CC BY
25
Литература
1.Баркаган З.С., Момот А.П. Диагностика и контролируемая терапия нарушений гемостаза.- М.: Ньюдиамед.- 2001.
2. Власов А.П. и др. Липидмодифицирующий компонент в патогенетической терапии.- М.: Наука.- 2008.
3. Власов А.П. и др. Системный липидный дистресс-синдром в хирургии.- М.: Наука.- 2009.
4. КелинаН.Ю. и др.// Вест.интенс. тер.- 2004. № 3.- С. 45
5. Мельцер И.М. и др.//Анестез. и реаним.- 2004. №2.-С. 49-52.
6. Осиков М.В. и др.// Бюлл. экспер. биол. и мед, 2007.-Т. 144, №8.- С. 143-145.
7. Осочук С.С., Коневалова Н.Ю.// Бюлл. экспер. биол. и мед, 2004.- Т. 138, №11.- С. 508-510.
8. Петросян Э.А. и др.И Бюлл. экспер. биол. и мед.- 2005.-Т. 139, №1.- С. 19-21.
УДК 616-005.1-08
ИЗМЕНЕНИЕ ПАРАМЕТРОВ СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗА ПРИ ЭНДОТОКСИКОЗЕ ПОД ВЛИЯНИЕМ НЕКОТОРЫХ АНТИОКСИДАНТОВ
Н.Ю. ЛЕЩАНКИНА, А.П. ВЛАСОВ, Э.И. НАЧКИНА, А.Г. ЗАХАРКИН, К.Ю. ЕРМИН, П.А. ВЛАСОВ, Е. Н. МЫКОЦ*
Ключевые слова: гемостаз, острый панкреатит
Синдром эндогенной интоксикации относится к наиболее распространенным в клинической практике и наблюдается при различных, этиологически и патогенетически нетождественных состояниях [2, 3]. Одним из ведущих звеньев патогенеза эндогенной интоксикации считается нарушение регуляции системы гемостаза с активацией коагуляционных механизмов и специфическим и неспецифическим угнетением системы естественных антикоагулянтов и системы фибринолиза [2]. Нередко это не только ухудшает прогноз заболеваний, но и ведет к смертельному исходу. В работе [3] выявили сочетание тромботических и геморрагических осложнений у 32,5% умерших от острого панкреатита, а с учетом результатов гистологического исследования, тромбогеморрагические проявления были выявлены в 86,5% случаев. Перспективным представляется применение веществ, влияющих на реологические свойства крови для уменьшения выраженности синдрома эндогенной интоксикации [4-5]. В эксперименте исследовано влияние ряда антиоксидантов (реам-берина и мексидола) на показатели гуморального компонента гемостаза при остром панкреатите.
Материалы и методы. Панкреатит моделировали по способу [5]: взрослым беспородным собакам выполняли срединную лапаротомию, пунктировали желчный пузырь, забирали желчь с последующим лигированием места пункции [1]. Затем желчь вводили в паренхиму вертикальной части поджелудочной железы по 0,6 мл в 5 точек. Все экспериментальные исследования проводились под внутривенным наркозом с использованием тиопентал-натрия из расчета 0,04 г/кг массы животного.
В контрольные сроки (1-е, 3-и, 5-е сутки) осуществляли забор крови. В послеоперационном периоде животным проводили инфузионную терапию (в/в введение 5% раствора глюкозы и
0,89% раствора хлорида натрия из расчета 50 мл/кг массы животного). В опытных группах животным в комплексную терапию включали внутривенные инъекции 1,5% раствора реамберина из расчета 10 мл/кг массы, 5% раствора мексидола (10 мг/кг). Для оценки состояния гемостаза применялись биохимические методики, позволяющие оценить как общую коагуляционную способность крови, так и отдельные звенья свертывающей системы крови. Полученные цифровые данные обрабатывали методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента.
Результаты. Модель панкреатита оказалась адекватной поставленным задачам. У животных возникала эндогенная интоксикация, которая выявлялась повышенным уровнем в плазме крови токсических продуктов гидрофобной и гидрофильной природы. При эндотоксикозе возникали существенные изменения в системе гемостаза в виде повышения коагуляционного потенциала крови. Так, время свертывания, каоли-
новое, тромбиновое и протромбиновое время укорачивалось на 7,26-16,39, 9,22-22,19 и 13,16-29,29% (р<0,05) соответственно в течение всего времени наблюдений. Время рекальцификации плазмы к 5 суткам было ниже исхода на 19,32% (р<0,05). Содержание антитромбина III и толерантность плазмы к гепарину были ниже исходного показателя на 12,94-16,77 и 10,88-15,40% (р<0,05) соответственно. Изменение фибринолитической активности плазмы отмечалось на всех этапах динамического наблюдения: время эуглобулинового фибринолиза превышало норму на 10,50-13,12%, а спонтанный фибринолиз снижался на 17,0336,91% (р<0,05). Уровни фибриногена и продуктов его деградации превосходили норму на 36,20-45,10 и 35,56-67,92% (р<0,05) соответственно. Вязкость крови превышала норму на 21,0958,07% (р<0,05) (рис.).
Онорма
Вэуглоб.фибринолиз
Оспонт.фибринолиз
ОПДФ
□вязкость крови
Рис. Показатели гемостаза при остром панкреатите на фоне традиционной терапии. * - достоверность по отношению к исходным данным
При синдроме эндогенной интоксикации возникают значительные изменения в системе гемостаза в виде повышения коагуляционного потенциала крови. Данные нарушения в свертывающей системе являются одним из факторов, усугубляющих нарушения гемодинамики и микроциркуляции, результатом которых, по данным некоторых исследований, могут явиться тканевая гипоксия и нарушение энергетического метаболизма [1, 4], влекущие за собой каскад патологических реакций, утяжеляющих течение основного заболевания и ведущих к развитию полиор-ганной недостаточности, в том числе печеночной [3, 14].
При исследовании состояния системы гемостаза на фоне применения реамберина в терапии острого панкреатита были получены следующие результаты (табл.). Выявлено, что на первые сутки применения реамберина протромбиновое время было сопоставимо с нормой, и превышало контроль на 10,32% (р<0,05). ПДФ и вязкость крови снижались, на данном этапе наблюдения показатели были ниже контроля на 15,68 и 17,20% (р<0,05) соответственно, причем вязкость крови была сопоставима с нормой. Спонтанный фибринолиз возрастал относительно контроля, превосходя его на 30,79% (р<0,05), и был сопоставим с нормой. Остальные показатели на этом этапе наблюдения достоверно не отличались ни от контроля, ни от нормы.
Таблица
Показатели гуморальной системы гемостаза при остром панкреатите на фоне применения реамберина (М±т)
Показатель Груп па Норма Этапы послеоперационного наблюдения
1-е сутки 3-и сутки 5-е сутки
Время свертывания, с I 301,11±4,22 305,13±15,03 279,24±7,11* 251,75±8,53*
II 324,43±16,02 315,46±8,08* 268,15±9,53*
Время рекальцификации, с I 119,56±6,43 117,87±5,46 112,64±5,89 96,46±4,03*
II 114,58±5,07 113,23±5,46 93,28±4,12*
Толерантность плазмы к гепарину, с I 293,89±4,38 286,98±13,61 261,9± 5,57* 248,63±10,64*
II 292,23±13,98 291,49± 7,09 286,98±9,26
Каолиновое время, с I 54,11±1,08 49,12±1,17* 45,19±3,14* 43,96±1,17*
II 50,13±1,12* 46,17±2,97* 44,12±2,10*
Протромбиновое время, с I 26,22±0,73 22,77±0,78* 19,90±0,55* 18,54±0,71*
II 25,12±0,57 23,17±0,49 22,67±0,93*
Тромбиновое время, с I 16,00±0,85 16,12±0,46 12,45±0,59* 15,13±0,62
II 16,27±0,89 13,18±0,61 * 16,02±0,79
Фибриноген, г/л I 3,37±0,06 3,53±0,29 4,59±0,10* 4,89±0,06*
II 3,48±0,21 4,54±0,22* 4,91±0,24*
Антитромбин ш,% I 67,44±0,85 66,38±0,56 56,13±1,45* 58,71±2,54*
II 67,48±3,04 61,27±1,03* 68,76±2,13
Эуглобулиновый фибринолиз,мин I 168,44±2,50 163,12±5,75 190,54±7,34* 186,12±5,10*
II 169,16±8,12 163,16±6,12 182,09±4,38*
Спонтанный фибринолиз,% I 20,67±0,88 17,15±0,76* 13,04±0,51* 15,46±0,81*
II 22,43±0,81 16,12±0,55* 16,07±0,94*
ПДФ, г/л I 7,20±0,10 9,76±0,32* 12,09±0,63* 11,06±0,17*
II 8,23±0,24* 9,01±0,48* 9,16±0,41*
Вязкость крови, усл. ед. I 3,84±0,12 4,65±0,20* 6,07±0,23* 5,46±0,21*
II 3,85±0,14 5,04±0,19* 5,43±0,25*
Мордовский госуниверситет им. Н.П. Огарева, каф. факультетской хирургии, 430000 г. Саранск, ул. Большевистская, 68
Примечание: I - контрольная группа; II - опытная группа; * - достоверность по отношению к норме при р<0,05; жирный шрифт - достоверность изменений по отношению к контрольным данным при р<0,05
1 сутки
3 сутки
5 сутки
Далее динамика показателей гемостаза сохранялась. На 3 сутки включения реамберина в терапию исследуемой патологии время свертывания и показатель протромбинового времени были выше данных показателей в контроле на 12,97 и 11,41% (р<0,05) соответственно, причем первый из них достоверно от нормы не отличался. Время рекальцификации плазмы было сопоставимо с исходом. Содержание антитромбина III и толерантность плазмы к гепарину повышались относительно контроля на 9,16 и 11,29% (р<0,05) соответственно, последний показатель статистически значимо от исходных данных не отличался.
Тромбиновое время снижалось на всех этапах эксперимента, достигая минимума к его окончанию, когда оно статистически не отличалось от нормальных цифр. Время свертывания и время рекальцификации прогрессивно снижались так же, как и в контрольной группе, но и к пятым суткам эксперимента были ниже нормы на 10,95 и 21,98% (р<0,05) соответственно. На фоне применения реамберина выявлено изменение антикоагулянтной активности плазмы: показатель антитромбина III к окончанию эксперимента был сопоставим с исходными данными, превышая контроль на 17,12% (р<0,05). Уровень продуктов деградации фибриногена возрастал на 27,22% относительно нормы, оставаясь ниже контроля на 17,18% (р<0,05). Остальные гемостатические показатели на данном этапе динамического наблюдения на фоне терапии реамберином относительно контроля не изменялись.
При исследовании коагуляционно-литического потенциала крови на фоне применения мексидола было установлено, что на первые сутки протромбиновое время было сопоставимо с нормой и превышало контроль на 7,07% (р<0,05). ПДФ и вязкость крови снижались, на данном этапе наблюдения данные показатели были ниже контроля на 17,29 и 18,28% (р<0,05) соответственно, причем вязкость крови достоверно от нормальной не отличалась. Спонтанный фибринолиз возрастал относительно контроля, превосходя его на 22,97% (р<0,05), и был сопоставим с нормой. Остальные показатели на данном этапе наблюдения достоверно не отличались ни от контроля, ни от нормы.
При применении антиоксидантов при эндогенной интоксикации панкреатогенного генеза происходит коррекция нарушений гуморального компонента системы гемостаза. Эффект антиоксидантов проявляется с первых суток их применения, что делает перспективным их использование для предотвращения осложнений синдрома эндогенной интоксикации.
Литература
1.Буянов В.М. и др.// Клин. хир.- 1989.- № 11.- С. 24-26.
2.Власов А.П. и др. Системный липидный дистресс-синдром в хирургии - М.: Наука.- 2009.
3.Кубышкин В.А. и др. // Хирургия.- 1989.- № 7.- С. 138.
4.Рябов Г.Л. и др. // Вест. интен. тер.- 2002.- № 4.- С. 4-7.
5. Чаленко В.В., Кутушев Ф.Х. // Вестн. хир. им.
И.И. Грекова.- 1990.- № 4.- С. 3-8.
УДК 579.222.2:543.553
БИОСЕНСОРНОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ МИКРОБНОГО ОКИСЛЕНИЯ АЛКАНОВ НОРМАЛЬНОГО СТРОЕНИЯ С ДЛИНОЙ ЦЕПИ С6-С16
Н.Л. ЛАГУНОВА*
На основе биосенсорной регистрации изменения дыхательной активности штамма-нефтедеструктора Pseudomonas chlororaphis PCL1391(pOV17) в присутствии алканов нормального строения отмечен ряд особенностей окисления алифатических субстратов, связанных с длиной углеродного скелета субстрата, его растворимостью, токсичностью самого алкана, а также интермедиатов его микробной трансформации. Выявлена корреляция между результатами биосенсорных исследований и ростовыми и культуральными характеристиками штамма при выращивании в парах алканов.
Ключевые слова: активность штамма-нефтедеструктора Pseudomonas chlororaphis PCL1391
В последнее время перспективным способом очистки почв и вод от нефтепродуктов считается биоремедиация, осуществляемая путем стимуляции аборигенных микроорганизмов, селекции и последующей реинтродукции бактерий-нефтедеструкторов, фиторемедиации и биоаугментации [1]. Для подбора технологии восстановления загрязненных почв и вод необходимо предвари-
тельно исследовать особенности микробной трансформации нефтекомпонентов. Представляется важным изучение механизмов окисления бактериями-нефтедеструкторами наиболее токсичной легкой фракции нефти, большую часть которой составляют метановые углеводороды нормального строения.
Окисление алканов микроорганизмами непосредственно связано с потреблением кислорода [2], что дает возможность использовать биосенсоры амперометрического типа на основе кислородного электрода для характеристики биохимического поведения микробных клеток [3].
Цель работы - применить биосенсорные технологии для изучения закономерностей микробного окисления алканов нормального строения с длиной цепи С6-С16.
Материалы и методы. Исследуемый штамм-нефтедеструктор P^Mororaphis PCL1391(pOV17) предоставлен лабораторией биологии плазмид ИБФМ РАН. Сочетание бактериального хозяина P^Mororaphis PCL1391 и катаболической плазмиды pOV17 было признано наилучшим при определении окислительных свойств и жизнеспособности 3 штаммов Pseudomonas, модифицированных плазмидами деградации нафталина, а также аналитических характеристик биосенсоров на их основе [4]. Культивирование бактерий вели на чашках Петри с агаризованной минимальной средой Эванса [5] в парах нафталина в течение 3-х дней при комнатной температуре.
Формирование рецепторного элемента осуществляли включением бактериальных клеток в агаровый гель согласно предложенной ранее методике [6]. Биосенсорные измерения производили по методике, описанной в [6]. Измеряемыми параметрами (сигналами сенсора) являлись максимальная скорость (нА/с) и амплитуда (нА) изменения выходного сигнала (отклика) биосенсора при добавлении субстратов.
В работе использовали алканы нормального строения со степенью чистоты х.ч.: гексан, октан, нонан, декан, ундекан, додекан, гексадекан (Химмед, Россия) (содержание данных веществ в кювете составляло 0,34 мМ) и дизельное топливо (ДТ). Исследуемые соединения вводили автоматическими пипетками с варьируемым объемом (5-40 мкл, 50-200 мкл) (Ленпипет, Россия).
Статистическую обработку результатов проводили по программам MS Excel 2003, Sigma Plot 9.0. Повторяемость экспериментов трехкратная, если нет дополнительного описания.
Результаты. Фактор природы доступного бактериальным клеткам субстрата является лимитирующим экзогенным экологическим фактором, непосредственно влияющим на интенсивность метаболических процессов микроорганизмов.
Влияние субстратов, вводимых в измерительную кювету биосенсорной установки, оценивали по величине ответа и виду отклика биосенсора, а также по изменению уровня базового тока, количественно отражающего эндогенное дыхание бактериальных клеток, в результате последовательных заколов порций субстратов в течение нескольких часов и дней.
Величины скоростей развития отклика на алканы (рис.1) невысоки по сравнению с величинами сигналов биосенсора на ароматические субстраты и глюкозу [4] (0,015 нА/с в среднем на алканы против 0,13 нА/с в среднем на глюкозу и ароматические кислоты). Предпочтительное использование энергоемких субстратов характерно для бактерий рода Pseudomonas.
ТулГУ, каф. химии, 300600, г. Тула, пр.Ленина,92, т.8-(4872)35-18-40
Рис. 1. Величины скоростей изменения силы тока при введении алканов с длиной цепи С6-С16
Также необходимо отметить, что при поступлении в измерительную кювету биосенсора только алканов в течение суток и
