CC BY
49
УДК 619:616.013.2+616.013.44+616.013(018)
ИММУНОГЕННЫЕ И АГГЛЮТИНОГЕННЫЕ СВОЙСТВА
КУЛЬТУРЫ БРУЦЕЛЛ ШТАММА 82, ВЫРАЩЕННЫЕ В ГЛУБИННО-СУСПЕНЗИОННЫХ УСЛОВИЯХ И НА ПЛОТНЫХ
ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ
Акимов Е. К.*, Галиуллин А.К., Гумеров В.Г*.
ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных», г.Казань*
ФГОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана»
Ключевые слова: иммуногенность, аглютиногенность,
инфицированность.
Key words: immunogenicity, aglyutinogennost, infection.
Для изучения приживаемости агглютиногенных и иммуногенных свойств в организме животных использовали 24-х и 48 часовые культуры бруцелл штамма 82,полученные путем выращивания на лабораторном ферментационном стенде (СФЛ-И) в полусинтетической
гидролизатлактальбуминовой среде (ГЛА) и печеночно-пептонном
бульоне (ППБ), а также на печеночно-мартеновском агаре Хоттингера (МПХ) - контрольная культура.
Культуру суспензировали в физиологическом растворе и вводили морским свинкам весом 350-400 г подкожно в область правого паха в дозах 100 тыс., 1 млн. и 1 млрд. микробных клеток. Для определения приживаемости в организме и агглютиногенных свойств из каждой группы животных, иммунизированных данной культурой, через 25 дней убивали по 3 головы и проводили баквысев из 10 органов и лимфатических узлов: паховые, заглоточные, подчелюстные, парааортальные, печень, селезенка, костный мозг. Высев производили на ППБ,ППА и МПХ. Читку баквысева осуществляли через 7-10 дней. Индекс инфицированности рассчитывали по формуле:
х=а*100 , где в*с
х - индекс инфицированности, а - количество выделенных культур; в - количество взятых в опыт животных; с - количество засеваемых органов и лимфоузлов; 100 - коэффициент. Агглютиногенные свойства культур изучали в РА по классической методике. В качестве антигена использовали стандартный антиген единый для РА, РСК, (РДСК), нормальную сыворотку - от кролика. Параллельно ставили реакцию с антигеном из штамма 82 (гомологичный). Для изучения иммуногенных
свойств бруцелл вакцинированных морских свинок, через 4,5 месяца заражали оттитрованной вирулентной культурой Br. abortus 54.Заражение проводили подкожно в область левого паха. Животных разделили на две группы. Первой группе доза введения составляла 10-ти кратную минимально инфицирующую - 75 микробных клеток, второй группе двадцатикратная минимально инфицирующая - 150 микробных клеток.
Через 30 дней животных убивали и проводили баквысев из 10 органов и лимфатических узлов (как и в случае определения приживаемости). Определяли индекс инфицированности, с сывороткой крови ставили РА.
Всего в опытах использовано 169 голов морских свинок.
В таблице 1 приведены результаты по приживаемости бруцелл штамма 82 в организме морских свинок и агглютиногенные свойства данных культур.
1. Приживаемость (диссеминация) бруцелл шт.82 в организме морских свинок и агглютиногенные свойства культур
Культура бруцелл Доза введения ( м. к.) Индекс инфицир. Агглютинабельность
антиген. ср.титр. РА
24-х часовая гидро-лизатлактальбуми-новая среда 100 тыс. 53,3 шт.82 стандарт. 1:187 отр.
1 млн. 70,0 шт.82 стандарт. 1: 107 отр.
1 млрд. 60,0 шт.82 стандарт. 1: 93 отр.
48-и часовая гидролизатлактальбумин овая среда 100 тыс. 25,0 шт.82 стандарт. 1:133 отр.
1 млн. 43,3 шт.82 стандарт. 1: 160 отр.
1 млрд. 64,3 шт.82 стандарт. 1 : 80 отр.
Контроль антигенов РА с S-сыв. РА с R-сыв. С физраствором
Антиген шт.82 + + + + + + + + отр.
Стандартный + + + + отр. отр.
Таким образом, экспериментально установлено, что культура бруцелл штамма 82, полученная глубинным методом культивирования сравнительно хорошо приживалась в организме морских свинок. Индекс инфицированности возрастал с увеличением дозы введения. Культура, выделенная от всех животных, главным образом, из селезенки, парааортального, паховых, заглоточных, подчелюстных лимфоузлов, свидетельствует о полной диссеминации организма животных бруцеллами.
При вскрытии не отмечено патологоанатомических изменений органов и лимфоузлов, нехарактерных для вакцинного процесса. Исследования показали, что культура бруцелл штамма 82, полученная глубинным методом выращивания, проявляла характерные для данного штамма агглютиногенные свойства. Через 25 дней после введения в организм морских свинок она не вызывала серопозитивности со стандартным антигеном в РА, положительная реакция отмечалась только с гомологичным антигеном из штамма 82 в титрах 1: 80 - 1: 187. Это дополнительно характеризует штамм 82 как слабоагглютиногенный.
В таблице 2 представлены сводные данные по изучению иммуногенных свойств бруцелл штамма 82, выращенных глубинным методом в гидролизатлактальбуминовой (ГЛА) и печеночно-пептонном бульоне (ППБ) в сравнении с культурой, выращенной общепринятым методом на плотной питательной среде печеночно-мартеновском агаре Хоттингера (МПХ).
Как явствует из таблицы, культуры бруцелл, полученные в логарифмической фазе роста в процессе глубинного культивирования (24х и 48-и часовые) обладают высокими иммуногенными свойствами.При заражении вирулентной культурой в десятикратной минимально инфицирующей дозе, выявлено, что бруцеллы штамма 82 вызывали достаточно стойкий иммунитет в организме животных - 72,7 - 85,7%, а у животных, из которых была выделена культура, отмечалась, как правило, регионарная форма заражения. Особенно при введении культуры в дозах 1 млн. и 1 млрд. микробных клеток. Из исследованных 59 животных этой группы выделена 31 культура, что составляет 5,2% от общего количества баквысева из органов и лимфоузлов. Индекс инфицированности варьировал в пределах 3,3-11,4. Опыты показали, что бруцеллы штамма 82 в процессе 48-часового культивирования в жидкой среде сохраняли свои иммуногенные свойства. При введении в дозе 100 тыс.м.к. они вызывали стойкий иммунитет у 85,7-88,9% животных. В опытах на других группах морских свинок, подвергшихся заражению минимально инфицирующей дозой вирулентного штамма, относительно высокий иммунитет сохранялся у животных, вакцинированных в дозах 1млн. и 1 млрд. м.к. в пределах 5062,5%, а у животных, вакцинированных контрольной культурой - 50%. Контрольные животные (невакцинированные, зараженные) все заразились.
Следовательно культура бруцелл штамма 82 в процессе культивирования в данной питательной средств течение 48 часов полностью сохраняла свои агглютиногенные и иммуногенные свойства и обладала приживаемостью в организме опытных животных.
Кроме того, можно отметить, что культура бруцелл штамма 82, выращенная в полусинтетической гидролизатлактальбуминовой среде, разработанная в лаборатории экспериментальной технологии биопрепаратов, является
2. Иммуногенные свойства бруцелл штамма 82, выращенные глубинным методом в жидких и на плотных
питательных средах
Возраст культур Доза введения (м.к.) Исслед. голов В т. ч. иммунных Заразилось Из них(%) Выделено культур Индекс инфици рован ности Положи тельно реагир. в РА (гол)
Гол. % Гол. % Генерализ. форма Регионар. форма
Культура гидролизатлактальбуминовой среды ( ГЛА )
24-х часовая 100 тыс. 7 8 85,7 1 14,3 14,3 - 8 11,4 1
1 млн. 6 5 83,4 1 16,6 - 16,6 2 3,3 -
1 млрд. 15 11 73,4 4 26,6 6,6 20,0 8 5,3 -
48-и часовая 100 тыс. 9 8 88,9 1 11,1 11,1 - 5 8,3 1
1 млн. 6 3 50,0 1 50,0 33,3 16,7 8 8,8 1
1 млрд. 22 16 72,7 6 27,3 - 27,3 13 5,9 -
Культура печеночно-пептонного бульона ( ППБ )
24-х 100 тыс. 10 4 40 6 60 60 - 20 20 1
часовая 1 млн. 10 5 50 5 50 25 25 6 6,0 1
1 млрд. 8 5 62,5 3 37,5 37,5 - 13 16,2 1
48-и 100 тыс. 9 2 22 7 78 66,9 11,1 36 40 5
часовая 1 млн. 10 3 30 7 70 70 - 42 42 7
1 млрд. 16 8 50 8 50 31,3 18,7 45 28,1 4
Исходная культура с печеночно-мартеновского хоттингеровского агара (2-х суточная) - ( МПХ )
48-и 100 тыс. 6 2 33,3 4 66,7 66,7 - 26 43,3 2
часовая 1 млн. 5 2 40 3 60 60 - 15 30 1
1 млрд. 12 6 50 6 50 33,9 16,1 29 24,1 6
Контрольные животные, невакцинарованные, зараженные шт.54
75 клеток 9 - - 9 100 100 - 82 91,1 9
150 клеток 9 - - 9 100 100 - 69 76,6 9
биологически полноценной средой для глубинного культивирования данной культуры. Она обеспечивает хороший выход бактериальной массы и не уступает средам печеночно-пептонному бульону (ППБ), печеночномартеновскому агару Хоттингера (МПХ), печеночно-пептонному глюкозоглицериновому агару (ППГГА), которые используются в настоящее время в лабораторной и производственной практике.
ЛИТЕРАТУРА: 1. Волик Е.К. Глубинный способ выращивания бактериальных культур для получения биопрепаратов // Тр. науч.конт.ин-та ветеринарных препаратов.-М.,1954.-№3.-С.241-250. 2. Высоцкий В.В. Ультраструктура бруцелл // ЖМЭИ,1967,3.-С.19-22. 3. Никоноров Б.А. Изучение условий глубинного культивирования бруцелл штамма 19 // Тр. ГНКИ.- М.,1972.-С.71-73. 4. Орлов Е.С. Результаты изучения
слабоагглютиногенных культур штаммов B. abortus 4004 // Тр.
ВИЭВ,1967.-Т.33.-С.161-167. 5. Равилов А.З.и др. Микробиологические среды // Л.: Казань.1999.- 398с. 6. Салмаков К.М. Изучение антигенных и иммуногенных свойств штамма бруцелл // Уч.записки КВИ, 1964.- Т.90.-С.32. 7. Тараканов Ю.И. Глубинное культивирование Br. abortus19 на бульоне Хоттингера // Микробиологическая промышленность,1973,в,3.-С.51-53.
ИММУНОГЕННЫЕ И АГГЛЮТИНОГЕННЫЕ СВОЙСТВА КУЛЬТУРЫ БРУЦЕЛЛ ШТАММА 82,ВЫРАЩЕННЫЕ В ГЛУБИННО-СУСПЕНЗИОННЫХ УСЛОВИЯХ И НА ПЛОТНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ
Акимов Е. К., Галиуллин А.К., Гумеров В.Г.
Резюме
Культура бруцелл штамма 82 в процессе культивирования в данной питательной средств течение 48 часов, полностью сохраняла свои агглютиногенные и иммуногенные свойства и обладала приживаемостью в организме опытных животных.
IMMUNOGENIC ANDAGGLUTINOGENIC PROPERTIES OF BRUCELLA CULTURE OF THE 82 STRAIN CULTIVATED IN DEEP-SUSPENSION CONDITIONS AND ON
THE SOLID MEDIUM
Akimov Ye.K.,Galiullin A.K.,Gumerov V.G.
Summary
Brucella culture of the strain 82 in the process of cultivating in the solid medium within 48 hours secured its agglutinogenic and immunogenic properties and possessed assimilating properties in test animals organisms.
