CC BY
3
| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2022; ТОМ 67; №2 |
Кудинов А. В.1, Момот А. П.1, Царигородцева Н. О.2
ИЗУЧЕНИЕ УСЛОВИЙ ПРОБОПОДГОТОВКИ ДЛЯ АНАЛИЗА СОДЕРЖАНИЯ ЭКСТРАКЛЕТОЧНЫХ ВЕЗИКУЛ (ЕУ8)
В ПЛАЗМЕ КРОВИ
Алтайский филиал ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России, 2ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России
Введение. Исследования в области гемостаза все чаще обращаются к методу проточной цитофлуориметрии. Это относительно молодой метод, для которого до сих пор проведение про-боподготовки не вполне стандартизировано. При анализе состава экстраклеточных везикул (EVs) в плазме крови исследуют лишенную тромбоцитов плазму. Однако нет данных о том, как меняются показатели оценки EVs в зависимости от способа получения без-тробоцитарной плазмы и особенностей ее замораживания.
Цель работы. Определение оптимальных условий для получения и заморозки безтромбоцитарной плазмы крови при анализе содержания EVs.
Материалы и методы. Кровь 20 добровольцев собирали в пробирки с 0,32% цитратом натрия и обрабатывали в течение 1 часа после ее забора. Обработку образцов проводили в первом случае последовательным центрифугированием в три этапа, каждый по 15 мин при 2500 g, с переносом из этапа в этап верхнего слоя (3/4 объема) после каждой процедуры. Во втором случае кровь центрифугировалась однократно при 3000 g в течение 20 мин. Образцы для оценки влияния режима заморозки делили на 2 части: в первом случае замораживали при —70 °С, во втором — при температуре жидкого азота (—176 °С), далее все образцы хранили при —70 °С. В день анализа образцы размораживали при +37 °С с последующим центрифугированием при 3000 g в течение 10 мин. Фенотипирование EVs в полученном супернатанте проводили с помощью смеси конъюгированных с флуорофором антител против маркеров тромбоцитов (анти-С041-РС7, клон HIP8, Beckman
Coulter) и эритроцитов (анти-CD 235а, клон 6А7М, Biolegend), эндотелия (анти-СВ144-АРС, клон BV13, eBioscience) и лейкоцитов (aHTH-CD45-APC-A750, клон J33, Beckman Coulter). События относили к внеклеточным везикулам по размеру (0,1—1,0 мкм). Для этого строили гейт, используя набор микрогранул для калибровки с размером 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкм (Flow Cytometry Sub-micron Particle Size Reference Kit, Thermofisher). Данные представлялись в виде медианы (01;03), сравнение между группами проводили, используя критерий Жанна — Уитни.
Результаты и обсуждение. Однократное центрифугирование давало более высокий уровень EVs в сравнении с центрифугированием в три этапа как для тробоцитарных EVs (1754 соб/мкл (1195;9) против 328 соб/мкл (178;1048) соотвтетвенно, р=0,01), так и для EVs эритроцитарного происхождения (154 соб/мкл (80Д79) против 58 соб/мкл (31;74), р<0,05). Замораживание в жидком азоте давало более низкие концентрации EVs, чем в случае замораживании при —70 °С (271 соб/мкл (268;529) против 704 соб/мкл (555;712) р<0,05, и 28 соб/мкл (20;36) против 53 соб/мкл (37Д23), р<0,05) для тробоцитарных и эритроцитарных EVs соответственно. Аналогичные закономерности были получены и при определении EVs эндотелиального и лейкоцитарного происхождения.
Заключение. Использование трехэтапного центрифугирования при получении безтромбоцитарной плазмы и замораживания в условиях жидкого азота представляется оптимальным и позволяет избежать ложной генерации внеклеточных везикул в ходе пробоподготовки.
Кудяшева О. В., Пирогова О. В., Порунова В. В., Толстова С. В., Смирнова А. Г., Моиссев И. С., Кулагин А. Д.
СРАВНЕНИЕ БОРТЕЗОМИБ-СОДЕРЖАЩИХ РЕЖИМОВ С ДРУГИМИ ПОДХОДАМИ К ИНДУКЦИОННОЙ ТЕРАПИИ ПАЦИЕНТОВ С СИСТЕМНЫМ АМИЛОИДОЗОМ ЛЕГКИХ ЦЕПЕЙ
НИИ детской онкологии, гематологии и трансплантологии им. Р.М. Горбачевой ПСПбГМУ им. И.П. Павлова
Введение. Системный амилоидоз легких цепей (AL) характеризуется гиперпродукцией свободных легких цепей иммуноглобулинов клональными плазматическими клетками и их отложением в органах и тканях в виде нерастворимого фибриллярного белка-амилоида. Терапия на основе бортезомиба, циклофосфа-мида и дексаметазона (CyBorD) — новый стандарт для пациентов с системным AL-амилоидозом. Мы проанализировали ответ на терапию у 105 впервые выявленных пациентов, не кандидатов на проведение аутологичной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток. Терапия была разделена на 3 группы: 1 — CyBorD 26% (п=28), 2 — другие схемы на основе бортезомиба 59% (п=62), 3 — схемы без бортезомиба 14% (п=15).
Цель работы. Сравнить эффективность подходов к индукционной терапииу впервые выявленных пациентов с системным AL-амилоидозом, не кандидатов на проведение аутологичной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (АТГСК).
Материалы и методы. Медиана возраста пациентов составила 63 года (31—81). Пациенты с изолированным AL-амилоидозом составили 72% (п=76), в комбинации с множественной миеломой 27% (п=29). Стадии поражения сердца по классификации клиники Mayo были установлены у 91 пациента и составляли: I —
22% (n=20), II - 52% (n=47), Illa - 10% (п=9), 1ПЬ - 16% (п=15). Медиана NT-proBNP составила 1892 нг/л (35—34772). Поражение
почек выявленоу 94 пациентов со стадиями: I — 23% (п=22), II — 48% (п=45), III - 29% (п=27).
Результаты и обсуждение. 3-летняя общая выживаемость (ОВ) в общей группе составила 74,3%. Медиана наблюдения 27,8 месяца. Неблагоприятными факторами для ОВ в однофакторном анализе были возраст >70 лет (р=0,007), мужской пол (р=0,015), 1ПЬ стадия Мауо (р=0,07) и III стадия поражения почек (р<0,0001). Терапия другими режимами, помимо СуВогО, негативно сказывалась на показателях ОВ (4,9, 95% С11,4-17,2, р=0,012). 3-летняя БПВ на схеме СуВогО составила 82% против 52% и 61% в группах 2 и 3 (Р=0,28). Общая частота гематологического ответа (ГО) составила 70% (п=74). Процент ГО был достоверно выше в группе СуВоКО, 75% против 63% и 33% в группе 2 и 3 (р=0,033), как и медиана времени до ответа (9,6, 95% ДИ 5,3—15 месяцев). Процент органного ответа (ОО) в течение 3 лет был выше в группе СуВогО: для сердца — 56% против 37% и 11% (р=0,050) в 1, 2, 3-й группах соответственно, для почек 72% против 62% и 50% (р=0,01). В общей группе ГО (медиана 10 месяцев) и почечный ответ (медиана 12 месяцев) наблюдались раньше, чем кардиальный (медиана 26 месяцев).
Заключение. Применение схемы СуВогО демонстрирует высокую частоту ГО и ОО, улучшение ОВ в сравнении с другими режимами, тем не менее ОО, за исключением почечного, наблюдаются существенно позже, чем ГО.
П8
