CC BY
10
endogenous intoxication in highly skilled athletes of cyclic sports Health for all. 2016, no.1, pp.16-24.
4. Pereslegina I.A., Gabina S.V., Makarova I.B., Efferent therapy. 2005, no. 2, pp. 14-17.
5. Pokrovskiy A.A. Metabolicheskie aspektyfarmakologii i toksikologii pishchi [Metabolic aspects of pharmacology and toxicology of food]. Moskow: Medicine, 1979, 184 p.
6. Rakhmanov R.S., Gruzdeva A.E. Produkty napravlennogo deystviya - novoe napravlenie v nutritsiologii [Directional effect products - a new trend in nutritiology]. N.Novgorod:Tipografiya Povolzh'e, 2011, Ch.1, 117 p.
7. Rakhmanov R.S., Belous'ko N.I., Gruzdeva A.E. . Composition of sport nutrition product. Available at: http://
www.freepatent.ru/patents/2533002 (accessed 7 February 2017).
8. Trushkov V.F., Perminov K.A., Perminova T.A. Clinical and hygienic approbation of standards of chemical substances in production conditions Medical Newsletter of Vyatka. 2014, no. 3-4, pp. 42-45.
9. Babak O.Ya. Glutation v norme i pri patologii: biologicheskaya rol' i vozmozhnosti klinicheskogo primeneniya Health of Ukraine . 2015, no. 1, pp. 1-3.
10. Slattery K.M., Dascombe B., Wallace L.K., Bentley D.J., Coutts A.J. Effect of N-acetylcysteine on cycling performance after intensified training Med Sci Sports Exerc. 2014, Vol.46, no. 6. pp. 1114-1123.
УДК: 616.314.17-008.1-003.93-092.4
ИЗУЧЕНИЕ РЕГЕНЕРАЦИИ КОСТНОЙ ТКАНИ ПЕРИОДОНТА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ПЕРИОДОНТИТЕ У КРЫС
Романенко И.Г., Чепурова Н.И.
Медицинская академия им. С.И. Георгиевского ФГАОУ ВО «КФУ им. В.И. Вернадского», Симферополь, Россия (295006, г. Симферополь, бульвар Ленина, 5/7, ), e-mail: [email protected]
В работе приведены материалы исследования по изучению влияния препарата, содержащего лизоцим и гидроксиапатит (ГАП), на процессы регенерации костной ткани периодонта при экспериментальном периодонтите. Оценивали уровень минерализации и коллагенообразования костной ткани при заполнении ее дефекта препаратом, содержащим лизоцим и гидроксиапатит, полученным из свиной кости путем щелочного удаления органических веществ.
Ключевые слова: периодонтит, минерализация костной ткани, протеолиз, гидроксиапатит, препарат, содержащий лизоцим.
THE STUDY OF PERIODONTAL BONE TISSUE REGENERATION IN THE EXPERIMENTAL PERIODONTITIS ON RATS
Romanenko I.G., Chepurova N.I
Medical Academy named after S.I. Georgievsky of Vernadsky CFU, Simferopol, Russia (295006, Simferopol, Lenin Boulevard, 5/7), e-mail: [email protected]
In the work materials of the study on the influence of hydroxyapatite (HAP) and a preparation containing lysozyme and on the processes of regeneration of periodontal bone tissue during experimental periodontitis are presented. The level of mineralization and collagen formation of bone tissue was assessed when the defect was filled with a preparation containing lysozyme and hydroxyapatite derived from porcine bone by alkaline removal of organic substances.
Key words: periodontitis, the mineralization of bone tissue, proteolysis, hydroxyapatite, preparation containing lysozyme.
Введение
Биохимические процессы в кости играют важную роль в патогенезе периодонтита, в результате которых в околозубной костной ткани развивается деструкция минеральной и органической субстанций кости [1, 3, 4, 8]. Причинами этого, безусловно, являются микробные токсины и ответная воспалительная реакция ткани, приводящая к активации деструктивных процессов [9, 10].
Наше внимание привлек препарат, содержащий лизоцим, который оказывает противовоспалительное, антимикробное и иммуномодулирующее действие [5].
Цель исследования: изучить влияние ГАП и препарата, содержащего лизоцим, на процессы реге-
нерации костной ткани периодонта с помощью оценки уровня минерализации и коллагенообразования после воспроизведения периодонтита.
Материал и методы
Эксперименты были проведены на 42 белых крысах линии Вистар (самки, 8 месяцев, средняя масса 220±15 г), распределенных в 7 равных групп 1-я -норма (интактные); 2-я - экспериментальный периодонтит (ЭП), 10 дней; 3-я - ЭП, 30 дней; 4-я - ЭП + ГАП, 10 дней; 5-я - ЭП + ГАП, 30 дней; 6-я - ЭП + ГАП + препарат, содержащий лизоцим, 10 дней; 7-я - ЭП + ГАП + препарат, содержащий лизоцим, 30 дней.
Экспериментальный периодонтит вызывали у животных под тиопенталовым наркозом (20 мг/кг)
личественному признаку использовался тест Уилкок-сона. Также был применен корреляционный анализ по Спирмену (г). Проверка статистических гипотез заключалась в сравнении полученного уровня значимости (р) с пороговым уровнем 0,05 [2].
Результаты и их обсуждение
В таблице 1 представлены результаты определения активности фосфатаз в костной ткани очага поражения периодонта. Исходя из полученных результатов, при экспериментальном периодонтите на 10-й день достоверно, почти в 2 раза, увеличивается активность кислой фосфатазы, являющейся маркером остеокластов. Активность ЩФ также увеличивается, но всего лишь на 16,5 % (р>0,05). К 30-му дню периодонтита активность фосфатаз снижается, хотя уровень КФ остается достоверно выше показателя нормы.
Применение ГАП увеличивает активность ЩФ и КФ на 10-й день и несколько снижает этот показатель на 30-й день, при этом уровень КФ все равно остается выше нормы.
Использование ГАП вместе с препаратом, содержащим лизоцим, достоверно увеличивает лишь активность ЩФ, которая является маркером остеобластов и мало изменяет активность кислой фосфатазы.
Таблица 1
Влияние ГАП и препарата, содержащего лизоцим, на активность фосфатаз костной ткани периодонта крыс при экспериментальном периодонтите (во всех группах п=6).
путем трепанирования правого верхнего моляра и введения в канал 50 мкл суспензии пчелиного яда (20 мг/мл). В качестве ГАП использовали гидроксиапа-тит, полученный из свиной кости путем щелочного удаления органических веществ.
ГАП вводили в канал моляра (в количестве 100 мкл) в виде 20%-ной суспензии на 0,9%-ном №С1. Смесь ГАП и препарата, содержащего лизоцим, готовили путем смешивания 20% ГАП и 80% препарата, содержащего лизоцим. Полученную смесь вводили в канал в количестве 100 мкл.
В гомогенате костной ткани (75 мг/мл цитратно-го буфера, рН 6,1) определяли активность щелочной (ЩФ) и кислой (КФ) фосфатаз [9], казеинолитиче-скую активность [6], активность эластазы [6], содержание кальция [6] и содержание фосфора [6]. По соотношению активностей ЩФ и КФ рассчитывали индекс минерализации (ИМ) [7], а по соотношению казеинолитической активности и активности эласта-зы - индекс коллагенообразования [7].
Статистический анализ произведен с использованием программы BioStat2009 (AnalystSoft 1пс). При описании количественных признаков применяли среднюю величину (М) и стандартную ошибку средней (т). Для сравнения двух зависимых групп по ко-
Группы ЩФ, мк-кат/кг КФ, мк-кат/кг
1. Норма 170±10 8,5±0,7
2. Экспер. периодонтит (ЭП) - 10 дней 198±15 р>0,05 16,2±1,7 р<0,01
3. ЭП - 30 дней 154±13 р>0,05 12,6±1,1 р<0,05
4. ЭП + ГАП - 10 дней 215±18 р<0,05 13,6±1,4 р<0,02
5. ЭП + ГАП - 30 дней 180±15 р>0,05 11,8±0,9 р<0,05
6. ЭП + ГАП + препарат, содержащий лизоцим - 10 дней 291±14 р<0,05 р1>0,3 10,1±0,8 р>0,05 р1>0,3
7. ЭП + ГАП + препарат, содержащий лизоцим - 30 дней 188±14 р>0,05 р1>0,3 9,2±0,8 р>0,3 р1<0,05
В таблице 2 представлены результаты определения активности протеаз в костной ткани очага поражения. По полученным данным видно, что при периодонтите достоверно увеличивается активность обеих протеаз, причем в большей степени - активность коллагенолитического фермента эластазы.
Использование ГАП снижает активность проте-аз, особенно на 30-й день (почти до нормы).
Применение ГАП вместе с препаратом, содержащим лизоцим, снижает достоверно активность обеих протеаз, через 30 дней возвращая ее к норме.
В таблице 3 представлены результаты определения индекса минерализации (ЩФ/КФ) и индекса кол-лагенообразования (казеинолитическая активность/ активность эластазы).
Таблица 2
Влияние ГАП и препарата, содеращего лизоцим, на активность протеаз костной ткани периодонта крыс при экспериметальном периодонтите (во всех группах п=6)
Группы Казеинолит. акт., мк-кат/кг Эластаза, мк-кат/кг
1. Норма 25,6±2,8 4,8±0,5
2. Экспер. периодонтит (ЭП) - 10 дней 39,4±3,9 р<0,05 8,4±1,0 р<0,05
3. ЭП - 30 дней 31,6±3,8 р>0,05 6,9±0,8 р<0,05
4. ЭП + ГАП - 10 дней 36,6±3,7 р<0,05 7,7±0,8 р<0,05
5. ЭП + ГАП - 30 дней 29,9±3,1 р>0,05 6,5±0,7 р>0,05
6. ЭП + ГАП + препарат, содержащий лизоцим - 10 дней 29,1±2,5 р>0,3 р1<0,05 6,0±0,8 р<0,05 р1>0,05
7. ЭП + ГАП + препарат, содержащий лизоцим - 30 дней 26,2±2,7 р>0,5 р1>0,05 5,2±0,6 р>0,3 р1>0,05
Таблица 3
Влияние ГАП и препарата, содеращего лизоцим, на индекс минерализации (ИМ) и индекс коллагенообразования (ИКО) в костной ткани периодонта крыс при экспериметальном периодонтите
(во всех группах п=6)
Группы ИМ ИКО
1. Норма 20,0±1,8 5,33±0,63
2. Экспер. периодонтит (ЭП) - 10 дней 12,2±1,5 р<0,05 4,69±0,50 р>0,3
3. ЭП - 30 дней 12,2±1,3 р<0,05 4,58±0,48 р>0,3
4. ЭП + ГАП - 10 дней 15,8±1,7 р>0,05 4,75±0,47 р>0,3
5. ЭП + ГАП - 30 дней 15,3±1,6 р>0,05 4,60±0,50 р>0,3
6. ЭП + ГАП + препарат, содержащий лизоцим - 10 дней 21,9±2,0 р>0,3 р1<0,05 4,41±0,48 р>0,1 р1>0,3
7. ЭП + ГАП + препарат, содержащий лизоцим - 30 дней 20,4±1,8 р>0,5 р1>0,05 5,04±0,44 р>0,3 р1>0,3
Как видно из этих результатов, при экспериментальном периодонтите в костной ткани достоверно снижается индекс минерализации (ИМ) и проявляет тенденцию к снижению индекс коллагенообразования (ИКО).
Использование ГАП повышает уровень ИМ и не влияет на уровень ИКО, однако оба эти показателя остаются ниже нормы.
В то же время использование ГАП вместе с препаратом, содержащим лизоцим, полностью нормализует оба показателя.
В таблице 4 представлены результаты определения содержания кальция и неорганического фосфора в костной ткани. При периодонтите снижается содержание кальция (р>0,05). Использование ГАП и особенно ГАП + препарат, содержащий лизоцим, полностью восстанавливает уровень кальция. Содержание фосфора в костной ткани периодонта мало изменяется как при периодонтите, так и при использовании ГАП или ГАП + препарат, содержащий лизоцим.
Таблица 4
Влияние ГАП и препарата, содеращего лизоцим, на содержание кальция и фосфора в костной ткани периодонта крыс при экспериметальном периодонтите (во всех группах п=6).
Группы Сa, моль/кг Б неорг., моль/кг
1. Норма 5,02±0,39 2,94±0,26
2. Экспер. периодонтит (ЭП) - 10 дней 3,97±0,41 р>0,05 3,27±0,34 р>0,3
3. ЭП - 30 дней 4,27±0,53 р>0,05 3,12±0,33 р>0,3
4. ЭП + ГАП - 10 дней 4,60±0,42 р>0,05 3,21±0,30 р>0,3
5. ЭП + ГАП - 30 дней 4,88±0,40 р>0,05 3,16±0,28 р>0,3
6. ЭП + ГАП + препарат, содержащий лизоцим - 10 дней
4,86±0,44 р>0,05 р1>0,3
3,10±0,31 р>0,3 р1>0,3
7. ЭП + ГАП + препарат, содержащий лизоцим - 30 дней
5,12±0,50 р>0,05 р1>0,3
3,01±0,25 р>0,5 р1>0,5
Выводы
1. При экспериментальном периодонтите в костной ткани периодонта снижается уровень процесса минерализации и увеличивается активность протеолиза.
2. Сочетанное использование ГАП с препаратом, содержащим лизоцим, полностью восстанавливает процессы минерализации и коллагенообразования.
Список литературы
1. Борисенко А.В, Кодлубовський Ю.Ю. Методи лжування перюдонтипв (огляд лгтератури) // Современная стоматология. 2010. № 1. С. 15-20.
2. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М.: Практика, 1999. 458 с.
3. Деньга О.В., Цевух Л.Б., Левицкий А.П. Биохимические показатели тканей периодонта при экспериментальной терапии периодонтита // Вгсник стоматологи. 2007. № 4. С. 40-44.
4. Кабак Ю.С., Кабак С.Л., Анищенко С.Л. Гисто-морфология хронического апикального периодонтита // Стоматология. 2008. Т. 87, № 3. С. 13-19.
5. Левицкий А.П. Лизоцим вместо антибиотиков. Одесса: КП ОГТ, 2005. 74 с.
6. Левицкий А.П., Макаренко О.А., Деньга О.В. Экспериментальные методы исследования стимуляторов осте-огенеза: метод. рекомендации. Киев: ГФЦ, 2005. 50 с.
7. Левицький А.П., Макаренко О.А., Ходаков 1.В. Ферментативний метод оцшки стану юстково! тканини // Одеський медичний журн. 2006. № 3. С. 17-21.
8. Митронин А.В. Особенности развития, течения и лечения хронического апикального периодонтита у больных с сопутствующей патологией (обзор литературы) // Стоматолог. 2006. № 7. С. 7-15.
9. Шешукова О.В. Роль пародонтопатогенно! шфекци в розвитку перюдонтипв тимчасових зубш // Украшський стоматолопчний альманах. 2006. № 3. С. 66-68.
10. Tomofuji T., Azuma T., Kuzano H. Oxidative damage of periodontal tissue in the rat periodontitis model: Effects of a high-cholesterol diet // FEBS Lett. 2006. Vol. 580, N 15. P. 3601-3606.
References
1. Borisenko A.V., Kodlubovskiy Y.Y. Methods of treatment of periodontitis (review of literature) Modern dentistry. 2010, no.1, pp. 15-20.
2. Glants S. Medico-biological statistics. Moscow: Practice, 1999. 458 p.
3. Denga O.V., Tsevukh L.B., Levitsky A.P. Biochemical indicators of periodontal tissues during experimental therapy of periodontitis News of stomatology. 2007, no 4, pp. 40-44.
4. Kabak Yu.S., Kabak S.L., Anishchenko S.L. Histo-morphology of chronic apical periodontitis Stomatology. 2008, vol.. 87, No. 3. pp. 13-19.
5. Levitsky A.P. Lysozyme in place of antibiotics. Odessa: KP OGT, 2005, 74 p.
6. Levitsky A.P., Makarenko O.A., Denga O.V. Experimental methods of studying stimulators of osteogenesis: method. recommendations. Kiev: State Pharmacological Center, 2005, 50 p.
7. Levitsky AP, Makarenko OA, Khodakov I.V. Enzymatic method for assessing the state of bone tissue Odessa Medical Journal. 2006, no. 3, pp. 17-21.
8. Mitronin A.V. Features of development, course and treatment of chronic apical periodontitis in patients with concomitant pathology (review of literature) Stomatologist. 2006, no. 7, pp. 7-15.
9. Sheshukova O.V. The role of parodontopathogenic infection in the development of periodontitis of temporary teeth. Ukrainian Dental Almanac. 2006, no. 3, pp. 66-68.
10. Tomofuji T., Azuma T., Kuzano H. Oxidative damage of periodontal tissue in the rat periodontitis model: Effects of a high-cholesterol diet FEBS Lett. 2006, Vol, 580, No. 15, pp. 3601-3606.
УДК 616-091:617-022.
МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ ПРИ АССОЦИИРОВАННОЙ ИНФЕКЦИИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Сахаров С.П., Аксельров М.А., Аксельров А.М., Свазян В.В.
ФГБОУ ВО Тюменский государственный медицинский университет Минздрава России, Тюмень, Россия (625023 г. Тюмень, ул. Одесская, 54), e-mail: [email protected]
Проведен сравнительный анализ развития патологического процесса при ассоциированной инфекции в опытах на 58 кроликах породы Советская шиншилла. В первую группу вошли 26 кроликов, инфицированных культивируемыми формами бактерий Pseudomonas aeruginosa (P. аeruginosa) и Staphylococcus aureus (St. аureus), средняя масса тела 2365,0±37,5 гр. Вторую группу составили 26 животных, инфицированных некультивируемыми формами бактерий (НФБ) P. aeruginosa и St. aureus, средняя масса 2755,0±25,0 гр. Контрольная группа состояла из 6 интактных животных, средняя масса тела 2565,0±27,5 гр. Установлено, что у животных первой группы летальный исход регистрировался на 6 дней позднее, чем у кроликов, инфицированных некультивируемыми формами бактерий. В первой группе выживаемость была в 2 раза выше, чем во второй группе экспериментальных животных. Причиной смерти кроликов, погибших на 8-12 сутки после инфицирования ассоциацией культивируемых форм бактерий P. aeruginosa и St. aureus, стал системный воспалительный ответ на инфекционный агент. При попадании
