CC BY
86
СИБИРСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ № 32008 (выпуск 2)
ЛАБОРАТОРНЫЕ И
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ
ИССЛЕДОВАНИЯ
УДК 616-036.12 Е.А. Леонтьев
E-mail: [email protected]
ИССЛЕДОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ГИРУДОТЕРАПИИ ПО РЕЗУЛЬТАТАМ АУТОДЕРМОПЛАСТИКИ У ЖИВОТНЫХ С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ
МУЗ «Городская клиническая больница №1», г. Чебоксары
Большая социальная значимость сахарного диабета (СД) состоит в том, что он приводит к ранней инвалидизации. Риск развития ишемической болезни сердца и инфаркта миокарда увеличивается в 2 раза, патологии почек - в 17 раз, гангрены нижних конечностей - в 20 раз [1]. Сравнительный анализ частоты ампутаций показал, что ампутации нижних конечностей у больных СД проводятся в 17-45 раз чаще, чем у лиц, не страдающих диабетом. Однако частота поражений периферических артерий у пациентов с СД встречается лишь в 4 раза чаще [1, 2, 8, 9, 11]. Развитие гнойно-некротического процесса на фоне диабетической стопы более чем в 50-75% случаев приводит к нетравматическим ампутациям [1]. Эпидемиологические исследования показали, что 6-30% больных СД после первой ампутации подвергаются ампутации второй конечности в течение 1-3 лет, через 5 лет - 28-51% [1]. Все приведенные данные свидетельствуют о нерешенности этой проблемы и целесообразности дальнейшей разработки новых тактических подходов к лечению этой категории больных для снижения частоты инвали-дизации и летальности. СД не только значительно ухудшает качество жизни больного, но и является важным патогенетическим звеном формирования синдрома диабетической стопы (СДС) [1, 8, 11]. Для успешного лечения гнойно-некротических осложнений СДС недостаточно воздействовать на какой-либо один патогенетический механизм [2, 9]. Необ-32
ходим комплексный подход. При этом назначение большого количества лекарственных средств зачастую приводит к полипрагмазии. В связи с этим актуален поиск новых эффективных методов, позволяющих без существенной медикаментозной нагрузки воздействовать на возможно большее число патогенетических звеньев формирования СДС. Есть основания считать, что к числу таких методов относится гирудотерапия [4, 5, 7, 10]. Его биологические эффекты патогенетически адекватны практически всем механизмам развития СДС [4, 5].
Целью работы явилось исследование влияния ги-рудотерапии на результаты аутодермопластики у животных с экспериментальным сахарным диабетом.
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
Для проведения эксперимента были использованы 40 белых беспородных крыс-самцов. В ходе эксперимента животные были разделены на 2 группы (группы сравнения и эксперимента). Животным произведено моделирование экспериментального сахарного диабета по методике Кулешова Е.В. На 21-е сутки всем животным проведена операция. Техника операции была одинаковой во всех группах. Под эфирным наркозом в области спины параллельно продольной оси тела лезвием бритвы снимали свободный расщепленный кожный лоскут в виде ост-ровковой пластинки (1 см2) толщиной 0,3-0,4 мм с последующей аутодермопластикой. После биопсии рана не ушивалась и рассматривалась как открыто инфицированная. После операции 0,2 %-ная мазь на основе «Пиявита» вводилась в состав лечебных повязок у животных группы исследования [3, 6, 7]. У животных группы сравнения мазь «Пиявит» заменена на 1%-ную фурациллиновую мазь. Начиная со 3-го дня после введения аллоксана, животным групп сравнения и эксперимента ежедневно вводился инсулин 3-4 ед. п/к. При наличии признаков дегидратации и кетоацидоза (вялость животного, неактивное поведение, суженная глазная щель, резко положительная реакция на кетоны в моче) доза инсулина увеличивалась до 5-7 ед. п/к. Содержание глюкозы в сыворотке крови измеряли дважды - перед нанесением раны и в день забоя с использованием одноразового набора реактивов «Глюкоза-Ольвекс». Забор крови для исследования производили из кончика хвоста. Содержание глюкозы и кетонов в моче определяли с помощью тест-полосок «ИГ-индикатор глюкозы». Забор крови для исследования производили из кончика хвоста перед нанесением раны и на 3-и, 7-е и 14-е сутки после нанесения раны. Материал для гистологического исследования был взят на 4, 7, 14, 21, 28-е сутки после аутодермотрансплантации с фиксацией в 12%-ном растворе формалина и последующей заливкой парафином. Серийные депарафинированные срезы толщиной 7-8 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван-Гизон и орсеином. Гистологические препараты изучали на
Е.А. Леонтьев
ГИРУДОТЕРАПИЯ В ЛЕЧЕНИИ САХАРНОГО ДИАБЕТА
Цейсовском микроскопе «Standart 25». Полученные биоптаты ран фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина, обезвоживали, обезжиривали и заливали в парафин по стандартной методике. Депарафинированные гистологические срезы окрашивали гематоксилином-эозином с использованием стандартных рецептурных прописей. Для измерения площади раны на цифровую фотография раны между статичными ориентирами накладывали шкалу с последующей компьютерной обработкой данных.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
На 4-е сутки в аутотрансплантате у животных группы сравнения в отдельных местах наблюдался распад эпидермиса и отслойка его с сохранением лишь базального слоя. Сосочковые и сетчатые слоя дермы инфильтрированы лейкоцитами, имеется множество небольших кровоизлияний. Капилляры полнокровны, расширены, с явлениями стаза. Волосяные фолликулы атрофированы. В сетчатом слое дермы лейкоцитарная реакция выражена умеренно. В пограничной с трансплантатом области определялись небольшие кровоизлияния в состоянии резорбции и лизиса. При воздействии мази «Пиявит» ткань ауто-трансплантата отличалась лучшей сохранностью эпидермиса и развитостью микроциркуляторного русла. Лейкоцитарная инфильтрация была значительно менее выражена. Ткань трансплантата была вполне жизнеспособной и содержала в себе все составные части. В сосочковом слое дермы преобладали клеточные элементы и большое количество капилляров. Жировая ткань подкожной клетчатки имела обычное строение. Пограничная ткань кожи реципиента была изменена и имела неравномерную толщину. За счет отслойки блестящий слой и слой роговых чешуек часто отсутствовал. Поперечно-полосатая мышечная ткань была с реактивными изменениями в виде отека волокон. На 7-е сутки у животных группы сравнения в области аутотрансплантата в эпидермисе определялись участки некроза. Сосочковые и сетчатые слоя дермы инфильтрированы лейкоцитами, множество небольших кровоизлияний, периваскулярная лейкоцитарная инфильтрация. Поперечно-полосатая мышечная ткань была с реактивными изменениями в виде умеренного межуточного отека волокон. При воздействии мази «Пиявит» к 7-м суткам отмечалась лучшая сохранность эпидермиса, меньшая степень выраженности воспалительных изменений, в том числе лейкоцитарной инфильтрации, определялись более развитые элементы микроциркуляторного русла и более крупные сосуды во всех слоях дермы и подкожной клетчатки, соединительная ткань. Эпидермис на границе с тканью реципиента был хорошо развитым. На 14-е сутки в группе животных в области центральной части ауто-трансплантата отмечался участок гомогенной ткани, являющийся, по-видимому, результатом отслойки и некроза эпидермиса. При воздействии мази «Пиявит» в области трансплантата к 14-м суткам эпидермис в
основном сохранялся. В отличие от группы сравнения следует отметить отсутствие выраженных воспалительных изменений, представленных лишь пограничной лейкоцитарной инфильтрацией, активное развитие элементов микроциркуляторного русла и сохранность более крупных сосудов, а также активную регенерацию эпидермиса. В сосочковом слое дермы определялось множество капилляров, некоторые из них были расширенными, с явлениями стаза и бывшими кровоизлияниями в виде организующегося фибринового сгустка. Поперечно-полосатая мышечная ткань сохраняла признаки жизнеспособности. На 21-е сутки у животных группы сравнения в области послеоперационного поля эпидермис полностью отсутствовал, отмечались очаговые и диффузные лейкоцитарные инфильтраты. Инфильтрат состоял из лимфоцитов, плазматических клеток, макрофагов (в том числе и многоядерных), периваскулярных инфильтратов, участков распада и лизиса. Корни волос были с различными проявлениями разрушения, дистрофии. Лейкоцитарные инфильтраты в сетчатом слое дермы и клетчатке пронизывали трансплантат на значительном расстоянии, вплоть до мышечной ткани. При воздействии мази «Пиявит» на 21-е сутки после операции на большей части поверхности трансплантата многослойный плоский неорого-вевающий эпителий был сохранен. Непосредственно в области контакта ткани реципиента и трансплантата отмечались гемодинамические расстройства в виде кровоизлияний и периваскулярных инфильтратов. Нарушений микроциркуляции зарегистрировано не было. В центре трансплантата дефект был заполнен грануляционной тканью. Ткань была обильно ва-скуляризирована. Была выявлена меньшая степень выраженности деструктивных и воспалительных изменений в тканях. Наблюдались хорошая регенерация и жизнеспособность эпидермиса. После воздействия мази «Пиявит» на 28-е сутки почти вся раневая поверхность была покрыта эпидермисом. Отдельные участки, лишённые эпителия, активно регенерировались. Местами эпителий, сначала состоящий из одного слоя уплощенных эпителиальных клеток, становился многослойным и приобретал все типичные для нормального эпидермиса слои. Сосочковый и сетчатый слои состояли в основном из пучков коллагеновых волокон. Ткань была очень хорошо васкуляризиро-вана капиллярами, артериолами, венулами, венами. Лейкоцитарные инфильтраты вокруг сосудов были крайне редки. Образовывались новые многочисленные волосяные фолликулы. Жировые клетки, богатые сосудами, встречались островками. В прилежащих к месту трансплантации участках эпидермис и дерма имели обычное строение.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Представленные данные демонстрируют, что ги-рудотерапия даёт выраженный и быстрый клинический эффект. Мазь «Пиявит» снижает выраженность воспалительной реакции, ускоряет начало
ЛАБОРАТОРНЫЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
контракции раны. К особенностям положительного влияния мази «Пиявит» следует отнести активную регенерацию эпидермиса, меньшую выраженность структурных изменений кожи, воспалительной реакции (слабая диффузная и очаговая лейкоцитарная инфильтрация), более активное развитие элементов микроциркуляторного русла.
ЛИТЕРАТУРА
1. Дедов И. И. и др. Диабетическая стопа. - М.: Практическая медицина, 2005. - 197 с.
2. Дедов И. И. и др. Экономические проблемы сахарного диабета в России // Сахарный диабет. - 2000. - № 3. -С. 56-58.
3. Инструкция по медицинскому применению препарата Пиявит® мазь для наружного применения 0,2%. Научно-внедренческая фирма «Гируд И.Н.» лицензия № 009941 Министерства здравоохранения РФ.
4. Исаханян Г.С. // Пути реализации лечебного эффекта.// ГИРУД0-2003. - 2003. - С. 21-22.
5. Каменев Ю.А. // Пиявки (гирудотерапия). - 2-е изд. -С-П., 2003. - 104 с.
6. Крашенюк С.В. и др. // Российское агентство по патентам и товарным знакам. Приоритет от 14.03.1996, зарегистрировано в Государственном реестре изобретений РФ 20.01.2000. (Доступен по URL http://www.fips.ru).
7. Пат. 2144698 Россия. Способ моделирования влияния медицинской пиявки на стимуляцию роста нервных волокон в культуре ткани / Крашенюк А.И., Крашенюк С.В., Чалисова Н.И. // Российское агентство по патентам и товарным знакам. Приоритет от 14.03.1996, зарегистрировано в Государственном реестре изобретений РФ 20.01.2000. (Доступен по URL http://www.fips.ru).
8. Прихожан В. М. Поражение нервной системы при сахарном диабете (Основы нейродиабетологии) / АМН СССР - 2-е изд., перераб. и доп.- М.: Медицина, 1981. - 88 с.
9. Смирнова В. Ю. Дистальная диабетическая нейропатия: (Патогенез, диагностика, лечение): Автореф. дис. ... канд. мед. наук. - М., 1997.
10. Фисталь Э.Я. и др. Гирудотерапия в комплексном лечении острых флеботромбозов и их последствий у обожжённых. // Вестник неотложной и восстановительной медицины. - 2002. - Том 3, № 1. - С. 42-47.
11. Юшков П. В. Синдром диабетической стопы // Новый медицинский журнал. - 1998. - № 3. - С. 2-6.
STUDYING EFFICACY OF HIRUDOTHERAPY AS ASSESSED BY RESULTS OF AUTODER-MOPLASTY IN EXPERIMENTAL DIABETES MELLITUS ANIMALS
Ye.A. Leontyev
SUMMARY
Comparative assessment was performed on rats aimed at studying influence of «Piyavit» liniment on wounds healing. Gauze bandages which were moistu-red by this liniment were used in preoperative period. The efficacy of the liniment was established which was expressed by decreased terms of preoperative preparation, improved short- and long-term results. The liniment «Piyavit» is demonstrated to decrease cellular infiltration of wounds, accelerates forming granulating tissue which contributes to accelerated healing of wounds as compared to controls.
Key words: diabetes mellitus, neuropathic ulcers, hirudotherapy.
