CC BY
10
https://doi.org/10.37489/0235-2990-2022-67-11-12-10-15 Оригинальная статья/Original Article
Изучение активности противовирусных препаратов в отношении возбудителя лихорадки Чикунгунья в культуре клеток
С. Я. ЛОГИНОВА, В. Н. ЩУКИНА, С. В. САВЕНКО, Р. В. САХАРОВ, *С. В. БОРИСЕВИЧ
ФГБУ «48 Центральный НИИ» Минобороны России», Московская область, Сергиев Посад, Россия
Study of the Activity of Antiviral Drugs Against the Causative Agent of Chikungunya Fever in Cell Culture
SVETLANA YA. LOGINOVA, VERONIKA N. SCHUKINA, SERGEY V. SAVENKO, ROMAN V SAKHAROV, *SERGEY V. BORISEVICH
48th Central Scientific Research Institute of the Ministry of Defence of the Russian Federation, Sergiev Posad, Russia
Резюме
Вирус Чикунгунья является представителем вирусов рода Flavivirus, семейства Flaviviridae, и относится к зоо-нозным арбовирусным инфекциям, переносимым комарами рода Aedes. В организме человека этот флавивирус вызывает заболевание, известное как лихорадка чикунгунья, этиологически родственное жёлтой лихорадке, лихорадкам денге, Западного Нила и Зика. Специфического лечения лихорадки чикунгунья нет, вакцина или же химиопрепараты на сегодняшний день также отсутствуют. Проведённый сравнительный анализ эффективности химиопрепаратов, индукторов интерферона и двух классов интерферона а-, в-, и y- показал, что препараты интерферона эффективно подавляют репродукцию вируса в культуре клеток Vero в широком диапазоне концентраций. Химиопрепараты Триазавирин®, Триазид® и Ингавирин® не влияли на репродукцию вируса Чикунгунья, штамм FN198/66, в культуре клеток Vero. Рибавирин® в концентрации 100 мкг/мл практически полностью подавлял репродукцию вируса Чикунгунья при внесении препарата в культуральную среду как до, так и после инфицирования.
Kлючевыеслова:вирус Чикунгунья; Триазавирин®;Рибавирин®;Ингавирин®;Реаферон-ЕС®;Rebif(@1a)®;противовирусная эффективность; культура клеток
Для цитирования: Логинова С. Я, Щукина В. Н, Савенко С. В., Сахаров Р. В., Борисевич С. В. Изучение активности противовирусных препаратов в отношении возбудителя лихорадки Чикунгунья в культуре клеток. Антибиотики ихи-миотер. 2022; 67: 11-12: 10-15. https://doi.org/10.37489/0235-2990-2022-67-11-12-10-15.
Abstract
Chikungunya virus (CHIKV) is a member of the Flavivirus genus, Flaviviridae family. It belongs to the zoonotic arbovirus infections transmitted by mosquitoes of the genus Aedes. In humans, this flavivirus causes a disease known as Chikungunya fever, etymologically related to yellow fever, dengue, West Nile, and Zika. There is no specific treatment for Chikungunya fever, as there is no vaccine or preventive measures to date. A comparative analysis of the effectiveness of chemotherapy drugs, interferon inducers and two classes of interferon а-, в-, and Y-showed that interferon drugs effectively inhibit the reproduction of CHIKV in the Vero cell culture in a wide range of concentrations. Chemotherapy drugs Triazavirin® and Ingavirin® did not affect the reproduction of CHIKV strain FN198/66 in Vero cell culture. Ribavirin® at a concentration of 100 ^g/ml almost completely suppressed the reproduction of the CHIKV virus when the drug was introduced into the culture medium both before and after infection.
Keywords: ^ikungunya virus; Triazavirin®; Ribavirin®; Ingavirin®; Reaferon-EU®; Rebif(e1a)®; antiviral efficacy; cell culture
For citation: Loginova S. Ya, Shukina VN, Savenko S. V, Sakharov R. V, Borisevich S. V. To study the activity of antiviral drugs against the causative agent of Сhikungunya fever in cell culture. Antibiotiki i Khimioter = Antibiotics and Chemotherapy. 2022; 67: 11-12: 10-15. https://doi.org/10.37489/0235-2990-2022-67-11-12-10-15.
Введение
Новые и вновь возникающие вирусные инфекции представляют собой серьёзную проблему
© Коллектив авторов, 2022
"Адрес для корреспонденции: ул. Октябрьская, д. 11, 48 ЦНИИ, г. Сергиев Посад-6, Россия, 141306. E-mail: [email protected]
для здравоохранения и ветеринарии. Вирус Чикунгунья (СН1КУ), артритогенный альфавирус, вызывает взрывоопасные эпидемии с участием миллионов случаев. Глобально расширяющиеся
© Team of Authors, 2022 "Correspondence to: E-mail: [email protected]
пандемии CHIKV с ревматическими расстройствами и постинфекционные осложнения усиливают проблемы общественного здравоохранения. Однако антивирусная терапия или вакцины для борьбы с инфекцией CHIKV ещё не одобрены. Инфекция, вызванная вирусом Чикунгунья, является постоянной проблемой во всём мире благодаря эффективной адаптации вирусных векторов Aedes aegypti и Aedes albopictus mosquitoes. Для борьбы с тяжёлыми случаями лихорадки необходимы эффективные противовирусные средства.
В последние годы в клинических испытаниях оценивали несколько противовирусных препаратов; однако для клинической терапии не было зарегистрировано ни одно из изученных средств. In vitro выявили потенциальные анти-СШКУ-пре-параты. Были идентифицированы четыре соединения: никлозамид, нитазоксанид, нифлумовая кислота, тольфенамовая кислота [1].
Выявлен новый класс малых молекул ([1,2,3] триазоло [4,5-d] пиримидин-7 (6Н)-триазинонов) с высокой активностью in vitro против изолятов CHIKV из разных географических регионов [2]. Изучение активности класса тиено [3,2-b] пир-ролов и открытие тризамещённого тиено [3,2-b] пиррол-5-карбоксамида 15c показало, что оно проявляет высокую ингибирующую активность против инфекции CHIKV in vitro. Соединение 15c демонстрирует низкую микромолярную активность (значение EC50 около 2 мкМ) и ограниченное цитотоксическое действие (CC5o>100 мкМ), поэтому оно даёт индекс селективности, превышающий 32. Примечательно, что 15c не только контролирует продуцирование вирусной РНК, но и эффективно ингибирует экспрессию белков CHIKV nsP1, nsP3, капсидов и E2 с концентрацией до 2,5 мкМ. Что более важно, соединение15с также выявило антивирусную активность широкого спектра действия против других клинически важных альфавирусов, таких как вирус О'онон-Ньон и вирус Синдбиса [3].
Соединения природного происхождения, такие как флавоноиды [4], известные лекарственные средства, такие как никлозамид [1] и сурамин [5], синтетические соединения [6-8] ингибируют репродукцию CHIKV в опытах in vitro.
Доклинические исследования показали, что монотерапия препаратом Рибавирин® задерживает репродукцию CHIKV, но не полностью его подавляет. Кроме того, высокие концентрации препарата Рибавирин® были необходимы для достижения существенного противовирусного эффекта, с EC50 и ECgo значениями 142,70 мкг/мл и 238,35 мкг/мл, соответственно. Эти концентрации выходят за пределы терапевтического окна для препарата Риба-вирин® и считаются токсичными для человека [9].
CHIKV очень чувствителен к противовирусной активности интерферонов типа I (ИФН-a/ß). Мо-
нотерапия ИФН альфа была эффективной против CHIKV при высоких концентрациях. Уровни ИФН альфа, по меньшей мере 100 МЕ/мл, подавляют продукцию CHIKV на 1-й день после терапии, но необходимы 10 000 МЕ/мл для поддержания противовирусной активности через 3дня [10].
Комбинированная химиотерапия с 2 и более противовирусными агентами является привлекательной терапевтической стратегией для обеспечения повышенной противовирусной активности [11, 12]. Рибавирин® и ИФН альфа обладают противовирусной активностью против CHIKV и проявляют синергетический эффект при использовании в качестве комбинированной химиотерапии.
Favipiravir (T-705), противовирусное средство, одобренное в Японии для лечения вируса гриппа, вместе с его дефторированным аналогом T-1105, ингибировал репликацию CHIKV in vitro [13]. Кроме того, у инфицированных CHIKV мышей AG129, получавших перорально T-705, было выявлено менее тяжёлое неврологическое заболевание и более 50% снижение смертности [13].
RNAi-опосредованное ингибирование репликации вируса стало многообещающей антивирусной стратегией. Небольшая интерферирующая РНК (siRNA) и небольшие молекулы РНК (shRNA) шпильки являются основными для интерференции РНК [14].
Цель работы — изучение in vitro активности некоторых химиопрепаратов, индукторов интерферона и рекомбинантных человеческих интер-феронов в отношении вируса Чикунгунья.
Материал и методы
Вирус. В работе использовали вирус Чикунгунья, штамм FN198/66, хранящийся в Специализированной коллекции ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России.
Исследуемые препараты. Рибавирин® — химиопрепарат (1^^-рибофуранозил-1,2,4-триазол-3-карбоксамид) производства Dragon Hwa ChemPharm Co. Limited. Ингавирин® — противовирусный химиопрепарат ОАО Валента Фармацевтика, Россия. Триазавирин®—противовирусный химиопрепарат, производства «Медсинтез», Россия. Триазид — экспериментальный образец, предоставленный ФГБУН Института органического синтеза им. И. Я. Постовского УО РАН. Реаферон ЕС® — человеческий рекомбинантный а-2Ь-интерферон производства ЗАО «Вектор-Медика», Россия. Rebif® (ß1a) — человеческий рекомбинантный ß-^ интерферон производства Serono, Италия. Ро-ферон-А® — человеческий рекомбинантный интерферон а-2а производства Ф. Хоффманн-Ля рош Лтд., Швейцария. Гам-маферон® — генно-инженерный человеческий Y-интерферон производства НПО «Фермент» «Санитас». Ларифан® — высокомолекулярный индуктор интерферона, дц РНК фага f2 E.coli, производства Института микробиологии им. Кирхенштейна, Латвия. Ридостин® — высокомолекулярный индуктор интерферона, дц РНК дрожжей, производства ЗАО «Вектор-Медика», Россия.
Для изучения влияния препаратов на репродукцию вируса Чикунгунья, штамм FN198/66, лекарственные препараты вносили в культуру клеток по следующим схемам: за 24 ч до инфицирования в среду поддержания и через 2 ч
Таблица 1. Результаты оценки влияния химиопрепаратов на репродукцию вируса Чикунгунья, штамм FN198/66, в культуре клеток Vero Cl008
Table 1. The results of assessing the effect of chemotherapy drugs on the reproduction of the Chikungunya virus, strain FN198/66, in Vero Cl008 cell culture
Препарат Доза препарата, мкг/мл Схема внесения препарата Подавление репродукции вируса, Alg Коэффициент ингибирования, КИ, %
Ингавирин® 25G За 1 ч до инфицирования 0,0 0,00
Триазавирин® 1GG 0,0 0,00
Триазид 1GG 0,1 20,00
Рибавирин® 1GG 4,7 99,99
25 1,2 93,18
Ингавирин® 250 Через 1 ч после инфицирования 0,2 40,00
Триазавирин® 1GG 0,1 20,00
Триазид 1GG 0,1 20,00
Рибавирин® 1GG 4,9 99,99
25 1,5 97,09
Таблица 2. Результаты оценки влияния интерферона на репродукцию вируса Чикунгунья, штамм FN198/66, в культуре клеток КЛ-17 Table 2. The results of assessing the effect of interferon on the reproduction of the Chikungunya virus, strain FN198/66, in KL-17 cell culture
Препарат Доза препарата, мкг/мл Схема внесения препарата Подавление репродукции вируса, Alg Коэффициент ингибирования, КИ, %
Реаферон ЕС® 105 За 24 ч до инфицирования 6,3 100,00
Роферон-А® 105 6,3 100,00
Ребиф® 104 4,6 99,99
Гаммаферон® 105 4,1 99,99
Реаферон ЕС® 105 Через 1 ч после инфицирования 4,5 99,99
Роферон А® 105 5,5 99,99
Ребиф® 104 3,1 99,90
Гаммаферон®_Ш5_1,8_98,50
после инфицирования. Препараты вносили в культуральную среду, инкубировали в течение 24 ч при температуре 37°С. После удаления среды, содержащей исследуемый препарат, вносили вирус при инфицирующей дозе 0,0001 БОЕ на клетку (Vero C1008) и 0,3 БОЕ на клетку (КЛ-17). На каждую дозу препарата использовали не менее 4 пробирок с монослоем клеток суточного возраста. После адсорбции вируса в течение 60 мин при температуре 37°С монослой трижды промывали питательной средой, содержащей по 100 ед/мл пенициллина и стрептомицина, вносили свежую среду (по второй схеме — среду с исследуемыми препаратами) и инкубировали 48 ч (Vero C1008) и 72 ч (КЛ-17). По окончании инкубации проводили криодеструкцию клеток: трёхкратным быстрым замораживанием в криостате и быстрым оттаиванием (водяная баня при комнатной температуре).
Культура клеток. Использована постоянная культуры клеток почек африканской зелёной мартышки — Vero C1008, диплоидные клетки лёгкого эмбриона человека КЛ-17. В качестве ростовой среды и среды поддержания использовали полусинтетическую среду (ПС-4) на растворе Ирля, содержащую 7,5 и 2,0% фетальной сыворотки крупного рогатого скота, соответственно.
Оценка биологических свойств вируса. Биологическую активность вируса Чикунгунья оценивали титрованием в культуре клеток Vero C1008 по формированию негативных колоний (lg БОЕ/мл).
Оценка противовирусной эффективности экспериментальных субстанций осуществлена в соответствии с рекомендациями ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России [15].
Основными критериями оценки эффективности препаратов in vitro являются подавление уровня накопления вируса (Alg ) и показатель коэффициента ингибирования репродукции вируса (КИ, процент).
Коэффициент ингибирования (Ки, %) рассчитывали по формуле:
Ки = [(Аконтр - А„п) / Аконтр] X 100% (1),
где: Аконтр — биологическая активность вируса, определённая в клетках без внесения химиопрепарата, БОЕ/мл; Аоп — биологическая активность вируса, определённая в клетках c внесением химиопрепарата, БОЕ/мл.
Статистический анализ. Статистическая обработка полученных результатов проведена с использованием программы Microsoft Office Exel 2007. Полученные результаты представляли в виде среднего и ошибки репрезентативности (Х±йх)[16].
Результаты и обсуждение
Проведённые ранее исследования по оценке уровня накопления вируса Чикунгунья, штамм FN198/66, показали, что возбудитель в широком диапазоне инфицирующих доз в культуре клеток Vero C1008 накапливается в высоких концентрациях в культуре клеток КЛ-17 только при высокой множественности инфицирования.
Результаты оценки влияния химиопрепаратов на репродукцию вируса Чикунгунья, штамм FN198/66, в культуре клеток Vero С1008 представлены в табл. 1. Показано, что пептидомиметик Ингавирин®, препараты триазолового ряда Триа-завирин® и Триазид в изученных концентрация не выявили противовирусную активность ни по одной схеме применения.
Таблица 3. Результаты оценки влияния а-интерферона на репродукцию вируса Чикунгунья, штамм FN198/66, в культуре клеток Vero C1008
Table 3. The results of assessing the effect of а-interferon on the reproduction of the Chikungunya virus, strain FN198/66, in Vero C1008 cell culture
Схема внесения препарата Препарат Доза препарата, Подавление Коэффициент
МЕ/мл репродукции ингибирования,
вируса, Alg КИ, %
За 24 ч до инфицирования Реаферон ЕС® 10 4,9 99,99
10 4/7 99,99
10 2,3 99,46
10 1,4 95,96
Роферон-А® 104 4,7 99,99
103 4,7 99,99
102 3,2 99,94
101 3,2 99,93
Через 1 ч после инфицирования Реаферон ЕС® 104 4,9 99,99
103 4,9 99,99
102 4,7 99,99
101 2,1 99,21
Роферон-А® 104 4,7 99,99
103 4,7 99,99
102 4,7 99,99
101 4,7 99,99
Таблица 4. Результаты оценки влияния индукторов интерферона на репродукцию вируса Чикунгунья, штамм FN198/66, в культуре клеток КЛ-17 Table 4. The results of assessing the effect of interferon inducers on the reproduction of the virus Chikungunya, strain FN198/66, in KL-17 cell culture
Препарат Доза препарата, Схема внесения мкг/мл препарата Подавление репродукции вируса, Alg Коэффициент ингибирования, КИ, %
Ларифан® 250 За 24 ч до инфицирования 1,5 96,8
Ридостин® 250 1,5 96,8
Ларифан® 250 Через 1 ч после инфицирования 0,4 61,9
Ридостин® 250 0,3 52,5
Рибавирин® в концентрации 100 мкг/мл практически полностью подавлял репродукцию вируса Чикунгунья при внесении препарата в культу-ральную среду как до, так и после инфицирования. При снижении концентрации препарата в 4 раза эффективность также значительно снизилась. В концентрации 25 мкг/мл Рибавирин® при внесении до инфицирования выявил низкую эффективность, после инфицирования — умеренную эффективность. Таким образом, из изученных хи-миопрепаратов только Рибавирин® в большой концентрации высокоэффективно подавляет репродукцию вируса Чикунгунья.
Проведённые исследования влияния двух типов человеческого рекомбинантного интерферона на репродукцию вируса, представленные в табл. 2, свидетельствуют, что в высоких концентрациях интерфероны как 1 типа (а-ИФ, р-ИФ), так и II типа (у-ИФ) практически полностью подавляют репродукцию вируса Чикунгунья в диплоидной культуре клеток лёгкого эмбриона человека. Зависимость эффективности препаратов от времени их применения не выявлена.
Было также изучено влияние различных концентраций рекомбинантных человеческих интер-
феронов I типа на репродукцию вируса Чикунгунья в перевиваемых клетках почки африканской зелёной мартышки Vero C1008.
Результаты, представленные в табл. 3, показывают, что изученные препараты в широком диапазоне концентраций эффективно подавляют размножение вируса Чикунгунья. Даже в очень низкой концентрации (10 МЕ/мл) препарат Ро-ферон-А® выявил высокую противовирусную активность: практически полностью подавлял репродукцию вируса по обеим изученным схемам применения.
Реаферон ЕС® в концентрации 10 МЕ/мл умеренно эффективно подавлял размножение вируса при внесении до инфицирования и высокоэффективно — после заражения клеток.
Результаты оценки влияния высокомолекулярных индукторов интерферона на репродукцию вируса Чикунгунья, штамм FN198/66, в культуре клеток КЛ-17 представлены в табл. 4.
Показано, что при внесении препаратов за 24 ч до инфицирования клеток Ларифан® и Ридостин® выявили умеренную противовирусную активность. При внесении препаратов через 1 ч после инфицирования — эффективность не установлена. Полу-
Таблица 5. Изучение влияния сочетанного применения а-интерферона и Рибавирина® на репродукцию вируса чикунгунья, штамм FN198/66 в монослое культуры клеток Vero C1008 (n=3)
Table 5. Study of the effect of the combined use of а-interferon and Ribavirin® on the reproduction of the Chikungunya virus, strain FN198/66 in the monolayer of Vero C1008 cell culture (n=3)
Схема внесения препарата Препарат Доза препарата, Подавление Коэффициент
МЕ/мл репродукции ингибирования,
вируса, Alg КИ, %
За 24 ч до инфицирования Рибавирин® 25 2,3 99,46
Реаферон ЕС®* ТОО
Рибавирин® 25 ГГ5 96,4О Реаферон ЕС®* ГО
Рибавирин® 25 Г,2 93,18
Реаферон ЕС®* ГОО 2,3 9946
ГО 1,4 95,96
Через 1 ч после инфицирования Рибавирин® 25 5,3 99,99
Реаферон ЕС®* ГОО
Рибавирин® 25 2,7 99,79 Реаферон ЕС®* ГО
Рибавирин® 25 Г,6 97,О9 Реаферон ЕС®* ГОО 4,7 99,99 _ ГО 2,Г 99,2Г
ченные результатах согласуются с научным положением, что для создания индукторами интерферона антивирусного состояния клеток необходимо время. Максимум синтеза интерферона, индуцированного дц РНК, приходится на 6-8 ч после внесения препаратов. В культуре клеток Vero C1008 антивирусная активность препаратов Ларифан® и Ридостин® не выявлена ни по одной из применяемых схем.
По-видимому, в ближайшей перспективе отдельные препараты не решат проблему борьбы с той или иной вирусной инфекцией. Комбинированное применение противовирусных препаратов с различным механизмом действия открывает несомненные перспективы в профилактике и терапии вирусных инфекций.
Терапевтически эффективная концентрация рибавирина (600 мг препарата Рибавирин® на приём) вызывает токсическое действие [17]. Снижение дозы препарата приводит к снижению его эффективности. Представляет интерес изучение влияния сочетанного применения препарата Рибавирин® и препарата Реаферон ЕС® (а2-интерферон). Рибавирин® в концентрации 25 мкг/мл оказывает низкую противовирусную активность. В сочетании с препаратом Реаферон ЕС® и при применении за 24 ч до инфицирования не выявлен ни аддитивный, ни синергидный эффект. При комбинированном применении после инфицирования препарата Рибавирин® (в концентрации 25 мкг/мл) и препарата Реаферон ЕС® (в концентрации 10 МЕ/мл и 100 МЕ/мл) отмечено статистически достоверное (с вероятностью 95%) увеличение подавления репродукции вируса Чикунгунья.
Заключение
Резюмируя изложенное можно заключить, что из всех изученных химиопрепаратов значимую
эффективность выявил только Рибавирин® в высокой концентрации. Препараты двух типов человеческого рекомбинантного интерферона как I типа (а-ИФ, р-ИФ), так и II типа (у-ИФ) практически полностью подавляют репродукцию вируса Чикунгунья в широком диапазоне концентраций.
При комбинированном применении противовирусных препаратов с различным механизмом действия Рибавирина и Реаферона выявлен аддитивный эффект при применении препаратов после инфицирования. Таким образом, из всех изученных лекарственных средств только ре-комбинантные интерфероны выявили высокую противовирусную эффективность и являются перспективными препаратами в отношении вируса Чикунгунья.
Дополнительная информация
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Участие авторов. Логинова С. Я. — концепция и дизайн исследования, сбор данных литературы, сбор и обработка материала, написание текста, редактирование статьи; Щукина В. Н. — сбор и обработка материала, статистический анализ; написание текста; Савенко С. В. — сбор и обработка материала; Сахаров Р. Н. — сбор и обработка материала; Борисевич С. В. — написание текста, редактирование статьи.
Funding. The study was not sponsored.
Conflict ofinterest. The authors declare no conflict of interest.
Contribution,: Loginova S. Ya. — research concept and design, literature data collection, material collection and processing, writing of the text, editing of the article; Shchukina V. N. — material collection and
processing, statistical analysis, writing of the text; Sa-venko S. V. — material collection and processing; Sa-kharov R. V. — material collection and processing;
Литература/References
1. Wang Y. M, W J. Lu, Lin C.C. etal. Antiviral activities of niclosamide and nitazoxanide against chikungunya virus entry and transmission. Antiviral Res. 2016; 135: 81-90. doi: 10.1016/j.antiviral.2016.10.003.
2. Delang L, Li C, Tas A., Querat G. et al. The viral capping enzyme nsP1: a novel target for the inhibition of chikungunya virus infection. Sci Rep. 2016; 6: 31819. doi: 10.1038/srep31819.
3. Ching K.C., Kam Y.W., Merits A. et al. Trisubstituted thieno[3,2-b]pyrrole 5-carboxamides as potent inhibitors of alphaviruses. J Med Chem. 2015; 58 (23): 9196-9213. doi: 10.1021/acs.jmedchem.5b01047.
4. Lani R., Hassandarvish P., Shu M.-H. et al. Antiviral activity of selected flavonoids against Chikungunya virus. Antivir Res. 2016; 133: 50-61. doi: 10.1016/j.antiviral.2016.07.009.
5. Albulescu I.C., van HoolwerffM, Wolters L.A. et al. Suramin inhibits chi-kungunya virus replication through multiple mechanisms. Antivir Res. 2015; 121: 39-46. doi: 10.1016/j.antiviral.2015.06.013.
6. Staveness D, Abdelnabi R., Near K. E. et al. Inhibition of Chikungunya virus-induced cell death by salicylate-derived bryostatin analogues provides additional evidence for a PKC-independent pathway. J Nat Prod. 2016; 79 (4): 680-684. doi: 10.1021/acs.jnatprod.5b01017.
7. Mishra P., Kumar A., Mamidi P. et al. Inhibition of chikungunya virus replication by 1-[(2-Methylbenzimidazol-1-yl) methyl]-2-oxo-indolin-3-ylidene] amino] thiourea(MBZM-N-IBT). Sci Rep. 2016; 6: 20122.
8. Varghese F.S., Thaa B., Amrun S.N. et al. The antiviral alkaloid berberine reduces chikungunya virus-induced mitogen-activated protein kinase signaling. J Virol. 2016; 90: 9743-9757. doi: 10.1128/JVI.01382-16.
9. Preston S.L., Drusano G.L., Glue P. et al. Pharmacokinetics and absolute bioavailability of ribavirin in healthy volunteers as determined by stable-isotope methodology. Antimicrob Agents Chemother. 1999; 43: 2451-2456. doi: 10.1128/AAC.43.10.2451.
Информация об авторах
Логинова Светлана Яковлевна — д. б. н., ведущий научный сотрудник ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России», Московская область, Сергиев Посад, Россия. ORCID: 0000-0001-6732-8404. eLibrary Spin: 8764-7946 Щукина Вероника Николаевна — к. б. н., научный сотрудник ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России», Московская область, Сергиев Посад, Россия. ORCID: 0000-0002-54613641. eLibrary Spin: 1504-4433
Савенко Сергей Владимирович — научный сотрудник ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России», Московская область, Сергиев Посад, Россия. ORCID: 0000-0002-5175-916X. eLibrary Spin: 6353-7075
Сахаров Роман Владимирович — старший научный сотрудник отдела опасных вирусных инфекций, ФГБУ «48 Центральный научно-исследовательский институт» Министерства обороны Российской Федерации, Сергиев Посад-6, Россия. ORCID: 0000-0001-6155-1365 Борисевич Сергей Владимирович — д. б. н., профессор, академик РАН РФ, начальник института ФГБУ «48 ЦНИИ» Минобороны России», Московская область, Сергиев Посад, Россия. ORCID: 000-0002-6742-3919
Borisevich S. V. — writing of the text, editing of the article.
10. Food and Drug Administration (FDA). Interferon alfa-2a (Roferon-A) product approval information. Solution for injection — vials. 3/14/2003 ed Nutley, NJ: FDA, 2003; 12.
11. Gallegos K.M., Drusano G.L., D Argenio D.Z., Brown A.N. Chikungunya virus: in vitro response to combination therapy with ribavirin and interferon Alfa 2a. J Infect Dis. 2016; 214 (8): 1192-1197. doi: 10.1093/infdis/jiw358.
12. Scagnolari C, Caputo B, Rezza G, Antonelli G. Antiviral activity of the combination of interferon and ribavirin against Chikungunya virus: are the results conclusive? J Infect Dis. 2017; 215 (3): 492-493. doi: 10.1093/infdis/jiw579.
13. DelangL, Segura Guerrero N., Tas A et al. Mutations in the ^ikungunya virus non-structural proteins cause resistance to favipiravir (T-705), a broad-spectrum antiviral. J Antimicrob Chemother. 2014; 69 (10): 27702784. doi: 10.1093/jac/dku209.
14. Kaur P., Thiruchelvan M., Lee R.C.H. et al. Inhibition of Chikungunya virus replication by Harringtonine, a novel antiviral that suppresses viral protein expression. Antimicrob Agents Chemother. 2013; 57 (1): 155. doi: 10.1128/AAC.01467-12.
15. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть 1, М.: Минздрав РФ, 2013; 942. [Ruko-vodstvo po provedenijyu doklinicheskikh issledovanij lekarstvennykh sredstv. Chast' 1, Moscow: Minzdrav RF 2013; 942. (in Russian)]
16. Ашмарин И.П., Воробьев АА. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Ленинград: Медгиз., 1962; 180. [Ashmarin I.P., Vorob 'ev A.A. Statisticheskie metody v mikrobiologicheskikh issle-dovaniyakh. Leningrad: Medgiz., 1962; 180. (in Russian)]
17. Ravichandran R., Manian M. Ribavirin therapy for Chikungunya arthritis. J Infect Developing Countries. 2008; 2 (2): 140-142.
About the authors
Svetlana Ya. Loginova — D. Sc. in Biology, leading researcher at the 48th Central Scientific Research Institute of the Ministry of Defence of the Russian Federation, Sergiev Posad, Russia. ORCID: 0000-0001-6732-8404. eLibrary Spin: 8764-7946 Veronika N. Schukina — Ph. D. in Biology, researcher at the 48th Central Scientific Research Institute of the Ministry of Defence of the Russian Federation, Sergiev Posad, Russia. ORCID: 0000-0002-5461-3641. eLibrary Spin: 1504-4433
Sergey V. Savenko — researcher at the 48th Central Scientific Research Institute of the Ministry of Defence of the Russian Federation, Sergiev Posad, Russia. ORCID: 0000-0002-5175-916X. eLibrary Spin: 6353-7075
Roman V. Sakharov — Senior researcher at the Department of Dangerous Viral Infections, 48th Central Scientific Re-search Institute of the Ministry of Defence of the Russian Federation, Sergiev Posad, Russia. ORCID: 0000-0001-6155-1365
Sergey V. Borisevich—D. Sc. in Biology, professor, Academician of the Russian Academy of Sciences, Head of the Institute, 48th Central Scientific Research Institute of the Ministry of Defence of the Russian Federation, Sergiev Posad, Russia. ORCID: 0000-0002-6742-3919. eLibrary Spin: 5753-3400
