CC BY
182
УДК 582.949.27
ИЗУЧЕНИЕ ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ТИМЬЯНА МЕЛОВОГО (THYMUS CRETACEUS KLOK. ET SCHOST.)
В.Н. БУБЕНЧИКОВА1 Ю.А. СТАРЧАК2
1Курский государственный медицинский университет
2Орловская медицинская академия
e-mail: [email protected]
Изучены фенольные соединения тимьяна мелового, представленные флавоноидами, оксикоричными кислотами, кумаринами, дубильными веществами. Из флавоноидов выделены: цинарозид, космоссиин, скутеллярин, из оксикоричных кислот: кофейная, хлорогеновая, розмариновая кислота, из кумаринов -скополетин. Количественное содержание флавоноидов составляет 1,12-1,43%, дубильных веществ 6,21%-11,1
Ключевые слова: тимьян меловой, флавоноиды, оксикоричные кислоты, кумарины, дубильные вещества.
Введение. В научной медицине России широко используется тимьян ползучий Thymus serpyllum L. В качестве отхаркивающего средства в форме настоя и жидкого экстракта [3]. Тимьян ползучий произрастает в сосняках, на опушках, полянах, на песках, каменистых склонах. Наряду с тимьяном ползучим на территории Европейской части России произрастает около 20 близких видов, которые в природных условиях не различаются заготовителями и используются наравне с тимьяном ползучим, однако химический состав их изучен недостаточно. Установлено, что одна из групп действующих веществ растений рода тимьян обусловлена присутствием фенольных соединений [4, 5].
Целью нашей работы явилось изучение фенольных соединений тимьяна мелового, широко распространенного в областях Центральной России.
Материалы и методы. Объектом исследования служила трава тимьяна мелового, заготовленная в 2010 году в Курской области в фазу цветения.
Выделение фенольных соединений осуществляли экстракцией 70 % спиртом этиловым, растворитель отгоняли, очищали от липофильных примесей четыреххлористым углеродом. Учитывая разнообразие полярности сложной смеси флавоноидов, кумаринов и оксикоричных кислот, очищенные водные экстракты фракционировали методом селективной экстракции диэтиловым эфиром, этилацетатом. Разделение смеси флавоноидов, оксикоричных кислот, кумаринов проводили методом препаративной хроматографии на колонках в сочетании с препаративной хроматографией на бумаге.
Структуру выделенных веществ устанавливали с использованием классических химических и физико-химических методов анализа на основании физико-химических свойств исходных соединений и продуктов их превращения, УФ- и ИК-спектров, величин Rf в различных системах растворителей, а также температур плавления проб смешения с достоверными образцами [1].
Для количественного определения флавоноидов использовали спектрофотометрический метод, основанный на реакции взаимодействия флавоноидов с алюминия хлоридом в среде 70 % спирта этилового и модифицированный нами. Около 1,0 г (точная навеска) измельченного и просеянного сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм, сухого сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 100 мл 70 % этилового спирта и взвешивают. Колбу присоединяют к обратному водяному холодильнику, нагревают на кипящей водяной бане в течении 60 минут, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Колбу с содержимым охлаждают, взвешивают и при необходимости доводят до первоначальной массы 70 % спиртом этиловым. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 10 мл фильтрата. 2,5 мл фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 5 мл 5 % раствора алюминия хлорида в 70 % спирте этиловом и через 10 мин 1 мл 3 % кислоты уксусной. Объем раствора доводят 70 % спиртом этиловым до метки и оставляют на 30 мин.
Оптическую плотность полученного раствора измеряют на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 395 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.
В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 2,5 мл исходного извлечения, 1 мл 3 % раствора кислоты уксусной и доведенный 70 % спиртом этиловым до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл [6].
Для качественного определения дубильных веществ готовили водные извлечения (1:10) на кипящей водяной бане в течение 30 минут. Извлечение фильтровали и использовали для проведения реакций с 10% раствором желатина, с железо-аммонийными квасцами, с формальдегидом и концентрированной кислотой хлористоводородной [7].
Для количественного определения дубильных веществ использовали метод перманганатометрии, являющийся фармакопейным для определения дубильных веществ [2].
Результаты и обсуждение. Установлено, что выделенные фенольные соединения тимьяна мелового представлены флавоноидными соединениями (3 вещества), оксикоричными кислотами (3 соединения), кумаринами (1 соединение).
Выделенные флавоноиды по результатом качественного анализа, хроматогафии в различных системах растворителей, УФ-спектроскопии продуктов количественного кислотного гидролиза, физико-химических свойств отнесены к моногликозидам флавоноидам. Углеводная часть у двух соединений представлена глюкозой, а у одного -глюкуроновой кислотой. Углеводная часть присоединена по 7 положению молекул гликозидов. В продуктах кислотного гидролиза исследуемых соединений идентифицировали лютеолин, апигенин и скутеллареин. Таким образом, исследуемые флавоноиды идентифицировали как цинарозид (лютеолин-7-глюкозид), космоссиин (апигенин-7-глюкозид), скутеллярин (скутелляреин-7-глюкуронозид).
Выделенные оксикоричные кислоты и их производные идентифицированы по флуоресценции пятен на хроматограммах, качественным цветным реакциям с железа хлоридом, диазотированной кислотой сульфаниловой и бромкрезоловым зеленым, УФ-спектрам, физическим константам, хроматографической подвижности. Они представлены хлорогеновой, кофейной и розмариновой кислотами.
Выделенный кумарин идентифицировали по флуоресценции пятна на хроматограмме в УФ-свете, хроматографической подвижности, данным УФ-, ИК-спектров. Кумариновая природа исследуемого соединения подтверждена также деструкцией кислотой йодистоводородной в среде жидкого фенола. В сравнении с достоверным образцом его охарактеризовали как скополетин.
Анализ результатов спектрофотометрического определения флавоноидов показал, что в траве тимьяна мелового их содержание колеблется от 1,12% до 1,43 %.
Результаты качественного определения дубильных веществ показали, что в сырье тимьяна мелового содержатся дубильные вещества преимущественно конденсированной группы. Содержание дубильных веществ колеблется от 6,21 % до 11,15%.
Выводы.
Таким образом, проведенные исследования позволили изучить фенольные соединения тимьяна мелового. Установлено, что тимьян меловой имеет близкий состав фенольных соединений и содержание флавоноидов в нем сопоставимо с тимьяном ползучим. Поэтому после изучения других биологических активных веществ (тритерпенов, эфирного масла) тимьян меловой может представлять интерес в качестве лекарственного сырья.
Литература
1. Бубенчиков, Р.А. Изучение фенольных соединений и полисахаридов травы фиалки скальной / Р.А. Бубенчиков // Башкир. хим. журн. - 2011. - Т. 18, № 1. - С. 128-130.
2. Государственная фармакопея СССР. - Изд. 11. - М.: Медицина, 1987. - Вып. 1. -277 с.
3. Государственная фармакопея СССР: Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. - Изд. 11., доп. - М.: Медицина, 1989. - 400 с.
4. Иллюстрированный определитель растений Средней России. - Т. 3: Покрытосеменные (двудольные: раздельнолепестные) / И.А. Губанов, К.В. Киселева, В.С. Новиков, В.Н. Тихомиров - М.: Т-во научных изданий КМК, Ин-т технологических исследований, 2004. - С.105.
5. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейства Hippuridaceae - Lobeliaceae. - СПб., 1991. - 200 с.
6. Смирнова, Л.П. Количественное определение суммы флавоноидов в цветках бессмертника песчаного / Л.П. Смирнова, Л.Н. Первых // Хим.-фарм. журн. - 1998. - №6. - С. 35-38.
7. Химический анализ лекарственных растений / под ред. Н.И. Гринкевич, Л.Н. Сафронич. - М.: Высш. шк., 1984. - 176 с.
THE STUDY OF PHENOLIC COMPOUNDS OF THYMUS CRETACEOUS KLOK. ET SCHOST
V.N. BUBENCHICOVA1 YU.A. STARCHAK2
Kursk State Medical University 2Oryol Medical Academy e-mail: fg.ksmu @mail.ru
The phenolic compounds of Thymus cretaceous Klok. et Schost. presented by flavonoids, oxycinnamic acids, coumarins, tannins have been studed. Cinarozid, kosmossin, skutellyarin have been identified from the flavonoids, from the oxycinnamic acids: caffeic, chlorogenic, rosemary acid, of the coumarins - scopoletin. Quantitative content of flavonoids is 1,12-1,43%, of tannins - 6,2111,1
Key words: Thymus cretaceous Klok. et Schost., flavonoids, oxycinnamic acids, coumarins, tannins.
