ИЗУЧЕНИЕ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МЕХАНИЗМОВ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ СИГНАЛЬНОГО ПУТИ NOTCH И ТРАНСКРИПЦИОННОГО ФАКТОРА RUNX2 Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

материалы v национального конгресса по регенеративной медицине

171

для создания каркаса с помощью технологии 3D печати: REC Flex TPE, REC TPU Easyflex, eSun eLastic, Raise TPU-95A, REC Rubber SEBS, Bestfilament SBS Watson. Физико-химические свойства материалов были охарактеризованы методами дифференциальной сканирующей калориметрии, термогравиметрического анализа, гель-проникающей хроматографии, проведены механические испытания филаментов при одноосном растяжении и проведено сравнение полученных характеристик и свойств эпикардиальных волокон. В работе обсуждаются перспективы применения проводящих добавок для создания новых материалов для аддитивных технологий. Исследование выполнено при финансовой поддержке Госзадания НИЦ «Курчатовский институт».

Литература:

1. Piepoli M.F., Hoes A.W., Agewall S. et al. Eur. Heart J. 2016. V.

37. P. 2315-2381.

выявление факторов, ассоциированных с эффективностью запуска аптоптоза химическим индуктором димеризации (cid) в nk-клетках, модифицированных геном индуцируемой каспазы 9 (icasp9)

А.И. Паламарчук, Е.И. Коваленко, М.А. Стрельцова

ФГБУН Институт биоорганической химии

им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова

РАН, Москва, Россия

e-mail: [email protected]

Ключевые слова: иммунотерапия, NK-клетки, генетическая модификация, индуцируемая каспаза 9 (iCasp9), каталитическая субъединица теломеразы (hTERT), направленная элиминация модифицированных клеток, апоптоз.

Применение NK-клеток является развивающимся направлением терапии злокачественных новообразований, тем не менее автономия терапевтических клеток представляет потенциальную опасность, в частности, после их генетической модификации. Введение систем контроля в клетки, в особенности, трансдукция гена iCasp9 суицидной конструкции, на основе индуцируемой каспазы 9, активируемой химическим индуктором димеризации (CID), является наиболее эффективным подходом для направленной элиминации модифицированных клеток [1], [2]. Нами было показано, что iCaspG-NK-клетки могут демонстрировать устойчивость к действию диме-ризатора. Также была прослежена взаимосвязь между эффективностью индукции iCaspG-опосредованного апоптоза и уровнем дифференцировки NK-клеток, разделённых по поверхностной экспрессии KIR2DL2/ DL3 и NKG2C. Менее дифференцированные iCasp9-NK-клетки с фенотипом KiR2DL2DL3- эффективнее индуцировали апоптоз в ответ на димеризатор в сравнении с более дифференцированными KIR2DL2DL3+ [3]. Работа поддержана грантом РНФ № 22-75-00110.

Литература:

1. Barese C.N., Felizardo T.C., Sellers S.E., et al. 2016. Stem Cells V. 33., № 1. - 91-100p.

2. Marin V., Cribioli E., Philip B., et al. 2012 Hum. Gene Ther. Methods V. 23, 376-386.

3. Palamarchuk A.I., Alekseeva N.A., Streltsova M.A., et al. Int. J. Mol. Sci., 2021. V. 22., № 24.

изучение молекулярных механизмов взаимодействия сигнального пути notch и транскрипционного фактора runx2

Д.Д. Паншин, А.А. Лобов, А.Б. Малашичева

Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия e-mail: [email protected] Ключевые слова: NOTCH, RUNX2.

Сигнальный путь NOTCH и фактор транскрипции RUNX2 являются важными и консервативными регуляторами клеточных судеб. Сигнальный каскад NOTCH принимает участие в регуляции множества клеточных процессов в организме, играет заметную роль в эмбриональном развитии и поддержании тканевого гомеостаза [1]. Нарушение его регуляции приводит к появлению аномалий развития и возникновению целого ряда заболеваний. Основная роль фактора транскрипции RUNX2 заключается в регуляции развития остеобластов и образования костной ткани в организме. В то же время сверхэкспрессия RUNX2 характерна для метастатического рака, и его роль, по-видимому, выходит за рамки контроля остеогенной дифференцировки [2].

Во многом процессы, регулируемые сигнальными путями Notch и RUNX2, перекрываются, тем не менее, пока не было показано прямой взаимосвязи двух этих сигнальных каскадов. Чтобы проверить это, мы исследовали влияние сверхэкспрессии RUNX2 и внутриклеточного домена NOTCH на экспрессию генов, связанных с этими сигнальными путями.

Для активации сигнальных путей Notch и RUNX2 мы трансфицировали клетки HeLa и HEK-293T плаз-мидами, несущими транскрипт RUNX2 и последовательность, соответствующую внутриклеточному домену NOTCH1 (N1ICD), после чего выделяли РНК и определяли уровень экспрессии RUNX2 и NOTCH и их гены-мишени оценивали с помощью ПЦР в реальном времени.

Активация RUNX2 в клетках HeLa и HEK-293T приводила к повышенной экспрессии компонентов сигнального пути Notch (NOTCH1 и NOTCH2), а также гена-мишени Notch (HES1), что указывает на активацию этого сигнального пути при сверхэкспрессии RUNX2. RUNX2 был обнаружен во всех экспериментальных образцах, трансфицированных конструкциями NICD и RUNX2, но не в контрольных клетках HeLa. Примечательно, что уровень RUNX2 в клетках, трансфицированных обеими плазмидами, был значительно ниже, чем при трансфекции одной конструкцией RUNX2. Можно предположить, что N11CD активирует экспрессию RUNX2, но в то же время не позволяет ей подняться выше определенного уровня. Исследование выполнено при финансовой поддержке гранта РНФ номер 18-14-00152-П.

Литература:

1. Yamamoto S., Schulze K., Bellen H. Introduction to Notch Signaling Methods in Molecular Biology. 2014. p. 1-14.

2. Zeng L. et al. Functional analysis of novel RUNX2 mutations in cleidocranial dysplasia Mutagenesis. 2017. vol. 32, number 4. p. 437-443.

Гены & Клетки XVII, №3, 2022