CC BY
30
БЫКОВ-ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ НА НОСИТЕЛЬСТВО МУТАЦИИ В ГЕНЕ FXID STUDY OF SUBPOPULATIONS OF SERVICING BULLS FOR CARRIERS OF A MUTATION IN A FXID GENE
Морковкина Наталья Альвиановна, Ковалюк Наталья Викторовна, д.б.н., Мачульская Елена Витальевна, к.б.н., Шахназарова Юлия Юрьевна,
Северо-Кавказский научно-исследовательский институт животноводства, Российская Федерация, г. Краснодар Иванченко Анастасия Анатольевна, Кубанский государственный университет, Российская Федерация, г. Краснодар Morkovkina, N.A., junior researcher Kovalyuk Natalia Viktorovna, Dr. Biol. Sc, Machulskaya Elena Vitalievna, Cand. Biol. Sc. Shakhnazarova Yulia Yurievna,
North-Caucasus Research Institute of Animal Husbandry Krasnodar,
Russian Federation
Machulskaya, E.V., Cand. Biol. Sc.
Shakhnazarova Yu.Yu., researcher
Ivanchenko, A.A., undergraduate
Kuban State University, Krasnodar, Russian Federation
Аннотация: произведён подбор условий ПЦР для скрининга носительства синдрома дефицита XI фактора. Генотипи-ровано 28 голов быков - производителей, широко использующихся в системе искусственного осеменения Краснодарского края, на носительство вышеуказанной генетической аномалии.
Ключевые слова: дефицит XI фактора; мутация; полиме-разная цепная реакция; частота встречаемости.
Abstract: the selection of PCR conditions for screening of carriers of the deficiency syndrome of factor XI has been made. We have genotyped 28 servicing bulls which are widely used in the system of artificial insemination in Krasnodar region for the carriage of the above-mentioned genetic abnormalities.
Key words: deficiency of XI factor; mutation; polymerase chain reaction; the frequency of occurrence.
В настоящее время выявлено 505 различных генетических особенностей крупного рогатого скота (как аномалий, в том числе летальных, так и SNP и прочих полиморфизмов, не оказывающих значительного влияния на здоровье животных) [1, 2].
Дефицит XI фактора (FXID) свертывания крови крупного рогатого скота является аутосомальным рецессивным наследственным генетическим дефектом. Данная генетическая аномалия является следствием вставки нуклеотидной последовательности в составе экзона 12 гена FXID длиной 76 пар оснований. В результате данной инсерции появляется STOP codon (TAA) [4]. Фенотипически дефицит XI фактора (FXID) свертывания крови у телят характеризуется длительным кровотечением из пупочного канатика, анемией, что вызывает смертность 80 % телят в первый год жизни. У коров, гетерозиготных носителей данного дефекта молозиво розового цвета, обычно, такие животные восприимчивы к пневмонии, маститам и эндометритам [3].
Исследованиями установлено, что дефицит XI фактора свертывания крови у коров негативно влияет на репродуктивную функцию коров, в частности у таких животных снижается рост фолликулов и половой цикл сопровождается снижением пиковой концентрации эстрадиола в крови. У коров, гетерозиготных носителей этого генетического дефекта низкие показатели воспроизводительной функции, часто встречаются трудные отелы и рождение нежизнеспособных телят [5].
Цель работы - подобрать оптимальные условия постановки ПЦР при скрининге генетической аномалии FXID, выявить частоту встречаемости данной аномалии в группе быков - производителей.
Методика. Исследования были проведены на базе лаборатории биотехнологии ФГБНУ СКНИИЖ. Объектом исследования являлись образцы спермы 28 быков-производителей.
Для выделения ДНК из образцов использовали наборы реагентов Diatom™ DNA Prep 100 (ООО «Лаборатория Изоген» г. Москва). Для контроля прохождения реакции и оценки качества
и концентрации ПЦР - продуктов проводили электрофорез в 2% агарозном геле.
Результаты исследований и их обсуждение. При скрининге интересующего нас участка экзона 12 гена FXID для выбора оптимальных условий реакции использовали различные условия амплификации.
Наилучший результат по выходу специфического продукта дала полимеразная цепная реакция со следующими условиями амплификации:
94°С 5 сек.
65С 5 сек. 30 циклов
72°С 5 сек.
72С 5| мин. 1 цикл
Для амплификации использовали праймеры FXID 1 и FXID 2 [2]. В результате амплификации возможна детекция следующих специфических фрагментов: М (мутантный) - 320 п.н.; G (гетерозиготный) - 320, 244 п.н.; N (нормальный) - 244 п.н. В нашем случае из 28 исследованных животных у одного животного помимо фрагмента длинною 244 п.н., наблюдалось наличие фрагмента длинной 320 п.н. (дорожка 11), что свидельствует о носительстве им мутантного аллеля. Результаты скрининга представлены на электрофореграмме (рис.1).
1-й ряд:1-4, 6-18 - ПЦР-продукт реакции, 5 - маркер молекулярного веса М50;
2-й ряд: 1-6, 8-12 - ПЦР-продукт реакции, 13 - «-»-контроль ПЦР, 7 - маркер молекулярного веса М50.
1 2 3 4 5 6 7 S 9 lO И 12 13 14 15 16 17 18
Рис.1 Электрофореграмма результатов скрининга 28 быков-производителей на наличие генетической аномалии FXID.
Выводы. В результате исследований было выявлено носи-тельство FXID у одного из быков-производителей, который широко используется в системе искусственного осеменения. Частота встречаемости мутантного аллеля таким образом, составила 0.018. Учитывая то, что для коров гомозиготных и гетерозиготных носителей генетического дефекта XI фактора свертывания крови характерны низкие показатели воспроизводительной функции, часто встречаются трудные отелы и рождение нежизнеспособных телят необходимо ограничить использование этого производителя.
Список литературы
1. Гладырь, Е.А., Зиновьева, Н.А., Эрнст, Л.К., Костюнина, О.В., Быкова, А.С., Банникова, А.Д., Кудина, Е.П., Брем, Г. Молекулярные методы в диагностике заболеваний и наследственных дефектов сельскохозяйственных животных // Зоотехния. -2009. - № 8. - С . 26-27.
2. Hasan Meydan, Mehmet A Yildiz, J0rgen S Agerholm, Screening for bovine leukocyte adhesion deficiency, deficiency of uridine monophosphate synthase, complex vertebral malformation, bovine citrullinaemia, and factor XI deficiency in Holstein cows reared in Turkey // Acta Veterinaria Scandinavica. 2010, 52:56
3. Kunieda M., Tsuji T., Abbasi A.R., Khalaj M., Ikeda M., Miyadera K., Ogawa H., Kunieda T., An insertion mutation of the bovine F11 gene is responsible for factor XI deficiency in Japanese black cattle // Mamm Genom . 2005,16:383-389
4. Marron B.M., Robinson J.L., Gentry P.A., Beever J.E., Identification of a mutation associated with factor XI deficiency in Holstein cattle //Anim Genet. 2004 Dec;35(6):454-6
5. Meydan H., Yildiz M.A., Ozdil F., Gedik Y., Ozbeyaz C. Identification of factor XI deficiency in Holstein cattle in Turkey // Acta Vet Scand. 2009, Jan 22;51:5
УДК 636.32/.38.061(470.68)
ЭКСТЕРЬЕРНЫЕ И ИНТЕРЬЕРНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ
БАРАНЧИКОВ ПОРОДЫ ДОРПЕР В ПЕРИОД АДАПТАЦИИ К ПРИРОДНО-КЛИМАТИЧЕСКИМ УСЛОВИЯМ КАЛМЫКИИ EXTERIOR AND INTERIOR INDICATORS OF YOUNG RAMS IN DORPER BREED DURING THE ADAPTATION TO CLIMATIC CONDITIONS OF KALMYKIA
Погодаев Владимир Аникеевич, д.с.-х.н., Сергеева Наталья Владимировна,
ФГБНУ «Всероссийский научно - исследовательский институт овцеводства и козоводства», Российская Федерация, г. Ставрополь
Арилов Анатолий Нимеевич., д.с.-х.н.
ФГБНУ «Калмыцкий научно-исследовательский институт сельского хозяйства имени М.Б. Нармаева», Российская Федерация, г. Элиста
Pogodaev, Vladimir Anikeevich, Dr. Agr. Sc.; Sergeeva, Natalia Vladimirovna,
"All - Russian Research Institute of Sheep and Goat Breeding" Stavropol, Russian Federation Arylov, Anatoly Nimeevich, Dr. Agr.Sc., "Kalmyk Research Institute of Agriculture named after M.B. Narmaev", Russian Federation, lista,
Аннотация: представлены данные весового роста, эксте-рьерных особенностей и биохимических показателей крови баранчиков породы дорпер в процессе адаптации к новым природно-климатическим условиям Калмыкии.
