CC BY
144
УДК 616-093
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ СИСТЕМ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПАРОДОНТА
Е.Д. ОЛЕЙНИК1 Б.В. ТРИФОНОВ1 Е.Г. ДЕНИСОВА3
Белгородский государственный национальный
исследовательский университет
Областная стоматологическая поликлиника, г. Воронеж
e-mail: [email protected]
В статье изложены данные по использованию современных диагностических систем, основанных на 1)МЛ-8Тк1Р технологии, в практической деятельности врача-стоматолога-пародонтолога. Молекулярно-диагностический тест ОепоТуре П.-1 (11А1 N-lircscien.se, Германия) позволяет определить риск развития воспалительных заболеваний пародонта. Другой тест, Мюго-11 )еп1 (НАШ-Мезмепэе, Германия) предназначен для диагностики паро-донтопатогенных штаммов бактерий. Преимущества данных молекулярно-генетических систем состоит в ранней диагностике заболеваний и постоянном мониторинге терапевтического успеха.
Ключевые слова: заболевания пародонта, молекулярногенетические системы, ранняя диагностика, пародонтопатоген-ные микроорганизмы.
В настоящее время основной причиной воспалительных заболеваний пародонта большинство авторов считают нарушение динамического равновесия между патогенными микробами зубного налета и защитными силами пародонта и организма в целом [1, 2].
Большой интерес представляют молекулярно-генетические методы диагностики пародонтопатогенных бактерий в полости рта [2]. Для обеспечения долгосрочного успеха терапия требует целенаправленной ликвидации этих бактерий, чтобы снизить бактериальную нагрузку на ткани пародонта.
Ни у кого не вызывает сомнений, что риск развития пародонтитов генетически детерминирован [3, 4, 5, 6]. При наличии генетического дефекта в иммунной системе происходит перепроизводство главного медиатора воспаления - интерлейкина-1 [4, 5]. Гиперактивация медиатора интерлейкина-i способствует усиленной пролиферации остеокластов и приводит к разрушению костной ткани.
Цель работы - апробирование молекулярно-генетических систем для ранней диагностики воспалительных заболеваний пародонта.
Материал и методы исследования. В работе мы использовали тест-систему Micro-IDent (HAIN-lifesciense, Германия) основанную на принципе обратной гибридизации. Диагностический комплект влючает в себя: стерильные тубы с бумажными штифтами, сопроводительный бланк.
Анализ обратной гибридизации включал денатурацию ампликона ДНК и нанесение полученного образца на нитроцеллюлозную полоску, содержащую специфические зонды 5 пародонтогенов, контрольный зонд для выделенной ДНК и контроль конъюгата. Ампликоны, связавшиеся с комплентарным зондом, визуализировали после добавления конъюгата стрептавидина с щелочной фосфатазой. Результаты считывали по предоставленному шаблону.
Методика исследования: исследуемая зубодесневая бороздка или карман изолируются от слюны, в нее на 20 секунд погружается бумажный штифт, который извлекается и перекладывается в стерильный контейнер и отправляется в лабораторию HAIN-diagnostika. Метод позволяет выявить не сами бактерии (чувствительность метода 5-12 основных пародонтопатогенных бактерий), а определенные «маркерные» последовательности их нуклеиновых кислот.
Благодаря высокой специфичности и чувствительности тест Micro-IDent на выявление пародонтопатогенных бактерий в экссудате пародонтальных карманов позволяет быстро идентифицировать пациентов из групп риска и может дать ценную информацию для выбора эффективного способа антибактериального лечения.
Присутствие медиатора воспаления интерлейкина-i определяли с помощью генетического теста GenoType PST (HATN-lifescience, Германия).
Методика проведения теста. Тест основан на ОКА-ЭТРИР технологии и характеризуется полиморфизмом 1Ь-1А - 889; 1Ь-1В +3953; 1Ь-1 ИЧ +2018. Процедура состоит из трех ступеней: изоляции ДНК, многократной амплификации и обратной гибридизации. Комплект состоит из стерильной тубы с аппликатором, сопроводительного письма. Основой теста является мазок слизистой оболочки полости рта, процедура взятия которого чрезвычайно проста и абсолютна безболезненна.
Заполнялись анкетные данные на пациента, затем стерильным аппликатором в течение 20-30 секунд брали мазок со слизистой оболочки щеки. Аппликатор вносили в стерильную тубу и отправляли в лабораторию фирмы НАШ-Жеваепсе.
Результаты исследования. На первом этапе мы определили риск развития воспалительных заболеваний пародонта и генетическую предрасположенность к ним.
DNA-Nachweis von 5 parodontopathogenen
Аа- Actinobacillus actinomycetemcomitans
Komplex ++
Porphyromonas gingivalis
- 1
Roter Bacteroides forsythus
Komplex - 1
Treponema denticola
(+)
Oranger Prevotella intermedia
Komplex +
- = Keimkonzentration unter dem cut-off
(+) = Keimkonzentration am cut-off/Nachweisgrenze
+ = erhöhte Keimkonzentration*
++ = stark erhöhte Keimkonzentration*
♦+♦ = sehr stark erhöhte Keimkonzentration*
Рис. Выявление ДНК пародонтопатогенов в зубодесневой борозде у пациентов группы I
При проведении GenoType-TecTa объектом исследования были: I группа - подростки (12 чел.) в возрасте 12-14 лет с генетической патологией, II группа - практически здоровые дети в возрасте 12-14 лет (9 чел.). У 75% (9 чел.) респондентов с хромосомными аномалиями результаты оказались позитивными при полиморфизме позиций IL-1A-889; IL-1B+3953; IL-1RN+2018. В то время как в группе сравнения только в 22% случаев тест GenoType PST оказался положительным. Таким образом, у подростков с синдромом Дауна риск развития заболеваний пародонта генетически детерминирован по сравнению с подростками из группы сравнения.
С целью ранней идентификации пародонтопатогенных микроорганизмов зубной бляшки использовали молекулярно-генетический тест Micro-IDent (фирмы Hain -lifescience), использующий принцип обратной гибридизации. Выявляли маркеры 5 пародонтопатогенов P.intermedia (оранжевый комплекс), P. gingivalis, T.denticola B.forsithus (красный комплекс), Aactinomycetemcomitans (розовый комплекс). На рисунке представлен полученный результат MicroDent — теста из лаборатории НАВД-lifescience (Германия) пациента Ф.Д., 12 лет (группа I - дети с синдромом Дауна).
В группе I был проведен тест MicroDent у 11 человек (от ю лет и старше). Были получены следующие результаты: маркеры P. gingivalis, T.denticola B.forsithus (красный комплекс) встречались в 18% случаев (2 чел.), маркеры розового комплекса A.actinomycetemcomitans выявлены у 4 человек (36%).
В группе сравнения (II) были выявлены только маркеры оранжевого комплекса у 1 ребенка из ю (ю%).
Анализируя вышеизложенное, делаем вывод, что у пациентов из группы I (с синдромом Дауна) по сравнению с группой сравнения уже сложился благоприятный генетический и бактериальный фон для развития заболеваний пародонта.
На втором этапе мы оценивали состояние тканей пародонта с помощью индексов РМА и КПИ. Данные представлены в таблице.
Таблица
Показатели индексов РМА и КПИ в обследуемых группах
Исследуемые параметры Группа с синдромом Дауна Группа сравнения Р
Индекс РМА 26,8+10,4% 8,9±4,5 7% р<о,ос>5
Индекс КПИ 1,9±о,б9 о,7±о,29 р<0,001
У детей с синдромом Дауна показатели индекса гингивита значительно выше (почти в три раза), чем в группе сравнения. Так, в группе I среднее значение индекса РМА составило 26,8+10,4%, в группе II - 8,9+4,57%. Различия достоверны и максимально значимы (р<0,005).
Среднее значение индекса КПИ (комплексный периодонтальный индекс) у детей с синдромом Дауна - 1,9+0,69, в группе сравнения - 0,7+0,29, что свидетельствует о риске развития заболеваний пародонта. Различия между показателями индекса КПИ достоверны и очень значимы (р<0,001).
Анализируя вышеизложенное, необходимо отметить, что методы диагностики, основанные на использовании пародонтологических индексов, несмотря на широкое применение в клинике, признаются косвенными, так как отражают, скорее, проявления частных аспектов патогенеза заболеваний пародонта.
Использование в практической деятельности врача-пародонтолога современных молекулярно-генетических систем позволяет оценить риск развития воспалительных заболеваний пародонта, провести раннюю диагностику заболеваний на стадии малых клинических проявлений, разработать индивидуальную программу лечения для пациента.
Литература
1. Новое понимание патогенеза болезней пародонта в свете работ о роли распознающих рецепторов / Ю.М. Максимовский [и др.] // Стоматология для всех. - 2006. - № 2. - С. 24-29.
2. Перспективы применения молекулярно-генетических методов исследований в диагностике пародонтита / В.Н. Царев [и др.] // Российский стоматологический журнал. — № 5. — 2002. - С. 6-9.
3. Sellman, Hans H. Kariesrisikotest jetzt auch als DNS-Sonden-Test / H. Sellman Hans // Dental Spiegel. - 2003. - № 1. - P. 44-45.
4.Socransky, S.S. Subgingival microbial profiles in refractory periodontal disease / S.S. Socransky, C. Smith, A.D. Haffajee // J. Clin. Periodontol. - 2002. - Vol. 29. - P. 260-268.
5. Immunoglobulin G subclass antibody profiles in Porphyromonas gingivalis-associated aggressive and chronic periodontitis patients / Y. Takeuchi [et.al.] // Oral Microbiol. Immunol. - 2006. -Vol. 21. - P. 314-318.
6. White, D. Association of oral Bacteroides with gingivitis and adult periodontis / D. White, D. Mayrand // J. Periodontal .Res. - 1981. - Vol. 16. - P. 259-265.
13
ip
MOLECULAR GENETIC SYSTEMS FOR DIAGNOSTICS OF INFLAMMATORY PERIODONTAL DISEASE
EA OLEYNIK1 B.V. TRIFONOV1 E.O. DENISOVA2
Belgorod National Research University
Voronezh Region Dental Polyclinic
e-mail: [email protected]
The article describes modem diagnostics systems based upon the DNA-STRIP technology in practice 01 periodontist. The Molecular genetic test GenoType IL-l (HAIN-lifesciense, Germany) enables to detect inflammatory periodontal disease risks. Another test - Micro-IDent (HAIN-litesciense, Germany) is specially designed for diagnostics of periodontium pathogenic bacterial strains. The advantage of these molecular genetic systems is the early diagnostics of disease and constant therapeutic success monitoring.
Key words: periodontal disease, molecular genetic systems, early diagnostics, periodontium pathogenic microorganisms.
