CC BY
18
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
89
концентрации с 0,0396 мг/мл процент погибших клеток увеличивается, не достигая при этом активности экстракта аврана. Следовательно, противоопухолевая активность экстракта аврана лекарственного, по-видимому, обусловлена не только содержанием в нем кверцетина. Необходимо проведение более детального анализа химического состава экстракта и дополнительных исследований по изучению противоопухолевой активности и других фракций, входящих в экстракт.
Н.В. Полуконова1, А. Б. Бучарская1, Н.А. Наволокин1, М.А. Барышникова2, Д.А. Хоченков2, Э.Ш. Соломко2, О.О. Рябая2, Т.Н. Маслякова1, А.Ю. Барышников2, Б.Н. Хлебцов3, Н.Г. Хлебцов3 ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ ЗОЛОТЫХ НАНОСТЕРЖНЕЙ НА КЛЕТКИ КУЛЬТУРЫ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ SK-BR-3 1ГБОУ ВПО «СГМУ им. В. И. Разумовского» Минздрава России, Саратов;
2ФГБУ «РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва; 3ФГБУН ИБФРМ РАН, Саратов
Введение. В ближайшем будущем золотые наночасти-цы могут стать эффективными терапевтическими агентами в лечении различных заболеваний, в том числе и онкологических. Важным условием применения в онкологии новых материалов, в частности золотых наностержней (ЗНС), является всестороннее изучение их влияния на опухолевые клетки.
Цель исследования — изучить влияние ЗНС через 24 ч в эксперименте на клеточной культуре рака молочной железы SK-BR-3.
Материалы и методы. В работе использовали раствор пегилированных ЗНС длиной 41 ± 8 нм и диаметром 10,2 ± 2 нм (концентрация золота 400 мкг/мл), синтезированных в лаборатории нанобиотехнологии ИБФРМ РАН. Использовали культуру опухолевых клеток человека — карциному молочной железы SK-BR-3. Анализировали клетки, окрашенные флуоресцентным красителем Hoechat, используя показатели: среднее число клеток в поле зрения, активность роста культуры, % клеток в митозе от общего числа, % клеток в апоптозе от общего числа, а также учитывали стадии митоза.
Результаты. В контроле клетки культуры карциномы молочной железы человека SK-BR-3 имели четко очерченное ядро, в ряде случаев встречались митозы на разных стадиях до 5 в полях зрения. При воздействии ЗНС через 24 ч в культуре не наблюдали изменения количества клеток по сравнению с контролем, что свидетельствует об отсутствии как цитотоксического, так и стимулирующего рост культуры эффекта. Вместе с тем если в контроле наблюдали клетки в состоянии деления на стадиях мета- и анафазы, то при воздействии ЗНС выявлены клетки только в состоянии ранней профазы или поздней телофазы, что свидетельствует о возможном цитостатическом эффекте. Появления клеток в состоянии апоптоза также не было обнаружено.
Заключение. Таким образом, пегилированные ЗНС in vitro не оказывали цитотоксического воздействия на клетки карциномы молочной железы SK-BR-3. Перспективно
дальнейшее исследование противоопухолевой активности ЗНС при изменении условий и длительности эксперимента.
А. В. Пономарёв1, А.Е. Бармашов1, А.М. Дёмин2,
О.С. Бурова1, Н.В. Голубцова1, И.М. Лученко1,
М.А. Барышникова1, В.П. Краснов2
МАГНИТНАЯ СЕПАРАЦИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ
СУПЕРПАРАМАГНИТНЫХ ЧАСТИЦ
С АНТИТЕЛАМИ ICO406 К CD117
1ФГБУ «РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва;
2 ФГБУН «ИОС им. И. Я. Постовского УрО РАН»,
Екатеринбург
Введение. CD117 (С-kit) — трансмембранный протоон-когенный белок, относящийся к тирозинкиназным рецепторам III типа. CD117 встречается на многих типах опухолей человека, в частности в злокачественных новообразованиях желудочно-кишечного тракта, почки, остеосаркоме, меланоме. Был разработан метод иммобилизации антител ICO406 на магнитные наночастицы (МНЧ) на основе Fe3O4 для магнитной сепарации CD117+-популяций опухолевых клеток.
Цель исследования — подтвердить возможность использования синтезированных наноконъюгатов МНЧ и антител ICO406 для выделения CD117+-клеток.
Материалы и методы. Конъюгацию МНЧ и ICO406 проводили при использовании 1-этил-3- (3-диметилами-нопропил) карбодиимида в фосфатном буферном растворе (PBS). В результате были получены суспензии МНЧ в PBS (МНЧ-ICO406-1) и воде (МНЧ-!Ш406-2). Для проверки полученных в работе МНЧ использовали CD117+ клеточную линию меланомы человека mel Kor. К клеткам добавляли МНЧ-ICO406-1 и МНЧ-!Ш406-2. Смесь переносили в колонку MS Column на штативе MACS MultiStand, вставленную в магнит MiniMACS (Miltenyi Biotec). В качестве контроля использовали клетки без частиц. После выхода раствора из колонки ее снимали с магнита и смывали задержавшиеся в ней клетки PBS. Производили подсчет клеток, прошедших через колонку с магнитом и задержавшихся в колонке.
Результаты. Маркер CD117 был экпрессирован на 94 % клеток линии mel Kor. При проведении магнитной сепарации клетки, инкубированные с частицами МНЧ-ICO406—1, вышли из колонки с магнитом в количестве 5,7 %, а клетки, инкубированные с частицами МНЧ-ICO406—2, вышли в количестве 9,86 %. Клетки без магнитных частиц вышли из колонки с магнитом в количестве 96,1 %. Частицы состава МНЧ-ICO406—1 проявили выраженную способность к связыванию, с их помощью удалось выделить 100 % CD117+-клеток.
Заключение Суперпарамагнитные частицы, конъюгиро-ванные с антителами ICO406, позволяют выделять CD117+-популяцию клеток меланомы с достаточно высоким выходом. Процент клеток, связавшихся с МНЧ, соответствует проценту клеток, имеющих на своей поверхности CD117. Данный факт свидетельствует о высоком качестве частиц с иммобилизованными антителами, а также о надежности и эффективности иммуномагнитной сепарации с ними.
Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ(№ 14-03-00146-а) и УрО РАН(№ 15-21-3-6).
№1 / том 15 / 2016
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
