CC BY
44
литература
1. Антипко Л.Э. Стеноз позвоночного канала. — Воронеж: ИПФ «Воронеж», 2001. — 272 с.
2. Афонин Д.Н., Афонин П.Н. Допплерографическое исле-дование кровотока в сегментарных артериях при стенозе позвоночного канала // Вестник новых медицинских технологий. — 2001. — № 4. — С. 75-77.
3. Михайлов В.П. Боль в спине и связанные с ней проблемы // Хирургия позвоночника. — 2001. — № 1. — С. 110-112.
4. Ситель А.Б., Кузьминов Н.О., Канаев С.П., Шубин Д.Н. Ультразвуковой и электронейромиографический мониторинг в острой фазе диско-радикулярного конфликта поясничной локализации // Материалы 2-го Всероссийского съезда мануальных терапевтов. — СПб., 2002. — С. 24-28.
5. Смирнов А.Ю. Клиника, диагностика и хирургическое лечение стеноза позвоночного канала на поясничном уровне // Тр. Моск. мед. акад. им. И.М. Сеченова, 2001. — С. 21.
Адрес для переписки: 664003, г. Иркутск, ул. Борцов Революции, 1, тел. (3952) 29-03-36; e-mail: [email protected]
Ипполитова Елена Геннадьевна — научный сотрудник НЦРВХ Кошкарева Зинаида Васильевна — к.м.н., ведущий научный сотрудник НЦРВХ СО РАМН; Скляренко Оксана Васильевна — к.м.н., старший научный сотрудник НЦРВХ
© кАРгИН А.г., АПАРЦИН к.А., хороших О.в., гРИгОРьЕв С.Е., зАРИЦкАя Л.в., БАтуНОвА Е.в., ПРОкОПьЕв м.в., ЛЕПЕХОвА С.А. — 2009
изменение субпопуляционного состава иммунокомпетентных клеток вследствие аспленизации
А.Г. Каргин1, К.А. Апарцин1,2, О.В. Хороших4, С.Е. Григорьев1, Л.В. Зарицкая1,3, Е.В. Батунова3, М.В. Прокопьев1,4, С.А. Лепехова1 ('Научный центр реконструктивной и восстановительной хирургии СО РАМН, г. Иркутск, директор — член-корр. РАМН Е.Г. Григорьев;
2Иркутский государственный медицинский университет, г. Иркутск, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов; 3Иркутский государственный институт усовершенствования врачей, г. Иркутск, ректор — д.м.н., проф. В.В. Шпрах; 4ГУЗ Иркутская областная клиническая больница, г. Иркутск, гл. врач — к.м.н. П.Е. Дудин)
Резюме. Исследование выполнено с использованием аспленизированных животных, оценивали общее количество и субпопуляционный состав иммунокомпетентных клеток к дифференцировочным антигенам (CD3+ — зрелые Т-лимфоциты, CD4+ — Т-хелперы, CD8+ — цитотоксические супрессорные клетки) в периферической крови в раннем послеоперационном периоде. Показатели контролировали на протяжении 2-х, 5-х и 7-х суток.
Установлено, аспленизация животных приводит к выраженным изменениям выбранных показателей к 7-м суткам со снижением количества зрелых Т-лимфоцитов и Т-хелперов, увеличением цитотоксических супрессорных клеток.
ключевые слова: спленэктомия, иммунодефицит, лимфоциты.
change of subpopulational composition of immunecompetent cells after splenectomy
A.G. Kargin1, K.A. Apartsin1,2, O.V. Khoroshikh4, S.E. Grigoryev1, L.V. Zaritskaya1,3, E.V. Batunova3, M.V. Prokopiev1-4,
S.A. Lepekhova1
('Scientific Center of Reconstructive and Restorative Surgery SB RAMS, Irkutsk;
2State Medical University, Irkutsk; 3State Institute of Physicians' Training, Irkutsk;
4Regional Clinical Hospital, Irkutsk)
Summary. The study is carried out using animals after splenectomy, general amount and subpopulational composition of immune competent cells to differentiation antigens (CD3+ — mature Т-lymphocytes, CD4+ — Т-helpers, CD8+ — an cytotoxic suppressor cells) in peripheral blood in early postoperative period. The parameters were controlled during 2nd, 5th and 7th days.
It has been established that splenectomy of animal brings to expressed change the selected factors to 7th day with reduction of mature Т-lymphocytes and Т-helpers, increase cytotoxic suppressor cells.
Key words: splenectomy, immune deficit, lymphocytes.
Условия адекватного состояния физиологических систем организма определяются нормальным функционированием иммунной системы. Основным компонентом иммунной системы является лимфоидная система, состоящая из первичных (центральных) и вторичных (периферических) лимфатических органов. Наиболее крупный вторичный лимфоидный орган — это селезенка, содержащая до 25% общего числа иммунокомпетентных лимфоцитов человека [4].
В настоящее время активно обсуждается вопрос о роли селезенки в иммунитете. Значительное внимание уделяется изучению иммунологических и физиологических функций селезенки [9]. Установлено, что после спленэктомии развивается иммунный дефицит, что предрасполагает к генерализации инфекции и возникновению синдрома отягощенной постспленэктомической инфекции (так называемый ОР81-$уп4тотв) [10]. Клинические проявления ОР81-$уп4тотв развиваются, преимущественно, в отдаленном послеоперационном периоде и характеризуются астеническим синдромом, снижением антимикробной и антибластической резистентности ор-
ганизма вплоть до развития молниеносного сепсиса [2, 8] — крайняя форма проявления инфекционного процесса с быстрым прогрессированием и высокой летальностью (50-70%) [6]. В ряде наблюдений возникновение сепсиса отмечалось в течение 2 лет после спленэктомии, в то же время в 50% наблюдений наблюдалось 6 лет спустя, в 29% — через 10 лет, даже через 25 лет после спле-нэктомии описаны наблюдения сепсиса [1].
Спленэктомия приводит к нарушениям пула периферических иммунокомпетентных клеток, к нарушению контакт антигенов, циркулирующих в крови, с иммуно-компетентными клетками, этапы распознавания и презентации антигена, развития специфического иммунного ответа, взаимодействие иммунокомпетентных клеток [5]. После аспленизации ухудшаются условия для кооперации клеток в иммунном ответе за счет снижения концентрации иммунокомпетентных клеток, угнетения антителоо-бразования, продукции цитокинов и хемокинов [3].
Вопросы о том, какому именно нарушению иммунитета принадлежит приоритет в развитии осложнений при спленэктомии, остаются до конца не решенными [7].
Целью настоящего исследования была оценка общего количества и субпопуля-ционный состав иммунокомпетентных клеток к дифференцировочным антигенам (СБ3+ — зрелые Т-лимфоциты, СБ4+ — Т-хелперы, СБ8+ — цитотоксические супрессорные клетки) в периферической крови в раннем послеоперационном периоде у аспленизированных крыс.
материалы и методы
Таблица 1
Характеристика популяционного состава лимфоцитов при асплениза-ции в периферической крови
Выполнение работы осуществлялось на базе научного отдела экспериментальной хирургии с виварием НЦРВХ СО РАМН совместно с иммунологической лаборатории Центральной научно-исследовательской лаборатории (зав. — к.м.н. А.В. Кочкин) Иркутского государственного института усовершенствования врачей и центром лабораторных исследований (зав. центра — д.м.н. Т.С. Белохвостико-ва) «Иркутской государственной областной «Знак почета» клинической больницы».
Животных содержали в условиях вивария при свободном доступе к воде и пище соответственно нормативам ГОСТа «Содержание экспериментальных животных в питомниках НИИ» (виварий I категории, вет. удостоверение 238 № 0015220 от 25 марта 2009 г., служба ветеринарии Иркутской области). В эксперимент включали крыс-самцов породы Вистар в возрасте не менее 6 месяцев, весом 200-250 г. Опыты на животных проводились в соответствии с правилами гуманного обращения с животными, которые регламентированы «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденных Приказом МЗ СССР №742 от 13.11.84 г. «Об утверждении правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» и №48 от 23.01.85 г. «О контроле за проведением работ с использованием экспериментальных животных».
У всех экспериментальных крыс, в стерильных условиях выполняли спленэктомию с удалением всех обнаруженных очагов резидуальной ткани (полная асплени-зация).
Проведено исследование общего анализа крови и иммунологических показателей у аспленизированных животных. Забор анализов выполняли на 2-е, 5-е и 7-е сутки послеоперационного периода. За норму приняты показатели, полученные у 6 здоровых животных.
Проточная цитометрия выполнена на двулазерном проточном флуориметре Баез СаНЬиг ББ, США с использованием крысиных моноклональных антител к СБ3+, СБ4+, СБ8+ фирмы СоНак.
Иммунологические показатели, % Здоровые животные Аспленизированные животные
2 сутки 5 сутки 7 сутки
Лейкоциты, кл/мкл (х 10") 3,2 (3,2-3,3) 7,5* (7,0-9,0) 17,5* * (16,0-19,0) 32,0* * (23,0-38,0)
Лимфоциты 51 (50-52) 50 (34-53) 33* (25-37) 42 * (39-59)
Т-лимф. (CD3+) 81 (79-85) 66* (58-71) 65* (60-69) 68* (62-71)
Т-хел. (CD4+) 64 (63-71) 27* (19-36) 33* (24-52) 36* (28-40)
Т-цит. (CD8+) 17 (11-19) 20 (17-31) 34* * (28-52) 20 (17-34)
Примечания: *— значимые различия по критерию Даннета по сравнению с нормальным показателем (рс<0,05); # — значимые различия по критерию Вилкоксона по сравнению с предыдущим показателем (ри<0,05).
Статистическая обработка выполнена в программа Statistica v. 6.0 (StatSoft, USA, 1999).
Результаты и обсуждение
Для оценки субпопуляций иммунокомпетентных клеток при аспленизации контролировали количество лейкоцитов, лимфоцитов, и фракции Т-лимфоцитов в периферической крови (табл. 1).
Отмечено, что уровень лейкоцитов в крови экспериментальных животных на 2-е сутки был существенно повышенным по сравнению с нормой (pD=0,006). А на 7-е сутки исследования закономерно сохранялся лейкоцитоз, при этом уровень лейкоцитов был максимальным (pD=0,0001; pw=0,006). Уровень абсолютного количества лимфоцитов существенно снижался к 5-м суткам исследования (pD=0,0002) (табл. 1).
Далее рассмотрим результаты исследования субпопуляций иммунокомпетентных клеток при аспленизации в периферической крови экспериментальных животных.
Установлено, что на вторые сутки исследования процент зрелых лимфоцитов значимо снижался, так же отмечали существенное понижение Т-хелперов (pD<0,003). Отметим несущественное нарастание цитотоксических супрессорных клеток.
На 5-е сутки, изучаемые показатели сохранялись пониженными, однако процент цитотоксических супрес-сорных клеток существенно возрастал (pD=0,001), достигая максимальных значений. D
Установлено, аспленизация животных приводит к выраженным изменениям выбранных показателей к 7-м суткам, с развитием иммунодефицита, что проявляется снижением количества Т-зрелых лимфоцитов и Т-хелперов, увеличением цитотоксических супрессорных клеток.
литература
1. Бабаева А.Г. Регенерация и система иммуногенеза. — М.: Медицина, 1985. — 256 с.
2. Матинян Н.С. Аутотрансплантация размельченной селезеночной пульпы в эксперименте (экспериментальное исследование): автореф. дис. ... канд. мед. наук. — М., 1986. — 22 с.
3. Павлова И.Е., Бубнова Л.Н., Каргин В.Д. Способность моно-нуклеаров периферической крови к продукции некоторых про-воспалительных цитокинов у больных, перенесших спленэкто-мию // Медицинская иммунология. — 2002. — Т. 4, № 2. — С. 370.
4. Павлова И.Е. Особенности функционирования иммунной системы после спленэктомии у пациентов с заболеваниями системы крови и травмами селезенки: автореф. дис. . д-ра мед. наук. — СПб., 2007. — 42 с.
5. Павлова И.Е., Бубнова Л.Н. Динамика показателей клеточного и гуморального иммунитета у пациентов, перенесших
спленэктомию, в отдаленном послеоперационном периоде травмой // Медлайн-экспресс — 2007. — № 3-4. — С. 26-31.
6. Рожинский М.М. Постспленэктомический гипоспле-низм // В кн.: «Вопросы клинической медицины». — Чита, 1970. — С. 84-85.
7. Сорокин А.П., Полянкин Н.Я., Федонюк Я.И. Клиническая морфология селезенки. — М.: Медицина, 1989. — 160 с.
8. Acea Nebril B., Marini Dhaz M., Fraguela Marica J., et al. Acute abdomen caused by thrombosis of the portal and superior mesenteric veins in a splenectomized hematologic patient // Gastroenterol hepatol. — 1997. — Vol. 20, N 6. — P. 299-302.
9. Buntain W.L., Lynn H.B. Splenography: changing concepts for the traumatized spleen // Surgerry. — 1979. — Vol. 86, N 5. — P. 748-760.
10. Dujmovic F. Post-traumatic asplenia and splenosis // Med Pregl. — 1993. — Vol. 46, N 7-8. — P. 264-267.
Адрес для переписки: 664079, г. Иркутск, Юбилейный, 100, а/я 23; Александр Германович Каргин — аспирант НЦРВХ; Апарцин Константин Анатольевич — д.м.н., профессор, зам. директора по научно-лечебной работе НЦРВХ; Лепехова Светлана Александровна — к.б.н., зав. научным отделом экспериментальной хирургии с виварием; е-шаП: [email protected]; Прокопьев Максим Владимирович — к.м.н., старший научный сотрудник НЦРВХ
