CC BY
111
УДК 616-006 Вестник СПбГУ. Сер. 11. 2012. Вып. 1
Г. А. Раскин1,2, Р. В. Орлова1,2,3, С. В. Петров4, А. Э. Протасова3
ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ АДЕНОКАРЦИРНОМЫ ТОЛСТОЙ КИШКИ ДЛЯ ОЦЕНКИ ПРОГНОСТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ
1 Клиническая больница № 122 им. Л. Г. Соколова, Санкт-Петербург;
2 СПб ГУЗ «Городской клинический онкологический диспансер», Санкт-Петербург;
3 ГОУ ВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет им. И. И. Мечникова», Санкт-Петербург;
4 ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет», г. Казань;
ФБГОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный университет», медицинский факультет
В настоящее время химиотерапия при определенной нозологии назначается, как правило, по протоколам, разработанным после многолетних исследований противоопухолевых препаратов. Надо отметить, что при этом не учитываются особенности метаболизма клеток конкретной опухоли и, как результат, — не очень высокая эффективность химиопрепаратов. Сейчас всё большее развитие получает поиск так называемых предикторов эффективности противоопухолевых препаратов.
Белок Ki-67 экспрессируется с G1 по М фазу клеточного цикла, с его помощью можно оценивать пролиферирующий пул клеток, на который осуществляет воздействие химиопрепарат. Фермент топоизомераза-II-a является мишенью для антраци-клинов. Если происходит изменение уровня топоизомеразы-II-a в меньшую или большую сторону в сравнении с Ki-67, то можно говорить о гипо- или сверхэкспрессии этого фермента соответственно, предполагать эффективность антрациклинов [1].
Комбинация карбоплатины и паклитаксела — наиболее распространенный режим химиотерапии у больных немелкоклеточным раком легкого. Потеря экспрессии III класса в-тубулина и ERCC1 (excision repair cross-complementation) была связана с увеличением выживаемости этих больных, получавших химиотерапию по схеме таксаны плюс препараты платины, в то же время сохранная экспрессия одного из маркеров ухудшала выживаемость больных при проведении химиотерапии [2, 3]. ERCC-1 — это белок экс-цизионной репарационной системы ДНК — впервые был описан M. Duin в 1987 г. [4]. Эксцизионная репарационная система осуществляет восстановление поврежденной ДНК путем вырезания (эксцизии) поврежденной нуклеотидной последовательности в цепи ДНК и последовательным ее восстановлением ДНК-полимеразой [5]. Взаимодействие цисплатина (cis-diamminedichloroplatinum(ll)) с ДНК включает в себя два этапа. Вначале цисплатин связывает одну цепочку ДНК в G-остатках, затем формирует перекрестные связи внутри ДНК [5]. Дефекты в эксцизионной репарационной системе связаны с пигментной ксеродермой у человека. Гомозиготные по мутантному типу ERCC-1 мыши рождались карликовыми и умирали от печеночной недостаточности в течение нескольких месяцев после рождения [6].
Дигидропиримидин дегидрогеназа (Dihydropyrimidine dehydrogenase [NADP+], DPYD) — это фермент, ответственный за катаболизм 5-фторпиримидинов. Дефицит экспрессии данного гена связан с тимидин-урацилурией и повышенным риском токсичности препаратов ряда 5-фторпиримидинов у онкологических пациентов [7].
© Г. А. Раскин, Р. В. Орлова, С. В. Петров, А. Э. Протасова, 2012
Тимидилат синтетаза (TS) — мишень для 5-фтор-пиримидинов. Тимидинфос-форилаза (ТР) превращает Капецитабин (Кселода) из неактивной в активную форму, кроме того, ТР стимулирует превращение 5^и в FdUMP, который ингибирует TS [8, 9]. Некоторые исследователи показали, что высокий уровень TS связан с эффективностью 5-фтор-пиримидинов, однако в большинстве работ утверждается, что высокий уровень TS указывает на резистентность к 5-фтор-пиримидинам [10, 11].
Микротрубочки — это мишень для таксанов. Таксаны, связываясь со свободным в-тубулином, повышают скорость и степень его полимеризации, стимулируют сборку микротрубочек, стабилизируют сформировавшиеся микротрубочки, препятствуют деполимеризации тубулина и распаду микротрубочек [12]. Если в опухоли экспресси-руется III класс в-тубулина, то таксаны не могут воздействовать на микротрубочки и, соответственно, на опухолевые клетки [11, 13].
РТЕМ — белок гена-супрессора, ответственного за апоптоз клетки. Если подавляется EGFR, то РТЕМ отправляет клетку в апоптоз, таким образом, в случае отсутствия РТЕМ препараты типа анти-EGFR оказываются неэффективными [14, 15].
Материалы и методы. Был исследован материал первичных опухолей от 185 больных, получавших лечение в Городском клиническом онкологическом диспансере, 122 Клинической больнице. Материал поступал как в виде парафиновых блоков, так и кусочков опухолей, залитых в 10% буферный формалин. В последнем случае производилась вырезка материала, доведение фиксации в формалине до 24 часов. Затем проводили материал в десяти порциях изопропилового спирта и 3-х парафинах. Приготавливались блоки, с которых нарезались срезы толщиной 4 микрона, их помещали на стёкла с поли^-лизиновым покрытием. Срезы подсушивались, депарафинировались и подвергались демаскировке антигенов при помощи цитратного буфера в условиях водяной бани, 1 = 95°С, 30 мин. После чего они остывали при комнатной температуре и промывались трис-буфером с твином. Каждый срез обводился парафиновым карандашом, после чего осуществлялось ингибирование эндогенной пероксидазы 3% перекисью водорода в течение 20 мин. Затем на каждый срез наносилось первое антитело (табл. 1), экспозиция длилась 1 час на термостолике в условиях «водяной бани» при температуре 30°С.
Для визуализации реакции антиген-антитело применялась полимерная система детекции ЕпУшоп компании DAKO, в качестве хромогена использовался диаминобен-зидин. Контр-окрашивание ядер осуществлялось при помощи гематоксилина Майера. После каждого из этапов до окрашивания диаминобензидином стекла со срезами промывались в трис-буфере с твином рН 7,1 фирмы ВюОрИса. Стекла заключались в Вю-МаиП фирмы ВюОрИса.
Уровень экспрессии TS, ТР, DPYD оценивался следующим образом: 1 балл, если количество окрашенных клеток было менее 25%; 2 балла, если количество окрашенных клеток было не менее 25%, интенсивность окрашивания была слабая; 3 балла — количество больше или равно 25%, интенсивность умеренная; 4 балла — количество больше или равно 25%, интенсивность выраженная [16]. Позитивной реакцией признавались 2-4 балла, 1 балл считался негативной реакцией.
Статус ERCC-1 оценивался как позитивный, если количество позитивных клеток превышало 10% и интенсивность была выше или соответствовала степени окрашивания нормальных клеток [10, 17].
Таблица 1. Спецификация антител
№ Название антитела Клон Характер антител Разведение Фирма-производитель
1 b-tubulin, class III EP1569Y Кроличьи, моноклональные 1:250 Epitomics
2 ERCC-1 PDM 151 Мышиные, моноклональные 1:100 DBS
3 Ki-67 SP6 Кроличьи, моноклональные 1:200 LabVision
4 DPYD ab54797 Мышиные, моноклональные 1:100 AbCam
5 Thymidine Phosphorylase (TP) P-GF. 44C Мышиные, моноклональные 1:400 LabVision
6 Thymidylate synthase (TS) Sc-33679 Мышиные, моноклональные 1:100 Santa Cruz
7 Topoisomerase-II-a Ki-S1 Мышиные, моноклональные 1:300 LabVision
8 PTEN 17.A Мышиные, моноклональные 1:100 LabVision
Экспрессия III класса в-тубулина анализировалась при помощи Шз1о8соге (ги-стосчет).
Н = q слабо-окрашенных + 2q умеренно-окрашенных + 3q сильно-окрашенных,
где q — количество клеток [11]. Если гистосчет был более 50, то реакция признавалась позитивной.
Уровень пролиферации оценивался при помощи экспрессии Ю-67. Менее 15% считался низким уровнем, от 15 до 30% — умеренным, свыше 30% — высоким.
Экспрессия топоизомеразы-П-а исследовалась аналогично с Ю-67 способом и сопоставлялась с уровнем пролиферации.
Экспрессия РТЕМ считалась потерянной, если не менее чем в 50% клеток была снижена или отсутствовала экспрессия относительно нормальных структур [14, 15].
При оценке иммуногистохимического окрашивания использовался внутренний контроль в виде нормальных структур, присутствующих в срезах.
Статистический анализ проводили на персональном компьютере с использованием пакета программ Statistica 6.0. Непараметрические данные анализировались с использованием теста х2 . Различия считались статистически достоверными при р < 0,05.
Результаты и обсуждение. Локализации опухолей вместе с основными гистологическими формами, исследованные в данной работе, приведены в таблице 2. Основной исследуемой группой были случаи с аденокарциномой толстой кишки. Группой сравнения являлись аденокарциномы желудка и легкого.
Химиотерапевтические средства воздействуют на делящиеся клетки, которые являются неотъемлемым атрибутом любой злокачественной опухоли. Однако в организме есть ткани, которые в норме имеют достаточно высокий уровень пролиферации: это костный мозг, корни волос, эпителий кишечника. Очевидно, что чем ниже уровень пролиферативной активности в опухоли, тем больше химиопрепарата пойдет на уничтожение нормальных структур организма, обуславливая побочные эффекты.
Таблица 2. Распределения случаев в зависимости от локализации и дифференцировки
Локализация Количество случаев Дифференцировка / количество случаев
Аденокарцинома толстой кишки 139 Низкая 12
Умеренная 110
Высокая 9
Муцинозная аденокарцинома 8
Аденокарцинома желудка 34 Низкая 10
Умеренная 8
Высокая 4
Перстневидно-клеточный 16
Аденокарцинома легкого 12 Низкая 7
Умеренная 0
Высокая 5
Таблица 3. Распределение случаев аденокарциномы толстой кишки в зависимости от экспрессии Ю-67, ЕИСС-1, топоизомеразы-11-а, дифференцировки опухолей и метастатического статуса
Гистологическая дифференцировка, метастатический статус Ю-67 ERCC-1 Топоизомераза-11-а
В У Н + - Со Вы Ни
Муцинозная аденокарцинома 3 (37%) 3 (37%) 2 (26%) 7 (78%) 2 (22%) 2 (25%) 6 (75%
Высокодифференцированная 7 (78%) 1 (11%) 1 (11%) 2 (22%) 7 (78%) 1 (12%) 7 (88%)
Умереннодифференцирован-ная 89 (81%) 19 (17%) 2 (2%) 39 (35%) 71 (65%) 27 (26%) 76 (74%)
Низкодифференцированная 7 (58%) 3 (25%) 2 (17%) 2 (25% 6 (75% 2 (17%) 10 (84%)
Метастатическая форма рака 53 (73%) 14 (18%) 7 (9%) 24 (35%) 44 (65%) 17 (24%) 55 (76%)
Неметастатическая форма 34 (81%) 8 (19%) 0 15 (39%) 23 (61%) 11 (27%) 29 (73%)
Примечания: В — высокая пролиферация, У — умеренная, Н — низкая, «+» — позитивная реакция, «—» — негативная реакция, Со — экспрессия соответствует Ю-67, Вы — экспрессия выше Ю-67, Ни — экспрессия ниже Ю-67.
Любопытно отметить, что при анализе уровня пролиферации в аденокарциномах толстой кишки не отмечалось увеличения уровня пролиферации со снижением дифференцировки (табл. 3). Более того, в низкодифференцированных аденокарциномах уровень пролиферации оказался даже ниже в сравнении с высокодифференцирован-ными. При сравнении неметастатического рака и аденокарцином с метастазами, оказалось, что пролиферативный уровень в неметастатических формах аденокарцином
толстой кишки выше, чем с метастатическими формами. Высокий уровень пролиферации по данным исследований наблюдается в ранних неметастатических формах аде-нокарцином толстой кишки [18]. В аденокарциноме желудка прослеживается аналогичная тенденция при сравнении метастатических и неметастатических форм. Кроме того, в аденокарциномах желудка выявлялось увеличение пролиферативного уровня при снижении дифференцировки, однако перстневидноклеточный рак, клинически являющийся одним из наиболее агрессивных, по пролиферативному уровню оказался практически идентичным высокодифференцированной аденокарциноме. Аналогичная тенденция с увеличением уровня пролиферации при снижении дифференцировки наблюдалась в аденокарциномах легкого.
Уровень экспрессии ERCC-1 (рис. 1, е) не варьировался в аденокарциномах толстой кишки в зависимости от дифференцировки опухоли, однако более высокий уровень отмечался в муцинозных аденокарциномах толстой кишки, что в совокупности с более низким уровнем пролиферации должно указывать на более благоприятное клиническое течение данной группы опухолей, однако при оценке экспрессии TS (рис. 1, Ь) оказалось, что в муцинозных аденокарциномах имеется более высокий уровень экспрессии TS, что является плохим прогностическим фактором по данным одних авторов [19], хотя другие исследования не выявили корреляции экспрессии TS и выживаемости больных с распространенной аденокарциномой толстой кишки [20]. В аденокарциномах желудка экспрессия ERCC-1 не варьировалась в зависимости от дифференцировки, только перстневидноклеточный рак желудка показал более низкий уровень экспрессии. При сравнении метастатических и неметастатических форм аде-нокарцином желудка и толстой кишки оказалось, что уровень экспрессии ERCC-1 стабилен независимо от метастатического статуса и локализации опухоли.
Топоизомераза-П-а — это мишень для антрациклинов, однако изолированное ее определение не позволяет сделать вывод об эффективности доксорубицина и его производных [21]. Кроме того, во многих исследованиях топоизомераза-П-а оценивается путем гибридизации [22], когда учитывается амплификация гена, а не его экспрессия, хотя рядом авторов было показано, что увеличение числа копий гена топоизомеразы-П-а не коррелирует с его экспрессией [23], а следовательно, и с уровнем экспрессии мишени для антрациклинов. Сравнительный анализ топоизомеразы-П-а с уровнем пролиферации (Ю-67) позволяет сделать вывод, насколько делящийся (а значит, потенциально чувствительный к химиотерапии) пул клеток содержит мишень для антра-циклинов.
При сопоставлении экспрессии топоизомеразы-П-а с Ю-67 в аденокарциномах толстой кишки оказалось, что данный показатель практически не изменяется при различной гистологической дифференцировке. При сравнении групп метастатического рака толстой кишки и группы без метастазов степень экспрессии топоизомеразы-П-а в сопоставлении с Ю-67 также оказывалась неизменной.
Анализ экспрессии DPYD (рис. 1, а) показал, что в среднем негативный статус наблюдается в 17% аденокарцином толстой кишки, уровень экспрессии практически не изменялся в зависимости от дифференцировки опухоли и от метастатического статуса (р > 0,05). Так как низкий уровень экспрессии DPYD связан с высокой токсичностью препаратов ряда 5-фтор-пиримидинов [24], обуславливая прежде всего побочные эффекты на кардиоваскулярную систему [25], вероятно, перед назначением данной группы препаратов имеет смысл определять уровень экспрессии DPYD. В аде-
нокарциномах легкого также наблюдались случаи с отсутствием экспрессии БРУБ, а вот в аденокарциномах желудка был выявлен всего один случай с негативным статусом БРУБ.
Рис. 1. Иммуногистохимическое исследование аденокарциномы толстой кишки на DPD, TS, TP, PTEN, ERCC, III класс ß-тубулина, коричневое окрашивание хромогеном — диамензобензидином, контр-окрашивание гематоксилином Майера:
a — экспрессия DPD, выявляется цитоплазматическая реакция в раковых клетках, увеличение 1:400; b — окрашивание на TS, выявляется ядерная реакция в опухолевых клетках, увеличение 1:400; с — экспрессия ТР, ядерно-цитоплазматическое окрашивание опухоли, позитив в строме, увеличение 1:400; d — PTEN. Выявляется цитоплазматическая реакция в опухолевых клетках, увеличение 1:400; e — ERCC-1. Ядерная реакция в опухолевых клетках, увеличение 1:400; f — III класс ß-тубулина. Выявляется цитоплазматическая реакция в раковых клетках. Нормальная слизистая толстой кишки имеет негативную реакцию. Позитивная реакция также отмечается в нервных стволах, увеличение 1:100.
Таблица 4. Распределение случаев аденокарциномы толстой кишки в зависимости от экспрессии DPYD, ТР, TS, дифференцировки опухоли и метастатического статуса
Гистологическая дифференци-ровка, метастатический статус DPYD TP TS
- + - + - +
Муцинозная аденокарцинома 0 3 (100%) 1 (25%) 3 (75% 0 3 (100%)
Высокодифференцированная 1 (33%) 2 (67%) 0 3 (100%) 8 (89%) 1 (11%)
Умереннодифференцированная 9 (17%) 44 (83%) 14 (26%) 40 (74%) 9 (17%) 44 (83%)
Низкодифференцированная 2 (20%) 8 (80%) 2 (22%) 7 (78%) 2 (20%) 8 (80%)
Метастатическая форма рака 6 (15%) 34 (85%) 11 (26%) 31 (74%) 6 (15%) 34 (85%)
Неметастатическая форма 2 (11%) 17 (89%) 6 (32%) 13 (68%) 2 (10%) 18 (90%)
Примечание. «+» — позитивная реакция, « - » — негативная реакция.
Таблица 5. Распределение случаев аденокарциномы толстой кишки в зависимости от экспрессии III класса ß-тубулина и PTEN, дифференцировки опухоли и метастатического статуса
Гистологическая дифференцировка, метастатический статус III класс ß-тубулина PTEN
- + - +
Муцинозная аденокарцинома 3 (100%) 0 1 (14%) 6 (86%)
Высокодифференцированная 3 (43%) 4 (57%) 1 (20%) 4 (80%)
Умереннодифференцированная 26 (31%) 59 (69%) 14 (17%) 70 (83%)
Низкодифференцированная 4 (50%) 4 (50%) 0 10 (100%)
Метастатическая форма рака 20 (32%) 43 (68%) 11 (19%) 47 (81%)
Неметастатическая форма 12 (46%) 14 (54%) 3 (10%) 29 (90%)
Примечание. «+» — позитивная реакция, « - » — негативная реакция.
Однако мишень для химиопрепарата может меняться, например за счет экспрессии родственных белков. Так, белок тубулин, являющийся основным белком микротрубочек и мишенью таксанов [26] в раковых клетках, состоит из множества подклассов, один из которых (III класс в-тубулина) не взаимодействует с таксанами и ведет к резистентности опухолевых клеток к данному химиопрепарату [27, 28]. Экспрессия III класса в-тубулина связана с низкой эффективностью таксанов [2]. Этот маркер не позволяет делать вывод об эффективности таксанов, но может указывать на резистентность опухоли к данной группе химиопрепаратов.
В аденокарциномах толстой кишки при сравнении групп с метастазами и без оказалось, что экспрессия III класса в-тубулина (рис. 1, f) была статистически достоверно выше в группе с метастазами (р < 0,05). В 3-х случаях же муцинозного рака толстой кишки была выявлена отрицательная реакция на III класс в-тубулина, однако все 3 случая были метастатическими формами рака. Корреляцию экспрессии III класса в-тубулина и степень дифференцировки опухоли показали аденокарциномы желудка. Так, самый высокий уровень экспрессии III класса в-тубулина был выявлен в персте-видноклеточном раке желудка, а самый низкий — в высокодифференцированном раке. Что интересно: ни один случай с неметастатической формой рака желудка не показал позитивную реакцию на III класс в-тубулина. Наоборот, все случаи аденокарциномы легкого имели позитивную реакцию на III класс в-тубулина, и все они были метастатическими формами рака.
Препараты типа анти-EGFR активно применяются при лечении колоректального рака. Уже вошло в стандарты определение Ki-ras мутаций для оценки эффективности данной группы препаратов [29]. Однако все больше работ свидетельствует о неэффективности препаратов типа анти-EGFR при отсутствии экспрессии PTEN [15, 30]. При анализе экспрессии PTEN (рис. 1, d) в аденокарциномах толстой кишки оказалось, что неметастатические формы чаще оказываются позитивными на PTEN по сравнению с метастатическими формами.
Таким образом, наибольшую корреляцию с гистологической дифференцировкой и метастатическим статусом аденокарцином толстой кишки, желудка, легкого показала экспрессия III класса в-тубулина. Практически не менялась экспрессия TP, TS, DPYD. Остальные маркеры показали промежуточное значение. Сопоставление эффективности, токсичности химиотерапии в зависимости от экспрессии данных маркеров является задачей следующего исследования.
Литература
1. Miyoshi Y., Kurosumi M., Kurebayashi J., Matsuura N. et al. Topoisomerase IIalpha-positive and BRCAl-negative phenotype: association with favorable response to epirubicin-based regimens for human breast cancers // Cancer Letters. 2008. Vol. 264. P. 44-53.
2. Azuma K., Sasada T., Kawahara A. et al. Expression of ERCC1 and class III beta-tubulin in non-small cell lung cancer patients treated with carboplatin and paclitaxel // Lung Cancer. 2009. Vol. 64. P. 326-333.
3. Okuda K., Sasaki H., Dumontet C. et al. Expression of excision repair cross-complementation group 1 and class III beta-tubulin predict survival after chemotherapy for completely resected non-small cell lung cancer // Lung Cancer. 2008. Vol. 62. P. 105-112.
4. Duin M., Koken H. M., Tol J., Dijke P. et al. Genomic characterization of the human DNA excision repair gene ERCC-1 // Nucleic Acids Research. 1987. Vol. 15. P. 9195-9213.
5. Larminat F., Bohr V. A. Role of the human ERCC-1 gene in gene-specific repair of mcisplatin-induced DNA damage // Nucleic Acids Research. 1994. Vol. 22. P. 3005-3010.
6. McWhir J., Selfridge J., Harrison D. J. et al. Mice with DNA repair gene (ERCC-1) deficiency have elevated levels of p53, liver nuclear abnormalities and die before weaning // Nature Genetics. 1993. Vol. 5. P. 217-224.
7. Schneider H. B., Becker H. Impact of dihydropyrimidine dehydrogenase on 5-fluorouracil treatment in cancer patients // European Journal Medical Research. Vol. 8. P. 226-228.
8. Степанова Е. В., Бохан Б. Ю., Петровичев Н. Н., Личиницер М. Р. Экспрессия тимидилат синтетазы, тимидил фосфорилазы, дигидропиримидин дегидрогеназы в мягкотканых саркомах в оценке эффективности капецитабина // Вопросы онкологии. 2005. Т. 51, № 3. С. 314-316.
9. Uchida K., Danenberg P. V., Danenberg K. D., Grem J. L. Thymidylate synthase, dihydropyrim-idine dehydrogenase, ERCC1, and thymidine phosphorylase gene expression in primary and metastatic gastrointestinal adenocarcinoma tissue in patients treated on a phase I trial of Oxaliplatin and capecitabine // BioMed Central Cancer. 2008. Vol. 23. P. 386.
10. Kwon H. C., Roh M. S., Oh S. Y. et al. Prognostic value of expression of ERCC1, thymidylate synthase, and glutathione S-transferase P1 for 5-fluorouracil/oxaliplatin chemotherapy in advanced gastric cancer // Annals of Oncology. 2007. Vol. 18. P. 504-509.
11. Sève P., Lai R., Ding K., Winton T. et al. Class III ß-Tubulin Expression and Benefit from Adjuvant Cisplatin/Vinorelbine Chemotherapy in Operable Non-Small Cell Lung Cancer: Analysis of NCIC JBR. 10 // Clinical Cancer Research. 2007. Vol. 13. P. 99-104.
12. Имянитов Е. Н., Моисеенко В. М., Брежнев Н. В. Роль тубулина в резистентности к препаратам таксанового ряда // Российский онкологический журнал. 2008. № 6. С. 49-52.
13. Yang W., Klos K. S., Zhou X. et al. ErbB2 overexpression in human breast carcinoma is correlated with p21Cip1 up-regulation and tyrosine-15 hyperphosphorylation of p34Cdc2: poor responsiveness to chemotherapy with cyclophoshamide methotrexate, and 5-fluorouracil is associated with Erb2 overexpression and with p21Cip1 overexpression // Cancer. 2003. Vol. 98. P. 1123-1130.
14. Frattini M., Saletti P., Romagnani E., Martin V. et al. PTEN loss of expression predicts cetuximab efficacy in metastatic colorectal cancer patients // British Journal of Cancer. 2007. Vol. 97. P. 1139-1145.
15. Perrone F., Lampis A., Orsenigo M. et al. PI3KCA/PTEN deregulation contributes to impaired responses to cetuximab in metastatic colorectal cancer patients // Annals of Oncology. 2009. Vol. 20. P. 84-90.
16. Honda J., Sasa M., Moriya T., et al. Thymidine phosphorylase and dihydropyrimidine dehydrogenase are predictive factors of therapeutic efficacy of capecitabine monotherapy for breast cancer — preliminary result // The Journal of Medical Investigation. 2008. Vol. 55. P. 54-60.
17. Taillade L., Penault-Llorca F., Boulet T., Fouret P. et al. Immunohistochemichal expression of biomarkers: a comparative study between diagnostic bronchial biopsies and surgical specimens of non-small-cell lung cancer // Annals of Oncology. 2007. Vol. 18. P. 1043-1050.
18. Hoos A., Nissan A., Stojadinovic A., Shia J. et al. Tissue microarray molecular profiling of early, node-negative adenocarcinoma of the rectum. A comprehensive analysis // Clinical Cancer Research. 2002. Vol. 8. P. 3841-3849.
19. Karlberg M., Ohrling K., Edler D., Hallström M. et al. Prognostic and predictive value of thy-midylate synthase expression in primary colorectal cancer // Anticancer Research. 2010. Vol. 30. P. 645-651.
20. Ishibashi K., Okada N., Ishiguro T., Kuwabara K. et al. The expression of thymidylate synthase (TS) and excision repair complementing-1 (ERCC-1) protein in patients with unresectable colorectal cancer treated with mFOLFOX6 therapy // Gan To Kagaku Ryoho. 2010. Vol. 37. P. 2532-2535.
21. Cardoso F., Durbecq V., Larsimont D. et al. Correlation between complete response to anthracycline-based chemotherapy and topoisomerase II-alpha gene amplification and protein overexpression in locally advanced/metastatic breast cancer // International Journal of Oncology. 2004. Vol. 24. P. 201-209.
22. Esteva F. J., Hortobagyi G. N. Topoisomerase II{alpha} amplification and anthracycline-based chemotherapy: the jury is still out // Journal Clinical Oncology. 2009. Vol. 27. P. 3416-3417.
23. Mueller R. E., Parkes R. K., Andrulis I., O'Malley F. P. Amplification of the TOP2A gene does not predict high levels of topoisomerase II alpha protein in human breast tumor samples // Genes Chromosomes Cancer. 2004. Vol. 39. P. 288-297.
24. Yoo B. K., Gredler R., Vozhilla N., Su Z. Z. et al. Identification of genes conferring resistance to 5-fluorouracil // Proceeding National Academy Science USA. 2009. Vol. 106. P. 12938-12943.
25. Shahrokni A., Rajebi M. R., Harold L., Saif M. W. Cardiotoxicityof 5-fluorouracil and capecitabine in a pancreatic cancer patient with a novel mutation in the dihydropyrimidine dehydrogenase gene // Journal of the pancreas. 2009. Vol. 10. P. 215-220.
26. Tang S. C. Taxanes in the adjuvant treatment of early breast cancer, emerging consensus and unanswered questions // Cancer Investigation. 2009. Vol. 27. P. 489-495.
27. Dumontet C., Isaac S., Souquet P. J. et al. Expression of class III beta tubulin in nonsmall cell lung cancer is correlated with resistance to taxane chemotherapy // Bulletin du Cancer. 2005. Vol. 92. P. 25-30.
28. Mozzetti S., Ferlini C., Concolino P. et al. Class III beta-tubulin overexpression is a prominent mechanism of paclitaxel resistance in ovarian cancer patients // Clinical Cancer Research. 2005. Vol. 11. P. 298-305.
29. Amado R. G., Wolf M., Peeters M. et al. Wild type KRAS is required for panitumumab efficacy in patients with metastatic colorectal cancer // Journal Clinical Oncology. 2009. Vol. 26. P. 1626-1634.
30. Steffensen K. D., Waldstmm M., Jakobsen A. The relationship of platinum resistance and ERCC1 protein expression in epithelial ovarian cancer // International Journal Gynecological Cancer. 2009. Vol. 19. P. 820-825.
Статья поступила в редакцию 7 декабря 2011 г.
