CC BY
122
УДК 619:615.37
ИЗУЧЕНИЕ АЛЛЕРГИЗИРУЮЩЕЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА «КОКЦИДОН 2,5%» ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ КОКЦИДИОЗА У ПТИЦ
Курочкина К.Г., Арисов М.В.
ФГБНУ Всероссийский НИИ фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений им. К.И.Скрябина»
Введение. Аллергизирующие свойства это способность какого-либо вещества вызывать при введении его в организм состояние повышенной чувствительности (гиперчувствительность, сенсибилизация), в основе которых лежат иммунопатологические механизмы различного типа: анафилактический, цитотоксический; аллергические реакции, связанные с образованием иммунных комплексов и активацией комплемента; клеточный тип (реакция сенсибилизированных лимфоцитов). Аллергические реакции могут развиваться по «немедленному» или «замедленному» типу (НТ и ЗТ)). В реакции с аллергеном (при гиперчувствительности НТ) выступает IgE, в другом случае, при ЗТ- иммунные клетки типа Т-лимфоцитов [1, 2, 3].
При подборе тестов для испытаний фармакологических средств на аллергизирующую активность, следует подбирать тесты, которые позволяли бы выявлять различные типы реакций [7].
Целью настоящей работы является установление возможных сенсибилизирующих свойств нового отечественного препарата «Кокцидон 2,5%» (раствора для перорального применения) на лабораторных животных, поскольку учет сенсибилизирующих свойств обязателен и проводится после оценки токсичности всех новых лекарственных форм [5].
Материалы и методы. Препарат на основе толтразурила «Кокцидон 2,5%» применяется для профилактики и терапии кокцидиоза у птиц. Используют препарат с питьевой водой в дозе 7 мг толтразурила (ДВ) на 1 кг массы тела (28 мл 2,5%-ного раствора кокцидона на 100 кг массы птицы). Для сенсибилизации лабораторных животных терапевтическую дозу препарата пересчитывали для морских свинок и мышей.
Экспериментальная работа проводилась согласно Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (раздел Методические указания по оценке аллергизирующих свойств фармакологических веществ), 2005.
Результаты и обсуждение. Реакция воспаления на конканавалин А.
Известно, что многие лекарственные средства и химические вещества высвобождают медиаторы аллергических реакций, в том числе гистамин, неспецифически, в результате прямого действия на тучные клетки и базофильные лейкоциты [1]. Кон А является неспецифическим активатором высвобождения медиаторов из тучных клеток и базофилов (гистамина,
208
серотонина и др.), что приводит к отеку в месте введения, а препараты могут усиливать это действие, либо не вызывать усиление реакции на Кон А, т.е. не проявлять аллергизирующих свойств [8].
В результате проведенных исследований установлено (табл. 1), что у контрольных мышей реакция воспаления на Кон А была более выраженной и индекс реакции составил 15,01±1,64%, у животных, которым кокцидон 2,5% вводили в терапевтической дозе этот показатель составил 13,54±1,04%, у мышей, получивших препарат в десятикратной дозе был достоверно ниже -9,82±0,95%.
Таблица 1
Оценка результатов реакции воспаления на Кон А у мышей
Препарат Доза Результаты исследования ИР (%) M+m
Кокцидон 2,5% 6 мкг/20 г 13,54 ± 1,04
Кокцидон 2,5% 60 мкл/20 г 9,82 ± 0,95*
Контроль - 15,01 ± 1,64
*Р>0,05
Таким образом, введение испытуемого препарата, в терапевтической и десятикратной терапевтической дозах, снижает ИР воспаления, т.е. сам препарат не стимулирует проявление воспалительной реакции, т.к., по-видимому, не вызывает усиления индукции медиаторов воспалительной реакции в отличие от Кон А. Кокцидон 2,5% не провоцирует проявление аллергической реакции, что установлено в этом опыте.
Выявление состояния сенсибилизации «in vivo». Тестирование морских свинок после различных схем введения испытуемого препарата (сенсибилизация) провели, используя кожную, конъюнктивальную и назальную пробы [3, 6].
Кожная проба. Через 10 дней после окончания введения испытуемого лекарственного препарата сенсибилизированным и контрольным морским свинкам на выстриженные участки кожи (2х2 см) нанесли, слегка втирая, препарат кокцидон 2,5%, а с противоположной стороны - воду. При визуальном учете через 15; 30 минут; 24 и 48 часов кожных реакций гиперчувствительности немедленного и замедленного типа не отмечали. Реакции оценивали по шкале в 0 баллов - видимой реакции нет.
По характеру кожной реакции: цвету кожи (отсутствие гиперемии) и толщине кожной складки (отсутствие инфильтрации) тестируемые участки не отличались у опытных и контрольных животных.
Конъюнктивальная проба. Опытным и контрольным животным в правый глаз закапывали испытуемый препарат, в левый - воду для инъекций. У сенсибилизированных морских свинок реакция не отличалась от проявлений реакции у контрольных животных. Животные на несколько секунд закрывали глаза (естественная реакция), затем глаза открывались, животные не трясли головой, не терли лапами морду, т.е. отсутствовало раздражающее действие. Не
209
было отмечено каких-либо изменений сосудистого рисунка конъюнктивы глаз или ее общей гиперемии через 15, 30 минут и 24 часа. Реакция была оценена как отрицательная.
Назальная проба. При постановке провокационной назальной пробы, установлено, что внесение в носовые ходы испытуемого препарата сенсибилизированным и контрольным морским свинкам не вызвало гиперемии слизистой оболочки, чихания, отека или усиления секреции слизи у животных ни через 15 -30 минут ни через 24 часа, поэтому тест оценили как отрицательный.
Непрямая реакция дегрануляции тучных клеток. Сыворотку крови от сенсибилизированных и контрольных морских свинок исследовали в реакции непрямой дегрануляции тучных клеток. Тучные клетки, полученные из перитонеальной жидкости интактных крыс, при контакте с комплексом антиген-антитело на своей поверхности начинают разрушаться в том случае, если организм сенсибилизирован каким-либо аллергеном. Эту реакцию используют для диагностики аллергии к пищевым продуктам, пыльце растений, лекарственным препаратам [4, 5]. При постановке теста в случае аллергизации организма, аллерген образует комплекс с антителами, находящимися в сыворотке крови испытуемых животных, что и приводит к разрушению оболочки тучных клеток и выходу гранул (дегрануляция). Результаты постановки непрямой реакции дегрануляции тучных клеток приведены в таблице 2.
Таблица 2
Непрямая реакция дегранулированных тучных клеток с сыворотками крови морских свинок после сенсибилизации
Группа Доза Схема сенсибили- зации Результаты исследования (%)
1 0,0028 мл/100г (0,1ТД) 30 дней 5,0
2 0,028 мл/100 г (1ТД) двукратно с интервалом 24 часа 5,33
3 0,14 мл/100 г (5ТД) двукратно с интервалом 24 часа 5,89
Контроль - - 5,67
Исследование сывороток крови (сыворотка исследуется трехкратно и берется среднее значение для каждого животного в группе) опытных морских свинок, после их сенсибилизации, показало отсутствие аллергизации организма у опытных животных всех трех групп, поскольку процент дегранулированных тучных клеток составил соответственно5,0; 5,33 и 5,89. У контрольных
210
животных этот показатель был на уровне 5,67%. Положительным считается тест, если процент дегранулированных клеток превышает 10.
Таким образом, применение кокцидона 2,5% не привело к значимому изменению показателей непрямой реакции дегрануляции тучных клеток по сравнению с контролем, т.е. к сенсибилизации организма.
Заключение. Уровень аллергенной активности фармакологических средств устанавливается в зависимости от степени развития аллергического состояния, частоты и характера проявления аллергических реакций, что устанавливается в эксперименте на животных.
Результаты проведенных исследований по оценке кожной, конъюнктивальной, назальной проб, непрямой реакции дегрануляции тучных клеток, реакции воспаления на конканавалин А свидетельствуют об отсутствии у нового препарата кокцидон 2,5% для лечения и профилактики кокцидиоза у птиц, аллергизирующих свойств (согласно критериям оценки тестирования).
Литература: 1.Адо В.А., Астафьева Н.Г. Поллинозы. М. «Знание».- 1991.222с. 2.Онойко Н.Ю. Аллергия. Диагностика, профилактика и методы лечения. - М.: ЗАО Центрполиграф, 2004.- 157с. 3.Полный справочник (все об аллергии). Под ред. Морозовой Н.В. М. «Эксмо».- 2010. - С. 454-471. 4.Радунская С.Ф. Автореф. дис. ... канд.биол.наук - М., 1982.- 16.с. 5.Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва.- 2005.- С. 54-59. 6. Суворов С.Д. и др. Ранняя диагностика профессиональных аллергодерматозов у рабочих железнодорожного транспорта (методические рекомендации). - М. 1985.- 25с. 7. Хорш Ф. М. Иммунопрофилактика болезней животных. М.: «Колос». 1981. - С. 117-121.
8. Khosrasi E. et al. //Inflamm. Res. -1995.- Vol.44.- P. 241-243.
Investigation of sensibilization effects of agent Coccidon 2,5% for treatment and prophylaxis of Coccidia infection in poultry. Kurochkina K.G., Arisov M.V. All-Russian K.I. Skryabin Scientific Research Institute of Fundamental and Applied Parasitology of Animals and Plants.
Summary. As a result of the obtained data in vivo and in vitro tests it has been revealed that a novel agent Coccidon 2,5% intended for treatment and prophylaxis of Coccidia infection in poultry doesn’t induce sensibilization reactions of immediate and delayed type at the tested dose range and modes of sensibilization of laboratory animals.
211
