CC BY
20
дованных образцах и представлены всеми четырьмя подклассами с преобладанием ^04. Практически во всех сыворотках обнаружены аАТг класса ^М. В шести образцах выявлены аА1 г класса ^А.
При исследовании конкуренции МКАТ с аАТг было установлено, что только одно из пятнадцати МКАТ (продукт гибридомного клона 1И10) интерферировало с аАТг сывороток пациентов, страдающих АИТ или ДТЗ.
Конкурирующие с МКАТ 1Р10 аАТг были обнаружены в сыворотках 44% обследованных пациентов. Среди аАТг, направленных к эпитопу 1Р10, обнаружены молекулы, относящиеся к 1§А и ко всем четырем подклассам 1цО, но не к 1«М.
Полученные данные указывают на то, что при аутоиммунных заболеваниях ЩЖ популяция синтезируемых аАТг не рестриктирована по изо- и субизотипу. Преобладание аАТг подкласса 1цС4, как известно, является следствием длительной антигенной стимуляции и не может рассматриваться как признак ограничения продукции субизотипа. В то же время, при АИТ и ДТЗ аАТг, по крайней мере, частично рестриктироваиы поэпитопной специфичности.
Исследование парапротеионов с помощью моноклональных антител (МКАТ)
Самойлович М.П., Грязева И.В., Крутецкал И.Ю., Климович В.Б., Баратова Д.А.'
Центральный научно-исследовательский рентгенорадиологический институт М3 РФ, г. Санкт-Петербург, 'Национальный госпиталь Киргизской Республики, г. Бишкек
Традиционные методы исследования сыворотки при диагностике парапротеинемнй включают иммунодиффузию, электрофорез и иммунофиксацию. Эти методы требуют высокоактивных, стандартных и специфичных антисывороток, занимают много времени, а получаемая информация носит качественный или полуколиче-ственный характер.
Цель работы состояла в разработке, на основе МКАТ, методов иммупохимическон диагностики парапротеи-немий. Панель МКАТ против типов, изотипов и субизотипов иммуноглобулинов (^) человека создана в лаборатории гибридомной технологии ЦНИРРИ и включает реагенты, которые распознают консервативные детерминанты, присутствующие как на молекулах нормальных 1ц, так и на парапротеинах.
Материалом исследования служили образцы сыворотки крови пациентов, у которых предполагали наличие парапротеинемии. Дополнительно исследовали образцы мочи. Контролем служил материал от здоровых доноров.
На первом этапе обследования в сыворотках определяли концентрации 1§0, ^М, ^А методом двухцентрового ИФА, а также соотношения ^ каппа- и лямб-да-гипов. Во многих случаях этого было достаточно,
чтобы выявить клональное преобладание в пределах одного из классов I”. При неопределенности результата на втором этапе с помощью двухцент рового ИФА оценивали концентрации 1цО 1. 1ц02. [цОЗ. 1ц04 и соотношение каппа/лямбда [ц в пределах каждого подкласса. По результатам этого исследования выявляли клональное преобладание 1ц минорных подклассов, которое не сказывалось существенно на обшей концентрации 1§0, а также устанавливали дефицит остальных подклассов 1цС. Редкие варианты |^Е- и 1цП-пара-протеинемий могут быть выявлены также с помотыо двухцентрового ИФА.
Концентрации свободных легких цепей в сыворотке крови и в моче определяли методом двухцентрового ИФА на основе МКАТ, который не требует концентрирования образцов мочи или освобождения сыворотки от целостных молекул 1ц. Метод позволял выявить парапротеинемии Бене-Джонса, получить информацию об уровне дифференцировки клеток доминирующего клона, а также оценить сохранность фильтрующей функции почек.
Описанные выше методы могут быть неэффективными, если парапротеин представлен тяжелыми цепями или мутантными молекулами, утратившими эпитоп, распознаваемый одним из МКАТ. В таком случае проводят прямой ИФА. Парапротепны адсорбируют из разбавленных сывороток на твердой фазе и затем выявляют с помощью меченых МКАТ. При этом можно использовать смешанный конъюгат, содержащий МКАТ против разных эпитопов молекулы 1” одного класса.
Разработанные на основе МКАТ приемы иммуно-химического исследования позволяют выявить парапротеин, определить составляющие его легкие и тяжелые цепи, а также оценить степень вторичного иммунодефицита.
Иммунологические аспекты развития осложнений реконструктивных вмешательств на абдоминальной аорте и магистральных артериях
Светликов А. В., Барсуков А.Е., Гайкова и Л.Б., Крапивка Н.А.
Государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова Санкт-Петербург, Россия
Цель н задачи: Цель работы заключалась в сравнительной оценке состояния иммунологической реакгив-ности оперированных пациентов с возникшими в различные сроки ложными аневризмами анастомозов, а также больных с поздними (после 1 года) реокклюзиями и благополучным течением послеоперационного периода.
Материалы и методы. Обследовано 3 группы пациентов. I фуппу составили 35 больных с реокклюзиями в аор-топодвздошно-бедренном и бедренно-подколенном сег-
ментах. Во II группу включен 21 больной с ложными аневризмами анастомозов, в III группу были объединены 35 больных с функционирующими реконструированными сосудами. 13 контрольную группу вошли 20 пациентов без клинических и электрофизиологпческих проявлении атеросклеротического процесса. Определение концентрации сывороточных иммуноглобулинов (Л, М, G) no G. Mancini et al., (1965). Кроме того, для характеристики аутоиммунных сдвигов изучали уровень циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) и антнкардиолипиновых антител класса G в крови (нммуноферментная тест-система фирмы Sanofi Diagnostics Pasteur). Неспецифическая резнстентность оценивалась по количеству активно фагоцитирующих нейт-рофилов (фагоцитарная активность) и фагоцитарному индексу, состоянию микробицидной системы нейтрофилов и НСТ-тесте. Содержание альфа и гамма-интерферонов 1итзмы определяли после суспензирования лейкоцитов в среде Игла с последующим добавлением в пробы в качестве индуктора альфа-ИФН вируса Сендай (20 часов), а для стимуляции гамма-ИФН лимфоцитарного митогепа (72 часа). Противовирусную активность ИФН определяли мик-рообъемным титрованием с использованием в качестве тест-культуры перевиваемых клеток штамма JI-41. Индикатором служил вирус везикулярного стоматита. Противовирусную активность образцов выражали в международных единицах (ME). Для изучения инфицированное™ обследуемых больных цитомсгшювирусом и Chlamydia pneumoniae для оценки их роли в атерогенезе были использованы диагностикумы Иммуиокомб II IgG, Иммунокомб II Chlamydia Bivalent IgG фирмы Orgenics.
Основные результаты: Проведенные исследования показали повышение концентрации иммуноглобулина G в сыворотке крови у пациентов с реокюнозией — 18,8 г/л по сравнению с нормой, уровень ЦИК достоверно возрастает до 136 Ед. Нарушение иммунного гомеостаза у больных обусловлено не только супрессией, но и развит ием аутоагрессии, что подтверждается как данными морфологических исследований, так и повышением уровня антител к кар-дисшипину (AKJI) до 27,12 GPL/мл при декомпенсации кровообращения (при реокклюзии) против 16,34+4,41 GPL/ml у пациентов без осложненного послеоперационного течения (р<0,01). Наряду с этим уменьшается фагоцитарный индекс нейтрофилов и моноцитов, а также их фагоцитарная активность, что, по-видимому, ведбт к недостаточной продукции ангиопротективных цитокинов. Об изменении иммунного профиля свидетельствует и тот факт, что у 60% обследованных больных уровень сывороточного интерферона превышает нормальные показатели в 2-5 раза, и только у 12 больных его содержание соответствовало норме. А у 87% имеется резкое (в 2-4 и даже более чем в 10 раз) снижение образования альфа- и гамма-интерферонов, 1,5-кратное уменьшение содержания липидов в нейтрофилах иувеличение показателя НСТ-теста до 24,3+2,4% в 1 группе больных свидетельствует об усилении микробицидной активности нейтрофилов и наличии в организме, в том числе и в артериях, воспалительного процесса. Антитела к ЦМВ обнаружены у 86% оперированных, у половины больных повышение титра со-
ставило 43% по сравнению с дооперационпыми показателями. Антитела к Chlamydia pneumoniae выявлены у 82% больных, при этом титр антител был выше у пациентов с тяжёлым течением атеросклероза.
Заключение: Полученные данные свидетельствуют о глубоких нарушениях функционирования иммунной системы у обследованных больных. Усилия хирургов, фармакологов и иммунологов должны бы ть направлены на нормализацию иммунологической реактивности, нитокиновога баланса больных периферическим атеросклерозом. Это позволит снизить частоту различног о рода осложнений после восстановительных операций ваорто-артериальном бассейне и, тем самым, улучшить результаты лечения, а также повысить качество жизни у этой категории пациентов.
Клинико-иммунологическая характеристика синдрома хронической усталости
Селиванов А.А., Смирнов B.C., Селиванова Л.А., Малыгина Л.И.
Воешю-медицгшская академия Санкт-Петербург Россия
Синдром хронической усталости (СХУ) — малоизвестная и труднодиагностируемая нейропммунная и психофизиологическая патология. Этиология заболевания неизвестна. Имеются сообщения о развитии СХУ у ликвидаторов аварии на Чернобыльской АЭС, а также авиадиспетчеров и операторов радиолокационных станций.
Ведущим клиническим симптомом является постоянная усталость, не проходящая даже после длительного отдыха. Как правило, это достаточно тягостное ощущение сопровождается беспричинными головными болями, ми-алгиями и артрал гиями, не связанными с воспалительным процессом, симптомами раздражения толстой кишки. Часто больные отмечают повышенную раздражительность, рассеянность. Многие отмечают заметное снижение работоспособности. Нередко наблюдается бессонница. Продолжительность течения болезни составляе т около 6 мес. К врачу больные, как правило, не обращаются, специфических лабораторных тестов не разработано.
В период с декабря 1998 г. по февраль 1999 г. было обследовано 78 больных с различной степенью и давностью развития СХУ. В процессе обследования больных была разработана оригинальная методика выявления и мониторирования СХУ. В основе методики лежит специальный опросник и система математической обработки получаемых данных. С помощью этого опросника выявляются вероятные признаки СХУ, проводится дифференциальная диагностика с заболеваниями, имеющими сходные проявления: фибромиалгии, синдром Стилла, ревматические полимиалгии, синдромы Гийена-Бар-ре и Мейнинга.
У 7.7% больных выявлены устойчивые признаки раздражения толстой кишки, у 39.0 % эти признаки выявлялись периодически. Весьма необычно у больных прояв-
