колиформных бактерий имел выраженный рост и был оценен по 2 балльной шкале на 2 единицы.
При оценке продуктивности жидких селективных сред для обогащения использовали целевые и нецелевые штаммы одновременно. Если после культивирования такой смеси на жидкой селективной среде и пересева из нее на плотную селективную среду вырастит менее 10 колоний целевого штамма, необходимо выяснять причину низкой продуктивности. Например, для оценки селективного бульона Болтона использовали «коктель» микробов Сampylobacter jejuni 70.2T, Escherichia coli АТСС 25922 и Proteus mirabilis ATCC 35659 и инкубировали сначала в течение (5±1) ч при температуре (37±1)°С, затем на протяжении (44±4) ч при (41,5 ±1) °С в микро-аэрофильных условиях. В результате на мГСЭА выросло более 10 серого цвета, плоских и влажных колоний, которые были идентифицированы как бактерии Сampylobacter jejuni.
UVM и бульон Фрайзера оценивали на продуктивность с помощью Listeria mono-cytogenes ATCC 35152, E. coli ATCC 25922 и E. faecalis ATCC 29212. Культивировали в UVM в течение (24±2) ч при температуре (30±1)°С и в бульоне Фрайзера на протяжении (48 ±2) ч при (37±1)°С. На этих средах регламентированные условия культивирования обеспечили рост целевого штамма L. monocytogenes ATCC 35152, а также рост на хромоген-ном агаре для выделения листерий по Оттавиани-Агости более 10 сине-зеленых колоний с зоной помутнения вокруг, характеризующая фосфатидилинозитол-фосфолипазную С активность данного штамма.
При выявлении бактерий рода Salmonella в качестве селективных сред обогащения использовали среды Раппа-порта-Вассилиадиса с соей (RVS-бульон) и тетратионатную среду Мюллер-Кауфмана (МКТТ-бульон), продуктивность каждой из которых исследовалась с использованием двух «наборов» микробной взвеси: Salmonella enteritidis 11272 + Escherichia coli АТСС 25922 + Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853 и Salmonella ty-phimurium ATCC 14028 + Escherichia coli АТСС 25922 + Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853. По истечению (24 ±3) ч культивирования при (41,5 ± 1) °С на RVS бульоне и (37±1)°С на MKTT бульоне и дальнейшем пересеве на XLD агар были получены результаты, позволяющие считать удовлетворительной продуктивность МКТТ и RVS бульонов, что позволило рекомендовать эти среды для накопления сальмонелл.
Жидкие неселективные среды, такие как ЗПВ, TSB, а также плотные неселективные среды TSA, кровяной агар и плотные селективные агары -CCDA для кам-пилобактера без крови (MCCDА-Preston), хромогенный агар для выделения листерий по Оттавиани-Агости, XLD агар и ВСА обеспечивали выраженный рост целевого штамма.
Если питательные среды обладают низкой селективностью, невозможно получить достоверные результаты, т.к. рост нецелевого штамма в объекте исследования не может быть полностью или частично подавлен, соответственно он может «конкурироватать» с целевым штаммом за набор питательных компонентов среды и тем самым снижать ее продуктивность для целевого штамма.
Селективность питательных сред, предназначенных для Грамотрицатель-ных бактерий, тестируется на Грамполо-жительных штаммах, а также с помощью бактерий, способных расти при регламентированных для целевого штамма условиях. Для бульона Мосселя, Brilla бульона, EC бульона с новобиоционом, Эндо агара и хромогенного агара для E. coli и колиформных бактерий такими штаммами являются Enterococcus faecalis АТСС 29212 и Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853. При регламентированных условиях культивирования в бульоне Мосселя, EC бульон с новобиоционом, на Эндо агаре и хромогенном агаре для E. coli и колиформных бактерий наблюдали полное ингибирование роста Enterococcus faecalis, а в Brilla бульоне была незначительна мутность без газообразования. Штамм Pseudomonas aeruginosa АТСС 27853, который может расти при температуре 42°С, был иноку-
лирован в EC бульон, предназначенный для накопления E. coli при 44 0С. Однако рост оксидазаположительного штамма не был зарегистрирован даже через 48 ч культивирования.
Все среды, предназначенные для выявления патогенных микроорганизмов рода Listeria, Salmonella и Campylobacter, были инокулированы Escherichia coli АТСС 2S922 и культивированы на тестируемых средах в регламентированных условиях для целевого штамма. В основном наблюдали полное ингибирование роста данного штамма на всех средах для листерий и частичное на средах для выявления Salmonella spp. и Campylobacter spp.. Кроме E. rnli использовали Proteus mirabilis ATCC 3S6S9, Staphyloccus au-reus ATCC 2S923 и Enterococcus faecalis АТСС 29212. Proteus mirabilis полностью ингибировался после культивирования при 44 0С в бульоне Болтона, а рост Staphyloccus aureus на средах MŒDA-Preston и на агаре для кампилобактерий не был обнаружен. Тест-штамм Enterococcus faecalis АТСС 29212 в жидких селективных средах для листерий и сальмонелл полностью не гибнет и тестируется на уровне менее 1GG клеток, что отвечает требованиям, предъявляемым к этим средам. Селективные компоненты плотных идентификационных питательных сред, таких как хромогенный агар для выделения листерий, XLD агар и ВСА для сальмонелл, полностью подавляют рост энтерококков, но на среде ПАЛ наблюдается слабый рост эскулинположительных кокков.
Был проведен анализ специфичности двух плотных идентификационных сред для листерий и одной для БГКП. Хромогенный агар для листерий и ПАЛ были иннокулированы не патогенным штаммом L. innocua ATCC 33G9G и патогенным L. monocytogenes ATCC 3S1S2. На первой среде рост патогенного и непатогенного штаммов отличался наличием зоны помутнения среды вокруг колонии L. monocytogenes и отсутствием ее вокруг колонии L. innocua. На среде ПАЛ внутриродовых отличий в характере роста двух видов одного рода листерий не наблюдалось. Данные этого исследования указывают на специфичность хромогенного агара для листерий. Хромогенный агар для E. coli и колиформных бактерий был протестирован с помощью Citrobacter freundii АТСС 43864, который является одним из представителей БГКП, также как и E. coli. При температуре 37 0С на данной среде E. coli образовывали синие колонии, а Citrobacter freundii розовые колонии, который при температуре 44 0С не проявлял признаков роста.
о
о ^
IX 13 13 IX е
Рисунок 1. Результаты определения количества Enterobacteriacea, бактерий группы кишечной палочки (БГКП) и вида E. coli в говядине
E. coli
БГКП
Enterobacteriacea
1 2 3
Количество клеток, logKOE/r
I Полученное количество, l ogKTE/r Максимально допустимое количество, logKTE/r Оптимальное количество, logKTE/r Минимально допустимое количество, logKTE/r
Рисунок 2. Результаты определения суммарного количества дрожжей и плесневых грибов в говядине
со си
О 1
X
«
r
IX
о
о
IX
к
1 2 3
Количество клеток, logKOE/r
■ Полученное количевтво, logKTE/г
■ Максимально допустимое количество, logKTE/r
■ Оптимальное количество, logKTE/r
■ Минимально допустимое количество, logKOT/r
0
4
5
0
4
5
Результаты участия в профессиональном тестировании микробиологических лабораторий в международных сличительных испытаниях FEPAS®
При подсчете; количества санитар-но-показательных микроор ганизмов семейства Enterobacteriaceae, бактерий группы кишечной палочки (БГКП) и вида E. coli в говядине (таблица 1) методом НВЧ были получены результаты, представленные на рисунке 1.
В РФ бактерии семейства Enterobacteriacea, бактерии группы кишечной палочки (БГКП) и Е. coli не нормируются количественно, а только устанавливают их наличие или отсутствие в определенной массе навески (в 0,1 г и 0,01 г). При определении их количества в говядине нами был использован метод НВЧ, предназначенный для продуктов в одном грамме которых не более 150 клеток. Несмотря на то, что фактическое количество оказалось выше этого значения, результаты, полученные данным методом и равные 4,398 logKOE/г, находились в диапазоне приемлемых результатов 3,67-4,67 logKOE/г. Данный факт подтверждает высокую производительность бульона Мосселя, Brilla бульона и EC бульона с новобиоционом. Для идентификации микрофлоры, выросшей на жидких средах, был проведен пересев на селективные плотные среды Эндо агар и хромогенныйагар для E. coli и колифор-мных бактерий. При изучении культураль-но-морфологических свойств колоний на этих средах рост нецелевой микрофлоры не был выявлен, что предполагает высокую селективность жидких и плотных селективных сред. На Эндо агаре выросли колонии с металлическим блеском, а на хромогенном агаре для E. coli и колифор-мных бактерий колонии только синего цвета. Результаты исследования указывают на то, что говядина была искусственно контаминирована только одним целевым штаммом из семейства Enterobacteriacea.
При подсчете количества микроорганизмов порчи в говядине (таблица 1), а именно дрожжей и плесневых грибов были получены результаты, представленные на рисунке 2.
Данные, представленные на рисунке 2, были получены глубинным методом посева десятикратных разведений говядины в питательный агар. Коэффициент производительности для Сабуро агара с хлорамфениколом должен быть PR >0,5. Однако при оценке коэффициент производительности среды был выше этого значения и составил 0,9-1,0, что позволило получить результат - 4,146 log КОЕ/г, который входил в диапазон контрольных
значений 3,49-4,49 log КОЕ/г. 3/ счет высокой селективности на данной среде не был обнаружен рост нецелевых микроорганизмов, хотя составителями контрольных образцов были внесены Kocuria rhizophila и Lactobacillus plantarum.
При выявлении патогенных микроорганизмов из образцов с различной матрицей были получены результаты,
прикиденные в таблице 2. Данные таблицы 3 наглядно демонстрируют контрольные значения.
Была проведена исследовательская работа контрольных образцов в количестве 6 проб, контаминированных патогенами трех родов: Listeria, Salmonella и Campylobacter. Визуальный анализ результатов, представленных в таблицах 2
Таблица 2
Результаты собственных исследований контрольных образцов (РЕРДБ®) на наличие патогенных микроорганизмов
Наименование выявляемых бактерий
Проба Listeria monocytogenes Listeria spp. Salmonella spp. Campylobacter spp.
Результаты выявления
А + - + -
В - + (L. ivanovii) - +
Таблица 3 Заявленный состав патогенной микрофлоры контрольных образцов (FEPAS®)
Наименование внесенных бактерий
Проба Listeria monocytogenes Listeria spp. Salmonella spp. Campylobacter spp.
Данные протокола FEPAS
А + + (L. monocytogenes) + -
В
+
+
и 3, показал, что одна из двух проб (проба «А» и «В») обязательно была контами-нирована искомым целевым патогеном. Результаты, полученные нами (таблица 2), имели сходимость с результатами, заявленными организацией FEPAS (таблица 3).
Несмотря на то, что пробы «А» и «В» мяса птицы были контаминиро-ваны Proteus mirabilis, Bacillus cereus и Pseudomonas aeruginosa за счет высокой селективности жидких сред накопления и особенно плотных селективных сред, было минимизировано их влияние на интенсивность роста целевого штамма Campylobacter jejuni. Грамотрицательные бактерии Proteus mirabilis и Pseudomonas aeruginosa предположительно были использованы как индикатор отклонения от протокола исследования и низкого качества эксплуатационных характеристик питательных сред.
При сравнительном анализе данных пробы «А» в таблицах 2 и 3 видно, что при исследовании мяса птицы на наличие бактерий Listeria spp. нет сходимости. Однако такой результат был получен не из-за нарушения протокола исследования и качества сред. Была поставлена задача - определить в мясе птицы наличие бактерий Listeria monocytogenes и Listeria spp. В процессе исследования пробы «А» было установлено присутствие в ней только одного из 6 видов листерий, а именно Listeria monocytogenes. Так как другие виды листерий кроме Listeria monocytogenes в исследуемом образце не обнаружены, было сделано заключение и выдан результат - «Listeria spp. не обнаружены». Но, видимо, под Listeria spp. в конкретной ситуации подразумевались любые виды выделенных листерий.
организмов питательных сред, что очень важно при исследованиях, проводимых в рамках научно-исследовательских работ и работ при оценке безопасности различных пищевых продуктов.
© КОНТАКТЫ:
Батаева Дагмара Султановна V +7(495) 676-60-11 a [email protected] Панфилова Елена Павловна a [email protected]
список литературы; REFERENCES:
1. IS0/IEC17025:2017 General requirements for the competence of testing and calibration laboratories. - Geneva. - 8 p.
2. ГОСТ ISO 11133-2016 Микробиология пищевых GOST ISO 11133-2016 Mikrobiologiya pischevyih produktov, продуктов, кормов для животных и воды. Приго- kormov dlya zhivotnyih i vodyi. Prigotovlenie, proizvodstvo, товление, производство, хранение и определение hranenie i opredelenie rabochih harakteristik pitatelnyih рабочих характеристик питательных сред. — М.: sred [Microbiology of food, animal feed and water. Prepa-Стандартинформ, 2016. — 98 с. ration, production, storage and performance testing of
culture media]. — M.: Standartinform, 2016. — 98 p.
3. Меньшиков, В.В. Внутрилабораторный контроль качества питательных сред для клинических микробиологических исследований. Клинические рекомендации / В.В. Меньшиков, Р.С. Козлов, М.С. Поляк и др. - М.: Ассоциация специалистов организаций лабораторной службы «Федерация лабораторной медицины», 2014. - 42 с.
Menshikov, V.V. Vnutrilaboratornyiy kontrol kachestva pitatelnyih sred dlya klinicheskih mikrobiologicheskih issledovaniy. Klinicheskie rekomendatsii [Menshikov, V.V. Intralaboratory control of the quality of nutrient media for clinical microbiological studies. Clinical recommendations] / V.V. Menshikov, R.S. Kozlov, M.S. Polyak i dr. — M.: As-sotsiatsiya spetsialistov organizatsiy laboratornoy sluzhbyi «Federatsiya laboratornoy meditsinyi, 2014. — 42 p.
4. Шепелин, А.П. Современное состояние и тенденции Shepelin, A.P. Sovremennoe sostoyanie i tendentsii v nor-в нормативно-правовом регулировании производ- mativno-pravovom regulirovanii proizvodstva, realizatsii ства, реализации и применения питательных сред. i primeneniya pitatelnyih sred. Analiticheskie materialyi Аналитические материалы / А.П. Шепелин, И.А. Дят- [The current state and tendencies in standard and legal лов. — Протвино: А-ПРИНТ ЗАО, 2012. — 48 с. regulation of production, realization and use of nutrient
mediums. Analytical materials.] / A.P. Shepelin, I.A. Dyat-lov. — Protvino: A-PRINT ZAO, 2012. — 48 p.
5. ГОСТ ^0^11133-1-2014 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству питательных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления питательных сред в лаборатории. - М.: Стандартинформ, 2014. - 20 с.
GOST ISO/TS11133-1-2014 Mikrobiologiya pischevyih produktov i kormov dlya zhivotnyih. Rukovodyaschie ukazaniya po prigotovleniyu i proizvodstvu pitatelnyih sred. Chast 1. Ob-schie rukovodyaschie ukazaniya po obespecheniyu kachestva prigotovleniya pitatelnyih sred v laboratorii [Microbiology of food and animal feeding stuffs. Guidelines on preparation and production of culture media. Part 1. General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory]. — M.: Standartinform, 2014. — 20 p.
6. ГОСТ ISO 11133-2-2011 Микробиология пищевых GOST ISO 11133-2-2011 Mikrobiologiya pischevyih produk-продуктов и кормов для животных. Руководящие tov i kormov dlya zhivotnyih. Rukovodyaschie ukazaniya po указания по приготовлению и производству пита- prigotovleniyu i proizvodstvu pitatelnyih sred. Chast 2. Prak-тельных сред. Часть 2. Практические руководящие ticheskie rukovodyaschie ukazaniya po ekspluatatsionnyim указания по эксплуатационным испытаниям пита- ispyitaniyam pitatelnyih sred [Microbiology of food and ani-тельных сред. - М.: Стандартинформ, 2011. - 52 с. mal feeding stuffs. Guidelines on preparation and production
of culture media. Part 2. Practical guidelines on performance testing of culture media]. - M.: Standartinform, 2011. - 52 p.
7. FEPAS® Пищевая микробиология [Электронный ресурс] / Испытательная лаборатория ООО «Компания СТАЙЛАБ». — М.: Испытательная лаборатория ООО «Компания СТАЙЛАБ». — Режим доступа: http:// stylab-test.com/services/hierarchy/24/FEPAS/
FEPAS® Pischevaya mikrobiologiya [[FEPAS® Food microbiology] [Elektronnyiy resurs] / Ispyitatelnaya laboratoriya OOO «Kompaniya STAYLAB». - M.: Ispyitatelnaya laboratoriya OOO «Kompaniya STAYLAB». - Rezhim dostupa: http://stylab-test.com/services/hierarchy/24/FEPAS/
8. ГОСТ 32064-2013 Продукты пищевые. Методы GOST 32064-2013 Produktyi pischevyie. Metodyi vy-выявления и определения количества бактерий се- iyavleniya i opredeleniya kolichestva bakteriy semeystva мейства Enterobacteriaceae. - М.: Стандартинформ, Enterobacteriaceae [Food products. Methods for detection 2013. - 28 с. and quantity determination of family Enterobacteriace-
ae]. - M.: Standartinform, 2013. - 28 p.
Выводы
Данное тестирование дало возможность на международном уровне провести анализ сходимости результатов собственных исследований среди сотни участников. В приложении 3 в отчетах ЕЕРАБ® участниками приводятся методы с указанием перечня использованных в исследовании питательных сред. Таким образом, достоверность результатов собственных исследований, полученных на питательных средах удовлетворительного качества, позволяет считать, что нами используются среды надежных производителей и имеется эффективная система приготовления, контроля и хранения их в лаборатории.
Контроль качества питательных сред, приготовленных в лаборатории, позволил исключить использование не стандартизованных, с низкой производительностью и селективностью, а также неспецифических для ряда микро-
9. ГОСТ 31747-2012 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий). - М.: Стандартинформ, 2012. - 20 с.
GOST 31747-2012 Produktyi pischevyie. Metodyi vyiyavleni-ya i opredeleniya kolichestva bakteriy gruppyi kishechnyih palochek (koliformnyih bakteriy) [Food products. Methods for detection and quantity determination of coliforme]. — M.: Standartinform, 2012. — 20 p.
10. ГОСТ 30726-2001 Продукты пищевые. Методы вы- GOST 30726-2001 Produktyi pischevyie. Metodyi vyiyav-явления и определения количества бактерий вида leniya i opredeleniya kolichestva bakteriy vida Escherichia Escherichia coli. — М.: Стандартинформ, 2001. — 8 с. coli [Food-stuffs. Methods for detection and determination
of Escherichia coli]. M.: Standartinform. — 2001. — 8 p.
11. ГОСТ 10444.12-2013 Микробиология пищевых про- GOST 10444.12-2013 Mikrobiologiya pischevyih produktov дуктов и кормов для животных. Методы выявления i kormov dlya zhivotnyih. Metodyi vyiyavleniya i podscheta и подсчета количества дрожжей и плесневых грибов kolichestva drozhzhey i plesnevyih gribov (s popravkoy) [Mi-(с поправкой). — М.: Стандартинформ, 2013. — 13 с. crobiology of food and animal feeding stuffs. Methods for
the detection and colony count of yeasts and moulds]. — M.:
Standartinform, 2013. — 13 p.
12. ГОСТ 31659-2012 (ISO 6579:2002) Продукты пище- GOST 31659-2012 (ISO 6579:2002) Produktyi pischevyie. вые. Метод выявления бактерий рода Salmonella. — Metod vyiyavleniya bakteriy roda Salmonella [Food prod-М.: Стандартинформ, 2013. — 25 с. ucts. Method for the detection of Salmonella spp.]. — M.:
Standartinform, 2013. — 25 p.
13. ГОСТ 32031-2012 Продукты пищевые. Методы GOST 32031-2012 Produktyi pischevyie. Metodyi vyiyav-выявления бактерий Listeria monocytogenes. — М.: leniya bakteriy Listeria monocytogenes [Food products. Стандартинформ, 2012. — 28 с. Methods for detection of Listeria monocytogenes]. — M.:
Standartinform, 2012. — 28 p.
14. ГОСТ ISO 10272-1-2013 Микробиология пищевых GOST ISO 10272-1-2013 Mikrobiologiya pischevyih pro-продуктов и кормов для животных. Методы обна- duktov i kormov dlya zhivotnyih. Metodyi obnaruzheniya ружения и подсчета бактерий Campylobacter spp. i podscheta bakteriy Campylobacter spp. Chast 1. Metod Часть 1. Метод обнаружения. - М.: Стандартин- obnaruzheniya [Microbiology of food and animal feeding форм, 2013. - 20 с. stuffs. Methods for detection and enumeration of Campy-
lobacter spp. Part 1. Detection method]. - M.: Standartin-form, 2013. - 20 p.
