Иммуногистохимическая характеристика слизистой оболочки тонкой кишки при воздействии сероводородсодержащего газа Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Список литературы

1. Бобков, А. И. О компенсированных и декомпенсированных гормональных и биохимических нарушениях при стрессе / А. И. Бобков, Д. В. Решетняк, Е. В. Никушкин // Клиническая лабораторная диагностика. - 2000. - № 9. - С. 42-42.

2. Коваленко, Е. А. Гипокинезия / Е. А. Коваленко, Н. Н. Гуровский. - М. : Медицина, 1980. - 320 с.

3. Трилис, Я. Г. Взаимодействие основных эндокринных комплексов и процессов метаболизма в динамике стресса / Я. Г. Трилис, В. В. Давыдов, В. И. Николаев // Клинические и экспериментальные исследования. - 2006. - № 2. - С. 84-89.

Бахарев Илья Вячеславович, ассистент кафедры анатомии человека, ГБОУ ВПО «Рязанский государственный медицинский университет» Минздрава России, Россия, 390026, г. Рязань, ул. Шевченко, д. 34, тел.: (4912) 75-25-75, е-таП: [email protected].

УДК 616.341:611-018.25:951.81 © А.А. Бахтин, Т.А. Шишкина, И.Ю. Чекунова, 2013

А.А. Бахтин, Т.А. Шишкина, И.Ю. Чекунова

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ТОНКОЙ КИШКИ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ СЕРОВОДОРОДСОДЕРЖАЩЕГО ГАЗА

ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России

Изучены иммуногистохимические особенности слизистой оболочки тонкой кишки при хроническом ингаляционном воздействии природным сероводородсодержащим газом в концентрации, не превышающей предельно допустимой. С помощью различных антител (Bcl-xl, Ki-67, Integrin beta 5, Cadherin pan, p27kip1) оценено состояние эпителиального пласта слизистой оболочки тонкой кишки. Показано, что наиболее значимыми проявлениями эксперимента явилось усиление экспрессии такого маркера, как p27kip, и снижение Ki-67, Bcl-xl, Integrin beta 5, Cadgerin pan.

Ключевые слова: тонкая кишка, p27kip, Ki-67, Bcl-xl, Integrin beta 5, Cadgerin pan, сероводородсодер-жащий газ.

A.A. Bakhtin, T.A. Shishkina, I.Yu. Chekunova

IMMUNOHISTOCHEMICAL CHARACTERISTIC OF MUCOSE MEMBRANE OF THE SMALL INTESTINE AFTER THE INFLUENCE OF HYDROGEN SULPHIDE GAS

There were studied immunohistochemical features of mucosa of small intestines under the influence of chronic inhalation of natural hydrogen sulfide gas in the concentration which was not exceeding maximum permissible. By means of various antibodies (Bcl-xl, Ki-67, Integrin beta 5, Cadherin pan, p27kip) it was estimated the condition of epithelial layer of mucosa of small intestines. It was shown the most significant implications of experiment to be intensification of expression of marker p27kip and depression of markers Bcl-xl, Ki-67, Integrin beta 5, Cadherin pan.

Key words: small intestines, Bcl-xl, Ki-67, Integrin beta 5, Cadherin pan, natural hydrogen sulfide gas.

Введение. В последнее десятилетие морфогенез и многих типовых патологических процессов, и болезней пытаются раскрыть с позиций нарушения межклеточных взаимодействий, чему способствуют успехи молекулярной биологии [1]. Динамическое равновесие обновляющихся тканей связано с двумя разнонаправленными процессами: митотическим размножением и гибелью клеточных популяций. Гибель клеток играет чрезвычайно важную роль в формировании и функционировании многоклеточных организмов. Нарушение нормального контроля гибели клеток вызывает изменение гомео-стаза и приводит к различным патологическим процессам и состояниям. Длительное время значение гибели клеток недооценивалось. В последние годы интерес к этому явлению значительно возрос, и эта проблема стала одной из самых изучаемых в медицине и биологии [3, 4].

Цель: дать иммуногистохимическую характеристику слизистой оболочке тонкой кишки при воздействии сероводородсодержащего газа.

Материалы и методы. Материалом исследования стали белые беспородные половозрелые крысы, самцы, массой 180-220 г. Протокол экспериментов был составлен в соответствии с правилами биоэтики и лабораторной практики. Все животные были распределены на 5 групп. Четыре экспериментальные группы подвергались воздействию природного газа в концентрации 3 мг/м3 по сероводороду на протяжении 5 дней в неделю в течение 4 месяцев. Контролем служили крысы того же возраста, находившиеся в стандартных условиях вивария. В качестве непосредственного метода эвтаназии использовалась ингаляция смертельной дозы эфира для наркоза (этоксиэтан) [5]. После фиксации извлеченных органов 10 % нейтральным забуференным формалином были приготовлены парафиновые блоки. В исследованиях использовались антитела и система детекции фирмы SpringBioscience (США). Для иммуногистохимических исследований использовались стекла фирмы Menzel-Glaser (Германия) с поли^-лизиновым покрытием Thermo Scientific (США), что гарантировало фиксацию срезов даже после долгого нахождения их во влажной камере (в течение 3 суток). Определялась экспрессия следующих маркеров: Bcl-xl, Ki-67, Integrin beta 5, Cadherin pan, p27kip1.

Результаты исследования и их обсуждение. Уже через 1 месяц наблюдается снижение экспрессии Integrina beta 5. Уменьшение интегринов можно связать с процессами усиления слущивания энтероцитов на фоне усиленного апоптоза. Вследствие этого уже через 1 месяц хронической ингаляции сероводородсодержащего газа отмечаются изменения, связанные с пролиферативной активностью эпителия, это, прежде всего, повышение экспрессии p27kip1, что говорит о более детальном контроле митотической активности эпителия, чтобы не пропустить клетку с поврежденным хромосомным аппаратом. Кроме того, повышенная выработка белка p27kip1 блокирует комплекс циклин-зависимая киназа-2/циклин-Е, циклинзависимая киназа-2/Циклин-А, что приводит к остановке мито-тического деления в фазе G1, S. Остановка митотического цикла является ничем иным, как прохождением «сверочных точек». Первая «сверочная точка» приходится на фазу Gi. С этой точкой связана гиперэкспрессия белка p27kipi, нарастание которого по мере увеличения срока эксперимента было зафиксировано в данной работе. Если защитным механизмам удастся справиться с повреждениями, то клетка перейдет в следующий период жизненного цикла, если процесс восстановления затянется или повреждениями окажутся слишком значительными, увеличится экспрессия белков, отвечающих за апоптоз. Следовательно, экспрессия белков, отвечающих за митоз, начнет снижаться, в том числе уменьшится содержание маркера пролиферации Ki-67.

Вследствие более «детальной проверки» энтероцитов, находящихся в фазе митоза, и продолжающегося действия абиотического фактора все больше клеток «выбраковывается» из дифферона с помощью одного из механизмов клеточной гибели - апоптоза. Последний - это физиологический процесс, и его нарушение ведет к нелегитимному выживанию клеток, патологии развития или к заболеваниям опухолевого и неопухолевого характера. Программа апоптоза запускается в двух случаях: неудовлетворительное состояние самой клетки или негативная сигнализация снаружи. К факторам, вызывающим апоптоз изнутри, относятся чрезмерные плохо репарируемые или полностью нерепари-руемые повреждения ДНК, а также серьезные повреждения мембран, особенно митохондриальных, наиболее опасными в данном случае являются оксид азота и супероксидный радикал. В работах Т.А. Шишкиной (2008) и И.С. Давлатовой (2010) [2, 6] показано, что хроническое воздействие серо-водородсодержащим газом Астраханского месторождения в малой концентрации повышает образование оксида азота и увеличивает активность перекисного окисления липидов (ПОЛ), в том числе в структурах тонкой кишки. На делящиеся клетки добавляется действие еще одного фактора риска -сам процесс деления. Таким образом, в популяциях часто обновляющихся клеточных линий, к которым относится и эпителий тонкой кишки, деления повышают вероятность апоптоза.

Уже через 1 месяц проведения эксперимента отмечалось снижение экспрессии противоапопто-тического маркера Bcl-xl, что говорит об увеличении клеточной гибели. Преобладание апоптозов над митозами приводит к атрофии. Кроме того, данный срок эксперимента характеризуется повышением экспрессии p27kip 1 и снижением маркеров пролиферации Ki-67 и Integrin beta 5.

Во второй месяц эксперимента в эпителии отмечались практически прежние иммуногистохи-мические показатели c незначительным повышением их значений, что расценивалось как стабилизация адаптивных процессов, кроме того, сохранялась тенденция к повышению экспрессии р27Ыр1, и снижению экспрессии таких маркеров, как Ki-67, Bcl-xl, Cadgerin, Integrin beta 5. Данное соотношение маркеров клеточной экспрессии говорит об усугублении атрофических процессов, происходящих в эпителии. Уменьшение экспрессии Integrin beta 5 отражается на состоянии базальной мембраны.

На третий месяц эксперимента в иммуногистохимических исследованиях продолжала нарастать экспрессия р27Ыр1 и снижаться экспрессия всех остальных маркеров.

Четвертый месяц эксперимента характеризовался уже грубыми деструктивными изменениями. Отмечалось резкое увеличение бокаловидных клеток. Таким образом, изменения, происходящие в соединительнотканном каркасе, преобладание апоптоза над пролиферативными процессами, смена процентного соотношения пула различных энтероцитов приводят к изменениям уже на морфометри-ческом уровне.

Как отмечалось выше, действие природного газа приводит к образованию и накоплению активных форм кислорода с формированием оксидативного стресса и антиоксидантной недостаточности. В результате повышается проницаемость мембран, особенно чувствительны к действию радикалов мембраны митохондрий. Через поврежденные мембраны митохондрий диффундируют различные белки, активирующие каспазный каскад апотоза. В результате увеличивается количество проапопто-тических и снижается концентрация противоапоптотических факторов, в том числе Вс1-х1. Снижение его экспрессии было обнаружено в эпителии тонкой кишки пропорционально увеличению срока эксперимента. Белки группы Вс1 регулируют перенос Са2+ через мембраны эндоплазматического рети-кулума и митохондрий и отменяют сигнал для входа экстрацеллюлярного Са2+, предотвращая, таким образом, повышение цитозольного Са2+ в клетке и запуск апоптоза.

Что касается апоптоза «по команде», то в этом случае запрограммированная клеточная гибель развивается, если не выполняется хотя бы одно из условий: отсутствие ростового фактора, потеря связи с опорным субстратом или контакт клеток между собой. Также апоптоз запускается при действии антимитогенных факторов, например, глюкокортикоидов, ФНО и многих других. В работе показано, что хроническое действие природного газа приводит к изменению качественного состава экст-рацеллюлярного матрикса, это сопровождается накоплением сиаломуцинов и разрушением базальной мембраны. Соответственно, связь эпителиальных клеток с базальной мембраной уменьшается, что проявляется уменьшением количества интегриновых связей и снижением концентрации Ш^пп, что является дополнительным фактором запуска апоптоза. Этому способствуют действующие на клетку антимитогены. Что касается изучаемого Cadgerin, уменьшение его экспрессии связывается с уходом Са2+, необходимого для поддержания межклеточных связей, в клетки из-за снижения в последних Вс1-х1 на фоне действия природным газом.

Заключение. Выявленные изменения изучаемых иммуногистохимических маркеров полностью согласуются с полученной гистологической картиной. При хроническом воздействии сероводо-родсодержащим газом в эпителии тонкой кишки происходит преобладание апоптоза над пролиферацией. Причем запрограммированная клеточная гибель запускается как в ответ на действие внешних факторов («по команде»), так и «изнутри».

Список литературы

1. Белушкина, Н. Н. Введение в молекулярную патологию / Н. Н. Белушкина, И. И. Белицкий. - М. : Медицина, 2004. - 623 с.

2. Давлатова И. С. Морфофункциональная характеристика стенки толстой кишки при хроническом воздействии сероводородсодержащим газом: (экспериментальное исследование) : автореф. дис. ... канд. мед. наук / И. С. Давлатова. - Тюмень, 2010. - 18 с.

3. Западнюк, И. П. Лабораторные животные / И. П. Западнюк, В. И. Западнюк, Е. А. Захария. -Киев : Вища школа, 1974. - 210 с.

4. Суханова, Г. А. Апоптоз : учеб. пос. / Г. А. Суханова, О. Е. Акбашева. - Томск : Изд-во ТПУ, 2009. - 172 с.

5. Темчура, В. В. Роль растворимых факторов, продуцируемых эпителиальными клетками тонкого кишечника мыши, в регуляции гемо-, иммуно- и энтеропоэза : автореф. дис. ... канд. биол. наук / В. В. Темчура. - Новосибирск, 2001. - 18 с.

6. Шишкина, Т. А. Патогенетические механизмы нарушения микроциркуляции в легких при хроническом воздействии сероводородсодержащим газом : автореф. дис. ... канд. мед. наук / Т. А. Шишкина. - Саратов, 2008. - 24 с.

Бахтин Артур Александрович, аспирант кафедры гистологии и эмбриологии, ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 414000, г. Астрахань ул. Бакинская, д. 121, тел.: (8512) 78-33-78, е-таП: [email protected].

Шишкина Татьяна Александровна, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры гистологии и эмбриологии, ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 414000, г. Астрахань ул. Бакинская, д. 121, тел. 8-961-054-31-25, е-шаП: [email protected].

Чекунова Ирина Юрьевна, кандидат биологических наук, ассистент кафедры гистологии и эмбриологии, ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России, Россия, 414000, г. Астрахань ул. Бакинская, д. 121, тел. 8-961-816-09-18.

УДК 616.895.6-615.035.1

© П.О. Бомов, И.В. Городошникова, М.В. Дворниченко, А.А. Шипилова, 2013

П.О. Бомов1, И.В. Городошникова2, М.В. Дворниченко1, А.А. Шипилова1

ПОЗДНЕВОЗРАСТНЫЕ ДЕПРЕССИИ И ОСОБЕННОСТИ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОГО ВМЕШАТЕЛЬСТВА ПРИ НИХ

:ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Минздрава России 2ГБУЗ «Оренбургская областная клиническая психиатрическая больница № 1»

Обследовано 23 пациента с началом депрессивных расстройств после 45 лет. По структуре депрессивных расстройств преобладали больные с тревожным аффектом, в меньшей степени были представлены пациенты с тоскливым и апатоадинамическим типом депрессии. Была установлена довольно высокая антидепрессивная эффективность и безопасность препарата феварин, в том числе и для пациентов с сопутствующей соматической патологией.

Ключевые слова: депрессия, поздний возраст, антидепрессант.

P.O. Bomov, I.V. Gorodoshnikova, M.V. Dvornichenko, A.A. Shipilova

THE DEPRESSIONS OF LATE AGE AND FEATURES OF THERAPEUTIC INTERVENTION

23 patients with depressive disorders beginning after 45 years were investigated. The dominated structure in depressive disorders were patients with anxiety affect, the lesser extent were patients with dreary and apathoadinamitical type of depression. There were defined the high efficacy and safety of antidepressant drug fevarin including the patients with concomitant somatic pathology.

Key words: depression, late age, antidepressant.

Введение. Депрессия - одна из наиболее часто встречающихся форм психической патологии. Распространенность депрессивных расстройств в общей популяции по оценкам различных авторов составляет от 2 до 11 %, а одним из наиболее тяжелых последствий депрессии является суицид, который совершают до 15 % больных [3, 4, 5].

Распространенность депрессий в населении старших возрастных групп составляет, по данным разных исследователей, от 9 до 30 % [2]. При этом важно, что легкие и умеренно выраженные депрессивные расстройства имеют место почти в 10 раз чаще, чем тяжелые депрессивные состояния, требующие стационарного лечения в гериатрических отделениях психиатрических больниц. Поздний возраст рассматривается как пиковый в отношении частоты депрессивных расстройств у пациентов общесоматической практики. Этот показатель колеблется у разных авторов от 15 до 75 %, свидетельствуя о значительном накоплении депрессий позднего возраста среди пациентов врачей общей практики [4]. Зачастую избегание пожилыми пациентами посещения психиатра возникает из-за взглядов самих медицинских работников, которые привычно относят психические симптомы к проявлениям либо необратимых возрастных изменений, либо соматических заболеваний. Нераспознанные при этом нетяжелые формы депрессий позднего возраста являются наиболее курабельными и прогностически благоприятными. Негативные последствия недовыявления депрессивных расстройств у пожилых сводятся к следующему: повышенный риск суицида, утяжеление проявлений депрессии, хрони-фикация состояния, возрастание потребности в продолжительном стационарном лечении, ухудшение качества жизни самих пациентов и лиц из их ближайшего окружения, снижение возможностей соци-