CC BY
25ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
© Игнатьев Г.М., Каа К.В., Оксанич А.С., Антонова Л.П., Самарцева Т.Г., Мефед К.М., Яковлева Д.А., Жиренкина Е.Н., 2020
Индикация и идентификация вирусов денге и Чикунгунья в комарах рода Aedes spp., отловленных в Центральной Америке
Игнатьев Г.М.1Н, Каа К.В.1, Оксанич A.C.3, Антонова Л.П.1, Самарцева Т.Г.2, Мефед К.М.1, Яковлева Д.А.2, Жиренкина Е.Н.4
1ФГБНУ «Федеральный научный центр исследования и разработки иммунобиологических препаратов имени М.П. Чумакова», 108819, Москва, Россия;
2ФГБНУ «Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток имени И.И. Мечникова», 105064, Москва, Россия;
3ЗАО БТК «Биосервис», 249010, Боровск, Россия;
4ФГУП «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов» ФМБА России, 198320, Санкт-Петербург, Россия
Целью работы было выделение арбовирусов из комаров различных видов в культуре клеток и их идентификация молекулярными и иммунохимическими методами.
Материалы и методы. Выделение вирусов проводилось на клетках C6/36. Возбудителей идентифицировали с использованием наборов для иммуноферментного анализа (ИФА) для выявления антигенов вирусов денге, Чикунгунья, ВЗН и Синдбис и полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) со специфическими праймерами с последующим секвенированием по Сенгеру. Результаты. Всего было исследовано 102 комара, относящихся к трем родам: Culex spp., Culiseta spp., Aedes spp. Комары каждого вида или рода были разделены на пулы по 4-5 особей. При исследовании суспензий только 2 пулов комаров, полученных от Aedes aegypti и Aedes albopictus, начиная с 3-го пассажа отмечены изменения монослоя клеток C6/36. В материалах суспензии, полученной из пула Aedes albopictus, начиная с 4-го пассажа методом ИФА выявлялся антиген вируса Чикунгунья. В материалах, полученных из пула Aedes aegypti, на 5-м пассаже определялся вирус денге. Таким образом, только в 2 из 23 исследованных пулов комаров разных родов определялись антигены вирусов Чикунгунья или денге. Материалы 5-го пассажа были исследованы в ОТ-ПЦр со специфическими праймерами к вирусам денге и Чикунгунья. Подтверждено, что изолят, полученный от комаров Aedes albopictus, содержал РНК вируса Чикунгунья и соответствовал Восточному/Центральному/Южно-Африканскому генотипу, а изолят, полученный от комаров Aedes aegypti, содержал РНК вируса денге 2-го типа.
Заключение. Полученные нуклеотидные последовательности вируса Чикунгунья были депонированы в международной базе данных GenBank под номерами MN271691 и MN271692.
Ключевые слова: арбовирусы; денге; Чикунгунья; комары; Aedes spp.; идентификация; ИФА; ПЦР; секвенирование.
Источник финансирования. Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда (грант № 17-15-01525).
Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.
Для цитирования: Игнатьев Г.М., Каа К.В., Оксанич А.С., Антонова Л.П., Самарцева Т.Г., Мефед К.М., Яковлева Д.А., Жиренкина Е.Н. Индикация и идентификация вирусов денге и Чикунгунья в комарах рода Aedes spp., отловленных в Центральной Америке. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2020; 97(3): 227-232.
DOI: https://doi.org/10.36233/0372-9311-2020-97-3-4
Поступила 27.01.2020 Принята в печать 09.02.2020
Indication and Identification of Dengue and Chikungunya Viruses in Aedes spp. Mosquitoes Captured in Central America
Georgy M. lgnatyev1H, Konstantin V. Каа1, Alexey S. Oksanich3, Lilya P. Antonova1, Tatyana G. Samartseva2, Kirill M. Mefed1, Dinora A. Yakovleva2, Ekaterina N. Zhirenkina4
1M.P. Chumakov Federal Scientific Center for Research and Development of Immunobiological Preparations, Moscow, 108819, Russia;
"ft) Check for updates
ORIGINAL RESEARCHES
2Mechnikov Research Institute for Vaccines and Sera, Moscow, 105064, Russia;
3"Bioservice" Biotechnology Company, Borovsk, 249010, Russia;
4St. Petersburg Vaccine and Sera Research Institute, Saint Petersburg, 198320, Russia
The purpose of study was to isolate arboviruses from mosquitoes of different species in the cell culture and to identify them by using molecular and immunochemical techniques.
Materials and methods. Viruses were isolated in C6/36 cell cultures. The pathogens were identified by using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kits for detection of antigens of dengue, Chikungunya, West Nile and Sindbis viruses as well as the reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) with specific primers and Sanger sequencing.
Results. A total of 102 mosquitoes belonging to three genera, Culex spp, Culiseta spp., Aedes spp., were studied. Mosquitoes of each species or genus were divided into pools, each containing 4-5 mosquitoes. The study of suspensions of only 2 mosquito pools obtained from Aedes aegypti and Aedes albopictus, starting from the 3rd passage, showed changes in the C6/36 cell monolayer. Starting from the 4th passage, an antigen of Chikungunya virus was detected using ELISA test in the suspension obtained from the Aedes albopictus pool. Dengue virus was detected in the 5th passage from the materials obtained from the Aedes aegypti pool. Thus, antigens of the Chikungunya and dengue viruses were detected only in 2 of 23 examined pools of mosquitoes of different genera. Materials of the 5th passage were analyzed by RT-PCR with specific primers for dengue and Chikungunya viruses. It was confirmed that the isolate obtained from Aedes albopictus mosquitoes contained RNA of the Chikungunya virus and corresponded to the East/Central/South African genotype, while the isolate obtained from Aedes aegypti mosquitoes contained RNA of the dengue type 2 virus.
Conclusion. The obtained nucleotide sequences of the Chikungunya virus were deposited in the GenBank international database under accession numbers MN271691 and MN271692.
Keywords: arboviruses; dengue; Chikungunya; mosquitoes; Aedes spp.; identification; ELISA; PCR; sequencing.
Acknowledgments. This work was supported by the Russian Science Foundation (grant 17-15-01525). Conflict of interest. The authors declare no apparent or potential conflicts of interest related to the publication of this article.
For citation: Ignatyev G.M., Kaa K.V., Oksanich A.S., Antonova L.P., Samartseva T.G., Mefed K.M., Yakovleva D.A., Zhirenkina E.N. Indication and identification of dengue and chikungunya viruses in Aedes spp. mosquitoes captured in Central America. Journal of microbiology, epidemiology and immunobiology = Zhurnal mikrobiologii, epidemiologii iimmunobiologii. 2020; 97(3): 227-232. (In Russ.). DOI: https://doi.org/10.36233/0372-9311-2020-97-3-4
Received 27 January 2020 Accepted 9 February 2020
Введение
Комары различных родов являются переносчиками целого ряда возбудителей вирусных заболеваний, прежде всего относящихся к семействам Flaviviridae (род Flavivirus) и Togaviridae (род Alfavirus) [1, 2]. Ареал распространения комаров родов Aedes spp., Culex spp., Culiseta spp. не ограничивается странами, расположенными в тропической и субтропической зонах. Комары этих видов распространены в странах с умеренным климатом в Южном и Северном полушариях [2-4]. В связи с этим возрастает вероятность смены переносчика, что, в свою очередь, может приводить к изменениям инфекционности вирусов для человека [5].
Для вируса Чикунгунья описаны три генотипа: Восточный/Центральный/Южно-Африканский, Западно-Африканский и Азиатский [6]. Увеличение выявляемости вируса Чикунгунья в отловленных комарах и у заболевших людей привело к более подробному изучению нуклеотидных последовательностей его изолятов, из-за чего изменилось представление о генотипах данного патогена. В частности, некоторыми исследователями предлагаются генотипы линии Индийского океана и карибский [6-8]. Для вируса денге описаны только 4
серотипа [5, 9]. Учитывая растущую выявляемость вирусов, переносимых комарами, и их патогенность для человека, разработка средств профилактики и лечения заболеваний, вызываемых альфа- и флави-вирусами, остается актуальной. Выделение вирусов непосредственно от переносчиков, отловленных в естественных ареалах обитания, и изучение выделенных штаммов являются составной частью этого процесса.
Целью данной работы были выделение и идентификация арбовирусов, принадлежащих родам Flavivirus и Alfavirus, из комаров видов Aedes albopictus, Aedes aegypti, Culiseta spp., Culex spp.
Материалы и методы
Комары были отловлены в сухой сезон в лесной зоне в Никарагуа (муниципалитет Типитапа) с координатами 12.325527N 85.974662W и 12.323326N 85.974275W. Среди отловленных комаров были представители родов Aedes (виды Aedes albopictus, Aedes aegypti), Culiseta spp. и Culex spp. После определения видов комары были разделены на пулы по 4-5 особей одного вида. Каждый пул был гомогенизирован до получения суспензии в объеме 0,4 мл фосфатно-солевого буфера рН 7,4.
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Выделение вируса. Полученную суспензию комаров наносили на монослой комариных клеток линии С6/36, выращенный в культуральных флаконах («Corning», США) площадью 25 см2. После 1 ч адсорбции во флаконы добавляли среду поддержки DMEM (ФГБНУ «ФНЦИРИП им. МП. Чумакова» РАН) с 2% фетальной эмбриональной сывороткой («Gibco»). Флаконы находились в термостате при 32°С с 5% содержанием СО2. Наблюдение за монослоем проводили ежедневно под микроскопом до появления цитопатического действия.
Определение антигенов вирусов. Для определения антигенов вирусов Чикунгунья, Денге, Синдбис и вируса Западного Нила в образцах куль-туральной жидкости использовали наборы реагентов компании «Биосервис»: «БиоСкрин-Денге» (комплект AG), «БиоСкрин-Чикунгунья» (комплект AG), «БиоСкрин-ВЗН» (комплект AG), «БиоСкрин-Синдбис» (комплект AG). Постановку реакции и учет результатов проводили согласно инструкции к наборам реагентов.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР). Из 100 мкл вируссодержащей культуральной жидкости с помощью комплекта реагентов «АмплиСенс® Магно-Сорб» («ИнтерЛабСервис») выделяли РНК согласно инструкции производителя.
Далее с использованием обратных праймеров для вируса Чикунгунья: pE2CHVrev1, pE2CHVrev2, pElCHVrevl, pE1CHVrev2, pNSICHVrevl, pNS1 CH-
Угеу2, р№1СНУгеу3 (табл. 1); для вируса денге — pDV2rt (5'-CAGCCATGGCAGCGGTAGGTC-3') и набора реагентов для обратной транскрипции (ОТ) («Синтол») на матрице вирусной РНК проводили реакцию ОТ и получали кДНК. На первом этапе смешивали 2 мкл обратного праймера (10 пкмоль/ мкл) с 6 мкл выделенной РНК и прогревали смесь при 95°С 5 мин. После этого пробирки охлаждали при комнатной температуре 2 мин, добавляли в них 22 мкл смеси для ОТ (9 мкл деионизированной воды, 12 мкл 2,5-кратного буфера для ОТ, 2,5 мкл MMLV-ревертазы) и инкубировали при 42°С 30 мин. Для инактивации ревертазы смесь прогревали в течение 5 мин при 95°С.
Для получения фрагментов генов Е1, Е2 и Ж1 вируса Чикунгунья и их секвенирования использовали олигонуклеотиды, описанные в табл. 1.
ПЦР на кДНК, полученной после ОТ, проводили с использованием следующих комбинаций прай-меров для вируса Чикунгунья:
• ген Е1 — рЕ1СНУйэг1 и рЕ1СНУгеу1, рЕ1СНУТог2 и рЕ1СНУгеу2;
• ген Е2 — рЕ2СНУТог1 и рЕ2СНУгеу1, рЕ2СНУТог2 и рЕ2СНУгеу2;
• ген Ж1 — р№1СНУйэг1 и pNS1CHVreу1, pNS1CHVfor2 и pNS1CHVreу2, р№1С№У-йэгЗ и р^ЮНУгеуЗ.
Для вируса денге ПЦР проводили при ранее описанных условиях [10]: pDV2for (5'-ССААААА
Таблица 1. Праймеры, использованные для ОТ, ПЦР и секвенирования вируса Чикунгунья Table 1. Primers used for RT, PCR and sequencing of the Chikungunya virus
Номеp комплекта
пpаймеpов Ref No. of primers
Пpаймеp Primer index
Ген белка Protein gene
Последовательность пpаймеpа Sequence of the primer
Координаты Coordinates
Размеp ПЦР-пpодyкта, п.н. Size of the PCR-product, b.p.
1 pEICHVforl pElCHVrevl Е1 5'-GAACTGACACCAGGAGCTACCGTCC-3' 5'-CGCCAAATTGTCCTGGTCTTCCTG-3' 9745- 10600 856
2 pE1CHVfor2 pE1CHVrev2 5'-AACATGGACTACCCGCCCTT-3' 5'-GTGCCTGCTRAACGACACGC-3' 10552 -11313 762
1 pE2CHVfor1 pE2CHVrev1 Е2 5'-TTCAATGTCTATAAAGCCACAAGACC-3' 5'-GTGATTGGTGACCGCGGCATG-3' 8560 -9240 681
2 pE2CHVfor2 pE2CHVrev2 5'-GYCAGACGGTGCGGTACAAGTG-3' 5'-GCAGCATATTAGGCTAAGCAGGAAAG-3' 9125 -9794 670
1 pNSICHVforl pNSICHVrevl NS1 5'-ATGGATYCTGTGTACGTGGAYATAGAC-3' 5'-GGTGRTATAGCGACGTGGGTGC-3' 80- 572 493
2 pNS1CHVfor2 pNS1CHVrev2 5'-CATGTAGACAGAGAGCAGACGTCGC-3' 5'-CCTCCGGCGTGACTTCTGTAGC-3' 498- 1139 642
З pNS1CHVfor3 pNS1CHVrev3 5'-CGTGCCGGCGACCATTTGTG-3' 5'-GCKCCTCTMGGAGTCTCTATTATTCC-3' 1078 -1710 633
ORIGINAL RESEARCHES
CCCGCCACTCTAAGG-3') и pDV2rev (5'-GTTAT CACGACAGTGTATTCCA-3'). ПЦР-смесь получали смешиванием по 1 мкл прямого и обратного праймеров с концентрацией 10 пкмоль/мкл, 10 мкл универсальной 2,5-кратной реакционной смеси для ПЦР («Синтол»), 8 мкл деионизированной воды с последующим добавлением 5 мкл кДНК. Амплификацию проводили на приборе XP Cycler («Hangzhou Bioer Technology») по следующей программе: 95°С — 1 мин 30 с; 30 циклов: 95°С — 20 с, 55°С — 15 с, 72°С — 30 с; финальная элонгация: 72°С — 10 мин. Программа для амплификации вируса денге: 95°С — 1 мин 30 с; 40 циклов: 95°С — 20 с, 57°С — 15 с, 72°С — 30 с; финальная элонгация 72°С — 10 мин.
Определение инфицированности (minimum infection rate, MIR) исследованных комаров проводили, как описано ранее [11, 12].
Результаты
Всего обследовано 102 комара трех родов (табл. 2). Наибольшее количество комаров относилось к роду Aedes, представленному видами Aedes aegypti и Aedes albopictus. Каждый образец суспензии прошел 4 последовательных «слепых» пассажа на клетках С6/36. Контроль за состоянием монослоя клеток проводили под микроскопом в течение 5 дней после пассажа.
В результате подтверждено, что изолят, полученный из комаров Aedes albopictus, содержал РНК вируса Чикунгунья и не содержал РНК вируса денге. Изолят, полученный от комаров Aedes aegypti, содержал РНК вируса денге и не содержал РНК вируса Чикунгунья. Изолят денге по результатам секвенирования был отнесен ко 2-му типу. ПЦР-продукты генов Е1, Е2 и NS1, полученные при амплификации изолята вируса Чикунгунья, также были отсеквенированы.
Полученные последовательности представлены в GenBank под номерами MN271691 и MN271692. С помощью компьютерной программы BLAST нуклеотидные последовательности изолята
а / а б / b
Е1 Е1 Е2 Е2 NS1 NS1 NS1 M M DV DV
1 2 1 2 1 2 3 2-1 2-3
Г «T-i-vï Ç"i. • ' G; í Í' .
— — — — _ _ Л s — —
Электрофорез фрагментов генов вируса Чикунгунья (а) и денге (б) в 1% агарозном геле. а — ПЦР-продукты фрагментов генов Е1, Е2 и NS1 вируса Чикунгунья. 1-3 — номера комплекта праймеров (табл. 1); б — ПЦР-продукты фрагмента гена поверхностного белка вируса денге, полученного на 4-м (DV2-1) и 5-м (DV2-3) пассажах.
М 100 bp — весовой ДНК-маркер, 100 п.о.
The electrophoresis of gene fragments of Chikungunya (a) and dengue (b) viruses in 1% agarose gel.
a — PCR products of E1, E2 and NS1 gene fragments of the Chikungunya virus. 1-3 — the reference numbers of primers (Table 1);
b — PCR products of the gene fragment of the surface protein of the dengue virus, which was obtained on the 4th (DV2-1) and 5th (DV2-3) passages. M 100 bp — the DNA molecular weight marker, 100 bp.
вируса Чикунгунья были отнесены к Восточному/ Центральному/Южно-Африканскому генотипу.
При исследовании суспензий только в 2 пулах комаров, полученных от Aedes aegypti и Aedes albopictus, начиная с 3-го пассажа были отмечены изменения монослоя клеток. На 4-м пассаже пула Aedes aegypti цитопатическое действие отмечалось на 4-е сутки, а для пула Aedes albopictus — на 3-и сутки. После дополнительного, 5-го пассажа на клетках С6/36 материалы указанных пулов были исследованы в ИФА (наборы реагентов «Биосервис») на определение наличия антигенов вирусов денге, Чикунгунья, Западного Нила и Синдбис.
В пулах Aedes aegypti и Aedes albopictus в материалах всех исследованных пассажей антигены вирусов Западного Нила и Синдбис не выявлены (табл. 2). В то же время в материалах суспензии, по-
Таблица 2. Род комаров, общее количество и количество исследованных пулов Table 2. Mosquito genus and total number of mosquitoes; number of studied pools
Род комаров Mosquito genus Количество комаров Number of mosquitoes Количество пулов Number of pools ИФА / ELISA ПЦР/PCR
денге dengue Чикунгунья Chikungunya денге dengue Чикунгунья Chikungunya
Culex spp. 16 4 0/4 0/4 0/4 0/4
Culiseta spp. 21 5 0/5 0/5 0/5 0/5
Aedes spp. 65 16 1/16 1/16 1/16 1/16
Aedes aegypti 28 7 1/7 0/7 1/7 0/7
Aedes albopictus 37 9 0/9 1/9 0/9 1/9
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
лученной из пула Aedes albopictus, начиная с 4-го пассажа выявлялся антиген вируса Чикунгунья. В материалах, полученных из пула Aedes aegypti, на 5-м пассаже определялся вирус денге (рисунок). Таким образом, только в 2 из 25 исследованных пулов комаров разных родов определялись антигены вирусов Чикунгунья или денге.
Инфицированность (MIR) составила для Aedes aegypti 0,0357, для Aedes albopictus — 0,0270. Таким образом, пулы, содержащие антигены Чикунгунья и денге, на 4-м и 5-м последовательных пассажах вызывали цитопатическое действие на клетках С6/36. Материал 5-го пассажа обоих пулов комаров был исследован в ОТ-ПЦР со специфическими прайме-рами к вирусам денге и Чикунгунья.
Обсуждение
В странах Центральной Америки распространение вирусов денге и Чикунгунья связано с комарами вида Aedes. Сбор насекомых проводится, как правило, в местах проживания человека [2-5, 9, 12]. В нашем исследовании комары 3 видов были отловлены вне населенных пунктов, в лесной зоне. При определении инфицированности комаров этого вида тем или иным вирусом важным фактором является количество комаров в исследуемом пуле. Оптимальным является пул, состоящий из 4 комаров [2, 11, 12]. Для детекции вирусов в пулах комаров используется ПЦР, в случае положительного результата проводится секвенирование полученного ампликона. Данных об использовании ИФА в опубликованных статьях нет.
В связи с ограниченным объемом первичной суспензии комаров в нашем исследовании проведение детекции вирусов после «слепых» последовательных пассажей на клетках C6/36 полностью оправданно. Использование для детекции вируса ИФА, как и проведение ОТ-ПЦР, позволяет провести детекцию двумя независимыми методами.
ЛИТЕРАТУРА
1. Kraemer M.U.D., Sinka M.E., Duda K.A., Mylne A., Shearer F.M., Brady O.J., et al. The global compendium of Aedes aegypti and Aedes albopictus occurrence. Sci. Data. 2015; 2: 150035. DOI: http://doi.org/10.1038/sdata.2015.35
2. Ponce P., Morales D., Argoti A., Cevallos V.E. First report of Aedes (Stegomyia) albopictus (Skuse) (Diptera: Culicidae), the Asian tiger mosquito, in Ecuador. J. Med. Entomol. 2018; 55(1): 248-9. DOI: http://doi.org/10.1093/jme/tjx165
3. Cevallos V., Ponce P., Waggoner J.J., Pinsky B.A., Coloma J., Quiroga C., et al. Zika and Chikungunya virus detection in naturally infected Aedes aegypti in Ecuador. Acta Trop. 2018; 177: 74-80.
DOI: http://doi. org/10.1016/j.actatropica.2017.09.029
4. Waggoner J.J., Gresh L., Vargas M.J., Ballesteros G., Tellez Y., Soda K.J., et al. Viremia and clinical presentation in Nicaraguan patients infected with Zika virus, Chikungunya virus, and Dengue virus. Clin. Infect. Dis. 2016; 63(12): 1584-90.
DOI: http://doi.org/10.1093/cid/ciw589
5. Vega-Rua A., Zouache K., Caro V., Diancourt L., Delaunay P., Grandadam M., et al. High efficiency of temperate Aedes albopictus to transmit Chikungunya and dengue viruses in the Southeast of France. PLoS One. 2013; 8(3): e59716.
DOI: http://doi.org/10.1371/journal.pone.0059716
6. Intayot P., Phumee A., Boonserm R., Sor-Suwan S., Bua-thong R., Wacharapluesadee S., et al. Genetic characterization of Chikungunya virus in field-caught Aedes aegypti mosquitoes collected during the recent outbreaks in 2019, Thailand. Pathogens. 2019; 8(3): 121.
DOI: http://doi.org/10.3390/pathogens8030121
7. Chen R., Puri V., Fedorova N., Lin D., Hari K.L., Jain R., et al. Comprehensive genome scale phylogenetic study provides new insights on the global expansion of Chikungunya virus. J. Virol. 2016; 90(23): 10600-11.
DOI: http://doi.org/10.1128/JVI.01166-16
8. Villero-Wolf Y., Mattar S., Puerta-González A., Arrieta G., Mu-skus C., Hoyos R., et al. Genomic epidemiology of Chikungun-ya virus in Colombia reveals genetic variability of strains and multiple geographic introductions in outbreak, 2014. Sci. Rep. 2019; 9(1): 9970.
DOI: http://doi.org/10.1038/s41598-019-45981-8
9. Guzman M.G., Halstead S.B., Artsob H., Buchy P., Farrar J., Gubler D.J., et al. Dengue: a continuing global threat. Nat. Rev. Microbiol. 2010; 8(12 Suppl.): S7-S16.
DOI: http://doi.org/10.1038/nrmicro2460
10. Букин Е.К., Отрашевская Е.В., Воробьева М.С., Игнатьев Г.М. Сравнительное изучение показателей гемостаза и продукции цитокинов при экспериментальной инфекции вирусом денге. Вопросы вирусологии. 2007; 52(2): 32-6.
11. Gu W., Unnasch T.R., Katholi C.R., Lampman R., Novak R.J. Fundamental issues in mosquito surveillance for arboviral transmission. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 2008; 102(8): 817-22. DOI: http://doi.org/10.1016/j.trstmh.2008.03.019
12. Medeiros A.S., Costa D.M.P., Branco M.S.D., Sousa D.M.C., Monteiro J.D., Galvao S.P.M., et al. Dengue virus in Aedes aegypti and Aedes albopictus in urban areas in the state of Rio Grande do Norte, Brazil: Importance of virological and entomological surveillance. PLoS One. 2018; 13(3): e0194108.
DOI: http://doi.org/10.1371/journal.pone.0194108
REFERENCES
1. Kraemer M.U.D., Sinka M.E., Duda K.A., Mylne A., Shearer F.M., Brady O.J., et al. The global compendium of Aedes aegypti and Aedes albopictus occurrence. Sci. Data. 2015; 2: 150035. DOI: http://doi.org/10.1038/sdata.2015.35
2. Ponce P., Morales D., Argoti A., Cevallos V.E. First report of Aedes (Stegomyia) albopictus (Skuse) (Diptera: Culicidae), the Asian tiger mosquito, in Ecuador. J.Med. Entomol. 2018; 55(1): 248-9. DOI: http://doi.org/10.1093/jme/tjx165
3. Cevallos V., Ponce P., Waggoner J.J., Pinsky B.A., Coloma J., Quiroga C., et al. Zika and Chikungunya virus detection in naturally infected Aedes aegypti in Ecuador. Acta Trop. 2018; 177: 74-80.
DOI: http://doi.org/10.1016/j.actatropica.2017.09.029
4. Waggoner J.J., Gresh L., Vargas M.J., Ballesteros G., Tellez Y., Soda K.J., et al. Viremia and clinical presentation in Nicaraguan patients infected with Zika virus, Chikungunya virus, and Dengue virus. Clin. Infect. Dis. 2016; 63(12): 1584-90.
DOI: http://doi.org/10.1093/cid/ciw589
5. Vega-Rua A., Zouache K., Caro V., Diancourt L., Delaunay P., Grandadam M., et al. High efficiency of temperate Aedes al-bopictus to transmit Chikungunya and dengue viruses in the Southeast of France. PLoS One. 2013; 8(3): e59716.
DOI: http://doi.org/10.1371/journal.pone.0059716
6. Intayot P., Phumee A., Boonserm R., Sor-Suwan S., Bua-thong R., Wacharapluesadee S., et al. Genetic characterization of Chikungunya virus in field-caught Aedes aegypti mosquitoes
collected during the recent outbreaks in 2019, Thailand. Pathogens. 2019; 8(3): 121.
DOI: http://doi.org/10.3390/pathogens8030121
7. Chen R., Puri V., Fedorova N., Lin D., Hari K.L., Jain R., et al. Comprehensive genome scale phylogenetic study provides new insights on the global expansion of Chikungunya virus. J. Virol. 2016; 90(23): 10600-11.
DOI: http://doi.org/10.1128/JVI.01166-16
8. Villero-Wolf Y., Mattar S., Puerta-González A., Arrieta G., Muskus C., Hoyos R., et al. Genomic epidemiology of Chikun-gunya virus in Colombia reveals genetic variability of strains and multiple geographic introductions in outbreak, 2014. Sci. Rep. 2019; 9(1): 9970.
DOI: http://doi.org/10.1038/s41598-019-45981-8
9. Guzman M.G., Halstead S.B., Artsob H., Buchy P., Farrar J., Gubler D.J., et al. Dengue: a continuing global threat. Nat. Rev.
ORIGINAL RESEARCHES
Microbiol. 2010; 8(12 Suppl.): S7-S16. DOI: http://doi.org/10.1038/nrmicro2460
10. Bukin E.K., Otrashevskaya E.V., Vorob'eva M.S., Ignat'ev G.M. Comparative study of hemostasis and cytokine production in experimental Dengue virus infection. Voprosy virusologii. 2007; 52(2): 32-6. (in Russian)
11. Gu W., Unnasch T.R., Katholi C.R., Lampman R., Novak R.J. Fundamental issues in mosquito surveillance for arboviral transmission. Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 2008; 102(8): 817-22. DOI: http://doi.org/10.1016/j.trstmh.2008.03.019
12. Medeiros A.S., Costa D.M.P., Branco M.S.D., Sousa D.M.C., Monteiro J.D., Galväo S.P.M., et al. Dengue virus in Aedes aegypti and Aedes albopictus in urban areas in the state of Rio Grande do Norte, Brazil: Importance of virological and entomological surveillance. PLoS One. 2018; 13(3): e0194108.
DOI: http://doi.org/10.1371/journal.pone.0194108
Информация об авторах:
Игнатьев Гэоргий Михайловичн — д.м.н., проф., зам. руководителя производственного направления ФГБНУ «ФНЦИРИП им. М.П. Чумакова РАН», 108819, Москва, Россия. ORCID Ю: https://orcid.org/0000-0002-9731-3681. Е-таИ: [email protected]
Каа Константин Владимирович — асп. лаб. молекулярной биологии вирусов ФГБНУ «ФНЦИРИП им. М.П. Чумакова РАН», Москва, Россия.
ORCID Ю: https://orcid.org/0000-0002-8446-1853.
Оксанич Алексей Сергеевич — к.б.н., генеральный директор АО БТК «Биосервис», Москва, Россия. ORCID Ю: https://orcid.org/0000-0002-8600-7347. Антонова Лилия Петровна — асп. лаб. молекулярной биологии вирусов, ФГБНУ «ФНЦИРИП им. М.П. Чумакова РАН», Москва, Россия.
ORCID Ю: https://orcid.org/0000-0002-1221-1134.
Самарцева Татьяна Геннадьевна — м.н.с. ФГБНУ «НИИ вакцин
и сывороток им. И.И. Мечникова», Москва, Россия.
ORCID Ю: https://orcid.org/0000-0003-3264-6722.
Мефед Кирилл Михайлович — к.б.н., зам. нач. отдела
управления качеством ФГБНУ «ФНЦИРИП им. М.П. Чумакова
РАН», Москва, Россия.
ORCID Ю: https://orcid.org/0000-0002-7335-1982. Яковлева Динора Абдуллаевна — к.м.н., с.н.с. ФГБНУ «НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова», Москва, Россия. ORCID Ю: https://orcid.org/0000-0001-8771-4177. Жиренкина Екатерина Николаевна — к.м.н., зам. директора по научной работе ФГУП «СПбНИИВС», Санкт-Петербург, Россия. ORCID Ю: https://orcid.org/0000-0003-0810-5985.
Участие авторов: все авторы сделали эквивалентный вклад в подготовку публикации.
Information about the authors:
Georgy M. lgnatye\P— D. Sci. (Med.), Prof., Deputy Head, Production department, Chumakov Federal Scientific Center for Research and Development of Immune-and-Biological Products of Russian Academy of Sciences, 108819, Moscow, Russia. ORCID ID: https://orcid.org/0000-0002-9731-3681. E-mail: [email protected]
Konstantin V. Kaa — postgraduate student, laboratory of molecular biology of viruses, Chumakov Federal Scientific Center for Research and Development of Immune-and-Biological Products of Russian Academy of Sciences, Moscow, Russia. ORCID ID: https://orcid.org/0000-0002-8446-1853.
Alexey S. Oksanich — PhD (Biol.), General Director, "Bioservice"
Biotechnology Company, Borovsk, Russia.
ORCID ID: https://orcid.org/0000-0002-8600-7347.
Lilya P. Antonova — postgraduate student, laboratory of molecular
biology of viruses, Chumakov Federal Scientific Center for Research
and Development of Immune-and-Biological Products of Russian
Academy of Sciences, Moscow, Russia.
ORCID ID: https://orcid.org/0000-0002-1221-1134.
Tatyana G. Samartseva — junior researcher, Mechnikov Research
Institute for Vaccines and Sera, Moscow, Russia.
ORCID ID: https://orcid.org/0000-0003-3264-6722.
Kirill M. Mefed — PhD (Biol.), Deputy Head of Quality Management,
Chumakov Federal Scientific Center for Research and Development
of Immune-and-Biological Products of Russian Academy of
Sciences, Moscow, Russia.
ORCID ID: https://orcid.org/0000-0002-7335-1982.
Dinora A. Yakovleva — PhD (Med.), senior researcher, Mechnikov
Research Institute for Vaccines and Sera, Moscow, Russia.
ORCID ID: https://orcid.org/0000-0001-8771-4177.
Ekaterina N. Zhirenkina — PhD (Med.), Deputy Director for science,
St. Petersburg Vaccine and Sera Research Institute,
Saint Petersburg, Russia.
ORCID ID: https://orcid.org/0000-0003-0810-5985. Contribution: the authors contributed equally to this article.
