CC BY
41
УДК 616.432 -053.31/ 36-091.8:1618.3-06:616.98:578.828]
ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСНИЕ ОСОБЕННОСТИ АДЕНОГИПОФИЗА ДЕТЕЙ, УМЕРШИХ В ВОЗРАСТЕ ОТ 6 МЕСЯЦЕВ Д01 ГОДА ОТ ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ МАТЕРЕЙ
Иммуногистохимическое исследование позволило нам определить в аденогипофизе детей, умерших в возрасте от 6 месяцев до 1 года от ВИЧ-инфицированных матерей, снижение интенсивности свечения тиреотропоцитов и адренокортикотропо-цитов, обработанных моноклональными антителами (МКА) к тиреотропному гормону (ТТГ) и адренокортикотропному гормону (АКТГ). Массивное разрастание стромы, увеличение относительного объема хромофильных клеток, за счет уменьшения хромофобных, данные иммуногистохимического исследования указывают на глубокое функциональное истощение аденогипофиза детей, умерших в возрасте от 6 месяцев до 1 года от ВИЧ-инфицированных матерей.
Ключевые слова: аденогипофиз, ВИЧ-инфекция, дети.
Введение. Ключевым звеном адаптационно-компенсаторного механизма эндокринной системы организма, как известно, является аденогипофиз. Несмотря на очевидную важность аденогипофиза в становлении эндокринной системы плода, его возрастная морфология описана лишь в единичных работах [з, 6, 12]. Известно, что при хронической фетоплацентарной недостаточности возникают состояние функционального истощения, декомпенсация эндокринных органов плода, дистрофия и деструкция секреторных клеток. Эти процессы являются не столько следствием нарушения обмена веществ, сколько проявлением перехода организма к аварийной секреции из-за гиперстимуляции со стороны регулирующих систем [3].
Неуклонный рост инфицирования ВИЧ женщин детородного возраста, заставил нас задуматься об особенностях развития ребенка на фоне материнской ВИЧ-инфекции, так как данное обстоятельство, по-видимому, приведет к компенсаторным морфологическим изменениям в организме ребенка в целом и эндокринной системе в частности [5, 7]. В доступной литературе данных о иммуногистохимических особенностях аденогипофиза детей, умерших в возрасте от 6 месяцев до 1 года, от ВИЧ-инфицированных матерей, найти не удалось, поэтому изучение данной проблемы, на наш взгляд, является весьма актуальным.
Целью настоящего исследования явилось выявление иммуногистохимических особенностей аденогипофиза детей умерших в возрасте от 6 месяцев до 1 года от ВИЧ-инфицированных матерей.
Материалы и методы исследования. Материал собирался в период с 1998 по 2011 гг. и предоставлен для изучения Одесским патологоанатомическим бюро. В исследуемую группу (группа Д-2) были отобраны 13 детей, умерших в возрасте от 6 месяцев до 1 года, от матерей с серологически подтвержденной ВИЧ-инфекцией. Для получения достоверных данных материал подбирался тщательно. Причиной смерти детей нашей исследуемой группы явились легочно-сердечная недостаточность, отек головного мозга и полиорганная недостаточность. Группу сравнения (группу Д-i) составили 12 случаев детей умерших в возрасте до 6 месяцев от ВИЧ-инфицированных матерей. Умершие дети группы сравнения погибли вследствие легочносердечной недостаточности, отека головного мозга и полиорганной недостаточности.
Аденогипофиз измерялся и взвешивался. Вырезались кусочки, которые после спиртовой проводки заливались в целлоидин-парафин, и изготавливались срезы толщиной 5-6 мкм. Эти срезы окрашивали по методу ван Гизон и по методу Маллори.
Иммуногистохимическое исследование производилось с использованием непрямого метода Кунса в модификации М. Brosman (1979) [1]. Адренокортикотропный гормон (АКТГ) и ти-реотропный гормон (ТТГ) выявляли с помощью моноклональных антител (МКА) к АКТГ и ТТГ фирмы Chemicon international (a Serological company)..
Иммуногистохимическое исследование проводилось в люминисцентном микроскопе «Axioskor 40» с использованием программного обеспечения Biostat. ехе.
Оптическую плотность иммунофлюоресценции определяли по методу Губиной-Вакулик Г.И. и соавторов (Губша-Вакулик ГЛ., Сорокина I.B., Марковський В.Д., Kynpiянова Л.С., Сидо-
СЛ. ШЕРСТЮК
Харьковский национальный университет имени В.Н. Каразина
e-mail: [email protected]
ренко Р.В. «Спосіб кількісного визначення вмісту антигену в біологічних тканинах». Патент на корисну модель № 46489 G01N 33/00, 24.12.2009. Бюл. №4).
Комплекс гистологических, морфометрических исследований проводился на микроскопе Olympus ВХ-41 с использованием программ Olympus DP-Soft (Version 3:1) и Microsoft Excel [4]. Плотность клеточных элементов пересчитывалась при увеличении 400, в ю ограниченных полях зрения. Все цифровые данные обрабатывались методами математической статистики с использованием вариационного и альтернативного анализа [4]. При использовании методов альтернативной и вариационной статистики вычисляли среднюю арифметическую степень дисперсии, среднеквадратическое отклонение, среднюю ошибку разницы, вероятность различия. Вероятность различия между двумя средними при малых выборках определяли по таблице Стьюдента с соблюдением условия (пі+п2-2) [ю]. При определении степени вероятности допускали точность р<0,05, что, как известно, соответствует Р>95,о%.
Результаты исследований. Микроскопически структурированность паренхимы нечеткая, с трудом удавалось визуализировать эпителиальные тяжи, в ряде случаев разделенные сетью синусоидных капилляров и рыхлой волокнистой соединительной тканью.
Обращало на себя внимание массивное разрастание периваскулярной соединительной ткани (рис. і).
В
Рис. 1. Аденогипофиз группы Д-2. Сеть полнокровных синусоидных капилляров с резко выраженным периваскулярным склерозом. Окраска по методу ванГизон. хюо
Периферическая часть тяжей была заполнена преобладающей популяцией эндокрино-цитов - хромофильными клетками, а срединное положение занимали клетки небольшого размера с нечеткими границами и слабо окрашиваемой цитоплазмой (хромофобные эндокри-ноциты).
Хромофильные клетки, по тропности их секреторных гранул к красителям, были разделены на ацидофильные и базофильные эндокриноциты, их соотношение составляло 4,3/1.
Популяция клеток, секреторные гранулы которых окрашивались основными красителями (базофильные эндокриноциты), встречались преимущественно в передмедиальной и переднелатеральной зонах.
Одним из представителей этой группы явились тиреотропоциты полигональной формы с центрально расположенным овальным ядром. Секреторные гранулы данной популяции клеток чаще выявлялись вдоль клеточной мембраны. Интенсивность свечения тиреотропоцитов в препаратах аденогипофиза обработанных МКА к ТТГ оказалась достоверно ниже, чем в группе Д-1 (рис. 2), (табл. і).
Рис. 2. Слабое специфическое свечение в цитоплазме тиреотропоцитов в аденогипофизе детей группы Д-2.
Прямой метод Кунса с МКА к АКТГ, хбоо
Адренокортикотропоциты определялись зачастую в переднемедиальной области аденогипофиза и имели, как правило, полигональную форму. Дольчатое ядро, занимало центральное положение в клетке. Цитоплазма окрашивалась в голубоватый цвет. Интенсивность свечения
адренокортикотропоцитов в препаратах обработанных МКА к АКТГ была слабой (рисунок з), соответственно показатель оптической плотности оказался ниже такового в группе Д-1 (табл. 1).
Рис. д. Слабое специфическое свечение адренокортикотропоцитов в аденогипофизе группы Д-2.
Прямой метод Кунса с МКА к АКТГ, хбоо
Обсуждение результатов. Как свидетельствуют данные литературы, увеличение относительного объема хромофильных клеток за счет уменьшения хромофобных, выявленное в данной исследуемой группе, является подтверждением напряжения компенсаторных возможностей аденогипофиза [8].
По-видимому, в нашем случае дети, умершие в возрасте от 6 месяцев до 1 года от ВИЧ-инфицированных матерей, не были подвержены нарушению развития аденогипофиза в эмбриогенезе, но испытывали высокое функциональное напряжение длительный период времени, включая и внутриутробный период, что привело к напряжению, а в последующем и к срыву адаптационно-компенсаторных возможностей аденогипофиза, так как известно, что длительное действие повреждающего фактора (длительно текущий поздний токсикоз, сердечнососудистая патология, профвредности и др.) может привести к угнетению (иногда резкому) функционального состояния аденогипофиза [2, д, и, 12]. Данные иммуногистохимического исследования свидетельствующие о прогрессивном снижении интенсивности свечения тиреотропоцитов и адренокортикотропоцитов, также являются подтверждением того, что функциональное состояние аденогипофиза детей, умерших в возрасте от 6 месяцев до 1 года от ВИЧ-инфицированных матерей, находится в состоянии угнетения (табл.).
Таким образом, в аденогипофизе детей, умерших в возрасте от 6 месяцев до 1 года от ВИЧ-инфицированных матерей, мы выявили глубокое функциональное истощение, проявившееся массивным разрастанием стромы, увеличением относительного объема хромофильных клеток, за счет уменьшения хромофобных, а также снижение интенсивности свечения тиреотропоцитов и адренокортикотропоцитов обработанных МКА к ТТГ и АКТГ.
Таблица
Оптическая плотность иммунофлюоресценции гормонов в клетках аденогипофиза (условные единицы)
Группы сравнения АКТГ ТТГ
Д-1 о,137±о, оо8 о,152±о, 005
Д-2 о,117±о, 004* 0,112±0, 003*
* Р<0,05 по сравнению с Д-1.
Выводы. Иммуногистохимический метод исследования позволил нам определить в аденогипофизе детей, умерших в возрасте от 6 месяцев до 1 года от ВИЧ-инфицированных матерей, снижение интенсивности свечения тиреотропоцитов и адренокортикотропоцитов обработанных МКА к ТТГ и АКТГ. Массивное разрастание стромы; увеличение относительного объема хромофильных клеток, за счет уменьшения хромофобных; снижение интенсивности свечения тиреотропоцитов и адренокортикотропоцитов обработанных МКА к ТТГ и АКТГ, свидетельствует о глубоком функциональном истощении аденогипофиза детей, умерших в возрасте от 6 месяцев до 1 года от ВИЧ-инфицированных матерей.
Литература
1. Атраментова Л.А. Статистические методы в биологии / Л.А. Атраментова, О.М. Лутевская //Горловка - 2008. - 247 с.;
2. Дедов И.И. Детская эндокринология / И.И. Дедов, В.А. Петеркова.// М.: Универсум Паблишинг, 2006. - боо с.;
3. Деревцов В. В. Состояние здоровья и адаптационно-резервные возможности в неонатальном периоде новорожденных детей матерей с анемиями / В. В. Деревцов // Фундаментальные исследования. -2010. - № 8 - С. 10-21;
4. Лапач С.К. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием Ехе1. / С.К. Лапач, А.В. Чубенко, П.Н. Бабич // К.:МОРИОН, 2001. - С. 144-155;
5. Марциновская В. А. Эпидемиологическая характеристика ВИЧ-инфекции у детей, рожденных ВИЧ-инфицированными женщинами, в Украине / В.А. Марциновская // Український медичний часопис. - 2006. -№і. - С. 109-113;
6. Милованова А.П. Внутриутробное развитие человека / А.П. Милованова, С.В. Савельева //. -М.: «МДВ», 2006. - 384 с.;
7. Ніколаєнко Д.В. Характеристика епідемічної ситуації з ВІЛ/СНІД в адміністративних областях України на базе ГІС /Д.В. Ніколаєнко, М.О. Трюхан// Вісник геодезії та картографії. - 2007. - №4.- С. 28-31;
8. Перетятко Л.П. Морфология плодов и новорожденных с экстремально низкой массой тела / Л.П. Перетятко, Л.В. Кулида, Е.В. Проценко // Иваново.: ОАО «Издательство «Иваново», 2007. - 384 с.;
9. Савищев А.В. Воздействие гипоксии на ультраструктуру ацинарных клеток поджелудочной железы / А.В. Савищев // «Морфология». - 2008. -№ 4. - С. 91;
10. Сергиенко В.И. Математическая статистика в клинических исследованиях./ В.И. Сергиенко, И.Б. Бондарева // М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 2000. - 256 с.;
11. Асфиксия новорожденных / Н.П. Шабалов, В.А. Любименко, А.Б. Пальчик, В.К. Ярославский. // - М.: МЕДпресс- информ. - 2003. - 368 с.;
12. Щеплягина Л.А., Состояние здоровья новорожденных от матерей с увеличением щитовидной железы / Л.А. Щеплягина, О.С. Нестеренко, НА. Курмачева // Рос. педиатр, журнал. - 2009. - № 4. -С. 56-58.
IMMUNOHISTOCHEMICAI FEATURES OF ADENOHYPOPHYSIS CHILDREN DIED AT THE AGE OF 6 MONTHS T01 YEAR FROM HIV-INFECTED MOTHERS
SASHERSTIUK
The Karazin Kharkiv National University
e-mail:[email protected]
Immunohistochemical study allowed us to identify reduction light intensity tireotropotsitov and adrenokortikotropotsitov treated with monoclonal antibody to TSH and ACTH in the adenohypophysis of dead children of 6 months to l year from HIV-inlected mothers. On account of a massive expansion of the stroma and increasing the relative amount chromolilic cells due to reducing the chromophobe cells the immunohistochemical studies indicate a profound depletion of anterior pituitary gland function of children who died at the age of 6 months to l year old from HIV-infected mothers.
Keywords: anterior pituitary, HIV inlection, children.
