CC BY
41
374
Вопросы онкогематологии
Н. С. Федоровская, Д. А. Дьяконов, Н. А. Федоровская, Е В. Ванеева
Изучение CD8+ T-лимфоцитов в гистологических срезах селезенки при иммунной тромбоцитопении
ФГБУН "Кировский НИИ гематологии и переливания крови ФМБА России"
Иммунная тромбоцитопения (ИТП) является одним из наибо-л ее распространенных аутоиммунных гематологических заболеваний и характеризуется снижением содержания тромбоцитов в периферической крови. Основным звеном в патогенезе данного патологического процесса считается разрушение тромбоцитов аутоантителами с участием макрофагов селезенки [1]. В последние годы появились сообщения о Т-клеточном механизме деструкции кровяных пластинок [2]. Встречаются единичные работы, указывающие на активацию CD8+ T-клеток в лимфоидном органе и их участие в разрушении тромбоцитов у пациентов с ИТП, не отвечающих на иммуносупрессивную терапию [3, 4].
Механизмы развития заболевания не могут не отражаться на изменениях гистоархитектоники селезенки. Однако работ, посвященных ее гистологическому исследованию с учетом количественного состава и особенностей распределения Т-клеточных популяций, недостаточно. Наиболее актуальным при этом на сегодняшний день остается вопрос изучения цитотоксических CD8+ Т-лимфоцитов в зависимости от ответа на спленэктомию и формы заболевания. Это позволит разработать дополнительные критерии прогноза течения патологического процесса после удаления селезенки и может быть использовано при назначении терапии.
Целью работы является исследование CD8+ T-лимфоцитов в гистологических срезах селезенки у больных ИТП.
Были проведены исследования на срезах селезенки, приготовленных из парафиновых блоков от 27 пациентов с ИТП после спленэктомии; медиана возраста составила 44 года (32,0-50,0). Из них 14 - мужского пола и 13 - женского. Группу 1 составили
Изучение CD8+ T-лимфоцитов в гистологических срезах селезенки ...
375
больные, у которых после спленэктомии установилась ремиссия (n = 16), в группу 2 были включены обследуемые с рефрактерным течением (n = 11). Впервые выявленная форма заболевания была установлена у 8 пациентов, персистирующая - у 10, хроническая - у 9 больных. В группу сравнения были включены образцы селезенок, взятые от 20 лиц, не имевших в анамнезе заболеваний системы крови.
Морфометрическую оценку количества CD8+ T-лимфоцитов, окрашенных с применением иммуногистохимических технологий, осуществляли на световом микроскопе со встроенной фото- и видеокамерой фирмы «Leica» с помощью программного обеспечения анализа изображений ImageScope Color, версии М, с окуляром х10, при объективах х10, х40 и х100. Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью программного обеспечения SPSS for Windows version 19 с применением непараметрических двусторонних критериев Крускала-Уоллиса и Манна-Уитни для выявления достоверности различий. Результаты исследований представлены с указанием медианы, а также нижнего и верхнего квартилей для каждой группы. Статистически значимыми считали различия при р < 0,01.
В результате морфометрического анализа CD8+ Т-лимфо-цитов в селезенке было установлено достоверное увеличение их количества у больных ИТП по отношению к группе сравнения, р < 0,001 (табл. 1). При этом повышение данной клеточной популяции выявлено как в белой, так и в красной пульпе органа, p < 0,001.
Таблица 1 - Количество CD8+ лимфоцитов в селезенке у больных иммунной тромбоцитопенией в зависимости от ответа на спленэктомию, %
Группы Содержание во всем органе Содержание в белой пульпе Содержание в красной пульпе
Группа сравнения 0,3 (0,2-0,5) 0,4 (0,3-0,7) 0,2 (0,1-0,5)
Больные ИТП 5,5* (3,3-7,1) 6,1* (3,6-6,9) 3,6* (2,1-5,9)
1 группа 3,8*/** (21,9-5,8) 4 у*/** (2,1-6,2) 2,7*/** (1,9-4,2)
2 группа у с* /** (6,1-10,7) 7 1*/** (6,1-8,6) 6,7*/** (3,5-7,7)
Примечание (здесь и далее): * - достоверность различий по отношению к группе сравнения; ** - достоверность различий между группами больных.
376
Вопросы онкогематологии
Статистически значимое увеличение количества CD8+ лимфоцитов у больных ИТП в зависимости от ответа на лечение было определено как в 1, так и во 2 группе по сравнению с нормой, р < 0,001. При этом установлено, что наиболее высокое содержание CD8+ клеток было характерно для пациентов с рефрактерным течением заболевания по отношению к обследованным, ответившим на спленэктомию, р < 0,001. Данные отличия выявлены как в белой, так и в красной пульпе лимфоидного органа соответственно, р < 0,001.
Дальнейшее исследование было направлено на подсчет CD8+ Т-лимфоцитов у больных с различными формами патологического процесса (табл. 2). Было установлено увеличение количества этих клеток у лиц с впервые выявленной, персистиру-ющей и хронической ИТП по отношению к группе сравнения, p < 0,001. При этом данные значения были достоверно выше как в белой, так и в красной пульпе селезенки по сравнению с нормой. Однако статистически значимых различий в зависимости от формы заболевания получено не было.
Таблица 2 - Количество CD8+ лимфоцитов в селезенке у больных иммунной тромбоцитопенией в зависимости от формы течения болезни, %
Группы Содержание во всем органе Содержание в белой пульпе Содержание в красной пульпе
Группа сравнения 0,3 (0,2-0,5) 0,4 (0,3-0,7) 0,2 (0,1-0,5)
Впервые выявленная форма 6,3* (5,1-7,0) 6,4* (5,5-6,8) 4,5* (3,7-6,6)
Персистирующая форма 5,4* (2,2-9,4) 5,9* (2,2-10,3) 3,5* (2,1-5,5)
Хроническая форма 4,4* (2,4-6,7) 4,7* (2,4-6,6) 2,7* (1,9-5,5)
Таким образом, установлено увеличение содержания в селезенке CD8+ лимфоцитов при ИТП. Количество данных клеток было значительно выше как в белой, так и в красной пульпе органа по сравнению с нормой. При этом более высокие значения этой популяции были характерны для пациентов с рефрактерным течением заболевания. Результаты полученных исследований могут быть использованы в гематологических отделениях и патологоанатомических лабораториях в качестве дополнительных критериев, предопределяющих прогноз течения ИТП
Изучение CD8+ T-лимфоцитов в гистологических срезах селезенки ...
377
у больных после спленэктомии и дифференцированного подхода при назначении терапии.
Список литературы
1. Toltl, L. Pathophysiology and management of cronic immune thrombocytopenia: focusing on what matters / L. Toltl, D. Arnold // Br. J. Haematology. - 2010. - Vol. 152. - P. 52-60.
2. Rodeghiero, F. Standardization of bleeding assessment in immune thrombocytopenia: report from the International Working Group / F. Rodeghiero, M. Michel, T. Gernsheimer // Blood. - 2013. -Vol. 121 (14). - P. 2596-2606.
3. Chow, L. A murine model of severe immune thrombocytopenia is induced by antibody- and CD8+ T cell-mediated responses that are differentially sensitive to therapy / L. Chow, R. Aslam, E. Speck [et al.] // Blood. - 2010. -Vol. 115 (6). - P. 1247-1253.
4. Audia, S. Preferential splenic CD8+ T-cell activation in rituxi-mab-nonresponder patients with immune thrombocytopenia / S. Au-dia, M. Samson, M. Mahevas [et al.] // Blood. - 2013. - Vol. 122. -Р. 2477-2486.
