CC BY
9
УДК 615.91'8:582.282).015.4:6 IB.33.099
А. Б. Левицкая, Л. В. Кравченко. В. А. Тутельян
ИЗУЧЕНИЕ ЭМБРИОТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ НЕКОТОРЫХ ТРИХОТЕЦЕНОВЫХ МИ КОТОКСИ НОВ
Институт питания АМН СССР, Москва
Реально опасными для здоровья человека и сельскохозяйственных животных являются три-хотеценовые микотоксины, к числу которых относятся токсины Т-2 и НТ-2 — метаболиты микроскопических грибов рода Fusarium, поражающие зерновые культуры в процессе их созревания и хранения. Трихотеценовые микотоксины обладают широким спектром токсического действия: лимфопеническим, и м м у но деп р есс к в н ы м, нейро- и дерматотоксическим [8, И]. В то же время эмбриотокснческие и тератогенные свойства данных веществ остаются малоизученным [3, 10].
Целью настоящей работы являлось сравнительное изучение эмбриотоксического действия токсина Т-2 и продукта его деацетилирования (токсина НТ-2) в организме различных видов животных [1, 8, И].
Исследования проводили на крысах-самках линии Вистар с исходной массой тела 250— 350 г. Первым этапом исследования явилось установление I.D50 токсинов Т-2 и НТ-2 при их однократном внутрижелудочном введении крысам в 1 % этаноле. Среднесмертельные дозы рассчитаны по методу Кербера [7]. Для изучения эмбриотоксического действия крысы были разделены па 4 группы по 20 животных в ыаж-дой. Крысы 1-й группы получали токсин Т-2 в дозе 0,62 мг на 1 кг массы тела ('/? LD50) в те-, чение всей беременности, 2-й — в дозе 0,087 мг/кг ('/so I.D50) в течение всей беременности, 3-й — в дозе 0,62 мг/кг на 9, 10, 11-й дни беременности; крысы 4-й группы получали токсин НТ-2 в дозе 0,93 мг/кг ('/7 LD50) в течение всей беременности. Контрольные животные получали эквивалентные количества растворителя. Для оценки токсического действия токсинов исследовали гематологические, иммунологические и биохимические показатели. Иммунологические исследования проводили на 6 животных в каждой группе. На 17-й день беременности самок иммунизировали внутр'ибрюшинно эритроцитами барана в количестве 1■108 клеток. Для оценки гематологических показателей [2, 6] у крыс на 20-й день беременности определяли содержание гемоглобина, общее количество эритроцитов, лейкоцитов и лейкоцитарную формулу. На 21-й день беременности животных забивали и подсчитывали количество желъых тел в яичниках, число резорбций, доимплантационную, постимплантаци-онную гибель эмбрионов, общую эмбриональную смертность, число эмбрионов у каждой самки, их размер и массу, массу плаценты, плодо-
плацентарный индекс [4]. В сыворотке крови самок определяли активность щелочной фосфата-зы, а-маннозидазы [5], концентрацию лизоцима [9], а у иммунизированных животных — титр антител с применением реакции гемагглютина-ции. По 6—8 животных 2-й и 3-й групп доводили до родов. При наблюдении за развитием потомства учитывали количество крысят в помете, их массу и длину при рождении, смертность при рождении и в первые 7 дней, прирост массы тела в течение периода лактации.
Клиническая картина отравления при однократном введении токсинов Т-2 и НТ-2 в дозах, превышающих 3 и 5 мг/кг, была сходной. У животных наблюдались взъерошенность шерсти^ адинамия, одышка, диарея, воспаление слизистых оболочек носа с выделением геморрагического экссудата. Начальные признаки интоксикации токсином Т-2 появлялись через 3 ч после введения и достигали наибольшего развития к концу 1-х суток. Первые клинические симптомы Н'Г-2-микотоксикоза появлялись лишь через 10 ч и достигали максимального развития к концу 3-х суток. Среднесмертельные дозы токсинов Т-2 и НТ-2 составили соответственно 4,33 и 6,5 мг/кг.
У животных 1-й и 4-й групп, получавших токсины в течение всей беременности, первые клинические симптомы интоксикации появлялись на 10—12-й день беременности и характеризовались адинамией, потерей аппетита, диареей; у некоторых животных наблюдались воспаление слизистой оболочки носа с выделением геморрагического экссудата и парезы задних конечностей. У крыс этих групп отмечалось снижение массы тела, массы тимуса и увеличение массы печени и селезенки. У крыс 2-й и 3-й групп ка-кнх-либо признаков отравления не наблюдалось.
Введение токсина в дозе 0,62 мг/кг в течение всей беременности (1-я группа) вызывает внутриутробную гибель плодов у всех подопытных крыс. Количество резорбций на 1 самку составляло 7,8 против 0,3 в контроле. У самок 2-й группы, получавших токсин Т-2 в дозе 0,087 мг/кг в течение всей беременности, отклонений в репродуктивной функции не наблюдалось.
Токсин Т-2 в дозе 0,62 мг/кг при введении на 9—11-й день беременности (3-я группа) вызывал внутриутробную гибель всех плодов у 2 из 13 подопытных самок. Число резорбций, общая эмбриональная и постимплантацнонная гибель были значительно выше по сравнению с конт-
Изменение активности ферментов и титра антител в сыворотке крови крыс при затравке различными дозами токсинов Т-2
и НТ-2 (М±т)
Показатель Группа животных
1-я 2-я 3-я 4-я контрольная
Щелочная фосфатаза, мкмоль/мнн/мл а-Маннозидаза, нмоль/мин/мл Лизоцим, мкг/мл 0,098±0,0065* 4,30+1,00* 6,92±1,15 0,183+0,02 9,65±2,60 7,7±1,39 0,211 ±0,023 26,6±2,7 7,2±0,36 0,125±0,0098* 5,9-t-1 ,04* 7,5±0,88 0,200±0,02 21,2±4,7 7,7±!,06
Титр антител, log» -р-0 1,25±0,1* 3,62dt0,26 3,86±0,4 1,63±0,1* 3,57±0,26
Примечание. Звездочка — показатели статистически достоверны при Р<0,01.
рольной группой животных. Количество живых плодов было меньше. Количество крысят в помете составило 7,8±1,8 против 11,6±0,7 в контрольной группе. Мертворождение и смертность в первые 7 дней составили соответственно 2 и 8,16% в опытной группе и 0 и 1,23% в контрольной.
Токсин НТ-2 в дозе 0,93 мг/кг (4-я группа) оказывал на репродуктивную функцию такое же влияние, как и токсин Т-2 (1-я группа): наблюдались внутриутробная гибель всех плодов у подопытных самок и значительное количество резорбций (10,8±2,8 против 0—2 в контроле).
При действии токсинов Т-2 и НТ-2 в различных дозах не выявлено изменений гематологических показателей, что согласуется с данными литературы о низкой чувствительности крыс к лейкопеннческому действию трихотеценов [11]. В то же время в сыворотке крови самок 1-й и 2-й групп наблюдалось резкое снижение активности щелочной фосфатазы, а-маннозидазы и титра антител (см. таблицу). Активность а-ман-нозидазы также снижалась при действии токсина Т-2 в дозе 0,087 мг/кг в течение всей беременности.
Таким образом, проведенные исследования показали, что острая токсичность токсина Т-2 для крыс-самок линии Вистар не отличается от таковой для самцов. Выявлена повышенная чувствительность крыс к действию токсина Т-2 в период беременности, сопровождавшаяся выраженными клиническими и биохимическими изменениями. Эмбриотоксическое действие токсинов Т-2 и НТ-2 проявляется при отсутствии каких-либо симптомов интоксикации.
По результатам исследований эмбриотокедче-ского действия токсина Т-2 дозу 0,087 мг/кг можно рассматривать в качестве недействующей. Однако выраженные биохимические изме-
нения, возникающие при действии токсина Т-2, указывают на необходимость комплексного подхода к оценке токсического действия митотокси-нов при их гигиеническом регламентировании в пищевых продуктах и кормах.
Литература
1. Вилай В. И., Тутсльян В. А., Элланская И. А. и др.— jjL Мнкробиол. журн., 1983, № 5, с. 45—49. v
2. Инструкция по определению гемоглобина крови геми-глобинцнапндным методом М„ 1974.
3. Костюнина Н. А. — Труды ВНИИ вет. санитарии, М„ 1979, т. 63, с. 109— ПО.
4. Методы экспериментального исследования по установлению порогов действия промышленных ядов на генеративную функцию с целью гигиенического нормирования. Метод, рекомендации. М., 1978.
5. Покровский А. А., Тутельян В. А. Лизосомы М., 1976.
6. ПредтечеШкий В. Е. Руководство по клиническим и лабораторным исследованиям М., 1960.
7. Karber О. — Arch. exp. Path. Pharmakol., 1931, Bel 162, S. 480—482.
8. Mirocha С. J. — In: Conference on Mycoloxins in Animal Feeds and Grains Related to Animal Health. FDA/BVM. Rockvible, 1979, p. 289—373.
9. Parry R., Chandan R„ Slianani K. — Proc. Soc. exp. Biol. (N. Y.). 1965, vol. 119, p. 384—386.
10. Stanford G. K-, Hood R. D„ Hayes A. W. — Res. Com-mun. chern. Path. Pharmacol., 1975, vol. 10 p 743— 746.
11. Trichothecenes: Chemical, Biological and Toxicological Aspects /Ed. J. Ueno. Amsterdam, 1983. >/
Поступила 17.12.84
Summary. Oral administration to of female rats of the T-2 and NT-2 toxins in a dose of 1/7 LD50 throughout the whole period of gestation caused intrauterine fetal death and reduced the activity of the blood serum alkaline phosphatase, a-mannosidase and antibody titer. T-2 toxin administered on the 9-. 11th days of gestation also produced a pronounced embryotoxic effect, but biochemical and immunological changes were not detected. T-2 toxin in a dose of l/SOLDso was not embryotoxic, but causcd a considerable reduction in the blood scrum a-mannosidase activity.
*
