К вопросу генотипирования бруцелл на основе MLVA Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

2012, Т. 2, № 1-2

Современное лабораторное обеспечение.

респираторно-синтициального вирус; аденовирусы, энтеровирусы, в том числе полиовирусы; астровирусы; ротавирусы группы А, норовирусы; вирус гепатита А, В, С, D, G; хантавирусы; вирус клещевого энцефалита; вирус крымской геморрагической лихорадки; вирус лихорадки Западного Нила.

К ВОПРОСУГЕНОТИПИРОВАНИЯ БРУЦЕЛЛ НА ОСНОВЕ MLVA

Д.А. Ковалев, E.H. Мисетова, C.B. Писаренко, С.И. Головнева, Л.В. Ляпустина

ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора, г. Ставрополь

Современная система противоэпидемических мероприятий по контролю и борьбе с бруцеллезом наряду со своевременным выявлением источника инфекции, быстрым выделением, проведением внутривидовой дифференциации возбудителя включает и его штаммовую дифференциацию. Для молекулярно-генетического исследования до штаммового уровня и одновременного установления генетического родства изучаемых штаммов нами был выбран метод MLVA (мультилокусный анализ вариабельного числа тандемных повторов) на основе ПЦР.

В работе были использованы 18 штаммов бру-целл трех основных патогенных видов (B. melitensis, B. abortus, B. suis), представленные 10 известными референтными, 6 полевыми штаммами и двумя изо-лятами, выделенными от мышевидных грызунов Австралии, имеющими неясное таксономическое положение. Референтные штаммы бруцелл с известными генотипами использовали для оценки воспроизводимости результатов MLVA специфических штаммовых генотипов и соответствия схемы MLVA-13 фенотипическим методам анализа.

Схема MLVA-типирования включала анализ известных вариабельных тандемных повторов штаммов бруцелл в ПЦР с праймерами, фланкирующими 13 VNTR-локусов из двух панелей MLVA-15 (P. Le Fleche et.al., 2006). Результаты секвенирования полученных ампликонов использовали для кластерного анализа в программе MEGA 5,03.

Анализ дендрограммы, построенной на основании данных MLVA-13, позволил выявить генетически родственный кластер, составленный из полевых штаммов B. melitensis 565, 548, C-457 вместе с референтным штаммом B. melitensis 63/9 второго биовара, что согласуется с ранее полученными нами данными. Полевые штаммы B. abortus 1552, А-422 группировались в родственный кластер вместе с большинством референтных штаммов вида B. аbortus. Референтные и один полевой штаммы B. suis формировали отдельный кластер. Австралийские штаммы Brucella 83-4, 83-6 вошли в общий, но удаленный от других кластер.

Таким образом, проведенное MLVA-13 геноти-пирование 18 штаммов бруцелл позволило выявить генетическое разнообразие исследуемых штаммов с высоким индексом вариабельности HGDI (0,99). Полученные результаты согласуются с данными традиционных методов дифференциации возбудителя бруцеллеза. Дальнейшие исследования позволят создать каталог MLVA-генотипов для качественного усовершенствования системы эпиднадзора за бруцеллезом в Российской Федерации.

О ЗНАЧЕНИИ НОРОВИРУСОВ В ЗАБОЛЕВАЕМОСТИ НАСЕЛЕНИЯ

И.В. Ковальчук1, А.В. Ермаков1, И.Б. Каширина1, Н.И. Соломащенко2, В.А. Хализева2, А.Р. Эльканова3

1Управление Роспотребнадзора по Ставропольскому краю, г. Ставрополь; 2ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Ставропольском крае», г. Ставрополь; 3ГБОУ ВПО Ставропольская государственная медицинская академия, г. Ставрополь

С внедрением в последние годы в практику тест-систем по определению кишечных вирусов в клиническом материале у больных с симптомами острой кишечной инфекции методом полимеразной цепной реакции изменились представления о роли вирусных патогенов в структуре инфекционной патологии с фекально-оральным механизмом передачи возбудителя. На территории Ставропольского края заболеваемость населения острыми кишечными инфекциями всегда оставалась значимой инфекционной патологией. В этиологической структуре ОКИ ведущее место занимали бактериальные инфекции. Из вирусных патогенов определялись ротавирусы. При этом уровень заболеваемости ОКИ неустановленной этиологии остается высоким.

С 2010 г. в работу лаборатории ПЦР — исследований центра гигиены и эпидемиологии в Ставропольском крае внедрены тест-системы по определению генетического материала рота-, астро- и норовирусов. Исследования проводились при регистрации групповой заболеваемости в организованных коллективах для этиологической расшифровки. В 2010 г. по результатам исследований диагноз норовирусной инфекции установлен 22 больным. Зарегистрировано 2 групповых ситуации норовирусной этиологии в стационаре и детском саду, а также рота-и норовирусной этиологии в детском дошкольном учреждении. Реализовывался контактно-бытовой путь передачи инфекции. В начале июня 2011 г. зарегистрирована вспышка норовирусной инфекции в детском санатории «Сосновая роща» г. Кисловодска с общим числом пострадавших 104 человека, из них 101 дети до 14 лет. Лабораторно диагноз подтвержден у 10 человек, у остальных установлен на основании клинико-эпидемиологических данных. Носительство но-ровируса выявлено у работника пищеблока, который и послужил, по всей вероятности, источником инфекции. Распространение возбудителя произошло пищевым и контактно-бытовым путем. Заболевание протекало в основном в легкой степени тяжести, госпитализированы в инфекционный стационар только первыми заболевшие 6 детей. Доминирующие симптомы заболевания были представлены следующими: недомогание и тошнота отмечены у 100,0% заболевших, рвота у 85%, боли в животе у 44,8%, жидкий стул у 35%, повышение температуры от 37,5°С до 38°С у 25,5%,

Таким образом, внедрение в лабораторную диагностику тест-систем по определению генетического материала кишечных вирусов позволяет изменить соотношение доли расшифрованных диагнозов, особенно это важно при этиологической расшифровке вспышечной заболеваемости и показать значимость этих инфекции в кишечной патологии. Для оценки циркуляции норовирусов среди населения необходимо дальнейшее внедрение их лабораторной диагностики в медицинских организациях.