CC BY
51
УДК 615.356:612.017.1
ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ ВИТАМИНОВ Е, С, P-КАРОТИНА И СЕЛЕНА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Л.З. БОЛИЕВА, А.С. ЦОГОЕВ, А.Р. ЧОЧИЕВА*
В эксперименте на мышах-самцах линий BALB/c, C3H изучено влияние раздельного и комбинированного применения витаминов Е, С, P-каротина и селена на пролиферативную активность Т-лимфоцитов. Показано, что P-каротин, витамины Е, С и селен проявляют иммуностимулирующее действие, повышая пролифератив-ную активность Т-лимфоцитов как в физиологических условиях, так и в условиях индуцированного цитостатиком аранозой вторичного иммунодефицита.
Ключевые слова: иммуномодулирующая активность, пролифера-тивная активность Т-лимфоцитов, p-каротин, витамин Е, витамин С, селен.
В ряде исследований на моделях экспериментального химического канцерогенеза нами показана антиканцерогенная активность витаминов Е, С, p-каротина и селена [1,7]. В настоящее время тот факт, что иммуносупрессия играет важную роль в процессе канцерогенеза, находит достаточное количество подтверждений. Показано, что на фоне сниженной иммунной реактивности легче реализуется феномен избегания опухолями иммунного надзора. Таким образом, важным свойством потенциального химиопрофи-лактического средства является способность восстанавливать сниженный по тем или иным причинам уровень иммунного ответа [2,6]. По мнению ряда исследователей, именно иммуномодули-рующая активность p-каротина, витаминов Е, С, селена является одним из основных механизмов, обеспечивающих их антиканцерогенные свойства [3,5]. В связи с этим нами проведен ряд экспериментов по изучению иммуномодулирующей активности микронут-риентов как в физиологических условиях, так и на экспериментальных моделях вторичного иммунодефицита.
Цель исследования - изучение влияния витаминов Е, С, р-каротина и селена при их раздельном и комбинированном применении на пролиферативную и цитолитическую активность Т-лимфоцитов.
Материалы и методы исследования. Исследования проведены на мышах самцах линий BALB/c, C3H весом 18-22 г, полученных из питомника «Столбовая» РАМН и из группы разведения отдела лабораторных животных РОНЦ РАМН.
Исследуемые средства: аскорбиновая кислота (ЗАО «Ал-тайвитамины», г. Бийск) - по 50 или 100 мг/кг массы тела с кормом; p-каротин (НПО «Витамины») - по 10 и 25 мг/кг с кормом; а-токоферол (ЗАО «Брынцалов-А», Ферейн) - по 25, 50 и 100 мг/кг с кормом; «Каскатол» (ОАО «Холдинг «ЭДАС») по 4 драже/кг с кормом; «Неоселен» (НПЦ «Исинга», г. Чита) по 2 мг селена/л воды. «Каскатол» в комбинации с «Неоселеном» - по 2 драже/кг и 1 мг селена/л воды соответственно. Препараты вводили животным в течение 8 недель. Для индукции вторичного иммунодефицита животным вводили аранозу четырехкратно в разовой дозе 200 мг/кг в/в.
Для определения пролиферативной активности лимфоцитов селезенки мышей BALB/с извлекали в стерильных условиях и растирали в стеклянном гомогенизаторе с 20 мл культурной среды. Клеточную суспензию дважды отмывали средой 199. Осажденные клетки помещали в культуральную среду и ресуспенди-ровали. Культуральная среда содержала 100 мл среды RPMI 1640, 20% инактивированной ТЭС, 2х10-3М L-глутамина, 5х10-3 ХЕПЕС, 3х10-5М 2-меркаптоэтанола, по 100 ЕД пенициллина и стрептомицина в 1 мл. Клеточную суспензию разводили до плотности 106 клеток/мл. Инкубацию проводили в 96-луночных пластиковых планшетах при 37°С в присутствии 5% СО2 в течение 3 суток. Митоген Кон А (Sigma) вносили в объеме 10 мкл. За 4 часа до окончания инкубации добавляли 3Н-тимидин в концентрации 1 мкКи/мл. По окончании культивирования клетки осаждали на фильтрах с помощью мультихарвестера и осуществляли радиометрию образцов. Отношение числа импульсов в минуту (имп/мин) в опыте к числу имп/мин в монокультуре принимали за индекс пролиферации (ИП).
Для определения пролиферативной активности лимфоцитов в смешанной культуре лимфоцитов в качестве реагирующих
* Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Северо-Осетинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», 362019, РСО-Алания, г. Владикавказ, ул. Пушкинская, 40
клеток использовали лимфоциты мышей Balb/c, в качестве стимулирующих сублетально облученные лимфоциты мышей С3Н. Лимфоциты смешивали в соотношении 1:1; 1:2; 5:1 и инкубировали в количестве 5-106 клеток в 1 мл среды в 24-луночных планшетах в течение 5 суток в термостате при 37оС с 5% СО2. Контролем служили монокультуры лимфоцитов. Для определения скорости пролиферации в культуру добавляли 3Н-тимидин и клетки собирали на фильтры с помощью мультихарвестера. Отношение числа имп/мин в опыте к числу имп/мин в контроле принимали за ИП.
Проведено две серии экспериментов. В первой серии изучалось влияние исследуемых веществ на пролиферативную активность Т-лимфоцитов, стимулированных in vitro Кон А и на пролиферацию лимфоцитов, стимулированных аллоантигенами в СКЛ. Во второй серии опытов изучалась пролиферативная активность Т-лимфоцитов в условиях индуцированного вторичного иммунодефицита. Исследования проводили на 2, 4, 6 и 8 неделях эксперимента.
Результаты и их обсуждение. В первой серии опытов получены следующие данные (рис. 1).
1 А № б 10
нщюпч жпцнлмэнта □ >ujHTp-int пр-lfBponiH п Вис С С! - 1 В 1 "П, ■ <H4f • ' ■!
Рис. 1. Влияние P-каротина, витаминов С, Е, селенита натрия и «Каскатола» на пролиферативную активность лимфоцитов мышей BALB/c, трансформированных in vitro Кон А.
Систематическое в течение 8 недель скармливание мышам BALB/c синтетического p-каротина в дозе 10 мг/кг приводило к статистически достоверному повышению пролиферативной активности Т-лимфоцитов в 1,4 раза (р<0,05) по сравнению с контрольной группой к 8 неделе исследования, применение р-каротина в дозе 25 мг/кг повышало данный показатель в 1,4 раза (р<0,05) к 6 и в 1,6 раза (р<0,01) к 8 неделе эксперимента. Аскорбиновая кислота в дозе 50 мг/кг практически не влияла на активность Т-лимфоцитов, в то время как ее применение в дозе 100 мг/кг приводило к статистически достоверному повышению индекса пролиферации в 1,5-1,8 раза (р<0,05) к 6-8 неделям исследования. Применение витамина Е только в одной из исследованных доз - 100 мг/кг, приводило к достоверному в 1,4 раза (р<0,05) усилению активности Т-лимфоцитов к 8 неделе эксперимента. Селенит натрия в дозе 4 мг/л способствовал повышению пролиферативной активности в среднем в полтора раза (р<0,05) к 6-8 неделе опыта. Таким образом, при систематическом длительном в течение 8 недель введении аскорбиновой кислоты, р-каротина, а-токоферола и селенита натрия были получены результаты о дозозависимом стимулирующем влиянии каждого из препаратов на пролиферацию лимфоцитов под действием мито-гена Кон А. При этом достоверный стимулирующий эффект препаратов проявлялся не ранее 6-8 недели исследования. Полученные нами результаты подтверждают ранее опубликованные данные о стимулирующем влиянии p-каротина и аскорбиновой кислоты на пролиферацию лимфоцитов. Данные об усилении про-лиферативной активности Т-лимфоцитов при действии а-токоферола и селенита натрия получены нами впервые. Систематическое длительное введение мышам BALB/c препарата «Каска-тол» или комбинации «Каскатола» с селенитом натрия (препарат «Неоселен») приводило к значительному (в среднем в 1,4-2,0 раза, р<0,01) увеличению активности Т-лимфоцитов, стимулированных митогеном Кон А, начиная уже с 4 недели эксперимента.
При изучении пролиферации лимфоцитов в СКЛ (рис. 2) показано, что скармливание мышам в течение 8 недель р-каротина, витамина С или селенита натрия приводило к достоверному повышению пролиферативной активности Т-лимфоцитов в СКЛ в среднем в 1,5 раза (р<0,05) не ранее 8 недели исследования. Применение препарата «Каскатол» или его комбинации с селенитом натрия усиливало активность лим-
фоцитов в 1,5 раза (р<0,05) уже с 4 недели эксперимента, к 8 неделе опыта индекс пролиферации увеличивался в 2,1-2,3 раза (р<0,01) по сравнению с контролем. Через 2 недели после отмены препаратов отмечалась тенденция к постепенному снижению индекса пролиферации.
2 * 6 В 10
Hifltrm акл^риимта со^арйшнпштс nftiTi н fl KKttWT* BKMMIW* S1
Рис. 2. Влияние Р-каротина, витаминов С, Е, селенита натрия и «Каскатола» на пролиферативную активность лимфоцитов мышей
BALB/c, трансформированных in vitro аллоантигенами в СКЛ.
Полученные результаты подтверждают данные о синергизме действия и потенцировании эффектов исследуемых микронут-риентов при их совместном применении.
Результаты опытов по изучению влияния многократного одновременного введения аранозы, селенита натрия и «Каскатола» на пролиферативный ответ спленоцитов мышей BALB/c, стимулированных митогеном Кон А (5 мкг/мл) представлены на рис. 3. Введение мышам только аранозы в дозе 200 мг/кг приводило к постепенному снижению пролиферативной активности спленоцитов в среднем в 1,5-3,0 раза (р<0,05) по сравнению контрольным уровнем со 2 до 8 недели опыта. «Каскатол» при одновременном с аранозой введении животным оказывал стимулирующее влияние, начиная с 4-й недели опыта, и повышал пролиферативную активность Т-лимфоцитов в 2,3 раза (р<0,05) по сравнению с группой животных, получавших только цитостатик, к 8 неделе исследования. Применение «Каскатола» с селенитом натрия оказывало выраженное корригирующее действие в условиях индуцированного иммунодефицита и практически полностью восстанавливало пролиферативный потенциал лимфоцитов к 6-8 неделям эксперимента.
Таким образом, p-каротин, витамины Е, С и селен проявляют иммуностимулирующее действие, повышая пролиферативную активность Т-лимфоцитов как в физиологических условиях, так и в условиях вторичного иммунодефицита. При раздельном применении эффект исследуемых средств находится в прямой зависимости от дозы и длительности воздействия. В то же время, при сочетан-ном применении «Каскатола» и селенита натрия выявлено достоверное стимулирующее действие на всех экспериментальных моделях и в более ранние сроки от начала экспериментов.
1 т___V_J
ПН Д. Т . 1 +1 т
т т Fh _ ! Л
; гГШ Г а 1 - гг i
■■■■■ f-1 - . 1; -
2 A G в 10
НСйепи шедший nicnasüTOö
□ KOM"[Wnii QApilHliJil Q " L: j|h:: j,j h «KiiCUl CUI> BApiUIDKl > < ' 1 ',7
Рис. 3. Влияние аранозы, «Каскатола» и селенита натрия на пролиферативный ответ Т-лимфоцитов, трансформированных in vitro Кон А.
Механизм иммуномодулирующего влияния витаминов Е, С, p-каротина и селена к настоящему времени недостаточно изучен. По мнению ряда исследователей, основная роль в его реализации принадлежит антиоксидантной активности микронутриентов, защищающей клетки иммунной системы от повреждающего действия свободнорадикальных соединений [3,4,8,9].
Литература
1. Болиева, Л.З. Экспериментально-клиническое обосно-
вание применения микронутриентов и нестероидных противовоспалительных препаратов в профилактике злокачественных новообразований / Болиева Л.З.// Автореферат ... дисс. докт. мед. наук.- Ст. Купавна.- 2005.- 44 с.
2. Буюклинская, О.В. Влияние каротинсодержащих препаратов на иммунный статус практически здоровых лиц и при патологии / Буюклинская О.В. // Автореферат дисс. ... докт. мед. наук.- Архангельск.- 2001.- 40 с.
3. Успехи клинической иммунологии и аллергологии. Под ред. А.В. Караулова / А.В. Караулов [и др.].- М.: Издательство «Региональное отделение РАЕН».- 2002.- С. 211-222.
4. Лебедев, В.В. Успехи клинической иммунологии и аллергологии. Под ред. А.В. Караулова / В.В. Лебедев.- М.: Издательство «Региональное отделение РАЕН».- 2002.- С. 34-55.
5.Плецитый, К.Д. Тер. Архив / К.Д. Плецитый.- 1980.-№2.- С. 131-140.
6. Сергеев, А.В. Вопр. мед. Химии / А.В. Сергеев, С. А. Коростелев, Н.И. Шеренешева.- 1992.- №4.- С. 42-45.
7. Чочиева, А.Р. Возможности химиопрофилактики рака молочной железы в эксперименте / Чочиева А.Р. // Автореферат ... дисс. канд. мед. наук.- Москва.- 2000.- 20 с.
8.ВепШск A. // Krinsky N.I., Mathews-Roth M.M. & Taylor R.F., eds. Carotenoids ^emistry and Biology.- 1990.- New York-Plenum Press- P. 323-335.
9. Bendich A. // Proc. Nutr. Soc.- 1991.- Vol. 50.- P. 263274.
THE EXPERIMENTAL STUDYING IMMUNOMODULATORY ACTIVITY OF VITAMINS E, C, B-CAROTENE AND SELENIUM
L.Z. BOLIEVA, A.S. TSOGOEV, A.R. CHOCHIEVA Vladikavkaz Northern Ossetia State Medical Academy
The experiment in BALB/c and C3H male rats the effect of separate and combined application of vitamins E, C, ß-carotene and selenium upon T-lymphocytes proliferative was studied. It was shown that a ß-carotene, vitamins У and C and selenium produce an immune-stimulating action, increasing proliferative activity of T-lymphocytes both in physiological conditions and in conditions of secondary immunodeficiency induced with cytostatic aranosa.
Key words: immunomodulatory activity, proliferative activity of T-lymphocytes, ß-carotene, vitamin E, vitamin C, selenium.
УДК 617.55
РЕЗУЛЬТАТЫ ХИРУРГИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ НЕОБЛИТЕРИРОВАННОГО ВЛАГАЛИЩНОГО ОТРОСТКА БРЮШИНЫ У ДЕТЕЙ
А.А. ЮСУФОВ*, Г.Н. РУМЯНЦЕВА**, М.И. ПЫКОВ***, В.Н. КАРТАШЕВ***, А.А. МЕДВЕДЕВ*
На основании анализа результатов хирургического лечения 125 пациентов с заболеваниями необлитерированного влагалищного отростка брюшины в возрасте от 1 года до 17 лет установлено, что оперативное лечение заболеваний из лапароскопического доступа позволяет достичь хорошего анатомического результата и нормальных показателей интраорганного кровотока.
Ключевые слова: паховый канал, необлитерированный вагинальный отросток брюшины, паховая грыжа, водянка оболочек яичка, ультразвуковое исследование.
Заболевания необлитерированного влагалищного отростка брюшины (НВОБ) чаще всех прочих в детской практике требуют планового хирургического лечения. Операции на паховом канале у детей занимают более 33% всех плановых хирургических вмешательств, а паховые грыжи составляют 92-95% всех видов грыж детей [1,2,3]. Несомненно, сохранность репродуктивного здоровья при паховой грыже и сообщающейся водянке оболочек яичка закладывается в детском возрасте и определяется многими факторами, в том числе: исходным состоянием кровотока яичка, своевременностью, техническим качеством выполнения операции, проведением реабилитационного и диспансерного периодов под наблюдением уролога-андролога [4,6,7,8]. Исходы оператив-
* ГУЗ «Детская областная клиническая больница», г. Тверь
ГОУ ВПО «Тверская государственная медицинская академия Минздрав-соцразвития России»
ГОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования Минздравсоцразвития России», г. Москва
