Исследование факторов свертывания внешнего, внутреннего и общего механизмов коагуляционного гемостаза при лабильной артериальной гипертензии у детей

Гомелля Марина Владимировна; Долгих Владимир Валентинович; Филиппов Евгений Семёнович; Рычкова Любовь Владимировна

ИССЛЕДОВАНИЕ ФАКТОРОВ СВЕРТЫВАНИЯ ВНЕШНЕГО, ВНУТРЕННЕГО И ОБЩЕГО МЕХАНИЗМОВ КОАГУЛЯЦИОННОГО ГЕМОСТАЗА ПРИ ЛАБИЛЬНОЙ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ У ДЕТЕЙ

Марина Владимировна Гомелля1, Владимир Валентинович Долгих2, Евгений Семёнович Филиппов1,

Любовь Владимировна Рычкова2 ('Иркутский государственный медицинский университет, ректор - д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра педиатрии ФПК и ППС, зав. - д.м.н., проф. Е.С. Филиппов; 2Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека Сибирского отделения РАМН, г. Иркутск, директор - д.м.н., чл.-корр. РАМН Л.И. Колесникова, клиника НЦ ПЗС и РЧ СО РАМН, гл. врач - д.м.н., проф. В.В. Долгих)

Резюме. При исследовании выявлено достоверное увеличение активности факторов свертывания внутреннего (VIII, IX, XI) и общего (X) путей коагуляционного гемостаза, снижение фактора XII, а также увеличение активности и содержания фактора Виллебранда при лабильной артериальной гипертензией у детей, что свидетельствует о ги-перкоагуляционной направленности гемостаза. Увеличение активности факторов VIII наблюдалось у 29,3%, IX - у 2,4%, XI - у 14,6%, X - у 12,2%, снижение XII - у 12,2%, увеличение активности и содержания фактора Виллебранда

- у 19,5% детей, больных с лабильной артериальной гипертензией.

Ключевые слова: факторы свертывания, коагуляционный гемостаз, артериальная гипертензия.

INVESTIGATION OF COAGULATION FACTORS OF EXTERNAL, INTERNAL AND GENERAL MECHANISMS OF COAGULATIVE HEMOSTASIS IN UNSTABLE ARTERIAL HYPERTENSION IN CHILDREN

M.V. Gomellya1, V.V.Dolgikh2, E.S. Filippov1, L.V. Richkova2 (Irkutsk State Medical University; Scientific Center of Family Health Problems and Human Reproduction,

The Siberian Department of the Russian Academy of Medical Sciences, Irkutsk)

Summary. This article presents the results of the study of coagulation factors of (F) external, internal and general mechanisms of coagulation hemostasis in children with unstable arterial hypertension. The study showed reliable increase in activity of FVIII, IX, X, XI, reduction of FXII, as well as increased activity and content of factor of Willebrand in unstable arterial hypertension in children, that shows giperkoagulative hemostasis. FVIII activity was observed in 29,3%, IX - 2,4% X - 12,2%, XI - 14,6%, decrease of FXII was observed in 12,2% of children, an increase of activity and content of factor of Willebrand was observed in 19,5% of children with unstable arterial hypertension.

Key words: coagulation factor, coagulation hemostasis, arterial hypertension.____________________

Согласно современным представлениям, нарушения системы гемостаза играют важную роль в развитии осложнений при артериальной гипертензии (АГ) [1-4,6,7]. В ряде работ обсуждается значение тромбоцитарно-фибриновых микротромбов в патогенезе развития нарушений органов-мишеней, нарушении мозгового кровообращения, инфаркта миокарда [5,8]. Известно, что ключевые этапы тромбообразова-ния связаны с факторами свертывания (Ф) VIII, IX, X, XI, XII, VII, II, V [7]. К сожалению, встречаются единичные публикации, посвященные исследованию гемостаза при АГ у детей. Частота встречаемости АГ среди детей и подростков - 4,8-18,0% [2]. В связи с этим целью наших исследований было изучение частоты и уровня изменений активности Ф свертывания внешнего (VII), внутреннего (VIII, IX, XI, XII) и общего (X, V, II) механизмов плазменного гемостаза, а также фактора Виллебранда (ФВ) у детей при лабильной АГ (ЛАГ).

Материалы и методы

На базе клиники НЦ ПЗС и РЧ СО РАМН обследовано 205 детей в возрасте от 9 до 17 лет, из них 170 детей с эссенциальной АГ (ЭАГ) и 35 - практически здоровых детей. Из числа 170 детей с ЭАГ у 80 была ЛАГ. У детей с ЛАГ в 41 (51,2%) случае выявлены про-тромботические нарушения гемостаза на основании проведения комплексного исследования сосудисто-тромбоцитарного и плазменного гемостаза (1 группа). Контрольную группу составили 35 практически здоровых детей (2 группа). У всех детей впервые исследовали активность ФVII, VIII, IX, XI, XII, X, V, II методом коррекции активированного парциального тромбопла-стинового времени на дефицитной по фактору плазме с основными реагентами фирмы Roche. Нормы активности Ф свертывания: VIII - 60-150%, IX - 60-150%, X

- 70-120%, XI - 60-140%, XII - 60-140%, VII - 60-150%, II - 70-120%, V - 70-120%. Также исследовали активность и содержание ФВ. Исследование активности ФВ

(ристоцетин-кофакторной активности) проводили на формалинизированных тромбоцитах по методу Born на агрегометре «PACKS-4» Helen Laboratories. Содержание антигена ФВ исследовали при помощи латексного набора на коагулометре STA-R Evolution (Roche Diagnostics). В норме активность ФВ - 60-150%, содержание ФВ -60-150%. Исследования проводили на автоматическом коагулометре ACL-200 (Instrumentation Laboratory) на базе лаборатории гематологии Иркутского областного консультативно-диагностического центра.

Сравнение результатов проводили по формулам математической статистики. В описании представлены средние значения результатов исследования в группах (М) и значения стандартной ошибки (m). Статистическая обработка данных осуществлялась на персональном компьютере с помощью электронных таблиц Excel с помощью пакета прикладных программ «Statistica for Windous» версии 6,0 (StatSoft, США). Для установления значимого различия использовался непараметрический критерий Крамера-Уэлча, различия считали статистически значимыми при р<0,05.

Результаты и обсуждение

При исследовании показателей активностей коагуляционных Ф было установлено, что у 12 (29,3%) детей при ЛАГ активность ФVIII была увеличена и отличалась от аналогичного показателя контрольной группы на 28,2% (р<0,01) (табл. 1). При этом увеличение активности ФVIII более 150,0% было обнаружено у 1 ребенка (8,3%). В контрольной группе изменений активности ФVIII выявлено не было. Таким образом, у 29,3% детей при ЛАГ была выявлена скрытая гиперкоагуляция, характеризующаяся повышением активности ФVIII.

На основе полученных результатов, а также литературных данных о том, что повышение ФVIII является тромбофилическим состоянием, можно предположить о наличии патогенетической связи между гиперпродукцией ФVIII и тромботическими осложнениями при

ЭАГ. У детей с АГ выявленные нарушения, возможно, являются фоном (тем более, что при АГ имеется травма сосудистого эндотелия, что закономерно снижает его атромбогенные свойства) или даже пусковым механизмом развития предтромботических нарушений при АГ.

У 1 (2,4%) ребенка при ЛАГ активность Ф1Х была увеличена (более 150,0%) и отличалась от аналогичного показателя контрольной группы на 114,0% (р<0,001). В контрольной группе изменений активности Ф1Х выявлено не было (табл. 1).

При исследовании ФХ1 было выявлено, что у 6 (14,6%) детей при ЛАГ активность данного фактора была увеличена (более 140,0%) и отличалась от аналогичного показателя контрольной группы на 55,0% (р<0,001). В контрольной группе изменений активности ФХ1 выявлено не было (табл. 1). Из числа этих 6 больных уровень активности ФХ1 был в пределах от 145,0 до 160,0% у 4 (66,7%) больных, у 2 (33,3%) больных - 170,0-180,0%. Выявленные изменения указывают на то, что у 14,6% детей при ЛАГ имеется скрытая гиперкоагуляция, характеризующаяся повышением активности ФХ1.

Известно, что ФУШ, 1Х, Х1 участвуют во внутреннем механизме свертывания крови.

Активация свертывания по внутреннему пути происходит вследствие контакта крови с субэндотелием (коллагеном), что наблюдается при повреждении стенок кровеносных сосудов. Следовательно, можно предположить, что гиперкоагуляционная направленность в плазменной системе свертывания крови по внутреннему пути, выявленная в наших исследованиях, может быть следствием гемодинамической травмы стенок кровеносных сосудов при ЛАГ у детей.

При изучении активности ФХ11 было установлено, что у 5 (12,2%) детей активность исследуемого фактора была снижена (менее 50,0%). В среднем активность ФХ11 была меньше контрольных величин на 64,3% (р<0,001) (табл. 1). В контрольной группе изменений активности ФХ11 выявлено не было. Из числа этих 5 больных уровень активности ФХ11 был в пределах от 50,0 до 40,0% у 3 (60,0%) больных, у 2 (40,0%) больных - 35,0-30,0%.

Известно, что недостаток ФХ11 характеризуется вероятностью тромботических осложнений, главным образом из-за снижения фибринолитической активности плазмы, так как ФХ11 является активатором фибри-нолиза. Следовательно, снижение активности ФХ11 у 12,2% детей при ЛАГ может способствовать развитию и прогрессированию тромботических осложнений.

Также наблюдалось изменение активности ФХ (более 120,0%) на 41,8% по сравнению с аналогичным показателем контрольной группы (р<0,001) (табл. 1). В контрольной группе изменений активности ФХ не выявлено. Увеличение активности ФХ было выявлено у 5 (12,2%) детей при ЛАГ. При этом, из числа 5 больных с увеличенным уровнем активности ФХ, исследуемый фактор был в пределах от 130,0 до 140,0% у 5 (100,0%) больных.

Так как, на ФХ факторе замыкаются оба механизма свертывания, то увеличение его активности, вероятно, связано с выявленными нами изменениями активности

ФУШ, 1Х, Х1 при ЛАГ у детей.

Изменений активности ФУ11 (внешнего механизма), У и II (общего механизма) коагуляционного гемостаза у детей при ЛАГ не было выявлено.

Как известно, процесс коагуляции по внешнему (тканевому) пути происходит при контакте крови с поврежденными клетками, которые высвобождают тканевой тромбопластин. Кроме этого, ФУ11 активируется фактором Х11, а активный ФУ11 ускоряет активацию фактора 1Х. Таким образом, можно предположить, что отсутствие изменений активности ФУ11 может быть обусловлено выявленным в наших ис-следованиях снижением активности ФХ11 при ЛАГ у детей.

При исследовании ФВ было установлено, что у 8 (19,5%) детей при ЛАГ отмечалось повышение активности на 37,8% (р<0,01) и содержания ФВ на 71,2% (более 150,0%) по сравнению с группой контроля (р<0,001) (табл. 2). В контрольной группе изменений активности

и содержания ФВ не выявлено. Из числа этих 8 больных уровень активности ФВ был в диапазоне от 150,0 до 160,0% у 5 (62,5%) больных, у 3 (37,5%) больных - в пределах 165,0-195,0%, а уровень содержания ФВ был в пределах от 150,0 до 160,0% у 4 (50,0%) больных, у 3 (37,5%) больных - в пределах 165,0-195,0%, а у 1 (12,5%) больного - 210,0-220,0%.

Известно, что повышение активности и содержания ФВ является тромбофилическим состоянием. Кроме этого, ФВ является маркером поражения эндотелия (эндотелиальной дисфункции). Повышение активности и содержания ФВ у 19,5% детей при ЛАГ может свидетельствовать о наличии скрытой гиперкоагуляции и повреждении сосудистого эндотелия.

Выявленные предтромботические нарушения при ЛАГ у детей требуют исключения наследственных тром-бофилий с проведением генетических исследований.

Таким образом, было установлено, что у детей с ЛАГ имеется скрытая гиперкоагуляционная направленность, характеризующаяся увеличением активности Ф свертывания внутреннего (VIII, 1Х, Х1) и общего (Х) путей коагуляционного гемостаза, снижением ФХП, а также увеличением активности и содержания ФВ. Несмотря на отсутствие у больных клинически значимых тромбозов, гиперкоагуляционная направленность гемостаза, по нашему мнению, является потенциально опасной, создавая реальные предпосылки для возникновения тромботических осложнений (особенно при инвазивных методах лечения и обследования). В этой связи детям с ЛАГ необходим контроль за состоянием системы гемостаза, а также коррекция сдвигов в системе свертывания крови.

Таблица 1

Изменение показателей факторов свертывания крови у детей при ЛАГ

Группы исследования р Показатели факторов свертывания (%)

VII VIII IX XI XII X V II

1 группа (п=41) - 121,5+3,6 200,0+3,8 172,0+3,7 38,0+3,2 131,0+3,2 - -

2 (контр. группа) (п=35) 99,9+3,5 93,3+3,6 86,0+3,8 117,0+2,9 102,3+3,4 89,2+3,9 89,5±3,9 110,5+3,2

р,-2 - <0,01 <0,001 <0,001 <0,001 <0,001 - -

Таблица 2

Изменение показателей фактора Виллебранда у детей при ЛАГ

Группы исследования Р Показатели фактора Виллебранда (%)

Активность фактора Виллебранда Содержание фактора Виллебранда

1 группа (п=41) 139,6+2,3 176,8+2,1

2 (контр. группа) (п=35) 101,8+4,6 105,6+4,5

Р,-2 <0,01 <0,001

ЛИТЕРАТУРА

1. Бугун О.В. Клинико-патогенетические варианты артериальной гипертензии у детей и подростков и обоснование рациональной терапии и реабилитационных программ: Дисс. ... д-ра мед. наук. - Иркутск, 2008. - 412 с.

2. ДолгихВ.В., КолесниковаЛ.И. Патогенез эссенциальной артериальной гипертензии у детей. - Иркутск: Изд-во ВСНЦ СО РАМН, 1999. - 220 с.

3. Подчерняева Н. Тромбоз в педиатрической практике. // Врач.- 2006. - №9. - С.20-23.

4. Чупрова А.В., Хозяинова Ж.В., Соловьев О.Н., Яхонтов Д.А. Состояние системы свертывания крови при артериальной гипертензии у детей // Педиатрия. - 1998. - №6. - С.48-52.

5. Кг$кт А., Tombuloglu М., Виуиккгсга Б ИЬипо1Шс

activity and platelet release reaction in essential hypertension // Jpn Heart J. - 1994. - Vol. 35. №6. - P.757-763.

6. Kjeldsen S.E., Julius S., Hender T., et al. Stroke is more common than myocardial infarction in hypertension analysis based on 11 major randomized intervention trials // Blood Press. - 2001. - Vol. 10. - P.190-192.

7. Salomaa V., Rasi V., Kulantinal S., et al. Haemostatic factors a predictors of coronary events and total mortality // Arteriosclerosis, Thrombosis Vascular Bioligy. - 2002. - Vol. 22. №2. - P.353-358.

8. Spenser C.G.C., Gurney D., Blann A.D., et al. Platelet and haemoreological markers in high risk hypertensives are improved by tighter blood pressure control and factor modification // Clinical Sciens. - 2000. - Vol. 9. №2. - P. 17.

Информация об авторах: e-mail: [email protected], Гомелля Марина Владимировна - к.м.н., ассистент; Долгих Владимир Валентинович - заместитель директора по науке, главный врач клиники, д.м.н., профессор; Филиппов Евгений Семёнович - заведующий кафедрой, д.м.н., профессор; Рычкова Любовь Владимировна -заведующая отделом экологической педиатрии, д.м.н.

РОЛЬ ИММУНОРЕГУЛЯТОРНЫХ ЦИТОКИНОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ ХРОНИЧЕСКОГО ГАСТРИТА И ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ, ПОИСК ПРЕДИКТОРОВ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Ольга Владимировна Штыгашева, Елизавета Сергеевна Агеева, Виктор Михайлович Иптышев (Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова, г. Абакан, ректор - д.м.н. О.В. Штыгашева, кафедра внутренних болезней, зав. - д.м.н. О.В. Штыгашева, кафедра фундаментальной медицины и гигиены,

зав. - к.м.н. Е.С. Агеева)

Резюме. Определены уровни IL-2 и IL-б в сыворотке крови у коренных жителей Республики Хакасия, больных язвенной болезнью и хроническим гастритом, ассоциированных с Helicobacter pylori. Изучено распределение генотипов полиморфных локусов генов -330 T/G IL-2, -174 G>C IL-б. Генотипирование проводили методом полимеразной цепной реакции с использованием рестрикционного анализа. Обсуждается целесообразность определения популяционных рисковых и протективных генотипов развития Helicobacter pylori-ассоциированных заболеваний у хакасов.

Ключевые слова: полиморфизм генов, иммунный ответ, Helicobacter pylori, язвенная болезнь, хакасы

THE ROLE OF IMMUNOREGULATORY CYTOKINES IN PATHOGENESIS OF CHRONIC GASTRITIS AND PEPTIC ULCER, SEARCH FOR DISEASE PREDICTORS

O.V Shtygasheva, E.S. Ageeva, V.M. Iptyshev (State University of Khakasia named after N.F. Katanov, Abakan)

Summary. The IL-2 and IL-б levels have been defined in the blood serum of patients with peptic ulcer and chronic gastritis associated with Helicobacter pylori. Distribution of genotypes of polymorphous genes locus -330 T/G IL-2, -174 G>C IL-б has been studied. All patients are aboriginal inhabitants of the Republic Khakasia. Analysis of genes polymorphism was performed using PCR and RFLP methods. The expediency of population risk and protective genotypes determination in Khakas patients with Helicobacter pylori has been discussed.

Key words: gene polymorphism, immune response, Helicobacter pylori, peptic ulcer, Khakas.

Известно, что способность давать адекватный иммунный ответ является отражением генетической структуры макроорганизма [8]. Наиболее распространенным вариантом наследственной предрасположенности является сочетание у индивида аллелей генов, совокупный эффект которых определяет особенности иммунитета, повышающих риск развития инфекционных заболеваний [3,7]. Различные исследования конкретных аллельных вариантов, ассоциированных с той или иной формой заболевания, противоречат друг другу. Возможным объяснением этому является наличие популяционно-зависимых ассоциаций между аллелями генов и особенностями клинических проявлений [9,11].

Интерлейкины являются неотъемлемыми участниками иммунных реакций. В частности, функции Ш2 заключаются в направленной дифференцировке и пролиферации ТЦ-лимфоцитов, стимуляции №К-клеток. В литературе обсуждается участие Ш2 в Н. ру1оп'-индуцированном иммунном ответе, в связи с тем, что данный цитокин является фактором, приводящим к атрофии и ингибированию желудочной секреции.

Синтез IL-2 особенно активен у больных с преобладанием эрозивно-язвенных изменений слизистой [4].

Другим иммунорегуляторным цитокином, ключевым медиатором ’Й2-пути, является IL-6 [13]. IL-6 способствует переключению синтеза IgM на IgG, являясь фактором дифференцировки В-клеток [12]. Имеет большое значение в инициации опухолевого роста [10]. Вырабатывается в ответ на антигенную стимуляцию H. pylori, максимальная секреция IL-6 эпителиоцитами желудка достигается через 12 ч.

Целью работы является анализ ассоциаций хронического гастрита и язвенной болезни с полиморфизмом генов иммунорегуляторных цитокинов -330 T/G IL-2 и -174 G>C IL-6 у больных с H. pylori персистенцией, коренных жителей Республики Хакасия.

Материалы и методы

Объект исследования - больные язвенной болезнью (n=21) и хроническим гастритом (n=34), хакасов (монголоиды, коренные жители Республики Хакасия). Средний возраст - 42,9 лет. Группу контроля составили

Investigation of coagulation factors of external, internal and general mechanisms of coagulative hemostasis in unstable arterial hypertension in children