CC BY
52
УДК 619:614.48.576.8
ИЗУЧЕНИЕ СПОРОЦИДНОГО ДЕЙСТВИЯ НОВОГО БИОЦИДНОГО ПРЕПАРАТА «БАКДЕЗ»
Софронов В.Г. - д.в.н., профессор, зав. кафедрой; *Аржаков П.В. - к.б.н., с.н.с.
Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана *ГНУ Всероссийский НИИ бруцеллеза и туберкулёза животных Россельхозакадемии,
г. Омск, тел.: (843) 273-97-75
Ключевые слова: Спороцидный эффект, дезинфекция высокого уровня, биоцидный полифункциональный препарат.
Keywords: Sporocidal effect, high-level disinfection, multifunctional biocide preparation.
Современный биоцидный препарат должен быть полифункциональным, то есть обладать моющим, обезжиривающим и дезинфицирующим действиями и представлять собой композицию на основе сбалансированной формулы, включающей одно или несколько активно действующих веществ, позволяющих добиться максимального эффекта в отношении наиболее устойчивых микроорганизмов. Обязательным условием для дезинфицирующего средства, является наличие спороцидного эффекта, которое во многом обуславливает возможность его использования для дезинфекции высокого уровня (ДВУ), то есть [1,2,3].
Дезинфекция высокого уровня - это важнейший момент в новом подходе к обеззараживанию объектов различного назначения. Для дезинфекции высокого уровня следует использовать только средства, обладающие спороцидным действием [1,2,3,4,5].
Материалы и методы. При проведении исследований использовались методики:
Методические указания о порядке испытания новых дезинфицирующих средств дляветеринарной практики; утв. ГУВ МСХ СССР 27.12.87 г.
В исследованиях использовали следующие материалы:
- тест-культуру микроорганизмов: B. cereus шт. ip 5832.
- объект исследования - новый моюще-дезинфицирующий препарат «Бакдез» представляющей собой сбалансированную композицию, состоящую из поверхностно-активных веществ и различных групп химических соединений, обладающих биоцидным действием.
В опытах использовались (1; 2; 3; 4 %-ные) концентрации и 15, 30, 60, 90-минутные экспозиции. Для исследования спороцидного действия препарата использовали кусочки обезжиренного батиста размером 0,5-1,0 см, стерилизованного в автоклаве. Нужное для исследования количество
стерильного батиста помещали в стерильную чашку Петри и заливали 1020 мл 2-х миллиардной бактериальной суспензии. Тест-культуру, используемую для импрегнации батистовых тест-объектов, предварительно пассажировали (четырехкратно) на соответствующих питательных средах. Импрегнировали бактериальной суспензией не менее 3-х тест-объектов. После внесения тест-объектов (с культурой) в дезинфицирующий раствор и экспозиции (15, 30, 60, 90 мин) проводили промывку «носителей» в стерильной дистиллированной воде. Далее производили посев на питательную среду (МПА), с последующей инкубацией в термостате. В качестве контроля спороцидного действия изучаемого препарата использовали стерильную дистиллированную воду.
Для изучения спороцидного действия биоцидной композиции использовали трансмиссионную электронную микроскопию. Для этого образцы фиксировали в 4 %-ном растворе параформальдегида при +4 °С в течение 48 ч. Бактериальную взвесь центрифугировали в течение 20 мин при 6000 об/мин. Тест-образцы разрезали на две части, которые складывали стопкой. Затем тест-образцы и полученный после центрифугирования осадок дофиксировали 1%-ным раствором осмиевой кислоты, обезвоживали по стандартной методике в растворах этилового спирта возрастающей концентрации и ацетоне и заливали в смесь эпон-аралдит. Ультратонкие срезы готовили на микротоме Райхерт-Янг (Австрия). Срезы контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца. Исследовали в электронном микроскопе JEM 1400 (Jeol, Япония), фотосъемку проводили с помощью встроенной цифровой камеры Jeol и цифровой камеры бокового ввода Veleta (SIS, Германия).
Результаты исследований. 4 %-ная концентрация биоцидного препарата оказывает спороцидное действие при 60 минутной экспозиции (таблица).
Таблица - спороцидное действие препарата
Тест-культура Концентрация Препарата, в % Экспозиция, в мин.
15 30 60 90
B. cereus шт. ip 5832 1 + + + +
2 + + + +
3 + + + +
4 + + - -
Контроль Н [2О + + + +
Примечание: «+» - четкий рост; «-» - нет роста
При изучении электронограмм в контроле В. сегеш шт. 1р 5832 морфологический анализ определил нормальную морфологию микробной клетки, в центре сформированная спора (рисунок № 1).
После 60 минутного воздействия 4 % рабочего раствора препарата на
субмикроскопическую структуру В. сегеш микробные клетки находятся на разной стадии лизирования. Зона кортекса оттеснена на периферию (серая стрелка), наблюдается крупновакуольная дистрофия (белая стрелка) повреждаются экзоспориум и споровые оболочки. Наблюдается фрагментация (черная стрелка) и разрывы (фигурная стрелка) цитоплазматической мембраны и клеточной оболочки, деструкция цитоплазмы и нуклеоида (рисунок № 2), после воздействия 4 %-ого рабочего раствора препарата и экспозиции 90 минут наблюдается массовый лизис споровых клеток (рисунок № 3).
Рисунок №1.
Рисунок №2.
Рисунок №3.
Основным первичным механизмом повреждения споровых клеток после применения нового биоцидного препарата является деструкция клеточной мембраны, которая проявляется фрагментацией и разрывом цитоплазматической мембраны, следующие за этим вторичные повреждения: разрушение цитоплазмы (вакуолизация) и нуклеоида способствуют деструктивно-дистрофическим изменениям в кортексе и сердцевине споровых клеток, что приводит к дальнейшей гибели (лизису) споровых клеток.
Выводы. 1. Новый полифункциональный биоцидный препарат обладает спороцидным действием в 4 %-ной концентрации и 60 минутной экспозиции. 2. Основой механизма биоцидного действия препарата в отношении споровых форм является мембраноатакующее действие.
ЛИТЕРАТУРА: 1. Закомырдин, А.А. Электрохимически активированные растворы в ветеринарии (Мойка и дезинфекция) / А.А. Закомырдин // Проблемы ветеринарной медицины в условиях реформирования сельскохозяйственного производства. - Махачкала, 2003. - С. 159 - 165. 2. Куликовский, А.В. Структурные и функциональные основы механизма действия дезинфицирующих средств на бактерии и споры: Автореф. дисс. ... д-ра ветеринар. наук / А.В. Куликовский. - М., 1979. - 33 с. 3. Ибрагимов, Р.И. Некоторые проблемы дезинфектологии /Р.И. Ибрагимов, Р.Р. Ибадулин // Дезинфекционное дело. - 2002. - № 4.
- С. 27 - 29. 4. Мичко, С.А. Новые биоцидные составы пролонгированного действия / С.А. Мичко, З.Е. Алиева, Н.И. Попов // Ветеринария. - 2000. -№4.- С.10-13. 5. Gill, A. O. Interactive inhibition of meat spoilage and pathogenic bacteria by lysozyme, nisin and EDTA in the presence of nitrite and sodium chloride at 24 °C / A.O. Gill, R.A. Holley // Int. J. Food Microbiol.-2003.-№ 80.- Р. 251-259.
ИЗУЧЕНИЕ СПОРОЦИДНОГО ДЕЙСТВИЯ НОВОГО БИОЦИДНОГО ПРЕПАРАТА «БАКДЕЗ»
Софронов В.Г., Аржаков П.В.
Резюме
Авторами проведены экспериментальные исследования, которые подтвердили теоретические выводы и продемонстрировали высокую спороцидную активность нового биоцидного препарата. Для изучения спороцидного действия биоцидной композиции использовали трансмиссионную электронную микроскопию. Основным первичным механизмом повреждения споровых клеток после применения нового биоцидного препарата является деструкция клеточной мембраны, которая проявляется фрагментацией и разрывом цитоплазматической мембраны, следующие за этим вторичные повреждения - разрушение цитоплазмы и нуклеоида способствуют деструктивно-дистрофическим изменениям в кортексе и сердцевине споровых клеток, что приводит к дальнейшей гибели (лизису) микробных клеток.
NEW STUDY SPORICIDAL ACTIVITY BIOCIDE "BAKDEZ"
Sofronov V.G., Arzhakov P.V.
Summary
Authors carried out pilot studies which confirmed theoretical conclusions and showed high sporecidal activity of a new biocidal preparation. For studying of sporecidal action of biocidal composition used transmission electronic microscopy. The main primary mechanism of damage of sporous cages of bacteria after application of a new biocidal preparation is the destruction of a cellular membrane which is shown by fragmentation and a rupture of the cytoplasmatic membrane, secondary damages following it: destruction of cytoplasm and nucleotide promote destructively - to dystrophic changes in thick layer of a cover disputes and a core of sporous cages that leads to further death (destruction) microbic cages.
