ИММУНОТРОПНАЯ АКТИВНОСТЬ КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ ПРЕПАРАТА ТИМОГАР, ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ ПОДОРОЖНИКА БОЛЬШОГО (Plantago major L.) И МЯТЫ ПЕРЕЧНОЙ (Mentha piperita L.) Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

УДК 616.15-018.5;615.038 doi: 10.31712/2221-7355-2018-8-4-511-517

ИММУНОТРОПНАЯ АКТИВНОСТЬ КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ ПРЕПАРАТА ТИМОГАР, ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ ПОДОРОЖНИКА БОЛЬШОГО (Plantago major L.) И МЯТЫ ПЕРЕЧНОЙ (Mentha piperita L.)

1ХУСЕЙНОВ У.М., 2БОБИЗОДА Г.М.

Таджикский государственный педагогический университет им. С. Айни 2Академия образования Таджикистана

Приведены результаты изучения иммунотропных свойств композиции на основе иммуностимулирующего препарата тимогар и экстрактов лекарственных растений подорожника большого и мяты перечной. Доклинические исследования последствия воздействия композиции на гематологические и биохимические показатели крови мышей проводились при экспериментальном сахарном диабете, а также на иммунологические и гематологические показатели крови мышей при нескольких модельных болезнях, вызвавших вторичный иммунодефицит. Установлено, что данная композиция обладает иммуномодулирующими свойствами.

Ключевые слова: подорожник большой, мята перечная, тимогар, вторичный иммунодефицит, иммуномодуляторы

IMMUNOTROPIC ACTIVITY OF THE COMPOSITION ON THE BASIS OF THE TIMOGOGAR PREPARATION, MEDICINAL PLANTS OF THE PARADISTER OF THE BIG (Plantago major L.) AND PEPPERMINT (Mentha piperita L.)

iHUSEYNOV U.M., 2BOBIZODA G.M.

Tajik State Pedagogical University named after S. Aini 2Academy of Education of Tajikistan

The results of the study of the immunotropic properties of the composition based on the immunostimulating preparation timogar and extracts of the medicinal plants plantain and peppermint are given. Preclinical studies of the effects of the composition on the hematological and biochemical blood parameters of mice were carried out in experimental diabetes mellitus, as well as on the immunological and hematological parameters of the blood of mice with several model diseases that caused secondary immunodeficiency. It is established that this composition has immunomodulating properties. Key words. large plantain, peppermint, timogar, secondary immunodeficiency, immunomodulators

Актуальность

С давних времен травы - подорожник большой и мята перечная - используются в народной медицине для лечения многих болезней. Биологически активные вещества (БАВ) подорожника и мяты перечной улучшают обмен веществ и укрепляют иммунную систему, обладают противомикробным, противоопухолевым, бактерицидным, противовоспалительным и иммуностимулирующим эффектами.

Весьма важным и актуальным представляется изучение суммарных экстрактов этих лекарственных растений и разработка новых лекарственных средств на основе их композиции с иммуноактивными препаратами.

Несмотря на имеющиеся успехи в области эффективного лечения многих заболеваний с использованием пептидных препаратов, средств на основе подорожника и мяты перечной, все ещё остается актуальным вопрос поиска новых соединений низкомолекулярных иммуноактивных пептидов с биологически активными веществами этих лекарственных растений и создание на их основе новых БАД. Цель исследования Исследование иммунотропных свойств композиции на базе иммуностимулирующего препарата тимогар и суммарного экстракта подорожника большого и мяты перечной.

Материал и методы исследования

В качестве материалов исследования применяли композицию на базе препарата тимогар и суммарного экстракта подорожника большого и мяты перечной (КТПМ), где компоненты лекарственных трав брали в соотношении 1:1 [1], а композицию - путем добавления в 0,3 г суммарного экстракта трав 100 мкг препарата тимогар [Бобиев Г.М. Пат. № 283. Республика Таджикистан. МПК С07К5/062, А61К38/05. Способ получения иммуностимулирующего препарата тимогар и его состав. Заявл. 980005/9 от 23.10.1998. Опубл. в Пат. вестник. -Душанбе, 2000.- № 4(20)].

Объект изучения составляла периферическая кровь беспородных мышей и мышей линии СБА.

Эксперименты, связанные с влиянием КТПМ на биохимические и гематологические показатели крови, проводились на 15 беспородных белых мышах-самцах массой 18-22 г.

Моделирование сахарного диабета 1 типа (СД1) у мышей было произведено внутри-брюшинным введением (в/б) моногидрата аллоксана 0,95 нормального солевого раствора в дозе 200 мг/кг.

На 10-е сутки вслед за применением аллок-сана начали проводить опыты по изучению влияния композиции на биохимические и гематологические показатели крови мышей ежедневным внутрибрюшинным введением суспензии в соотношении 1:10 в дистиллированной воде сухого порошка композиции с дозой 0,2 мл/мышь однократно в день.

Измерение показателей крови мышей проводили на 7-е и 14-е сутки после начала применения композиции. Забор крови для анализа выполняли утром натощак из хвостовой вены в количестве 10 мл без добавления консерванта. Охлажденную кровь ставили в центрифугу и при обороте 1500 в мин. Выдерживали в течение 20 мин. Затем сыворотку вносили в сухую пробирку.

Для опытов по изучению иммуностимулирующей активности КТПМ были выбраны 100 самцов мышей линии СБА (п=10) массой 18-22 г. Сухой концентрат КТПМ, разведенный физиологическим раствором, вводился в/б мышам в терапевтической дозе - 20 мкг и пятикратной терапевтической - 100 мкг один раз в день перед иммунизацией эритроцитами барана (2*108 в/б). Мышам из группы контроля вводили 100 мкл физраствора. Эффекты от воздействий КТПМ сопоставляли с препаратом тимогар, который также вводили в терапевтической дозе - 20 мкг/кг и пятикратной терапевтической дозе 100 мкг/

кг однократно в/б. Антигеном послужили эритроциты барана (ЭБ), их брали из яремной вены животного. ЭБ хранили в течение 7-10 дней при температуре +4°С. Перед иммунизацией ЭБ 2-3 раза отмывали в среде 199 на протяжении 10 минут при 1000 об/мин.

В 96-луночные планшеты вносили по 50 мкл физраствора. В начальную из лунок вносили 50 мкл сыворотки иммунизированной мыши, основательно перемешивали и проводили титрование с дальнейшим подрядным переводом в лунки до предпоследней. В последнюю лунку был внесен только физраствор (контроль). Вслед за этим во все лунки прибавляли по 50 мкл 1% раствора ЭБ. Планшеты 1 час держали в термостате при +37°С. Вслед за этим измеряли титр антител в реакции гемагглютинации. За титр антител брали последнее размещение сыворотки, вступавшее в реакцию с ЭБ (присутствие «зонтика» в лунке). Итоги измерения вычисляли в логарифмах с основанием 2.

Вторичные иммунодефициты [3] у мышей были вызваны методами:

- лучевой болезни: мышей облучали в дозе 4 Гр [5]. Спустя 5 дней им проводили иммунизацию в/б эритроцитами барана (ЭБ), а еще спустя 4 дня определяли содержание эритроцитов и лейкоцитов в периферической крови;

- острого токсического гепатита (ОТГ): посредством подкожного введения гепатотроп-ного яда - 20% раствор четыреххлористого углерода (СС14) по 0,2 мл на протяжении 3 дней. В последний день применения яда проводили иммунизацию мышей ЭБ, вслед за этим спустя 5 дней выполняли необходимые измерения;

- гемолитической анемии: с использованием солянокислого фенилгидразина. Препарат вводили в/б в дозе 30 мг/кг на протяжении 3-х дней и в последний день проводили иммунизацию мышей ЭБ в дозе 2*108/мышь. Спустя 5 дней после этого изучали воздействие композиции;

- ожоговой болезни: путем термического влияния. У животных снимали шерсть на спине. Вслед за этим им вводили снотворное гексенал в дозе 70 мг/кг, через несколько минут на область спины на 6-8 секунд прикладывали нагретую металлическую пластинку. Через 5 дней проводили иммунизацию мышей ЭБ в дозе 2*108/мышь, а еще спустя 5 дней выполняли необходимые измерения.

Подбор дозировок КТПМ основан на специальных рекомендациях [1] и дозах ближайшего к КТПМ препарата тимогар - 50-100 мкг при внутрибрюшинном (в/б) введении 1 раз в сутки.

Для проведения биохимических, гематологических и иммунологических измерений

были использованы: биохимический полуавтоматический анализатор DR-7000, ИФА анализатор Стат Факс 303 Плюс.

Статистический анализ результатов осуществлен с применением методов параметрической ^ критерий Стъюдента) статистики в программном пакете Statistica 6.0. Результаты и их обсуждение Изучено влияние композиции суммарного экстракта БАВ мяты перечной и подорожника большого с препаратом тимогар на биохимические и гематологические показатели крови при экспериментальном сахарном диабете.

Гематологические и биохимические измерения сыворотки крови подконтрольных мышей (рис. 1-7) при экспериментальном СД1 на 7-е и 14-е сутки введения композиции КТПМ показали, что имеется определенная динамика приближения их к норме. Как показывают результаты (рис. 1-3), уровень эритроцитов на 10-е сутки вслед за введением аллоксана находился в 1,35 раза ниже нормы, а количество гемоглобина и лимфоцитов - в 1,08 раз и 1,32 раза выше нормы. Наблюдается заметное повышение количества эритроцитов и уменьшения числа гемоглобина, тромбоцитов, лейкоцитов, СОЭ (рис.1-2).

Рис. 1. Воздействие КТПМ на изменения количества эритроцитов, лейкоцитов и СОЭ при экспериментальном диабете у мышей

314

331

349

371

120

Гемоглобин, г/л Тромбоциты, х-109/мкл

□ до опыта (на 10-е сутки после введения аллоксана) || на 7-пе стткп после опыта й на 14-пе стткп после опыта

Рис. 2. Воздействие КТПМ на изменения гемоглобина и тромбоцитов при экспериментальном диабете у мышей

Было обнаружено, что уровни глюкозы и АСТ в крови мышей при СД1 был почти в два раза больше нормы, АЛТ - в 4 раза (рис. 3), холестерина - в 1,7 раза (рис. 4), а общего белка - в 1,4 раза ниже нормы.

Показатель глюкозы на 2-е сутки после применения аллоксана был почти в 4 раза, а мочевины и креатинина - в 2 раза больше нормы (рис. 5). На 14-ие сутки данные по-

казатели соответственно были в 1,8, 1,1 и 1,1 раза больше нормы.

Анализ показателей по рисункам показывает позитивный характер изменений и устремленность к нормализации основных биохимических показателей крови мышей после применения КТПМ, т.е. его выраженный терапевтический эффекта при смоделированной аллоксановой сахарной болезни.

■ норма

Рис. 3. Влияние КТПМ на изменение показателей АЛТ, АСТ при экспериментальном диабете у мышей

Рис. 4. Влияние КТПМ на изменение показателей холестерина, калия и кальция при экспериментальном диабете у мышей

Рис. 5. Влияние КТПМ на изменения биохимических показателей (билирубин, мочевина, альбумин, глюкоза) при экспериментальном диабете у мышей

Следовательно, искомая композиция обладает терапевтическим эффектом при лечении сахарного диабета СД1.

Также нами изучена иммуностимулирующая активность композиции на основе препарата тимогар и экстрактов лекарственных растений подорожника большого и мяты перечной.

Изучение активности композиции на основе препарата тимогар и экстрактов подо-

рожника большого и мяты перечной (КТПМ) проводили в соответствии с требованиями к исследованиям средств с иммунотропными свойствами [3]. Было оценено влияние КТПМ на число антител в периферической крови мышей, которых иммунизировали эритроцитами барана в сопоставлении с иммуностимулирующим препаратом тимогар. Также была изучена иммуностимулирующая активность

исследуемых средств при моделировании вторичных иммунодефицитов у мышей.

Мы изучили воздействие средств на рост накопления антител к ЭБ в периферической крови мышей. Обнаружено, что уже на 5-е сутки после иммунизации под действием

этих средств количество титра антител к ЭБ увеличивается (табл., рис. 6). Подобные результаты получены и на 7-е сутки после этих процедур.

Титр антител к ЭБ в периферической крови контрольной группы составлял 4,8±0,4.

Влияние КТПМ в терапевтической (ТД) и 5-кратной терапевтической (5ТД) дозах на формирование антител к ЭБ в периферической крови мышей линии СВА (п=10)

на 5-ие сутки, %

Условия опыта, Доза Контроль, % Количество антител к ЭБ, % Количество эритроцитов, % к контролю Количество лейкоцитов, % к контролю

КТПМ ТД 100 145,5 128,1 51,3

КТПМ 5ТД 100 147,3 131,6 48,5

Тимогар ТД 100 135,2 119,8 67,8

Тимогар 5ТД 100 139,5 123,7 62,4

Примечание: достоверность р<0,05

1КШМ ТД 1КТТШ 5ТД iTrairif ТД Тгоюпр гТД

ига

13 S J

128.1

I31S

J1P.S "V

67,S

48.5

КО.ТНЧССТВО J1f7H,l(.l. к ЭЕ

Itiplit

.кнкишт». к "ирчг

Рис. 6. Влияние КТПМ и препарата тимогар в терапевтической (ТД) и 5-ти кратной терапевтической (5ТД) дозах на формирование антител к ЭБ в периферической крови мышей

линии СВА (п=10) на 5-ие сутки

Далее провели изучение влияния композиции КТПМ и препарата тимогар (для сравнения) на иммунологические и гематологические показатели периферической крови мышей посредством их ввода в/б в дозе 100 мкг/кг, спустя 5 дней вслед за иммунизацией ЭБ при следующих моделях заболеваний.

1. Лучевая болезнь. На 5 сутки после иммунизации титр антител к ЭБ в группе контроля равнялся 4,8, число эритроцитов - 7,0, лейкоцитов - 3,1. Обнаружено, что при облучении титр антител в периферической крови к ЭБ уменьшился в 2,26 раз, число эритроцитов в периферической крови мышей снижается в 2,84 раза, а содержание лейкоцитов - в 2,58 раза, т.е. имеет место подавление системы кроветворения. Под действием КТПМ титр антител к ЭБ поднимается в 1,71 раза, тимогара - в 1,63 раза, количество

эритроцитов под влиянием КТПМ увеличивается в 1,66 раза, а тимогара - в 1,58. КТПМ способствовала увеличению числа лейкоцитов в 1,69, а тимогар - в 1,64 раза.

2. Острый токсический гепатит. При этой модели болезни титр антител в периферической крови к ЭБ уменьшился в 2,12 раза, содержание эритроцитов - в 1,85 раз, а содержание лейкоцитов - в 1,76 раз относительно контрольных значений. Под влиянием КТПМ титр антител к ЭБ поднимается в 1,55 раз, тимогара - 1,47 раз. Отсюда следует, что КТПМ обладает свойством увеличивать титр антител к ЭБ при ОТГ. Обнаружено, что КТПМ достоверно увеличивает содержание эритроцитов у мышей с ОТГ в 1,58 раз, тимогар - в 1,47 раз; КТПМ повышает содержание лейкоцитов - в 1,62 раза, тимо-гар - в 1,57 раза.

3. Гемолитическая анемия. Известно, что эта болезнь сопровождается снижением иммунитета организма. У мышей с такой болезнью иммунная реакция понижается в 3,54 раза, т.е. образуется вторичный иммунодефицит. Под влиянием солянокислого фенилгидразина титр антител к ЭБ снижался в 1,89 раза, а после введения указанной композиции титр антител увеличивается в 1,75 раза, тимогара - в 1,7 раз. Выявлено, что при этой анемии содержание эритроцитов понижается в 2,16 раза. Под влиянием КТПМ количество эритроцитов по сопоставлению с предшествующим состоянием увеличивается в 1,85 раз, тимогара - в 1,78 раз. Также выявлено, что при экспериментальной гемолитической анемии содержание лейкоцитов снижается в 1,53 раза. Испытуемая композиция у мышей достоверно в 1,44 раза увеличивает содержание лейкоцитов, а тимогар - в 1,37 раза.

4. Ожоговая болезнь. При термическом травмировании мышей образуется вторичное иммунодефицитное состояние. В процессе течения ожоговой травмы антителообразование подавляется в 1,86 раза. После ввода КТПМ титр антител к ЭБ поднимается в 1,48 раза, а тимогара - в 1,42 раза. Обнаружено, что после теплового травмирования содержание эритроцитов в периферической крови понижается в 1,74 раза, а лейкоцитов - увеличивается в 1,38 раза. Под влиянием КТПМ количество эритроцитов достоверно увеличивается в 1,48 раза, тимогара - в 1,41 раза; КТПМ способствует понижению количества лейкоцитов в 1,28 раза, а тимогар - в 1,22 раза.

Результаты измерений иммунологических и гематологических показателей периферической крови мышей под воздействием композиции и препарата тимогар по вышеназванным моделям болезней, согласно вышеприведенным пп. 1-4, выражены в процентах на рисунках 7-10 .

Рис. 7. Воздействие КТПМ, препарата тимогар на иммунологические и гематологические показатели периферической крови у мышей при экспериментальной лучевой болезни

Рис. 8. Воздействие КТПМ, препарата тимогар

на иммунологические и гематологические показатели периферической крови мышей при экспериментальном остром токсическом гепатите

Рис. 9. Воздействие КТПМ, препарата тимогар на иммунологические и гематологические показатели периферийной крови у мышей при экспериментальной гемолитической анемии

Рис. 10. Воздействие КТПМ, препарата тимогар на иммунологические и гематологические показатели периферической крови у мышей при ожоговой болезни

Подводя итоги экспериментов по вышеназванным болезням, можно сделать вывод о том, что испытуемая композиция обладает способностью корректировать расстройства не только в иммунной системе, но и в систе-

ме кроветворения, и более выражено, чем препарат тимогар.

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов

ЛИТЕРАТУРА

1. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / под ред. А.Н. Миронова.- М.: Гриф и К, 2012.- Ч. I.- 944 с.

2. Хусейнов У.М. Изучение биохимического состава экстрактов из растений подорожника большого (Plantago major L.) и мяты перечной (Mentha piperita L.) // Изв. АН РТ. Отд. биол. и мед. н.- 2017.- №1(196).-С. 46-50.

3. Ярмухамедов А.А. Коррекция вторичных имму-нодефицитов с помощью экстракта куркумина с квер-цетином //Врач-аспирант.- 2011.- №5.3 (48). - С. 438-441.

REFERENCIES

1. Rukovodstvo po provedeniju doklinicheskih issle-dovanij lekarstvennyh sredstv / pod red. A.N. Mironova [Guide to the preclinical studies of drugs edited by Mironova]. M.: Grif i K. (- M.: Grif and K). 2012; I: 944.

2. Husejnov U.M. Izuchenie biohimicheskogo sostava jekstraktov iz rastenij podorozhnika bol'shogo (Plantago major L.) i mjaty perechnoj (Mentha piperita L.) [Study of the biochemical composition of extracts from plantain plants (Plantago major L.) and peppermint (Mentha piperita L.)], Izv. AN RT. Otd. biol. i med. n.( News of AS of theRT. Dep. Biol. and Med. Sc). 2017;1(196): 46-50.

3. Jarmuhamedov A.A. Korrekcija vtorichnyh im-munodeficitov s pomoshh'ju jekstrakta kurkumina s kvercetinom [Correction of secondary immunodeficiency with curcumin extract with quercetin], Vrach-aspirant (Doctor-Post Graduate student). 2011; 5.3 (48): 438-441.

Сведения об авторах: Хусейнов Умарджон Мирходжаевич - соискатель кафедры органической и биологической химии химического факультета Таджикского государственного педагогического университета им. С. Айни

Бобизода Гуломкодир Муккамал - доктор биологических наук, доктор фармацевтических наук, президент Академии образования Таджикистана; тел.: (+992) 888877917; e-mail: [email protected]

Information about authors: Husseinov Umarjon Mirkhojaevich - Applicant of the Department of Organic and Biological Chemistry, Faculty of Chemistry of the Tajik State Pedagogical University named after S. Aini Bobozoda Gulomkodir Mukamal - Doctor of Biological Sciences, Doctor of Pharmaceutical Sciences, President of Academy of Education of Tajikistan; Tel: (+992) 888877917; e-mail: [email protected]

ФАЪОЛИЯТИ МАСУНФАЪОЛИИ КОМПОЗИТСИЯ ДАР АСОСИ ДОРУВОРИИ ТИМОГАР, РАСТАНЩОИ ТАБОБАТИИ БАРГИ ЗУФ

(Plantago major L.) ВА ПУДИНАИ БОЕЙ (Mentha piperita L.)

*ХУСЕЙНОВ У.М., 2БОБИЗОДА Е.М.

1Донишгоди давлатии омузгории Точ,икистон ба номи С. Айнй 2Академияи тадсилоти Точ,икистон

Дар ма^олаи мазкур натицацои омузиши хосиятцои масунфаъолии композитсияи дар асоси дорувории ма-сунфаъоли тимогар ва ширацои растанщои табобатии барги зуф ва пудинаи боги созмоншуда оварда шуда-анд. О^ибатцои таъсири композитсия дар шароити токлиники ба нишондодцои гематологи ва биохимия-вии хуни мушцо цангоми диабети сунъищанд, цамчунин ба нишондодцои иммунологию гематологии мушцо цангоми якчанд намуд беморицои моделие, ки норасоии масунии дуввумдарацаро дар ощо ба миён меоваранд, тавсиф карда шудаанд. Собит шудааст, ки ин композитсия дорои сифатцои масунфаъоли мебошад. Калимщои асоси: барги зуф, пудинаи боги, тимогар, норасоии масунии дувумдараца, масунфаъолцо