Изучение биологических свойств бактериофагов рода Proteus Текст научной статьи по специальности «Биологические науки»

УДК 602.3:579.6

DOI 10.18286/1816-4501-2017-3-99-104

ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ БАКТЕРИОФАГОВ РОДА PROTEUS

Феоктистова Наталья Александровна, кандидат биологических наук, доцент кафедры «Микробиология, вирусология, эпизоотология и ветеринарно-санитарная экспертиза»

Васильев Дмитрий Аркадьевич, доктор биологических наук, профессор кафедры «Микробиология, вирусология, эпизоотология и ветеринарно-санитарная экспертиза»

Золотухин Сергей Николаевич, доктор биологических наук, профессор кафедры «Микробиология, вирусология, эпизоотология и ветеринарно-санитарная экспертиза» ФГБОУ ВО Ульяновский ГАУ

432017, г. Ульяновск, бульвар Новый Венец, 1; 8(8422)55-95-47, e-mail: [email protected]

Ключевые слова: Proteus, бактериофаги, биологические свойства, лизис, культура В статье описаны результаты исследований по изучению биологических свойств бактериофагов рода Proteus. Были изучены основные биологические свойства протейных фагов Pr-1, Pr-2, Pr-3, Pr-4, Pr-5, Pr-6 Pr-7, Pr-8 серии УГСХА, выделенных в 2017году из патологического материала и объектов санитарного надзора животноводческих и птицеводческих помещений в хозяйствах, неблагополучных по желудочно-кишечным заболеваниям. Установлено, что изучаемые протейные бактериофаги характеризуются различными показателями литической активности в диапазоне от 4,2±0,2х106 до 1,9±0,1х109 БОЕ/мл (по методу A. Gratia) и от 10-5 до 108 (по методу Аппельмана). Морфология негативных колоний фагов представлена бляшкообразующими единицами с четким краем и прозрачным центром различного диаметра в диапазоне от 0,2±0,1 до 0,6±0,1 мм. Определено, что изучаемые бактериофаги Proteus специфичны в пределах рода, обладают перекрестным лизисом в пределах видов Proteus vulgaris и Proteus mirabilis. Совокупный процент лизиса восьми бактериофагов на 42 культурах составил 100%. Протейные фаги являются строго специфичными в пределах рода и не лизи-руют культуры Escherichia spp., Citrobacter spp., Enterobacter spp., Morganella spp., Klebsiella spp., Salmonella spp., Yersinia spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Bacillus spp., Pseudomonas spp., Providenvia spp. Изученные свойства протейных бактериофагов позволяют систематизировать биологические особенности каждого из выделенных клонов и произвести отбор двух фагов - Pr-4 и Pr-8 серии УГСХА - с целью последующего конструирования фагового биопрепарата для диагностики, профилактики и лечения дисбиозов, возбудителем которыхявляются протеи в смешанной или монокультурах.

Введение

Роль бактериофага как средства диагностики, терапии и профилактики инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных и птицы в настоящее время невелика [1]. С каждым годом повышается значимость бактериофагов как высоко специфического диагностического средства, позволяющего надежно дифференцировать возбудителей бактериальных видов, а порой проводить более детальную дифференциацию отдельных типов и вариантов внутри данного вида [2]. Возможность фагоидентификации вытекает из специфичности действия фагов, которая может быть настолько выражена, что позволяет дифференцировать не только отдельные виды, но и серологически неотличимые штаммы в пределах одного вида [3]. Как указывали В.Д. Тимаков и Д.М. Гольдфарб, идентификация возбудителей инфекционных заболеваний при помощи бактериофагов является очень тонким методом, превосходящим по чувствительности все иммунологические реакции [4].

Поэтому все большее число исследователей предпочитают обращаться к бактериофагам, как универсальному механизму, способному инакти-вировать специфичные бактерии и применять этот биологический феномен в качестве средства диа-

гностики, профилактики и лечения инфекционных заболеваний [5]. Конструирование биопрепаратов на основе бактериофагов требует изучения их основных биологических свойств с целью получения высокоэффективного средства с широким спектром действия.

Протеи выделяются при маститах, эндометритах, раневых инфекциях и других воспалительных процессах у различных видов животных. Особое внимание заслуживают работы по изучению этиологической роли протея в возникновении желудочно-кишечных заболеваний новорожденных животных [6-11]. Разработка фаговых биопрепаратов для диагностики, лечения и профилактики дис-биозов, возбудителем которых являются протеи, включает этап изучения их основных биологических свойств.

Цель работы - изучение биологических свойств бактериофагов рода Proteus, выделенных из патологического материала и объектов санитарного надзора животноводческих и птицеводческих помещений в хозяйствах, неблагополучных по желудочно-кишечным заболеваниям.

Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- провести эксперименты по определению

таблица 1

Показатели некоторых биологических свойств изучаемых протейных бактериофагов

№ Название бактериофага и индикаторной культуры Название биологического свойства

Литическая активность (по методу агаровых слоев по A. Gratia), БОЕ /мл Литическая активность (по методу Аппельмана) Диаметр негативных колоний фага, мм

1 Pr - 1 УГСХА / Pr. vulgaris 1 2,3±0,1х108 10-7 0,3±0,1

2 Pr - 2 УГСХА / Pr. vulgaris 3 1,7±0,2х107 10-6 0,2±0,1

3 Pr - 3 УГСХА / Pr. vulgaris 13 4,5±0,1х108 10-7 0,4±0,1

4 Pr - 4 УГСХА / Pr. vulgaris 16 1,9±0,1х109 10-8 0,4±0,1

5 Pr - 5 УГСХА / Pr. vulgaris 33 5,6±0,3х107 10-6 0,3±0,1

6 Pr - 6 УГСХА / Pr. vulgaris 28 1,3±0,2х109 10-8 0,5±0,1

7 Pr - 7 УГСХА / Pr. vulgaris 38 4,2±0,2х106 10-5 0,6±0,1

8 Pr - 8 УГСХА / Pr. mirabilis 12 3,9±0,1х108 10-7 0,3±0,1

показателей литической активности бактериофагов Proteus;

- изучить морфологию негативных колоний бактериофагов Proteus;

- установить спектр литического действия бактериофагов Proteus;

- определить специфичность действия бактериофагов Proteus.

объекты и методы исследований

Бактериофаги рода Proteus: Pr-1 УГСХА, Pr-2 УГСХА, Pr-3 УГСХА, Pr-4 УГСХА, Pr-5 УГСХА, Pr-6 УГСХА Pr-7 УГСХА, Pr-8 УГСХА, выделенные и селекционированные авторами в 2017 году. В работе было использовано 42 штамма бактерий рода Proteus; 69 штаммов бактерий Escherichia spp., Citrobacter spp., Enterobacter spp., Providenvia spp., Morganella spp., Klebsiella spp., Salmonella spp., Yersinia spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Bacillus spp., Pseudomonas spp., которые были получены из музея кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ ФГБОУ ВО Ульяновский ГАУ. Все культуры характеризовались типовыми свойствами и хранились при температуре 2-4 0С в столбике 0,7 % мясо-пептонного агара (МПА). В исследованиях использовали 20±2 часовые культуры микроорганизмов (температура культивирования 36±10С).

В исследованиях применяли питательный бульон ТУ 10-02-02-789-176-94 (ООО «БиоКомпас-С», РФ), питательный агар для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-агар) ТУ 9398-020-780953262006 (ФБУН ГНЦ ПМБ, РФ), генцианвиолет 548-62-9 (ЗАО «Вектон», РФ).

Изучение биологических свойств бактериофагов проводили при температуре культивирования 36±10С, время термостатирования посевов 18±2 часа, по отработанным раннее методикам [12-15]. Литическую активность фагов (концентрацию фаговых частиц) определяли методом агаровых слоев -по A. Gratia - в двухслойном мясопептонном агаре и методом разведений (титрования) - по Аппельману [16].

S 1

SE IS ES SS »1

Si

Р О ш S Hi H ■ i

са s!

результаты исследований

Наиболее важным показателем из спектра изучаемых биологических свойств фагов можно считать его титр, то есть максимальное его разведение, при котором бактериофаг способен лизи-ровать гомологичную микробную культуру. Посевы последовательных разведений бактериофага с целью повышения точности эксперимента проводили троекратно. Результаты экспериментов по определению литической активности бактериофагов рода Proteus, представленные в таблице 1, позволяют нам утверждать, что изучаемые фаги характеризуются различными показателями титра в диапазоне 4,2±0,2х106 до 1,9±0,1х109 БОЕ/мл (по методу A. Gratia) и от 10-5 до 10-8 (по Аппельману).

При визуальном осмотре результатов посева чашечным методом по методике A. Gratia изучалась морфология негативных колоний протейных фагов. Этот показатель является основным биологическим признаком клонов бактериофагов, позволяющим проводить скрининговые (отборочные) дифферен-цильные тесты бактериальных патогенов на газоне индикаторной культуры. Установлено, что при высеве на МПА бактериофаги Proteus образуют бляш-кообразующие единицы с четким краем и прозрачным центром различного диаметра в диапазоне от 0,2±0,1 до 0,6±0,1 мм (таблица 1 и рисунок 1).

С целью определения спектра литического действия изучаемых протейных бактериофагов были проведены исследования на 42 штаммах бактерий рода Proteus. Культуры для исследований готовили стандартным образом, исследования проводили методом «стекающая капля» по Отто. Полученные данные были сгруппированы в таблице 2 и свидетельствуют о том, что изучаемые бактериофаги рода Proteus активно работают в широком диапазоне изучаемых культур. Совокупный процент лизиса у 8 бактериофагов составляет 100 %.

Важнейшей характеристикой бактериофага, который может входить в состав биопрепарата для диагностики, лечения и профилактики заболе-

В

Г

Рис. 1 - морфология негативных колоний фага: А) Рг - 4 УГСХА, Б) Рг - 2 УГСХА; В) Рг - 6 УГСХА; Г) Рг - 3 УГСХА (культивирование при температуре 36±10С в течение 18±2 часов)

ваний, возбудителем которых являются бактерии рода Proteus, является его специфичность в пределах вида. Результаты исследований, которые проводились по методу «стекающая капля» по Отто, отражены в таблице 3. Экспериментально установлено, что на чашках Петри, засеянных газонами культур Escherichia spp., Citrobacter spp., Enterobacter spp., Morganella spp., Providenvia spp., Klebsiella spp., Salmonella spp., Yersinia spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Bacillus spp., Pseudomonas spp., зон лизиса, при нанесении бактериофагов Proteus, при визуальном осмотре обнаружено не было. Особое внимание было уделено специфичности бактериофагов по отношению к бактериям Morganella spp., Providenvia spp., которые ранее составляли с бактериями рода Proteus одну группу [3].

Выводы

Были изучены основные биологические свойства бактериофагов рода Proteus (Pr-1 УГСХА, Pr-2 УГСХА, Pr-3 УГСХА, Pr-4 УГСХА, Pr-5 УГСХА, Pr-6 УГ-

СХА Pr-7 УГСХА, Pr-8 УГСХА), выделенных авторами в 2017 году из патологического материала и объектов санитарного надзора животноводческих и птицеводческих помещений из хозяйств, неблагополучных по желудочно-кишечным заболеваниям.

В экспериментах установлено, что изучаемые протейные бактериофаги характеризуются различными показателями литической активности в диапазоне от 4,2±0,2х106 до 1,9±0,1х109 БОЕ/мл (по методу A. Gratia) и от 10-5 до 10-8 (по методу Аппель-мана). Наиболее высокие титры имели фаги Pr-4 УГСХА (1,9±0,1х109 БОЕ/мл; 10-8) и Pr-8 серии УГСХА (1,3±0,2х109 БОЕ/мл; 10-8).

Морфология негативных колоний изучаемых фагов представлена бляшкообразующими единицами с четким краем и прозрачным центром различного диаметра в диапазоне от 0,2±0,1 до 0,6±0,1 мм.

Определено, что изучаемые бактериофаги Proteus специфичны в пределах рода, обладают

и

Sä es »1

Si

р и ш и ;>i М ■ i

00 s!

Таблица 2

Спектр логического действия бактериофагов рода Proteus

Наличие зоны лизиса на газоне анализируемой культуры при нанесении фага

№ Название культуры - 1 УГСХА - 2 УГСХА - 3 УГСХА - 4 УГСХА - 5 УГСХА - 6 УГСХА - 7 УГСХА - 8 УГСХА

CL CL CL CL CL CL CL CL

1. Proteus mirabilis Тр. 1 Культ. + - - - - + - -

2. Proteus mirabilis 95/98 - + + - - + + -

3. Proteus mirabilis 31/82 - + - + ++ - - ++

4. Proteus mirabilis 14 3"П" + - - - + ++ - -

5. Proteus mirabilis 4/2 3"П" + - - + - - - -

6. Proteus mirabilis 31/32 - + - - - + ++

7. Proteus mirabili 523 - ++ - - - + - +

8. Proteus mirabilis 491 + - - - - + - -

9. Proteus vulgaris Куз.с/х Тр. 1 сел. - - + ++ - - - +

10. Proteus vulgaris Куз. с/х фекал - - - - + + - -

11. Proteus vulgaris 82/98 - - - ++ - - - -

12. Proteus vulgaris 3"П" №3 - - - - - ++ - -

13. Proteus vulgaris 85/98 - + + - - + - ++

14. Proteus vulgaris 55А ++ + - - - + + -

15. Proteus vulgaris 261 - + - - - + - -

16. Proteus vulgaris 1 - - - - ++ + - -

17. Proteus vulgaris 2 - - - + - - - -

18. Proteus vulgaris 3 - - + - + + ++ -

19. Proteus vulgaris 4 - - - ++ - - - -

20. Proteus vulgaris 5 - + - - - + - -

21. Proteus vulgaris 6 - - ++ - - + - -

22. Proteus vulgaris 7 - + - - + + - +

23. Proteus vulgaris 8 - - - ++ - - + -

24. Proteus vulgaris 9 - + - - ++ ++ - -

25. Proteus vulgaris 10 ++ - - - - + - -

26. Proteus mirabilis 1 - - - + - - ++ -

27. Proteus vulgaris 1 УГСХА + + - - - ++ - -

28. Proteus vulgaris 3 УГСХА - + - ++ - - - -

29. Proteus mirabilis 12 УГСХА - - - - + + - +

30. Proteus vulgaris 13 УГСХА + - - + - - - +

31. Proteus vulgaris 16 УГСХА - - + + - - ++ -

32. Proteus mirabilis 18 УГСХА - - - - ++ + - -

33. Proteus vulgaris 21 УГСХА - - - + - - - -

34. Proteus mirabilis 24 УГСХА + - - + - - + -

35. Proteus mirabilis 25 УГСХА - + - + - - + -

36. Proteus vulgaris 28 УГСХА - ++ - + - - - +

37. Proteus vulgaris 32 УГСХА + + + - - + - +

38. Proteus vulgaris 33 УГСХА + + + - + - - +

39. Proteus mirabilis 36 УГСХА - + + - + - - +

40. Proteus mirabilis 37 УГСХА - - + ++ ++ - - -

41. Proteus vulgaris 38 УГСХА - - - + - + + -

42 Proteus mirabilis 40 УГСХА + - - + - + - -

Количество лизируемых культур 12 17 10 18 12 24 10 11

Совокупный процент лизиса 100

Примечание:

«+» - отмечена зона лизиса по ходу стекания капли бактериофага на газоне культуры; «++»- отмечена зона лизиса по ходу стекания капли бактериофага с проявлением стерильных пятен на газоне культуры.

перекрестным лизисом в пределах видов Proteus vulgaris и Proteus mirabilis. Совокупный процент лизиса восьми бактериофагов на 42 культурах составил 100%.

Протейные фаги являются строго специфичными в пределах рода и не лизируют культуры: Escherichia spp., Citrobacter spp., Enterobacter spp., Morganella spp., Klebsiella spp., Salmonella spp., Yersinia spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Bacillus spp., Pseudomonas spp., Providenvia spp.

Изученные свойства протейных фагов позволяют систематизировать биологические особенности каждого из выделенных клонов вирулентных бактериофагов и произвести отбор двух фагов - Pr-4 и Pr-8 серии УГСХА

- с целью последующего конструирования фагового биопрепарата для диагностики, профилактики и лечения дисбиозов, возбудителем которых являются протеи в смешанной или монокультурах.

Исследования проводятся при поддержке государства в лице ФГБУ «Российский фонд фундаментальных исследований» по научному проекту «Геномика и биология кандидатных бактериофагов для терапии энтеробактериальных инфекций в ветеринарной медицине» №16-44732038/16 от 03.11.2016г.

Библиографический список

1. Золотухин, С.Н. Малоизученные энтеробакте-рии и их роль в патологии животных / С.Н. Золотухин.

- Ульяновск: Копиринг, 2004. - 130с.

2. Критерии отбора бактериальных штаммов и бактериофагов для формирования производственной коллекции, специфически лизирующих бактерии родов: Klebsiella, Echerichia, Proteus, Pseudomonas, Staphylococcus / Е.Н. Сятчихина, П.А. Набатников, С.А. Коровкин, А.В. Катлинский, Г.М. Игнатьев // Биопрепараты. Профилактика. Диагностика. Лечение. - 2016. -Том 16, № 2 (58). - С.90-95.

3. Феоктистова, Наталья Александровна. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов рода Proteus, конструирование на их основе биопрепарата и разработка параметров практического применения: дис. ...канд. биологических наук: 03.00.07, 03.00.23 / Н.А.Феоктистова. - Саратов, 2006. -166с.

3. Тимаков, В.Д. Реакция нарастания титра фага (РНФ) / ВД Тимаков, Д.М. Гольдфарб. - М: Медгиз, 1962. -71с.

4. Золотухин, Сергей Николаевич. Создание и разработка схем применения диагностических био-

Таблица 3

Специфичность протейных бактериофагов

Наличие зоны лизиса на газоне

анализируемой культуры при на-

Род культур, нанесенных газо- несении фага

№\

ном на чашки Петри / количе- < < < er er С er <

№ ство использованных в экспе- и X и X и X и X и X и X и X и

рименте штаммов > с > с > с > с > 1_ > с > с >

1 1 2 1 3 1 Î 5 1 6 - 7 1 8 1

Q. а. ti- ti- Q. ti- а. D_

1 Escherichia spp./5 штаммов Отсутствие зон лизиса

2 Citrobacter spp./ 12 штаммов Отсутствие зон лизиса

3 Enterobacter spp./4 штамма Отсутствие зон лизиса

4 Morganella spp./ 13 штаммов Отсутствие зон лизиса

5 Klebsiella spp./ 8 штаммов Отсутствие зон лизиса

6 Salmonella spp./ 5 штаммов Отсутствие зон лизиса

7 Yersinia spp. / 4 штаммов Отсутствие зон лизиса

8 Providenvia spp. / 9 штаммов Отсутствие зон лизиса

9 Staphylococcus spp./2 штамма Отсутствие зон лизиса

10 Streptococcus spp./2 штамма Отсутствие зон лизиса

11 Bacillus spp./3 штамма Отсутствие зон лизиса

12 Pseudomonas spp./2 штамма Отсутствие зон лизиса

препаратов на основе выделенных и изученных бактериофагов энтеробактерий: дис. ... д-ра биологических наук: 03.00.07, 03.00.23 / С.Н. Золотухин. - Ульяновск, 2007. -341с.

5. Влияние микробного фактора на возникновение скрытого эндометрита у коров / Л.Г. Войтенко, Т.И. Лапина, И.А. Головань, Д.И. Шилин // Известия Самарской государственной сельскохозяйственной академии. - 2015. - № 1. - С 23-25.

6. О действии подкислителей на микрофлору желудрчно-кишечного тракта телят / О.Ж. Хапцева, З.Ю. Хапцев, Е.А. Фауст, О.С Ларионова, А.А. Щербаков // Научная жизнь. - 2015. - № 2. - С. 103-109.

7. Формирование кишечного микробиоценоза у телят с синдромом гипотрофии в молочный период / А.Г. Шахов, Л.Ю. Сашнина, Д.В. Федосов, Т.Е. Ерина, Ю.Н. Алехин // Сельскохозяйственная биология. - 2014. - № 2. - С. 105-111.

8. Сравнительная возрастная динамика становления микробоценоза слепой кишки кур и перепелов / М.В Каминськая, О.М. Стефанышин, Г.И. Нечай, Н.И. Бо-рецкая, С.В. Гураль, И.Н. Попык , Н.И. Цепко, В.В. Литвин // Болопя тварин. - 2014. - Том 16, № 4. - С. 50-58.

9. Эпидемиология, клиника и лабораторная диагностика бактериальных и вирусных диарей / В.Б. Сбой-чаков, С.М. Захаренко, Ю.П. Финогеев, В.Ф. Крумгольц // Лечение и профилактика. - 2012. - № 3. - С. 77-81.

10. Лукин, О.А. Особенности диагностики про-теоза среди новорожденных телят / О.А. Лукин, О.В. Поворова // Вестник Башкирского государственного аграрного университета. - № 3 (23). - 2012. - С. 34-36.

11. Юдина, М.А. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов бактерий вида Bacillus mesentericus / М.А. Юдина, Н.А. Феокти-

стова // Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека. - Ульяновск, 2013. - С. 197-211.

12. Феоктистова, Н.А. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов бактерии рода Proteus / Н.А. Феоктистова // Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека. - Ульяновск, 2013. - С. 171-185.

13. Васильев, Д.А. Выделение и изучение биологических свойств протейных бактериофагов, разработка метода фагоиндикации / Д.А. Васильев, Н.А. Феоктистова, С.Н. Золотухин // Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими и малоизученными инфекционными болезнями животных. Материалы международной научно-практической конфе-

ренции. - Покров, 2008. - С. 253-256.

14. Бактериофаги рода Proteus и их практическое применение в лабораторной практике / С.Н. Золотухин, Н.А. Феоктистова, М.А. Лыдина, Д.А. Васильев, И.Г. Шви-денко, А.В. Алешкин // Материалы VII ежегодного Всероссийского конгресса по инфекционным болезням с международным участием. - Москва, 2015. - С. 132.

15. Изучение некоторых биологических свойств выделенных фагов бактерий рода Proteus / Н.А. Феоктистова, А.С. Мелехин, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев // Современное развитие АПК: региональный опыт, проблемы, перспективы. Материалы всероссийской научно-практической конференции. - Ульяновск, 2005. - С. 176-179.

study of biological properties of bacteriophages of proteus genus

Feoktistova N.A., Vasiliev D.A., Zolotukhin s.N.

FSBEI HE Ulyanovsk SAU 432017, Ulyanovsk, Noviy Venets bld., 1;

8 (8422) 55-95-47, E-mail: [email protected]

Keywords: Proteus, bacteriophages, biological properties, lysis, culture

The article describes results of the studies on biological properties of bacteriophages of Proteus genus. Basic biological properties of Proteus phages such as Pr-1, Pr-2, Pr-3, Pr-4, Pr-5, Pr-6 Pr-7, Pr-8 UGSKHA series were studied, the above phages were isolated from pathological material and objects of sanitary supervision of livestock and poultry farms, where gastrointestinal diseases were found in 2017. It is stated that the studied Proteus bacteriophages are characterized by different indices of lytic activity in the range of from 4,2±0,2x106 to 1,9±0,1x109 PFU/ml (by method of A. Gratia) and from 105 to 108 (by method of Appelman). The morphology of the negative colonies of phages is represented by plaque-forming units with a clear edge and a transparent center of various diameters ranging from 0,2 ± 0,1 to 0,6 ± 0,1 mm. It is determined that the studied Proteus bacteriophages are specific within the genus, they have excellent lysis within the species of Proteus vulgaris and Proteus mirabilis. The cumulative percentage of lysis of eight bacteriophages in 42 cultures was 100%. Proteus phages are strictly specific within the genus and they do not lyse such cultures as, Escherichia spp., Citrobacter spp., Enterobacter spp., Morganella spp., Klebsiella spp., Salmonella spp., Yersinia spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Bacillus spp., Pseudomonas spp., Providenvia spp. The studied properties of Proteus bacteriophages allow to systematize biological features of each of the isolated clones and make selection of the two phages - Pr-4 and Pr-8 series UGSKHA for subsequent construction of phage biological product for the diagnosis, prevention and treatment of dysbiosis, the causative agent of which is Proteus of mixed or monoculture.

Bibliography

1. Zolotukhin, S.N. Insufficiently studied enterobacteria and their role in animal pathology/S.N. Zolotukhin. - Ulyanovsk: Copyring, 2004. - P.29-37 (130p).

2. Syatchikhina, E.N. Criteria for selection of bacterial strains and bacteriophages for formation of a production collection, specifically lysing bacteria of the genera: Klebsiella, Echerichia, Proteus, Pseudomonas, Staphylococcus / E.N. Syatchikhina, P.A. Nabatnikov, S.A. Korovkin, A.V. Katlinskiy, G.M. Ignatiev // Biocompounds. Preventive measures. Diagnostics. Treatment. - 2016. - V. 16. - № 2 (58). - P.90-95.

3. Feoktistova Natalia Alexandrovna. Isolation and study of biological properties of bacteriophages of Proteus genus, the elaboration of the biocompounds on their basis and development of practical application parameters: dissertation of Candidate of Biology: 03.00.07,03.00.23/ N.A. Feoktistova. - Saratov, 2006. - P.7 (166p).

4. Timakov, V.D. The reaction of increasing the phage titer / V.D. Timakov, D.M. Goldfarb. - M; Medgiz, 1962. - p. 65 (71p).

5. Zolotukhin Sergey Nikolaevich. Creation and development of schemes for application of diagnostic biocompounds based on isolated and studied bacteriophages of enterobacteria: dissertation of Doctor of Biology: 03.00.07, 03.00.23/S.N. Zolotukhin. - Ulyanovsk, 2007. - p. 8-9 (341p).

6. Influence of microbial factor on the latent endometritis of cows / L.G. Voitenko, T.I. Lapina, I.A. Golovan, D.I. Shilin // Izvestiya of Samara State Agricultural Academy. - 2015. - № 1. - P. 23-25.

7. Khaptseva, O.Zh. On the effect of acidulants on the microflora of the gastrointestinal tract of calves / O.Zh. Khaptseva, Z.Yu. Khaptsev, E.A. Faust, O.S. Larionova, A.A. Shcherbakov//Scientific life. - 2015. - № 2. - P. 103-109.

8. Shakhov, A.G. Formation of intestinal microbiocenosis of calves with a hypotrophy syndrome in the milk period / A.G. Shakhov, LYu. Sashnina, D.V. Fedosov, T.E. Erina, Yu.N. Alekhin //Agricultural Biology. - 2014. - № 2. - P. 105-111.

9. Comparative age dynamics of microbiocenosis formation of chicken and quail caecum / M.V. Kaminskaya, O.M. Stephanyshin, G.I. Nechay, N.I. Boretskaya, S.V Gural, I.N. Popyk, N.I. Tsepko, V.V. Litvin // Biology of animals. - 2014. - V. 16. - № 4. - P. 50-58.

10. Epidemiology, clinic and laboratory diagnostics of bacterial and viral diarrhea / V.B. Sboychakov, S.M. Zakharenko, Yu.P. Finogeev, V.F. Krummholtz //Treatment and preventive measures. - 2012. - № 3. - P. 77-81.

11. Lukin, O.A. Proteosis diagnostics peculiarities among newborn calves / O.A. Lukin, O.V. Povorova //Vestnik of Bashkir State Agrarian University. - № 3 (23). -2012. - P. 34-36.

12. Yudina, M.A. Isolation and study of basic biological properties of bacteriophages of Bacillus mesentericus species bacteria / M.A. Yudina, N.A. Feoktistova // Bacteriophages of microorganisms significantfor animals, plants and humans. - Ulyanovsk, 2013. - P. 197-211. (315 p).

13. Feoktistova, N.A. Isolation and study of basic biological properties of bacteriophages of Proteus genus bacteria / N.A. Feoktistova // Bacteriophages of microorganisms significantfor animals, plants and humans. - Ulyanovsk, 2013. - P. 171-185 (315p).

14. Vasiliev, D.A. Isolation and study of biological properties of Proteus bacteriophages, development of phage identification method / D.A. Vasilev, N.A. Feoktistova, S.N. Zolotukhin // Problems of prevention and control of especially dangerous, exotic and insufficiently studied infectious diseases of animals: materials of the international scientific and practical conference. - Pokrov, 2008. - P. 253-256.

15. Zolotukhin, S.N. Bacteriophages of Proteus genus and their practical application in laboratory practice /S.N. Zolotukhin, N.A. Feoktistova, M.A. Lydina, D.A. Vasiliev, I.G. Shvidenko, AV. Aleshkin // Materials of the VII annual All-Russian Congress on Infectious Diseases with international participation. - Moscow, 2015. - P. 132.

16. Feoktistova, N.A. Study of some biological properties of isolated phages of Proteus genus bacteria / N.A. Feoktistova, A.S. Melekhin, S.N. Zolotukhin, D.A. Vasiliev // Modern development of agribusiness: regional experience, problems, prospects: materials of All-Russian science and practical conference. - Ulyanovsk, 2005. - P. 176-179.