CC BY
46
2. Балашов С.Г. Иммунные глобулины в ветеринарии. / С.Г. Балашов. — Минск, 1972. — 43 с.
3. Джупина С.И. Методы эгшзоотологшеского исследования и теория эпизоотического процесса. / С.И. Джупта. — Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1991. — 142 с.
4. Горский А.Н. Изучение формирования иммунитета у cewieii в онтогенезе при применении биологически активш,а вещеапв: Автореф. дис. ... канд. ветеринар, наук. — Новосибирск, 2001. — 26с.
5. Итэсь Ю.В. Результаты ком/ьгексных иммунобиохимических исследований крупного рогатого скота разной породной принадлежности и степени компрометации к лейкозу: Aemopeip. дис. ... канд. бисчг. наук. — Новосибирск, 2002. — 22 с.
6. Крикун В.А. Лейкоз крупного рогатого скота и иммунологическая толерантность. — Ветеринария, 2002. — № 6— С. 6-9.
7. Романовой Е.Б. Иммунофармакологическое исследование зоотоксинов: Автореф. дис. ... канд. биол наук. — М., Купавна, 1983. — 22 с.
8. Сейфула РД., Орлов Б.Н., Романова Е.Б. Иммунофармакологическая активность токсинов животного происхождения фармакологического и токсикологического. Рига, 1982. № 2. — С. 238-244.
9. Проблемы лейкоза животных./!!. Н. Смирнов, А.Г. Незавшпин.В. В. Смирнова, В. В. Храмцов. //Под ред. П. Н. Смирнова. — Новосибирск, 1992. - 468 с.
10. Чекишев В.М. Иммунологические аспекты резистентности телят: Дис. ... д-ра. ветеринар, наук. — Новосибирск, 1983. — 344 с.
11. Hadden J.WIn vitro analisis of immunomodulators. //Stand.Immunopharmacol. Natur. and Synth.-immunomodul.: Proc. Symp., Annecy, 15-17 May, 1992. - P. 93-95.
12. Raitiard P. Immunostimulation et controle de mammites:perspective ou realie. //Bull Soc. Vet. Prat. De France,1986. — T.70, M10.-P. 595-606.
13. Weiss F.R. Herbal Medicine. 6h German edition, F English edition. // Translated by A.R Meuss. Portland, OR: Medicina Biologica, 1988.
THESTADYINFLUENCE BIOLOGICALLY ACTIVE PREPARATIONS, MAINLYVIPRACSIN ON IMMUNOBIOCHEMICALRESPONSIVENESSOF ANIMALS
V.V. Khramtsov, N.A. Osipova, T.A. Agarkova, N.G. Dvoeglazov
Summary. Learn influence biologically active preparations, first of all vipracsin onresponsivenese animals.
Key words: immunomodulator, biologically active preparations, alnorin, vestin, corrigin, vipracsin, immunobiochemical responsiveness, immunocompetente cells, antigenic capacity, intact, hemopoiesis, biochemical status.
УДК 619:676.807.7
ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА КОНЪЮГАТОВ, ИЗГОТОВЛЕННЫХ НА ОСНОВЕ АНТИГЕНОВ БЦЖ С ПОЛИВИНИЛПИРРОЛИДОНОМ
B.C. ВЛАСЕНКО, кандидат биологических наук, старший научный сотрудник
Е.М. ШУЛИКО, младший научный сотрудник
C.Ю. ПЕТРОВ, аспирант
М. А. БАЖИН, доктор ветеринарных наук, заведующий сектором
А.Н. НОВИКОВ, кандидат ветеринарных наук ВНИИ бруцеллеза и туберкулеза животных E-mail: [email protected]
Резюме. Представлены результаты исследований, свидетельствующие о том, что конъюгат, изготовленный из комплекса антигенов БЦЖ, инкубированный с формалином и конъюгированный с поливинилпирро-лидоном, обладает способностью восстанавливать нарушенную иммунологическую реактивность и усиливать протективные свойства вакцины БЦЖ. Ключевые слова: вакцина БЦЖ, иммунитет, комплекс антигенов БЦЖ, иммуностимулятор, иммунный статус.
Развитие средств иммунологической защиты людей и животных идет по нескольким направлениям: поиск в области традиционного вакцинного дела; создание искусственных вакцинных макромолекул, не имеющих аналогов в природе; регуляция иммунологической реактивности с помощью неспецифической
стимуляции; создание препаратов иммуностимулирующей, иммуномодулирующей активности и адъювантных свойств синтетических и естественных средств [1, 2, 3].
Сегодня для профилактики туберкулеза используется живая вакцина БЦЖ- Однако у нее имеется ряд таких негативных свойств, как остаточная вирулентность, наличие большого количества балластных, в том числе токсичных, компонентов из микробных клеток с высокими аллергизирующими свойствами.
Цель нашей работы — изучить иммуностимулирующие свойства конъюгатов, приготовленных на основе антигенов вакцинного штамма БЦЖ и синтетических полиэлектролитов.
Для ее достижения были поставлены задачи: изучить на морских свинках иммуностимулирующие и протективные свойства конъюгатов;
испытать конъюгат на молодняке крупного рогатого скота.
Условия, материал и методы. Работа выполнена в секторе иммунитета и специфической профилактики туберкулеза животных ВНИИБТЖ
Объект исследования — морские свинки, привитые противотуберкулезными конъюгантами. Комплекс антигенов для конъюгации с полиэлектролитами выделяли из вакцинного штамма БЦЖ, разрушенного ультразвуком. На их основе сконструированы и исследованы следующие средства: комплекс антиге-
нов БЦЖ (КАГ-БЦЖ); комплекс антигенов БЦЖ, инкубированный с формалином (КАГ-БЦЖ-Ф); комплекс антигенов БЦЖ, инкубированный с формалином и конъюгированный с поливинилпирролидоном (КАГ-БЦЖ-Ф-ПВП).
Культуру вакцинного штамма БЦЖ, выращенную на жидкой синтетической среде Сотона, подвергали ультразвуковой дезинтеграции на аппарате УЗДН-1 (22...35 кГц, 60...70 Вт/см2 в течение 30 мин). Полученную взвесь центрифугировали и в надосадочной жидкости определяли содержание белка. В объем антигенного комплекса (99,3) добавляли 37 или 40 %-ный медицинский формальдегид в количестве 0,7 или 0,6 мл соответственно. Реакционную смесь инкубировали в термостате при 37 °С в течение 7 суток, затем конъюгировали с ПВП (синтетический неприродный полиэлектролит, модулирующий иммуногенез, обладает митогенными свойствами, стимулирует миграцию стволовых клеток), концентрацию которого довели до 600 мг на 1 мг/мл белка (600:1).
Результаты и обсуждение. Число Т-лимфоцитов определяли методом спонтанного розеткообразова-ния с эритроцитами барана (Е-рок); Т-киллеров—непрямого глобулинового розеткообразования с эритроцитами быка (ЕА-рок); Т-антиген-реактивных лимфоцитов — туберкулинового розеткообразования с эритроцитами быка, адсорбировавшими ППД-туберкулин (ЕТ-рок); В-лимфоцитов — комплементарного розеткообразования с эритроцитами быка (М.А. Бажин с соавт., 1989). Подсчет лейкоцитов и выведение лейкоцитарной формулы проводили по общепринятым методикам.
При анализе результатов патологоанатомического исследования морских свинок определяли показатель интенсивности поражений, используя схему Г.И. Гельберга, Е.А.Финкеля [4] и индекс защиты, предложенный А.И. Тогуновой с соавт. [5].
Иммуностимулирующие свойства препаратов на способность восстанавливать утраченную иммунологическую реактивность испытывали на морских свинках по следующей схеме.
У 16 животных экспериментально индуцировали иммунологическую толерантность ППД-тубер-кулином для млекопитающих, который вводили подкожно в дозе 1,3 мл.
Затем их разделили на 4 группы (по 4 в каждой): через 5 суток после индукции толерантности свинкам I группы подкожно ввели комплекс антигенов БЦЖ (КАГ-БЦЖ) в дозе 500 мкг белка; II группы — комплекс антигенов, инкубированный с формалином (КАТ-БЦЖ-Ф) в дозе 500 мкг белка; III группы — комплекс антигенов, инкубированный с формалином и конъюгированный с ПВП (КАГ -БЦЖ-Ф-ПВП) в дозе500 мкг
белка; IV группы — иммуномодулирующее средство [6] подкожно в дозе 1,3 мл, контролем (V группа) служили 4 здоровые морские свинки. Животных первых 4-х групп через 7 суток после введения изучаемых препаратов привили вакциной БЦЖ внутрикожно в дозе 100 мкг в 0,1 мл. Через 30 суток после иммунизации морских свинкок всех групп заразили вирулентной культурой М. бош штамм 14 подкожно в дозе 0,0001 мг/мл и еще через 30 суток убили для проведения патологоанатомических исследований.
Для решения второй задачи был поставлен эксперимент на 60 телятах в возрасте от 10 до 20 дней. Их разделили на 3 группы по 20 голов. Особям I группы подкожно ввели изучаемый препарат в дозе 20 ми-белка на 1 кг массы животного (0,8... 1,0 мг белка на животное) в 1,0 мл. Через 30 суток этих животных и еще 20 телят (II группа) привили вакциной БЦЖ в дозе 1 мг в 0,2 мл. Оставшиеся 20 голов использовали в качестве контроля (III группа). Через 4 мес. у животных всех групп отобрали венозную кровь, в которой определили концентрацию нейтрофилов, Т-лимфоцитов, Т-киллеров, Т-антиген-реактивныхлимфо-цитов и В-лимфоцитов.
Поскольку в основе функционирования любой системы лежат связи между ее компонентами, для дальнейшего изучения иммунной системы у молодняка крупного рогатого скота мы применили дискретно-динамический подход, базирующийся на оценке системы с позиции взаимосвязей между параметрами.
Результаты и обсуждение. Наиболее высокая способность восстанавливать утраченную иммунологическую реактивность у морских свинок и повышать протективные свойства вакцины БЦЖ зафиксирована у препарата, изготовленного из комплекса БЦЖ, инкубированного с формалином и конъюгированного с ПВП (III группа). Степень пораженное™ органов в этом варианте составила — 1,75+0,75 балов; индекс защиты — 80 % (табл. 1), тогда как при введении только комплекса антигенов БЦЖ (I группа),
4,00+0,00 и 53,8 % соответственно. У иммуномодулирующего средства (IV группа) величины этих показателей были равны 3,66+0,66 балов и 57,7 % при использовании препарата, изготовленного из комплекса антигенов БЦЖ, инкубированного с формали-
Таблица 1. Результаты оценки иммуномодулирующих свойств препаратов на их способность восстанавливать иммунологическую реактивность у морских свинок
Группа животных Кожная аллергическая реакция через 30 суток после, мм Степень поражен- і а*
вакцинации заражения ности ор- *8 її І я і
п реаги- ровало М±т п реаги- ровало М±т ганов, баллы, М±т
КАГ-БЦЖ 4 - - 3 3 14,00±1,15 4,00±0,00 53,8
КАГ-БЦЖ-Ф 4 3 7,00±2,48 3 3 14,00±1,53 2,66+0,66 69,3
АГ-БЦЖ-Ф- пвп 4 4 6,75+1,03 4 4 13,75±0,48 1,75±0,75 80
имс-
Ласкавого Рыбина 4 2 4,75±3,30 3 3 16,33±3,18 3,66±0,66 57,7
Контроль 4 - - 4 4 14,00±1,22 8,66±0,33 0
ном (II группа) — 2,66+0,66 балов и 69,3 %.
Поэтому для дальнейшего испытания был отобран конъюгат, изготовленный из комплекса антигенов БЦЖ, инкубированный с формалином и конъюгированный с ПВП (АГ-БЦЖ-Ф-ПВП).
В ходе второго эксперимента мы установили, что содержание всех иммунокомпетентных клеток у телят, привитых вакциной БЦЖ после введения препарата, достоверно выше, чем у контрольных животных, особенно это касается Т-лимфоцитов, Т-киллеров, Т-антиген-реактивных лимфоцитов и нейтрофи-лов (р<0,001). Повышенное количество иммунокомпетентных клеток установлено также у телят, привитых только вакциной БЦЖ.
Изучение комплекса отдельных взаимосвязей между параметрами позволило выявить существен-ныеразличия иммунного статуса у интактного и привитого вакциной БЦЖ молодняка крупного рогатого скота. При этом установлено, что важнейшим критерием системы, характеризующим защищенность от
туберкулеза, служит степень связанности (напряженности), которая представляет собой число достоверных взаимосвязей между параметрами иммунной системы.
На основании выявленных с высокой степенью достоверности сочетаний параметров мы составили дифференциально-прогностическую таблицу (табл. 2).
Согласно полученным результатам у интактного молодняка крупного рогатого скота представлено 3 значимых сочетания параметров. Так, нейтрофилы в качестве вариабельного параметра взаимосвязаны с Т-киллерами, Т-антиген-реактивными лимфоцитами и В-лимфоцитами.
Число значимых сочетаний у животных, привитых только вакциной БЦЖ, по сравнению со здоровыми, увеличивается до 8, что свидетельствует о функциональном напряжении иммунной системы. Наибольшим числом связей определяемых показателей с другими обладают Т-лимфоциты (1 раз в качестве
Таблица 2. Дифференциально-прогностическая таблица для оценки иммуните- базисного и 3 раза в каче-
та у молодняка крупного рогатого скота, тыс/мкл
Сочетание базис (вариабельный параметр) л Ґ-критерий по Стьюденту базис вариабель- ный
Интактные Т-киллеры (нейтрофилы) 2,57 <0,42 <0,84
Т-антиген-реактивные лимфоциты (нейтрофилы) 20 2,50 <0,05 <0,72
В-лимфоциты (нейтрофилы) 2,41 <0,70 <0,46
Количество иммунных животных 6 Привитые вакциной БЦЖ В-лимфоциты (Т-киллеры) 4,48 30% >4,30 >8,60
Нейтрофилы (Т-антиген-реактивные лимфоциты) 4,27 < 1,90 <0,45
В-лимфоциты (Т-лимфоциты) 3,69 >4,30 >4,63
Т-киллеры (В-лимфоциты) 3,55 >6,71 >4,89
Т-антиген-реактивные лимфоциты (Т-лимфоциты) 20 3,44 >1,11 >2,85
Т-лимфоциты (В-лимфоциты) 3,33 >3,16 >3,44
Т-киллеры (Т-лимфоциты) 3,09 >6,71 >2,84
Т-антиген-реактивные лимфоциты (нейтрофилы) 2,90 >1,11 > 4,68
Количество иммунных животных 14 70 % Привитые вакциной БЦЖ после введения конъюгата
Т-антиген-реактивные лимфоциты (нейтрофилы) 6,53 <0,89 <2,73
Нейтрофилы (Т-антиген-реактивные лимфоциты) 4,77 >5,96 < 1,46
Т-киллеры (В-лимфоциты) 3,25 <4,31 <2,01
Т-киллеры (Т-антиген-реактивные лимфоциты) 3,25 <4,31 < 1,04
Т-антиген-реактивные лимфоциты (Т-киллеры) 20 2,94 <0,89 <5,35
Т-антиген-реактивные лимфоциты (Т-лимфоциты) 2,91 <0,89 <2,94
Нейтрофилы (Т-лимфоциты) 2,80 >5,96 < 3,70
Т-лимфоциты (нейтрофилы) 2,74 <3,12 >3,52
В-лимфоциты (Т-киллеры) 2,57 <1,54 <6,07
Нейтрофилы (Т-киллеры) 2,36 >5,96 >6,32
Количество иммунных животных 16 80%
стве вариабельного параметров) и В-лимфоциты (по 2 раза в качестве базисного и вариабельного параметров), наименьшим (2) — нейтрофилы.
У молодняка, привитого вакциной БЦЖ, после введения изучаемого препарата уровень связанности структурных компонентов иммунной системы увеличивается до 10 сочетаний. При этом наибольшим числом характеризуются нейтрофилы, Т-кил-леры и Т-антиген-реактив-ные лимфоциты (по 5 сочетаний), наименьшим — В-лимфоциты (2).
Далее, используя диф-ференциально-прогности -ческую таблицу, оценивали каждое животное исследуемых групп по всем значимым сочетаниям параметров.
Согласно результатам анализа высокой активностью иммунокомпетентных клеток характеризовались 30 % интактных животных, 70 % — привитых БЦЖ и 80 % — привитых БЦЖ после введения конъюгата.
Следовательно с увеличением числа значимых сочетаний параметров повы-
шается степень защищенности животных против ту- гическую реактивность и усиливать протективные
беркулеза. У телят, привитых БЦЖ в чистом виде и свойства вакцины БЦЖ.
после введения конъюгата, иммунная система нахо- Наиболее перспективный конъюгат для даль-дится в состоянии функционального напряжения (ак- нейшего изучения составлен на основе комплекса
тивной работы), в то время как у интактного молод- антигенов разрушенной культуры БЦЖ, инкубиро-
няка крупного рогатого скота количество статиста- ванный с формалином, и конъюгированый с ПВП в
чески достоверных взаимосвязей между параметра- соотношении 1 мг/мл белка комплекса антигенов
ми невелико (спокойное функционирование иммун- и 600 мг ПВП.
ной системы). Введение конъюгата перед иммунизацией телят уси-
Выводы. На основе комплекса антигенов вакцин- ливает протективные свойства вакцины БЦЖ, о чем свиного штамма БЦЖ и неприродных полиэлектроли- детельствует повышение уровня связанности струкгур-
тов можно создавать препараты, способные восста- ных компонентов и числа иммунных телят, выявленных
навливать у морских свинок утраченную иммуноло- с помощью дискретно-динамическою анализа.
Литература
1. Петров Р.В., Хаитов P.M. Иммунный ответ к искусственным антигенам // Успехи современной биологии. - 1979. — Т. 88. — Вып. 6. - С. 307-321.
2. Петров Р.В., Кабанов В.А., Хаитов P.M. и др. Модификация иммунного ответа при помощи антигена, связанного с неприродными полиэлектролитами // ЖМЭИ. — 1981. — М2. — С. 58-65.
3. Петров Р.В., Хаитов P.M. Искусственные антигены и вакцины. — М.: Медицина, 1988. — 288 с.
4. Гельберг С.И., Финкель Е.А. К методике экспериментального изучения иммуногенных свойств противотуберкулезных вакцин и эффективность методов их применения // Пробл. туберкулеза. — 1959. — № 2. — С. 80—84.
5. Тогунова А.И. и др. Иммуногенные свойства сухой вакцины БЦЖ// Бюл. ин-та туберкулеза АМН СССР. — 1951. — №1. — С. 27-
33.
6. Пат. № 2034542,Л 6/К 31/305(РФ) Иммуномодулирующее средство / В.Н. Ласковый, В.В. Рыбин —95119203/14; заявл. 21.11.1995; опубл. 27.04.1997.
IMMUNOPOTENTIATING PROPERTIES CONJUGATES, MADEON THE BASIS OF ANTIGENS BCG
WITH POLYVINYLPYRROLIDONE
V. S. Vlasenko, E. M. Shuliko, C. U. Petrov, M. A. Bajin, A.N. Novikov.
Summery. There are submitted results of researches that conjugate, made of a complex of antigens BCG, incubated with formalin and conjugated with polyvinylpyrrolidone, has protective properties, ability to restore disturbed immunologic reactance and to strengthen protective properties of vaccine BCG.
Key words: vaccine BCG, immunity, complex of antigens BCG, adjuvants, the immune status
УДК 631.95:634
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ГОМОГЕНАТОВ В ОПЫТАХ IN VITRO И IN VIVO
А. Т. ИНЕРБАЕВА, кандидат технических наук, старший научный сотрудник
Т.Н. БОКОВА, доктор биологических наук, зав. лабораторией
O.K. МОТОВИЛОВ, кандидат технических наук, зав. лабораторией
О. С. ЖЕЛТЫШЕВА, младший научный сотрудник Сибирский НИПТИ переработки сельскохозяйственной продукции
E-mail: [email protected]
Резюме. Изученоно влияние использования мясных полуфабрикатов из говядины с яблочными и облепиховыми гомогенатами в кормлении лабораторных животных на снижение содержания токсичных элементов в их органах и тканях.
Ключевые слова: яблочные и облепиховые гомо-генаты, мясные полуфабрикаты, токсичные элемен-
ты, свинец, кадмий, органы, ткани, лабораторные животные.
В Европейской части России и во многих районах Сибири отмечается острая экологическая ситуация, вызванная в основном химизацией сельского хозяйства. Значительная часть ядохимикатов из почвы вымывается в реки, накапливается в растительном и животном сырье. В организм человека из окружающей среды 20...40 % веществ-загрязнителей поступает с водой и 40...50 % — с пищевыми продуктами [1].
Среди множества органических и неорганических веществ особое место занимают токсичные элементы (ТЭ), они не разлагаются, включаются в пищевые цепи и аккумулируются в живых организмах, обладая мутагенным и токсичным эффектом [2, 3,4].
В связи с этим весьма актуалъня проблема их удаления из организма с помощью детоксикантов — соединений, способных связывать и выводить из орга-
