CC BY
10
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
271
IN SITU ДЕФОРМАЦИОННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОЛИМЕРНЫХ МАТРИКСОВ РАЗЛИЧНЫХ ТИПОВ В РЭМ
Е.В. Ястремский1, 2, Т.Д. Пацаев1, А.М. Азиева1,
Д.А. Кириллова1, А.А. Михуткин1,
К.Г. Антипова1, Р.В. Шариков1, Н.А. Шарикова1,
К.И. Луканина1, Т.Е. Григорьев1,
Р.А. Камышинский2, А.Л. Васильев1, 2
1 НИЦ Курчатовский институт, Москва, Россия
2 Институт кристаллографии им. А.В. Шубникова, ФНИЦ Кристаллография и фотоника РАН, Москва, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: полилактид (PLA], искусственный матрикс, in situ растровая электронная микроскопия, деформация.
Тканевая инженерия — активно развивающееся направление, целью которого в том числе является разработка матриксов — каркасов для роста клеток, с помощью которых возможно выращивать необходимые органы или их части. Одними из наиболее перспективных типов матриксов являются синтетические на основе биосовместимых полимерных материалов.
Такие матриксы могут быть изготовлены с заданными физико-химическими и механическими свойствами [1 ]. Mеханические свойства внеклеточного матрикса играют важную роль в развитии и функционировании тканей [S]. Так, матрикс влияет на структуру ткани и оказывает поддерживающую функцию для клеток, которые постоянно взаимодействуют с матриксом с целью сохранения так называемого механического гомеостаза [З], реагируют на механические импульсы (клеточная механотрансдук-ция] и оказывают силы сжатия на матрикс [4]. Поэтому, для создания матриксов с требуемыми свойствами необходим комплексный анализ формируемых образцов матриксов, в том числе визуализация морфологии самого матрикса и поведения клеточных культур при растяжении и сжатии. [5].
В настоящей работе представлена установка для проведения in situ испытаний внутри камеры растрового электронного микроскопа Versa 3D DualBeam, которая позволит проводить измерения механических характеристик матриксов с одновременной визуализацией микроструктурных изменений, и результаты исследований полимерных матриксов различного типа с её помощью.
Работа была проведена при финансовой поддержке РHФ (грант № 21-13-00321 «Деформационное поведение биоразлагаемых матриксов различного типа при механических нагрузках»].
Литература:
1. Юиселевский MB., Aнисимова НЮ., Юэрнюшенков E.A. и др. ^временные технологии в медицине. Э016. Т. 8. № 1. C. 6-1З.
S. Kanda K., Matsuda T., Oka T. ASAIO journal (American Society for Artificial Internal Organs: 199Э]. 199Э. V. З8. № З. P. M382-5.
3. Humphrey J.D., Dufresne E.R., Schwartz M.A. Nature reviews Molecular cell biology. Э014. V. 15. № 1Э. P. 80Э-81Э.
4. Dado D., Levenberg S. Seminars in cell & developmental biology. Academic Press. Э009. V. Э0. № . 6. P. 656-664.
5. И.И. Жаркова. Mатриксы из биосинтетического сополимера поли-З-оксибутирата с полиэтиленгликолем для инженерии костной ткани. Дисс. канд. биол. наук. Mосква: Mry им. MB. Ломоносова. Э017.
ВЛИЯНИЕ КОНЦЕНТРАЦИИ КОНДИЦИОННОЙ СРЕДЫ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК НА МОНОНУКЛЕАРЫ КРОВИ
Е.М. Яценко, Д.С. Барановский, Н.С. Семенова
Медицинский радиологический научный центр им. А.Ф. Цыба — филиал ФГБУ НМИЦ радиологии Минздрава России, Обнинск, Россия
e-mail: [email protected]
Ключевые слова: макрофаги, кондиционная среда, мезен-химальные стволовые клетки, активные формы кислорода.
В настоящее время широко изучается терапевтическое влияние мезенхимальных стволовых клеток (МСК) на процессы репарации различных органов, при этом остаются нерешенные вопросы, касающиеся межклеточных взаимодействий, окислительно-восстановительный баланс внутри и между МСК и иммунными клетками. Известно, что МСК, а также их кондиционированным средам (КС) характерно ингибирование продукции активных форм кислорода (АФК), которое может играть существенную роль в формировании им-муносупрессивного микроокружения при трансплантации МСК [1]. Целью работы стал анализ влияния концентрации кондиционной среды МСК на иммунные клетки — мишени.
У доноров было получено письменное добровольное согласие на участие в заборе костного мозга. Взвесь клеток МСК 5х106/10мл с сывороткой культивировали при 370С до достижения 80% конфлюент-ного монослоя. В КС проводили иммуноферментатив-ное измерение концентрации супероксиддисмутазы (SOD3), одного из механизмов МСК противовоспалительного и стимулирующего регенеративные процессы воздействия в поврежденных тканях [2]. В качестве клеток-мишеней использовали моно — и полиморф-нонуклеары (МН) фагоцитов, полученные методом градиентного центрифугирования. Для определения продукции АФК в кюветы вносили 1х106 выделенных МН в 500 мкл среды Хэнкса, содержащей люминол, к взвеси добавляли КС разной концентрации 0; 12; 25; 50 или 100% соответственно. Величину пика зимоза-ниндуцированной люминолзависимой хемилюминес-ценции (ХЛ) измеряли в (мВольтах/1 х106 макрофагов) в течение 40 минут на люминометре LKB-Wallac 1251 (Финляндия).
В in vitro системе получено, что КС при конечной концентрации в диапазоне от 25 до 100% оказывают значимое (p<0,05) дозозависимое угнетающее воздействие на уровень ХЛ-активности МН крови. При этом 50% ингибирование (ИД50) продукции АФК макрофагами наблюдали при 12-25% концентрации КС. Оценка количественного содержания SOD3 в культуральных средах: МН крови, МСК и МН+МСК показала очень низкий уровень (М ±м): 2,6 ± 0,2; 1±0,69 и 2,5 ± 0,46 нг/ мл соответственно, т. е. характерное свойство МСК продуцировать SOD3 [2] в наших условиях не проявилось. Полученные нами данные подтверждают необходимость учитывать влияние межклеточных взаимодействий МСК или продуктов их секреции при использовании в терапевтических целях.
Литература:
1. Цыб А.Ф., Петров В.Н., Коноплянников А.Г. и др. Клеточные технологии в биологии и медицине. 2008. № 3. С. 171-178.
2. Kemp K., Hares K., Mallam E. et al. J. Neurochem. 2010. V. 114. № 6. P. 1569-1580.
Гены & ^етки XVII, №З, S0SS
