CC BY
30
23. Siefermann-Harms, D. The light-harvesting and protective functions of carotenoids in photosynthetic membranes. Physiol. Plant. 1987; 69: 561-568.
24. Solovchenko, A.E., Neverov, K.V. Carotenogenic response in photosynthetic organisms: a colorful story. Photosynthesis Research. 2017; 133 (13): 31-47.
25. Strasser, R.J., Srivastava, A., Govindjee. Polyphasic chlorophyll a fluorescence transient in plants and cyanobacteria. Photochem. Photobiol. 1995; 61: 32-42.
26. Strizh, IG., Neverov, K.V. Photoinhibition of photosystem II in vitro: spectral and kinetic analyses. Russian Journal of Plant Physiol. 2007; 54: 439-449.
27. Young, A.J., Philip, D., Frank, H.A., et al. The xanthophyll cycle and carotenoid mediated dissipation of excess excitation energy in photosynthesis. Pure Appl. Chem. 1997; 69: 2125-2130.
28. Zabelin, A.A., Neverov, K.V., Krasnovsky, A.A. Jr., et al. Characterization of the low-temperature triplet state of chlorophyll in photosystem II core complexes: application of phosphorescence measurements and Fourier transform infrared spectroscopy. BBA - Bioenergetics. 2016; 1857: 782-788.
УДК: 575.83; 577.344; ГРНТИ:34.15.29; 34.17.09;
ИССЛЕДОВАНИЕ ФОТОХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ И ФИЛОГЕНИИ РАСТИТЕЛЬНЫХ _БЕЛКОВ СЕМЕЙСТВА WSCP_
DOI: 10.31618/ESU.2413-9335.2020.3.80.1118 Обухов Ю. Н.1, Неверов К. В.12, Малеева Ю.В.2, Крицкий М. С.1
1 Институт биохимии им. А. Н. Баха, Федеральный исследовательский центр «Фундаментальные основы биотехнологии» Российской академии наук,
г. Москва, Россия
2 Биологический факультет Московского государственного университета имени М. В. Ломоносова,
г. Москва, Россия
АННОТАЦИЯ
Показана способность хлорофилла в составе белков семейства WSCP (Water-Soluble Chlorophyll-binding Proteins) фотосенсибилизировать окислительные редокс-реакции. Облучение красным светом рекомбинантных хлорофилл-белковых комплексов WSCP подклассов IIa и IIb в присутствии донора электрона (NADH) приводило к окислению донора, т.е., у данных пигмент-белковых комплексов была выявлена фотохимическая активность. При этом не происходило фотодеструкции хлорофилла в составе WSCP, что указывает на фотокаталитический характер обнаруженной редокс-реакции. Кинетические константы фотоокисления NADH были выше для WSCP подкласса IIa (BoWSCP), чем для подкласса IIb (LvWSCP). Для объяснения разности фотосенсибилизирующей активности представителей разных подклассов WSCP был проведен биоинформатический анализ белков класса II данного семейства. С этой целью был проведен поиск членов семейства WSCP в базе данных белковых последовательностей UniProt с алгоритмом поиска BLAST с последующим их множественным выравниванием и построением филогенетического дерева с помощью веб-сервиса EMBL-EBI Clustal Omega и программы MEGA7. Биоинформатический анализ подтвердил филогенетическое разделение семейства белков WSCP класса II на два подкласса, ранее установленное на основании различия их физико-химических свойств. Высказано предположения о связи филогении с фотохимической активностью представителей разных подклассов в семействе WSCP.
ABSTRACT
Here we show the ability of the chlorophyll associated with proteins of the WSCP family (Water-Soluble Chlorophyll-binding Proteins) to photosensitize oxidative redox reactions. Irradiation with red light of the recombinant chlorophyll-protein complexes WSCP subclasses IIa and IIb in the presence of an electron donor (NADH) led to oxidation of the donor, i.e., these pigment-protein complexes showed photochemical activity. Meanwhile there was no photodestruction of chlorophyll associated with WSCP, which indicates the photocatalytic nature of the detected redox reaction. The kinetic constants of NADH photooxidation were higher for WSCP subclass IIa (BoWSCP) than for subclass IIb (LvWSCP). To explain the difference in the photosensitizing activity of representatives of different WSCP subclasses, bioinformatic analysis of class II proteins of this family was carried out. For this purpose, we searched for members of the WSCP family in the UniProt protein sequence database using the BLAST search algorithm, followed by their multiple alignment and construction of a phylogenetic tree using the EMBL-EBI Clustal Omega web service and the MEGA7 program. Bioinformatic analysis has confirmed the phylogenetic division of the WSCP class II protein family into two subclasses, previously established on the basis of the difference in their physicochemical properties. It was suggested that phylogeny is related to the photochemical activity of representatives of different subclasses in the WSCP family.
Ключевые слова: WSCP, фотохимия, окислительно-восстановительные реакции, биоинформатика, BLAST, множественное выравнивание, метод максимального правдоподобия.
Key words: WSCP, photochemistry, redox reactions, bioinformatics, BLAST, multiple alignment, Maximum likelihood method.
Введение
Белки семейства WSCP (Water Soluble Chlorophyll-binding Protein) растений занимают уникальное положение среди хлорофилл (Хл)-содержащих белков высших растений: они не являются частью аппарата фотосинтеза и не связаны с липидной мембраной, т.е. растворимы в водной фазе [1]. В данном семействе выделяют два класса, не имеющих гомологии в первичной последовательности - класс I и класс II. Для пигмент-белковых ансамблей класса I показана способность к фотоконверсии - изменению спектра поглощения хромофора под воздействием света; белки класса II такой способностью не обладают [2]. Белки класса II, в свою очередь, подразделяются на два подкласса IIa и IIb на основании различного сродства к Хл a и Хл b [3]. Белки WSCP класса II представляют собой водорастворимые гомотетрамерные пигмент-белковые комплексы (ПБК), формируемые мономерами с массой около 20 кДа, аминокислотные последовательности которых имеют высокую степень гомологии с ингибиторами протеаз типа Кунитца [4,5]. В состав тетрамера входит 2 или 4 молекулы Хл a или Хл a + Хл b [6,7,8], что существенно проще структуры известных фотосинтетических белковых ансамблей, в составе которых мультимерные белковые ассоциаты связывают множество молекул Хл, каротиноидов и других кофакторов. В клетках растений белки WSCP, предположительно, участвуют в реакциях организма на стрессовые воздействия разной природы, а также, возможно, выполняют фотопротекторную функцию [6,9,10].
Относительная простота структуры белков WSCP в сочетании с димерной организацией Хл, аналогичной «специальной паре» Хл, первичному донору электрона в реакционных центрах фотосистем (РЦ ФС), позволяют рассматривать данную группу белков как перспективный объект для моделирования фотосинтетических преобразователей энергии света, в том числе, эволюционных прототипов РЦ ФС. Поскольку исследования фотохимической активности данных белков ранее не проводились, целью данной работы стало, во-первых, изучение способности WSCP к фотосенсибилизации редокс-реакций in vitro, а во-вторых, поиск корреляции фотохимической активности со структурным разнообразием этого семейства, проанализированного
биоинформационными методами. Для
исследования фотокаталитических свойств были взяты наиболее изученные представители семейства WSCP класса II - белок подкласса IIa из Brassica oleracea (BoWSCP) и подкласса IIb из Lepidium virginicum (LvWSCP). Препараты данных белков получали путем гетерологичной экспрессии их генов, клонированных в клетках штаммов
Escherichia coli. Полученная информация относительно фотохимической активности белков разного происхождения сопоставлялась с результатами биоинформатического анализа филогенетического родства белков внутри семейства WSCP.
Материалы и методы
Для получения рекомбинантных препаратов белков BoWSCP и LvWSCP производили трансформацию клеток E. coli штамма BL21(DE3) вектором pet-24b со встроенной
последовательностью соответствующего гена. Векторы были любезно предоставлены зарубежными коллегами (см. благодарности). Полученные культуры штаммов-продуцентов выращивали в жидкой среде LB при 37oC с последующей индукцией синтеза белка 1 мМ раствором изопропил-ß-D-b
тиогалактопиранозида. По завершении индуцированного синтеза белка бактериальные клетки осаждали центрифугированием и разрушали ультразвуком. Тетрамерные Хл-белковые комплексы WSCP получали путём самосборки апобелков и молекул Хл при инкубации лизата клеток со свежевыделенными тилакоидами шпината. Полученные ПБК WSCP очищали с использованием центрифугирования и аффинной хроматографии на Ni-агарозе [11].
Для проведения фотохимических
экспериментов использовали осветитель "Свитязь-М" с галогеновой лампой (W=150 Вт) в качестве источника света. На оптической оси установки последовательно находились: тепловой водный фильтр толщиной 3 см, фокусирующая линза (F = 97 мм), система светофильтров для выделения нужного спектрального диапазона и магнитная мешалка с гнездом для установки кюветы с образцом. В опытах с BoWSCP использовали красный светофильтр КС-15 (5мм), пропускание >650 нм, и нейтральный фильтр НС-7 (3мм), интенсивность действующего света в спектральном диапазоне 650-710 нм на уровне образца составляла 850 ^E/Ä. В опытах с LvWSCP использовали светофильтр КС-15 (5мм), интенсивность действующего света в спектральном диапазоне 650710 нм составляла 1800 ^E/Ä. Интенсивность лучистого потока определяли с помощью радиометра LI-250A (LiCOR, США). Все эксперименты проводили в кварцевых кюветах с длиной оптического пути 1 см при непрерывном перемешивании образцов. Спектры поглощения образцов при комнатной температуре регистрировали на двухлучевом спектрофотометре СФ-2000 (ОКБ «Спектр», Россия). Пробы, подвергавшиеся облучению, содержали реакционную смесь с оптической плотностью OD=0,2 в пиках поглощения ПБК при 673 нм (BoWSCP) и 663 нм (LvWSCP), что
соответствовало концентрации белка около 0,6мкМ (50 мкг/мл). Концентрацию белка определяли методом Брэдфорда [12]. Все компоненты реакционной смеси растворяли в буфере 10мМ Трис-HCl, pH 8.0.
В биоинформатической части исследования мы провели поиск гомологов белков BoWSCP и LvWSCP, используя сведения об их первичной структуре, в базе данных UniProt (http://www.uniprot.org/) со встроенным в веб-сайт алгоритмом поиска BLAST (The Basic Local Alignment Search Tool). В результате поиска была выбрана 21 последовательность
охарактеризованных ранее белков, имеющих наибольшее сходство как с BoWSCP, так и с LvWSCP. Эти найденные последовательности наряду с двумя последовательностями, использованными для поиска гомологов, сравнили методом множественного выравнивания, используя веб-сервис EMBL-EBI Clustal Omega. Результаты выравнивания использовали для построения филогенетического дерева с помощью программы MEGA7 методом максимального правдоподобия (Maximum Likelihood), используя для оценки устойчивости топологии дерева 300 реплик в Bootstrap-тесте.
Результаты и их обсуждение
Для изучения фотохимической активности у ПБК WSCP проводили облучение растворов тетрамеров ПБК BoWSCP и LvWSCP в присутствии низкопотенциального донора электрона NADH (Eo'= -0,32 В). При действии на растворы красного света (длина волны >650 нм), поглощаемого только Хл в составе ПБК, наблюдали последовательное снижение оптической плотности максимума при 339 нм, соответствующего поглощению NADH что свидетельствовало об
окислении NADH в NAD+ (Рис. 1А). При инкубации белков с NADH в темноте окисления донора не происходило.
Как следует из Рис. 1А, во время облучения не происходило падения оптической плотности Хл в красной полосе. Это указывает на фотокаталитический характер процесса, где фотосенсибилизатор не подвергается разрушению.
Поскольку сведения о фотохимических редокс-реакциях с участием ПБК WSCP отсутствуют, можно утверждать, что нами впервые обнаружена способность белков WSCP класса II к фотокаталитическому окислению доноров электрона в растворе. Механизм реакции определяется, очевидно, фотосенсибилизирующей способностью димеров Хл в WSCP, что аналогично работе "специальной пары" Хл или бактериохлорофилла в РЦ фотосистем, где фотосенсибилизатором и участником первичного фотохимического акта является именно димерный Хл.
Надо отметить, что константа скорости фотоокисления NADH комплексами BoWSCP (подкласс IIa) заметно выше, чем комплексами LvWSCP (подкласс IIb), что хорошо продемонстрировано на Рис. 1Б.
Для простоты расчета констант скорости кривые фотоокисления NADH были приняты за моноэкспеоненциальные, то есть окисление донора можно описать мономолекулярным процессом. Для фотокаталитической реакции это допустимо, т.к. фотосенсибилизатор (димер Хл) остается в постоянной концентрации. Рассчитанная с учетом разной интенсивности облучения и интеграла поглощения образцов (см. Материалы и Методы) кинетика фотоокисления NADH для BoWSCP была примерно в 4 раза выше, чем для LvWSCP.
2 4 6 8
Длина волны (нм) Время освещения (мин)
Рисунок 1. А. Серия спектров поглощения смеси БвШБСР и ЫЛБН при облучении красным светом в течение 0,1,2,3,4,5,6,8 и 10 минут. Серая полоса справа показывает область пропускания светофильтра КС-15. Б. Кинетические кривые фотоокисления ЫЛБН (в относительных единицах) с участием БвШБСР и ЬуШБСР, полученные при вычислении падения оптической плотности ЫЛБН при 339 нм с учетом вклада поглощения ПБК ШБСР.
Обнаруженные различия в
фотокаталитической активности BoWSCP и LvWSCP поднимают вопрос о том, являются ли эти отличия характерными для отдельных представителей WSCP или же для целых подклассов этого семейства, и не объясняются ли эти различия структурной гомологией полипептидных цепей.
Для этого была предпринята попытка провести биоинформатический анализ широкого спектра представителей WSCP класса II и проанализировать филогенетическое дерево.
В результате биоинформатического анализа на полученном филогенетическом дереве (Рис. 2) видно отчётливое разделение белков WSCP класса II на две ветви, совпадающее с их разделением на подклассы IIa и IIb, ранее базировавшемся исключительно на разном сродстве белков этих к Хл a и Хл b. Такое совпадение указывает на эволюционную специализацию белков по данной характеристике (аффинности к пигменту), а также на функциональную значимость данного
показателя для белков этого семейства. При этом ветвь WSCP подкласса IIa выглядит гораздо более многочисленной и гетерогенной, чем ветвь подкласса IIb. В ней присутствуют как описанные ранее белки WSCP подкласса IIa, так и структурно родственные стресс-индуцируемые белки -ингибиторы протеаз. Поскольку связывание Хл не является необходимой или характерной функцией для белковых ингибиторов протеаз, можно предположить, что развитие данной ветви эволюции белков происходило в двух отчасти взаимоисключающих направлениях, отражающих их функциональную специализацию. Для первого направления характерно усиление в ходе эволюции ингибиторной активности по отношению к протеазам с возможной утратой возможности связывать Хл, в то время, как второе направление отличает способность специфически связывать только Хл a, с возможным параллельным усилением в процессе эволюции фотохимической и утратой такой ингибиторной активности.
57 73. 53 77 93
64 90
У
Heat stress-induced protein from Brassica oleracea 082795 Д^
WSCP Class IIA from Brassica о. (sequence) О Идентичны
WSCP Class IIA from Brassica oleracea var. botrytis Q7GDB3 I
WSCP Class IIA (Fragment) from Brassica oleracea var. viridis Q8H0F0
WSCP Class IIA from Brassica oleracea var. gemmifera I2FI78
BnD22 drought induced protein from Brassica napus Q43395
WSCP Class IIA (Fragment) from Brassica oleracea var. viridis Q8H0E9
WSCP Class IIA (Fragment) from Brassica nigra A0A193PMF8
WSCP Class IIA from Raphanus sativus var. raphanistroides KDIPI1 I ..
1 Идентичны
Взаимное Сходство более 80 %
30 L
991 WSCP Class IIA from Raphanus sativus var. niger Q8W5R3 — Drought-induced 22kDa protein (Fragment) from Raphanus sativus Q41170
- Kunitz-type trypsin inhibitor-like 1 protein from Noccaea caerulescens A0A1J3H3W6 B6TB b WSCP Class IIA from Arabidopsis thaliana Q9C7S6 WSC P
- Endogenous alpha-amylase/subtilisin inhibitor (Fragment) from Noccaea caerulescens A0A1J3GVL5 p Qfl KJ1 11A -WSCP Class IIA from Brassjca_oleracea va^botrytis Q8H0E7______________^ _ _
100l WSCP IIB from Lepidium virginicum 004797 I WSCP IIB from Lepidium virginicum (sequence) %
&WSCP IIB from Brassica juncea var. Crispifolia A0A1Q2TD53 WSCP IIB from Brassica rapa var. oleifera A0A1Q2TD47 „ WSCP IIB from Slnapis arvensis A0A1Q2TD46_
Ветвь WSCP ПОДКЛ.ИВ
£
Bark lectin isoform 2 from Noccaea caerulescens A0A1J3J2Z4
- Miraculin-like protein from Nicotiana tabacum A0A1S3XC37
- Kunitz-type serine protease inhibitor DrTI from Delonix regia P83667_
Внешняя группа
Рисунок 2. Филогенетическое дерево, построенное с помощью программы MEGA 7 (Maximum likelihood tree, Bootstrap-анализ - 300реплик). Точки - использованные для поиска гомологов последовательности.
На такого рода разнонаправленную тенденцию отчасти указывает количественная оценка (выраженная в процентах) взаимного сходства первичной структуры белков данной ветви на матрице процентной идентичности (Рис. 3). Видно, что сходство друг с другом большей части связывающих Хл белков WSCP на ветви «IIA» (№216) составляет более 80% (№7-16), и они компактно расположены на филогенетическом дереве (см. рис. 2), а белки с потенциальной ингибиторной функцией располагаются отдельно и имеют взаимное сходство 50-80% (№2-6). Таким образом, ветвь «IIA», предположительно, содержит
относительно консервативную группу обладающих высокой фотосенсибилизирующей активностью белков WSCP подкласса IIa из растений рода Brassica, связывающих Хл a (представитель которой имеет высокую фотосенсибилизирующую активность), и группу менее консервативных белков, у которых, предположительно, превалирует ингибиторная по отношению к протеазам активность. Что же касается ветви «IIB», то она содержит лишь белки WSCP подкласса IIb, представитель которого обладает более слабой фотокаталитической активностью.
Рисунок 3 - Матрица процентной идентичности 23 исследуемых аминокислотных последовательностей гомологов белков BoWSCP и LvWSCP.
В результате экспериментов по множественному выравниванию было также выявлено, что белки WSCP подклассов IIa и IIb различаются наличием стабильных
аминокислотных замен в отдельных участках первичной структуры. Так, например, в области LHCII (светособирающие комплексы высших растений II) - подобного мотива белки подкласса IIa зачастую имеют последовательность
NILPFCPLGIT, а белки подкласса IIb -DLT/SHLCPLGIV. Подобные стабильные вариации аминокислот могут обуславливать различия в свойствах белков, в том числе специфичность связывания пигментов, возможно оказывающую существенное влияние на фотохимическую активность. Однако поиск и анализ влияния таких замен на фотохимические свойства требует дополнительных исследований.
Таким образом, в данном исследовании мы обнаружили у белков семейства WSCP ранее не описанную в литературе фотохимическую активность, проявляющуюся в фотокатализе окисления донора электронов NADH. Ранее, на основании особенностей строения ПБК данных белков, где молекулы Хл изолированы белковым матриксом от среды, предполагалось выполнение ими фотопротекторной функции [9], однако, полученные нами результаты указывают на возможность выполнения данными белками также
и иных функций в растениях. Биоинформатический анализ показал, что BoWSCP и LvWSCP, ранее отнесённые к разным подклассам IIa и IIb на основании своих физико-химических свойств, имеют разную филогенетическую принадлежность и проявляют различия в первичной структуре, которые, судя по полученным результатам, причём эти различия коррелируют с их фотохимической активностью. На основе филогенетического разделения и сходства аминокислотной последовательности, экстраполируя данные о фотохимической активности белков BoWSCP и LvWSCP, можно сделать предположение о присутствии у белков WSCP подкласса IIb фотохимической активности, сравнимой с LvWSCP. При этом только у части белков из ветви WSCP подкласса IIa, проявляющих высокую гомологию первичной структуры, можно ожидать проявления фотохимической активности, сравнимой с таковой у BoWSCP. У остальных же членов данной ветви, могла происходить редукция или даже утрата способности связывать хлорофилл, что сопровождалось развитием другой, более приоритетной для них функции в качестве ингибиторов протеаз.
Благодарности
Коллектив выражает благодарность Prof. Hiroyuki Satoh, Toho University, Japan, а также Dr. Mara Werwie и Prof. Dr. Harald Paulsen, The Johannes
Gutenberg University Mainz, Germany за предоставление векторов со встроенными последовательностями генов белков WSCP.
Литература
1.Малеева Ю.В., Неверов К.В., Обухов Ю.Н., и др. Водорастворимые хлорофиллсвязывающие белки растений: структура, свойства и функции. // Молекулярная биология. 2019. Т.53. №.6. С.998-1011. [Maleeva Y V, Neverov K V, Obukhov Y N, et al. Water Soluble Chlorophyll-Binding Proteins of Plants: Structure, Properties and Functions. Molekulyarnaya Biologiya. 2019;53(6):998-1011. (In Russ.)] https://doi.org/10.1134/S0026898419060120
2. Hirabayashi H, Amakawa M, Kamimura Y, et al. Analysis of photooxidized pigments in water-soluble chlorophyll protein complex isolated from Chenopodium album. J. Photochem. Photobiol. A. 2006;183(1-2):121-125.
https://doi.org/10.1016/jjphotochem.2006.03.003
3.Satoh H, Uchida A, Nakayama K, et al. Water-soluble chlorophyll protein in Brassicaceae plants is a stress-induced chlorophyll-binding protein. Plant Cell Physiol. 2001;42(9):906-911.
https://doi.org/10.1093/pcp/pce117
4.Takahashi S, Yanai H, Oka-Takayama Y, et al. Molecular cloning, characterization and analysis of the intracellular localization of a water-soluble chlorophyll-binding protein (WSCP) from Virginia pepperweed (Lepidium virginicum), a unique WSCP that preferentially binds chlorophyll b in vitro. Planta. 2013;238(6):1065-1080. https://doi.org/10.1007/s00425-013-1952-7
5.Rustgi S, Boex-Fontvieille E, Reinbothe C, et al. Serpin1 and WSCP differentially regulate the activity of the cysteine protease RD21 during plant development in Arabidopsis thaliana. Proc. Natl. Acad.
УДК 69.05:658.3:331.4 ГРНТИ 34.39.19
Sci. U. S. A. 2017;114(9):2212-2217. https://doi.org/10.1073/pnas.1621496114
6.Horigome D, Satoh H, Itoh N, et al. Structural mechanism and photoprotective function of water-soluble chlorophyll-binding protein. J. Biol. Chem. 2007;282(9):6525-6531. https://doi.org/10.1074/jbc.M609458200
7.Bednarczyk D, Dym O, Prabahar V et al. Fine tuning of chlorophyll spectra by protein-induced ring deformation. Angew. Chem., Int. Ed. Engl. 2016;55(24):6901-6905. https://doi.org/10.1002/anie.201512001
8.Palm D M, Agostini A, Tenzer S, et al. Water-soluble chlorophyll protein (WSCP) stably binds two or four chlorophylls. Biochemistry. 2017;56(12):1726-1736. https://doi.org/10.1021/acs.biochem.7b00075
9.Takahashi S, Yanai H, Nakamaru Y, et al. Molecular cloning, characterization and analysis of the intracellular localization of a water-soluble Chl-binding protein from Brussels sprouts (Brassica oleracea var. gemmifera). Plant Cell Physiol. 2012;53(5):879-891. https://doi.org/10.1093/pcp/pcs031
10.Schmidt K, Fufezan C, Krieger-Liszkay A, et al. Recombinant water-soluble chlorophyll protein from Brassica oleracea var. Botrys binds various chlorophyll
derivatives. Biochemistry. 2003;42(24):7427-7433. https://doi.org/10.1021/bi034207r
11.Charlton A, Zachariou M. Immobilized metal ion affinity chromatography of histidine-tagged fusion proteins. In Affinity Chromatography. Humana Press. 2008;137-150. https://doi.org/10.1007/978-1-59745-582-4_10
12.Bradford M M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. 1976;72(1-2):248-254. https://doi.org/10.1016/0003-2697(76)90527-3
_ИССЛЕДОВАНИЕ УРОВНЯ СЛУХА У РАЗНОВОЗРАСТНЫХ ГРУПП ЛЮДЕЙ_
РР!: Ш.3Ш8^Ц.2413-9335.2020.3ЖШ9 Чумачева Надежда Михайловна
кандидат биологических наук, доцент НГАСУ (Сибстрин),
г. Новосибирск Степаненко Екатерина Владимировна студентка 3-го курса НГАСУ (Сибстрин),
г. Новосибирск Смагулова Майра Бауыржановна студентка 3-го курса НГАСУ (Сибстрин),
г. Новосибирск
АННОТАЦИЯ
Цель: исследовать уровень слуховой чувствительности у разновозрастных групп людей с нормальным слухом и патологией.
Методы: представлены результаты эксперимента в виде измерения слуха с помощью аудиометра у людей разных возрастных категорий и социологического опроса.
Результаты: у 66% опрошенных не выявлены явные отклонения слуха, у 16% уровень слуха составляет 75-85% от нормы, у 18% уровень слуха - 60-70% от нормы.
Вывод: ухудшение слуха обусловлено тем, что многие из опрошенных живут в местах с повышенным уровнем звукового давления (недалеко от аэропорта, железнодорожного вокзала, или же подвергались
