CC BY
72
ИММУНОГЕНЕТИКА И ПРОГРЕССИРОВАНИЕ ХРОНИЧЕСКИХ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ
Белобородова Е. В.1, Гончарова И. А. 2, Белобородова Э. И. 1, Пурлик И. Л. 1, Калачева Т. П. 1, Акбашева О. Е. 1, Рачковский М. И. 1, Бурковская В. А. 1 ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России ФГБУ НИИ медицинской генетики СО РАН
IMMUNOGENETICS AND PROGRESSION OF CHRONIC VIRAL HEPATITES
Beloborodova E. V. 1, Goncharova I. A. 2, Beloborodova E. I. 1, Purlik I. L. 1, Kalacheva T. P. 1, Akbasheva O. E. 1, Rachkovskiy M. I. 1, Burkovskaya V. A. 1
The Siberian State Medical University
Federal research Institute of medical genetics
Белобородова Екатерина Витальевна — д-р мед. наук, профессор, заведующий кафедрой терапии ФПК и ППС ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России
Гончарова Ирина Александровна — канд. биол. наук, научный сотрудник лаборатории популяционной генетики ФГБУ НИИ медицинской генетики СО РАМН
Белобородова Эльвира Ивановна — д-р мед. наук, профессор кафедры терапии ФПК и ППС ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России Пурлик Игорь Леонидович — д-р мед. наук, профессор кафедры патологической анатомии ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России Калачева Татьяна Петровна — канд. мед. наук. доцент кафедры терапии ФПК и ППС ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России Акбашева Ольга Евгеньевна — д-р мед. наук, профессор кафедры биохимии и молекулярной биологии ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России
Рачковский Максим Игоревич — д-р мед. наук, профессор кафедры госпитальной терапии с курсом физической реабилитации и спортивной медицины ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России
Бурковская Вера Антоновна — канд. мед. наук. доцент кафедры терапии ФПК и ППС ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России
Beloborodova E. V.— the doctor of medical sciences, the professor, head of the Department of therapy of skill improvement and professional retraining faculty in The Siberian State Medical University
Goncharova I. A.—candidate of biological sciences, researcher of the laboratory of population genetics, Federal research Institute of medical genetics
Beloborodova E. I.— the doctor of medical sciences, the professor, managing of chair of therapy of skill improvement and professional retraining faculty in The Siberian State Medical University
Purlik I. L.— the doctor of medical sciences, the professor, managing of chair pathological anatomy in The Siberian State Medical University Kalacheva T. P.— the candidate of medical sciences, the assistant professor of chair of therapy of skill improvement and professional retraining faculty in The Siberian State Medical University
Akbasheva O. E. — the doctor of medical sciences, the professor, managing of chair of biochemistry and molecular biology in The Siberian State Medical University
Rachkovskiy M. I.— the doctor of medical sciences, the professor, managing of chair of hospital therapy with a course of physical rehabilitation and sport medicine in The Siberian State Medical University
Burkovskaya V. A. — the candidate of medical sciences, the assistant professor of chair of therapy of skill improvement and professional retraining faculty in The Siberian State Medical University
Калачева Татьяна Петровна Kalacheva Tatiana P. 634062, г. Томск, ул. Бирюкова, 10-177. E-mail:
tatyana-kalachyova@ yandex.ru
Резюме
Цель исследования. Оценить роль полиморфных вариантов генов IL4 (C-590T), IL4RA (I50V), TNF (G-308A) и SLC11A1 (D543N) в прогрессировании хронических вирусных гепатитов.
Материалы и методы исследования. Обследован 121 пациент с хроническими вирусными гепатитами С и В.
Результаты исследования показали, что среди изученных полиморфных вариантов генов IL4 (C-590T), IL4RA (I50V), TNF-a (G-308A) и SLC11A1 (D543N) у больных хроническими вирусными гепатитами вариант «Val/Val» гена IL4RA (I150Val) ассоциирован с хронизацией HBV-инфекции. Аллель «А» гена TNF-a (G-308A) является протективным для течения хронического вирусного гепатита и ассоциирован с низким уровнем продукции
мононуклеарными клетками TNF-a и IL-12, высокой секрецией IL-4 и слабой степенью коллагенообразования в печени. Генотип «СТ» гена IL4 (C-590T) является неблагоприятным маркером для прогрессирования хронического вирусного гепатита. Имеет место значимая связь полиморфных вариантов генов TNF-a (G-308A) и IL4 (C-590T) с продукцией ключевых интерлейкинов, определяющих тип иммунного ответа (Th-1, Th-2) и продуктами метаболизма коллагена, что свидетельствует о генетической детерминированности реакций системного иммунитета и процессов коллагенообразования в печени при хроническом вирусном гепатите.
Ключевые слова: хронический вирусный гепатит, клеточная иммуногенетика
Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология 2015; 115 (3):45-49
Summary
Aim of investigation. To estimate the role of polymorphic variants of genes IL4 (C-590T), IL4RA (I50V), TNF (G-308A) and SLC11A1 (D543N) in chronic viral hepatitis progression.
Material and methods. Overall 121 patients with chronic viral hepatitis C and B.
Results. Study results have demonstrated, that of all investigated polymorphic variants of genes IL4 (C-590T), IL4RA (I50V), TNF (G-308A) and SLC11A1 (D543N) in patients with chronic liver diseases of various etiology the «Val/Val» IL4RA gene variant (II50Val) is associated with HBV-infection chronization. The allele «A» gene TNF-a (G-308A) is protective for chronic viral hepatitis and is associated with a low level of production by mononuclear cells of TNF-a and IL-12, high secretion of IL-4 and low degree of collagenopathy in the liver. Genotype «CT» of IL4 (C-590T) gene is an adverse marker for progression of chronic viral hepatitis B. There was significant correlation of polymorphic variants TNF (G-308A) and IL4 (C-590T) genes with production of the key interleukins, that determine type of immune response (Th-1, Th-2) and products of collagen metabolism that testifies genetic determination of system immune response and collagen formation processes in the liver at chronic viral hepatitis.
Keywords: chronic viral hepatitis, cell-based immunogenetics.
Eksperimental'naya i Klinicheskaya Gastroenterologiya 2015; 115 (3):45-49
В настоящее время все большее внимание исследователей привлекает роль цитокиновой системы в патогенезе хронических заболеваний печени, а также механизмы ее взаимодействия с другими регуляторными системами организма [1]. Поскольку функции иммунной системы находятся под генетическим контролем, правомерным становится вопрос об иммуногенетических аспектах хронизации вирусных инфекций и темпов прогрессирования хронических вирусных гепатитов (ХВГ) [2,3,4]. В середине прошлого столетия была сформулирована концепция, согласно которой подверженность к той или иной болезни обусловлена сочетанием в генотипе индивида определенных аллельных вариантов генов, формирующих неблагоприятный наследственный фон, реализующийся при взаимодействии с факторами среды в виде патологического фенотипа [5,6]. В соответствии с этим, одни индивиды обладают относительной резистентностью к инфицированию вирусами, тогда как другие — подвержены к развитию болезни при контакте с ее возбудителем [7,8].
Материал и методы исследования
В исследование включен 121 пациент с хроническими вирусными гепатитами С и В в возрасте от 16 до 73 лет (средний возраст обследованных составил 40,2±13,9 лет), госпитализированных в отделение гастроэнтерологии Томской областной клинической больницы. Критериями включения пациентов в настоящее исследование служили положительные
Несмотря на способность вируса модулировать защитные силы организма и «ускользать» от иммунного надзора, по современным представлениям предполагается, что именно генетическая детерминированность иммунного ответа макроорганизма предопределяет жизненный цикл инфекционного агента [9,10]. Изучение генетических основ подверженности к заболеванию ХВГ и детерминации индивидуальных особенностей течения и исхода заболевания обретает все большую актуальность. На сегодняшний день доказано, что вирусы НСУ и HBV не обладают прямым гепатотоксическим эффектом, а поражение печени происходит в основном иммуноопосредованным путем, что генетически детерминировано и обусловливает скорость прогрессирования фиброза в печени [10,11].
Цель: на основании комплексного анализа кли-нико-морфологических и иммуно-генетических данных установить роль полиморфных вариантов генов-цитокинов 1Ь4 (С-590Т), IL4RA (150У), ТОТа (С-308А) и SLC11A1 ф543ЭД в хронизации и про-грессировании хронических вирусных гепатитов.
маркеры вирусных гепатитов В, С в сыворотке крови, а также положительная полимеразная цепная реакция на выявление геномов вирусов НВУ и НСУ.
В основной группе пациентов с вирусным поражением печени НСУ-инфекция была выявлена у 91 больного (75,2 %), у 30 пациентов — хронический вирусный гепатит В (24,8 %). То есть,
НСУ-инфекция в настоящее время встречается в 3 раза чаще, чем НВУ. На основании тщательно собранного анамнеза практически у всех пациентов были установлены возраст инфицирования, длительность течения вирусной инфекции и путь заражения. Возраст пациентов, при котором произошло инфицирование, был от 2 до 63 лет (средний возраст инфицирования составил 29,1±12,1 лет). Длительность течения вирусной инфекции была от 1 года до 37 лет, в среднем составляя 9,2±6,4 лет. Для установления варианта прогрессирова-ния вирусной инфекции анализировались группы с различной длительностью инфицирования.
Был изучен «путь» заражения пациентов, вошедших в исследование: для НСУ- инфекции ведущей оказалась — внутривенная наркомания (28,8 %), затем гемотрансфузии (25,7 %), для НВУ-инфек-ции — медицинские манипуляции (40,6 % случаев).
Наряду с общеклиническими исследованиями всем больным проведена пункционная биопсия печени с морфологическим исследованием биоптатов: определялся индекс гистологической активности (ИГА) гепатита и стадия фиброза печени по Metavir (V. I. Desmet et. а1, 1994).
Пациентам, вошедшим в исследование, проводилось молекулярно-генетическое исследование: были изучены полиморфизмы генов фактора некроза опухолей-альфа (ТОТ-а); интерлейкина 4 (1Ь4); рецептора к интерлейкину 4 (IL4RA), а также полиморфизмы гена макрофагального протеина 1, ассоциированного с естественной резистентностью к инфекционным заболеваниям (SLC11A1). Результаты генетического исследования пациентов анализировались в сопоставлении с разновидностью вирусного гепатита, активностью и стадией фиброза, с продолжительностью прогрессирова-ния вирусного процесса в печени, с уровнем цито-кинпродуцирующей способности Т-лимфоцитов и сывороточными маркерами коллагенообразова-ния (свободный пептидо-связанный и белковосвя-занный гидроксипролин). Выделение ДНК проводили методом фенольной экстракции с помощью коммерческого набора «Вектор ДНК экстракция» (ЗАО «Вектор-Бест», Россия). Изучение полиморфных вариантов исследуемых генов проводили с помощью амплификации соответствующих
участков генома методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), используя структуру праймеров и параметры температурных циклов, описанных в геномной базе данных (GDB) и литературе. Рестрикцию изучаемых участков генома проводили соответствующими рестриктазами («Сибэнзим», Новосибирск). Генотипирование проводили путем разделения рестрицированных продуктов ПЦР в 3 % агарозном геле в течение 30-40 мин и окрашивания бромистым этидием, визуализацией в проходящем УФ-свете на установке фирмы «Biokad». Исследования выполнены на базе НИИ Медицинской генетики СО РАМН (г. Томск, директор — академик РАН В. П. Пузырев).
Исследование цитокинпродуцирующей способности Т-лимфоцитов — определение уровней ТОТ-а, ^-2, ^-4, ^-10 и ^-12 проводили в супер-натантах культивированных мононуклеаров с использованием твердофазного иммуноферментного «сэндвичевого» метода по инструкциям, предлагаемым производителями тест-систем («Ргосоп», Россия; «Суиттим», США).
Всем пациентам определяли сывороточные маркеры обмена коллагена. Количественные показатели содержания свободного, пептидо-свя-занного (ПСО) и белковосвязанного оксипролина в биологических жидкостях являются доступными маркерами активного фиброзообразования [12]. Деградация коллагена под влиянием коллагеназы сопровождается увеличением содержания свободного оксипролина (гетероциклическая аминокислота — специфическая составная часть белков соединительной ткани — коллагена и эластина). Концентрацию свободного, пептидо- и белковосвязанного гидроксипролина определяли с помощью метода, основанного на определении оптической плотности красного хромогена, полученного в результате конденсации продуктов окисления гидроксипролина с парадиметиламинобензаль-дегидом, с последующим использованием по калибровочного графика стандартного 100 мкг/л раствора гидроксипролина [12].
Группу контроля составили здоровые добровольцы (1200 человек), относящиеся к одной этнической группе (русские), проживающие в г. Томске и на территории Томской области.
Результаты исследования и их обсуждение
В настоящем исследовании проведен анализ полиморфизма генов цитокинов ^4 (С-590Т), IL4RA (150У), ТОТ-а ^-308А) и SLC11A1 ^543К) с установлением частот полиморфных вариантов исследованных генов у больных хроническими гепатитами г. Томска и Томской области с изучением их связи с заболеванием, функциональной активностью иммунной системы, морфологическими особенностями хронических гепатитов и скоростью прогрессирования фиброза в печени (рис.1).
Для выхода на значимые патогенетические механизмы коллагенообразования в печени проводились результаты генетического исследования. На основании полученных результатов было установлено, что ген ^4ЯА (I50V) связан с хроническим гепатитом В. В группе больных хроническим
вирусным гепатитом В (ХГВ) было выявлено накопление гомозиготного генотипа «Val/Val» по «патологическому» аллелю в сравнении с группой здоровых доноров и хроническим гепатитом С (ХГС) (рис.1). Вероятно, что носители генотипа «Val/Val» предрасположены к хронизации гепатита В в случае инфицирования данным вирусом. Высокий риск хронизации гепатита В по данным литературы связан с трехкратным увеличением эффективности в выработке ИЛ-4 при наличии данной генетической замены [E. Noguchi et al., 1998], что определяет развитие иммунного ответа в случае инфицирования по Th-2 пути.
Учитывая особую актуальность поиска маркеров, определяющих характер течения вирусных гепатитов и тяжесть фиброза в печени, было проведено
Рис.1.
Распределение частот генотипа «Val/Val» IL4RA (I50V) в группе здоровых и больных хроническим вирусным гепатитом различной этиологии.
Примечание:
ХГ — хронический гепатит токсической этиологии, ХГС — хронический гепатит С, ХГВ — хронический гепатит В
IL4RA"Val/Val"
«CT»
Рис.2.
Распределение частот генотипов (С590Т) «СС+ТТ» и «СТ» в группах с умеренным фиброзом (II) и циррозом печени.
7G
60 ^ 5G
ш 4G
н
о
¡3 3G
ГС
т 2G 1G G
фиброз II
цирроз
Рис.3.
Распределение частот аллеля «А» гена TNF-a (G-308A) в группе здоровых и больных ХВГ с фиброзом и циррозом печени
Фиброз I
Фиброз II
Цирроз
изучение связи полиморфных вариантов генов IL4 (C-590T), IL4RA (I50V), TNF-a (G-308A) и SLC11A1 (D543N) с различными стадиями фиброза [7]. На основании полученных результатов были обнаружены достоверные различия в частотах генотипов полиморфного варианта C-590T гена ИЛ-4 между группами больных с умеренным фиброзом и циррозом печени (ЦП), за счет накопления гетерозигот «СТ» в группе с ЦП и уменьшения гомозигот обоих классов: генотип «ТТ» в группе больных с ЦП отсутствовал (рис. 2). По данным литературы аллель «Т» связан с высокой выработкой ИЛ-4 [С. Ober et al., 2000], в связи с чем снижение частоты генотипа «ТТ», обусловливающее дефицит данного цитокина, очевидно способствует (учитывая функции ИЛ-4 ограничивать воспаление) высокой активности воспалительных реакций в печени, что закономерно ведет к активному фиброзообразованию (рис.2).
Цитокины — это эндогенные биологические вещества, представляющие собой обширную гетерогенную группу низкомолекулярных белков, которые секретируются клетками в окружающую среду. В настоящее время идентифицировано более 100 цитокинов, и их число продолжает увеличиваться. В настоящее время все цитокины, в зависимости
от их участия в воспалительном процессе, делятся на провоспалительные (ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-12, ФНО-а, ИФН-у) и противовоспалительные (ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-13, трансформирующий ростовой фактор) при этом доказано преимущественно их взаи-моингибирующее влияние на секрецию друг друга.
Также было выявлено, что изученный полиморфизм G-308A гена TNF-а имеет влияние на степень фиброза в печени при хроническом течении вирусных гепатитов. Выявлено постепенное снижение частоты «патологического» аллеля «А» от умеренного фиброза к ЦП. При этом в группе больных со слабым фиброзом было отмечено значимое повышение частоты аллеля «А» по сравнению со здоровыми донорами (рис. 3). На основании полученных данных можно предполагать протективную роль накопления аллеля «А» при хроническом течении вирусного гепатита. Именно при I стадии фиброза печени у пациентов была выявлена высокая частота «патологического» аллеля. При этом самая низкая его частота установлена у больных ЦП. Также в работе было установлено различие распределений частот генотипов TNF-a (G-308A) в группе больных со слабым фиброзом в печени и в контроле за счет накопления гомозигот «АА» по «патологическому» аллелю у больных (рис. 3). Таким образом, на основании полученных в исследовании данных можно предполагать, что носители генотипа «СТ» гена IL4 (C-590T) в случае заболевания хроническим вирусным гепатитом будут иметь быстропрогрессирующее течение заболевания с развитием ЦП. Носители же аллеля «А» и генотипа «АА» гена TNF-a (G-308A) будут характеризоваться благоприятным прогнозом заболевания с развитием слабовыраженного фиброза.
В работе проведена оценка ассоциаций исследованных генов с количественными, патогенетически значимыми для течения хронического вирусного гепатита, признаками. Было установлено, что именно полиморфный вариант G-308A гена TNF-a является одним из факторов, определяющих продукцию мононуклеарами ИЛ-4, ИЛ-12, ФНО-a и количественное содержание в сыворотке крови белковосвязанного и свободного гидрок-сипролинов — ключевых маркеров отражающих иммунный ответ и процессы активного коллагенообразования в печени. В результате проведенного анализа было установлено, что для носителей аллеля «А» гена TNF-a (G-308A), генотипа «GA» и генотипов «GA+AA» характерна более высокая продукция мононуклеарами ИЛ-4 и низкая выработка ИЛ-12 и ФНО-a по сравнению с носителями генотипа «GG». Отсюда следует, что носители аллеля «А» имеют низкую продукцию ФНО-a и следовательно меньшую интенсивность воспаления и фиброзообразования, что логично объясняет установленное нами уменьшение частоты данного аллеля у больных ЦП. Полученные в работе данные не соответствуют результатам предыдущих работ, где установлено, что аллель «А» гена TNF-a связан с более высокой продукцией конечного белкового продукта. В связи с этим становится понятным и выявленный в работе факт накопления аллеля «А» гена TNF-a (низкая продукция ФНО-a) у пациентов с благоприятным течением хронического
вирусного гепатита (слабый фиброз), учитывая значимую роль данного цитокина в стимуляции воспаления и фиброгенеза. Кроме того, в исследовании было установлено, что носители аллеля «А» гена TNF-a отличаются не только низкой продукцией ФНО-a, но и высоким содержанием ИЛ-4, что еще раз подчеркивает определенный про-тективный эффект данного цитокина в условиях хронического течения патологического процесса и адаптационное значение реакций системного иммунитета в направлении иммунного ответа по Th-2 пути. Установленная для аллеля «А» гена TNF-a закономерность в разнонаправленности выработки ИЛ-4 и ФНО-a подтверждает генетическую детерминированность взаимоингибиро-вания про- и противовоспалительных цитокинов.
Выводы
1. Среди изученных полиморфных вариантов генов IL4 (C-590T), IL4RA (I50V), TNF-a (G-308A) и SLC11A1 (D543N) у больных с хроническими вирусными гепатитами вариант «Val/Val» гена IL4RA (Ile50Val) ассоциирован с хронизацией HBV-инфекции.
2. Аллель «А» гена TNF-a (G-308A) является про-тективным для течения хронического вирусного гепатита и ассоциирован с низким уровнем продукции мононуклеарными клетками TNF-a и IL-12, высокой секрецией IL-4 и слабой степенью коллагенообразования в печени. Генотип «СТ»
Литература
1. Астахин А. В., и соавт. Роль цитокинов и интерферона a в патогенезе хронических диффузных заболеваний печени. А. В. Астахин и соавт. Вестник РАМН, 2004, № 4, C. 19-23.
2. Покровский В. И. Хронический гепатит С: современные представления о пато- и морфогенезе. концепция антивирусной стратегии гепатоцитов. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003, Т. 135, № 4, С. 364-376.
3. Ярилин А. А. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии. Иммунология. 1997, № 5, С. 7-14.
4. Белобородова Э. И., Абдрашитов Р. Ф., Белобородова Е. В., Бурковская, В.А. и соавт. Диагностическая ценность определения сывороточных маркеров фиброза печени при хроническом вирусном гепатите. Клиническая медицина. 2007, № 9, С. 61-63.
5. Fibrosis in patients with Chronic Hepatitis C: Delec-tion and Significance / Т. Poynard, V. Ratziu, Y. Ben-manov et al. Seminars in liver Disease, 2000, vol. 20, no 1, pp 47-54.
6. Future trends of HCV-related cirrhosis and hepatocellular carcinoma under urrently available treatments / V. Sypsa, G. Touloumi, G. V. Papatheodiridis et al. J. Hepatol, 2004, vol. 40, pp 84.
7. Абдукадырова М. А. Прогностические маркеры хронизации вирусного гепатита С. Иммунология. 2002, № 1, С. 47-50.
Также в результате исследования было выявлено, что носители аллеля «А» (генотипы «GA», «AA») характеризуются более низким уровнем белко-восвязанного гидроксипролина, по отношению к носителям генотипа «GG». Белковосвязанный гидроксипролин в сыворотке крови является продуктом, отражающим процессы метаболизма коллагена в печени, с нарастанием его содержания в условиях активного образования фиброзной ткани [11,12]
Также в работе была установлена связь гетерозиготного генотипа «СТ» IL4 (C-590T) с быстро-прогрессирующим течением вирусных гепатитов, что подтверждено в исследовании выявленной ассоциацией данного генотипа с высоким уровнем белковосвязанного гидроксипролина [12,13,14].
гена ^4 (С-590Т) является неблагоприятным маркером для прогрессирования хронического вирусного гепатита.
3. Имеет место значимая связь полиморфных вариантов генов ТОТ-а ^-308А) и ^4 (С-590Т) с продукцией ключевых интерлейкинов, определяющих тип иммунного ответа (Й-1, "Й-2) и продуктами метаболизма коллагена, что свидетельствует о генетической детерминированности реакций системного иммунитета и процессов коллагенообразования в печени при хроническом вирусном гепатите.
8. Абдурахманов, Д. Т. Вирус гепатита B в патологии человека. Клиническая фармакология и терапия. 2002, № 1, С. 48-56.
9. Анализ связи полиморфизма Ile50Val гена рецептора интерлейкина-4 (IL4RA) c хроническим вирусным гепатитом / И. А. Гончарова, М. Б. Фрейдин, Л. Е. Дунаева, Е. В. Белобородова, Э. И. Белобородова, В. П. Пузырев // Молекулярная биология. 2005, Т. 39, № 3, С. 379-384.
10. Рачковский М. И., Черногорюк Г. Э., Белобородова Э. И., Белобородова Е. В. и соавт. Оценка прогностической роли альфа-фетопротеина при циррозе печени: результаты 3-летнего наблюдения. Современные проблемы науки и образования. 2013, № 5, С. 303-304.
11. Петров Р. В., Хаитов Р. М. Основы иммунитета и иммунная биотехнология. Вестник РАМН. 2000, № 11, С. 18-21.
12. Веремеенко К. Н. Протеолитические ферменты и их ингибиторы. Новые области применения в клинике. Врачебное дело. 1994, № 1, С. 8-13.
13. Белобородова Е. В., Белобородова Э. И., Пурлик И. Л., Калачева Т. П. Состояние печени при хронических гепатитах различной этиологии (по данным морфологического исследования биоптатов печени). Клинические перспективы гастроэнтерологии, ге-патологии. 2014, № 1, С. 31-36.
14. Сенников С. В. Аллельные варианты и изоформы цитокинов в диагностике и патогенезе иммунопатологических состояний. Иммунология. 2002, № 4, С. 243-250.
