Научная статья на тему 'Идентификация клеток, полученных из крови онкологических пациентов при гемоцитофильтрации'

Идентификация клеток, полученных из крови онкологических пациентов при гемоцитофильтрации Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

CC BY
90
21
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
Ключевые слова
ЦИРКУЛИРУЮЩИЕ КЛЕТКИ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ / ОПУХОЛЕВЫЕ КЛЕТКИ / ГЕМОЦИТОФИЛЬТРАЦИЯ / ЦИТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ / ОНКОЛОГИЧЕСКИЕ БОЛЬНЫЕ / CIRCULATING CELLS IN THE PERIPHERAL BLOOD / TUMOR CELLS / HEMOCYTOFILTRATION / CYTOLOGICAL RESEARCH / ONCOLOGICAL PATIENTS

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Григорук Ольга Григорьевна, Лазарев А. Ф., Чимитов А. А., Ханхашанова Т. Д., Базулина Л. М.

В статье приведены результаты собственных исследований обнаружения циркулирующих клеток в крови у 48 онкологических больных с использованием гемоцитофильтрации. Обнаруженные циркулирующие клетки (21 наблюдение, 43,8%) представлены тремя вариантами: чаще всего в виде «голых» атипизированных ядер (76,2% наблюдений), а также одиночными сохранными опухолевыми клетками (14,3%) и крупными бесформенными одиночными клетками, вероятно, неэпителиальной природы (9,5%). Обсуждаются трудности идентификации полученных клеток при световой микроскопии и технические аспекты использования иммуно-цитохимических методик.

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Григорук Ольга Григорьевна, Лазарев А. Ф., Чимитов А. А., Ханхашанова Т. Д., Базулина Л. М.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

IDENTIFICATION OF CELLS OBTAINED FROM BLOOD OF ONCOLOGICAL PATIENTS WITH HEMOCYTOFILTRATION

This article presents the outcomes of our own research of the detection of circulating cells in the peripheral blood of 48 patients with oncological diseases, using hemocytofiltration. The observed circulating cells (21 cases, 43.8%) have been represented by three variants: more often in the form of “bare” atypical nuclei (76.2% cases), also single conserved tumor cells (14.3%) and large shapeless single cells, probably of non-epithelial nature (9.5%). The difficulties of identifying the obtained cells in light microscopy and technical aspects of the usage of immunocytochemical techniques have been discussed.

Текст научной работы на тему «Идентификация клеток, полученных из крови онкологических пациентов при гемоцитофильтрации»

РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2018; 23 (2) Р01: http://dx.doi.org/10.18821/1028-9984-2018-23-2-84-89

ФУНДАМЕНТАЛЬНАЯ НАУКА - ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗДРАВООХРАНЕНИЮ

ФУНДАМЕНТАЛЬНАЯ НАУКА - ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗДРАВООХРАНЕНИЮ

© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2018 УДК 616-006.04-018.1-076.5

Григорук О.Г.1-3, Лазарев А.Ф.1-3, Чимитов А.А.4, Ханхашанова Т.Д.4, БазулинаЛ.М.2, ШойхетЯ.Н.3

идентификация клеток, полученных из крови онкологических

пациентов при гемоцитофильтрации

'Алтайский филиал ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, 656049, г. Барнаул, Россия;

2КГБУЗ «Алтайский краевой онкологический диспансер», 656043, г. Барнаул, Россия;

3ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России, 656038, г. Барнаул, Россия; 4ГБУЗ «Бурятский республиканский клинический онкологический диспансер», 670047, г. Улан-Удэ, Республика Бурятия, Россия

В статье приведены результаты собственных исследований обнаружения циркулирующих клеток в крови у 48 онкологических больных с использованием гемоцитофильтрации. Обнаруженные циркулирующие клетки (21 наблюдение, 43,8%) представлены тремя вариантами: чаще всего в виде «голых» атипизированных ядер (76,2% наблюдений), а также одиночными сохранными опухолевыми клетками (14,3%) и крупными бесформенными одиночными клетками, вероятно, неэпителиальной природы (9,5%). Обсуждаются трудности идентификации полученных клеток при световой микроскопии и технические аспекты использования иммуно-цитохимических методик.

Ключевые слова: циркулирующие клетки в периферической крови; опухолевые клетки; гемоцитофильтрация; цитологические исследования; онкологические больные.

Для цитирования: Григорук О.Г., Лазарев А.Ф., Чимитов А.А, Ханхашанова Т.Д., Базулина Л.М., Шойхет Я.Н. Идентификация клеток, полученных из крови онкологических пациентов при гемоцитофильтрации. Российский онкологический журнал. 2018; 23 (2): 84-89. DOI: http://dx.doi.org/10.18821/1028-9984-2018-23-2-84-89

Для корреспонденции: Григорук Ольга Григорьевна, д-р биол. наук, зав. отделением клинической лабораторной диагностики (для проведения цитологических методов исследования) КГБУЗ «Алтайский краевой онкологический диспансер». E-mail: [email protected].

Grigoruk O.G.1-3, Lazarev A.F.1-3, Chimitov A.A.4, Khankhashanova T.D.4, Bazulina L.M.2, Shoykhet Ya.N.3 IDENTIFICATION OF CELLS OBTAINED FROM BLOOD OF ONCOLOGICAL PATIENTS WITH HEMOCYTO-FILTRATION

1Altai branch of N.N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology, Barnaul, 656049, Russian Federation;

2Altai Regional Oncology Dispensary, Barnaul, 656043, Russian Federation;

3The Altai State Medical University, Barnaul, 656038, Russian Federation;

4Buryat Regional Clinical Oncology Dispensary, Ulan-Ude, 670047, Russian Federation

This article presents the outcomes of our own research of the detection of circulating cells in the peripheral blood of 48 patients with oncological diseases, using hemocytofiltration. The observed circulating cells (21 cases, 43.8%) have been represented by three variants: more often in the form of "bare" atypical nuclei (76.2% cases), also single conserved tumor cells (14.3%) and large shapeless single cells, probably of non-epithelial nature (9.5%). The difficulties of identifying the obtained cells in light microscopy and technical aspects of the usage of immunocytochemical techniques have been discussed.

Keywords: circulating cells in the peripheral blood; tumor cells; hemocytofiltration; cytological research; oncological patients.

For citation: Grigoruk O.G., Lazarev A.F., ChimitovA.A., Khankhashanova T.D., Bazulina L.M., Shoykhet Ya.N. Identification of cells obtained from blood of oncological patients with hemocytofiltration. Rossiiskii onkologicheskii zhurnal. (Russian Journal of Oncology). 2018; 23 (2): 84-89. (In Russian). DOI: http://dx.doi. org/10.18821/1028-9984-2018-23-2-84-89.

For correspondence: Olga G. Grigoruk, MD, Ph.D., DSci., Head of the Department of Clinical Laboratory Diagnostics (implementation of cytological research methods), Altai Regional Oncology Dispensary, Barnaul, 656043, Russian Federation. E-mail: [email protected]. Conflict of interest. The authors declare no conflict of interest. Acknowledgment. The study had no sponsorship.

Received 13 March 2018 Accepted 19 April 2018

Попавшие в кровь клетки злокачественного новообразования, которые начинают мигрировать в крови, получили название циркулирующих опухолевых клеток - ЦОК (circulating tumor cells, CTC). Факт обнаружения опухолевых клеток в кровяном русле известен давно. Учёные-онкологи и медицинские лабораторные работники неоднократно в мировой и отечественной практике возвращались к научным исследованиям по обнаружению и оценке опухолевых клеток в кровяном русле. ЦОК представляют собой популяцию гетерогенных клеток опухоли, попавших в кровяное русло. Проникнуть в кровяное русло опухолевые клетки могут при условии их эпителиаль-но-мезенхимальной трансформации, когда они утрачивают межклеточную адгезию и приобретают способность аномальной подвижности и инвазивности [1-4]. Предполагается, что именно эти клетки являются основой для развития метастазов в различных органах [1-4]. Феномен эпителиально-мезенхималь-ного перехода встречается в физиологических условиях (эмбриональный морфогенез), при различных видах воспаления, формировании фиброза, а также является неотъемлемой частью канцерогенеза (3-й тип по классификации R. Weinberg). ЦОК в периферической крови изучаются в клинических исследованиях для определения их роли в канцерогенезе, как прогностические и предиктивные показатели в клинической практике, а также как потенциальный маркёр, позволяющий оценивать эффективность системного лечения [5-7].

В научной литературе имеется множество работ, посвящённых изучению и оценке ЦОК в крови онкологических больных. Наибольшее число исследований оценки ЦОК отмечено при раке молочной железы [1, 8-10]. Исследователи пришли к выводу, что динамика ЦОК в процессе лекарственного лечения пациенток с диагнозом «рак молочной железы» является перспективным направлением в контексте раннего прогнозирования ответа на предоперационную терапию у пациенток с местно-распро-странёнными формами заболевания, что является дополнительным объективным критерием оценки эффективности лечения [8-10]. Имеются работы по исследованию ЦОК при раке лёгких, желудка, прямой кишки, яичника, мочевого пузыря, меланоме и других опухолях [2, 11-13]. Практически во всех клинических исследованиях указывается, что наличие ЦОК в крови коррелирует с неблагоприятными патологическими особенностями и является ценным прогностическим и предиктивным маркёром, позволяющим прогнозировать выживаемость пациентов. Изменение количества ЦОК, рассчитанное до и после лечения, является показателем ответа на терапию и прогноз, мощным инструментом для мониторинга прогрессирования заболевания и выживаемости [2, 11-14].

Существует множество различных методов обнаружения ЦОК в крови больных [15]. Однако даже в настоящее время клинические исследования, посвя-щённые изучению ЦОК, ограничены отсутствием доступных технологий их обнаружения. Методологических стандартов выявления ЦОК не существует, а методики, доступные для применения в практической онкологии, не обладают надежной технологической платформой, высокой пропускной способностью, чувствительностью и специфичностью, а

BASIC RESEARCH - PRACTICAL MEDICINE

также сложны в воспроизведении и дороги, т. е. не полностью отвечают задачам клиники [2, 16, 17]. Чувствительное и точное обнаружение ЦОК остаётся сложной проблемой в клинической онкологии [18,

19].

Новая эффективная технология - жидкостная биопсия (CancerIntercept) значительно отличается от методики определения самих ЦОК, в основе которой лежит анализ следовых количеств ДНК опухолевых клеток, свободно циркулирующих в крови. Технология автоматической цифровой микроскопии (ADM) позволяет оптическим методом оценивать количество ЦОК в образце [1]. Процесс занимает достаточно много времени при сканировании больших по площади цитологических препаратов, что для практического применения не пригодно, поэтому технологию усовершенствовали и разработали массивное оптоволоконное сканирование (FAST). Новый подход позволяет просканировать за то же время в 500 раз большую площадь по сравнению с технологией ADM без потери чувствительности [1]. Использование FAST и ADM совместно позволяет выявить редкие опухолевые клетки после предварительной обработки флуоресцентно-меченными антителами к цитокератинам [20]. Другой метод обнаружения ЦОК под названием MAINTRAC заключается в использовании сканирующей лазерной цитометрии образцов крови, прошедших процедуру окрашивания антителами против клеток, экспрессирующих эпителиальные молекулы клеточной адгезии (EpCAM), и против лейкоцитов (CD45) [1, 21]. Одним из наиболее популярных методов определения ЦОК в крови является система CellSearch компании Veridex [22]. Система является полуавтоматической, в её основе лежат методы иммунофлуоресценции, им-муномагнитного разделения и проточной цитомет-рии [23]. Данная технология прошла экспертизу и была одобрена для выявления уровня ЦОК у пациентов с метастазами (Food and Drug Administration, FDA, США), однако разрешения для клинического использования система до сих пор не получила. Система CellSearch позволяет не только отделить лейкоциты от эпителиальных опухолевых клеток, но и подсчитать последние. Предел чувствительности прибора составил 5 ЦОК и более на 7,5 мл крови [22, 24]. Следует отметить, что исследование ЦОК на оборудовании CellSearch дорогостоящее и трудо-затратное, что ограничивает возможности более широкого его использования.

Кроме описанных методов определения ЦОК, также в научных исследованиях используют имму-номагнитные методы, примером которых служат системы MACS, RosseteSep, OncoQuick+, AdnaGen [25, 26]. Обнаружение ЦОК напрямую зависит от технических характеристик метода, используемого для их выделения. В настоящее время технологии совершенствуются в сторону получения недеформи-рованных, более сохранных клеток, поскольку часто при выделении ЦОК они деформируются и разрушаются [27].

Одной из самых сложных задач является точное определение характера циркулирующих клеток (ЦК), выделенных из крови. Необходим немалый опыт исследователя, изучающего ЦК. Также необходимо использование дополнительных методик для подтверждения злокачественной природы и типа

ФУНДАМЕНТАЛЬНАЯ НАУКА - ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗДРАВООХРАНЕНИЮ

выделенных клеток [28, 29]. Феномен эпителиаль-но-мезенхимального перехода оказывает влияние на формирование гетерогенности ЦОК, создаёт технические трудности их обнаружения и фенотипирова-ния. Во время эпителиально-мезенхимального перехода происходят морфологические трансформации, проявляющиеся изменением размера и формы клеток, наблюдаются полиморфизм клеток и ядер, ги-перхроматоз и гиперплоидность, а также отмечается увеличение их митотической активности. Большая часть ЦОК теряет свои эпителиальные антигены и начинает экспрессировать мезенхимальные антигены [30-32]. Цитологическое обнаружение ЦОК в зависимости от размера (выделение по размеру эпителиальных опухолевых клеток [КЕТ]) представляется очень эффективной процедурой, обеспечивающей высокую точность и чувствительность в дополнение к её простоте, быстроте и низкой стоимости. Хотя цитологический анализ предсказуемо более точен, чем антиген-опосредованный ЦОК-захват, основанный на отсутствии специфичности антител для опухолевых клеток, всё же необходимо уточнение возможности распознавания ЦОК с помощью цитологических критериев злокачественности, которые уже используются в традиционной цитологии. При выделении крупных клеток из крови возможно выделение редких гематологических (таких как мегакарио-циты или крупные моноциты) или мезенхимальных (как эндотелиальные) клеток, которые невозможно определить с помощью существующих гематологических анализов и трудно отличить от эпителиальных опухолевых клеток [30].

Исходя из вышесказанного, мы запланировали провести сравнительное цитологическое исследование образцов крови пациентов, обратившихся в онкологический диспансер, у которых цитологическим или гистологическим методом диагностирована злокачественная опухоль.

Цель работы - оценить возможность цитологической идентификации клеток, полученных из крови онкологических пациентов при гемоцитофильтра-ции.

Материал и методы

Материалом для исследования служила кровь 48 пациентов с установленным онкологическим заболеванием (38 мужчин и 10 женщин) в возрасте от 34 до 84 лет. У всех пациентов было морфологическое подтверждение злокачественной опухоли. Для проведения гемофильтроцитологического исследования использовали устройство для микропросеивания венозной крови (патент на изобретение № 2414710, зарегистрированный в Государственном реестре изобретений РФ 20.03.2011 года). Для выделения циркулирующих клеток всем пациентам производился забор не менее 7,5 мл венозной крови в пробирки с этилендиаминтетрауксусной кислотой, после чего в течение 30-60 мин кровь доставлялась в лабораторию. При пропускании цельной крови через фильтр с порами 6000 нм в диаметре выделяются циркулирующие клетки, которые задерживаются на фильтре. В результате микропросеивания крови на фильтре остаются клетки (или фрагменты клеток), отличимые от клеточных компонентов крови по размеру. Из осадка на фильтре готовили цитологические препараты в количестве 4-5 мазков-отпечатков, которые

окрашивали по методу Паппенгейма. В некоторых случаях проводили иммуноцитохимические исследования с применением стандартных методик проведения иммуноцитохимических реакций. В этих случаях были приготовлены 5 препаратов после микрофильтрации венозной крови для стандартной микроскопии и 4 препарата с применением цитоцен-трифуги Cytospin-4. Для визуализации реакции антиген/антитело использовали тест-систему REAL™ EnVision™ («ДАКО»). В качестве хромогена применяли DAB (3,3-diaminobenzidine), после проведения реакции мазки докрашивали гематоксилином.

Для оценки возможностей цитологической идентификации клеток, выделенных из крови онкологических пациентов при гемоцитофильтрации, о каждом пациенте были получены необходимые клинические данные из канцер-регистра, амбулаторных карт и историй болезни.

Результаты и обсуждение

Гемофильтроцитологические исследования проведены у пациентов с верифицированными эпителиальными опухолями. Морфологические варианты рака лёгкого были представлены в 18 наблюдениях аденогенным раком, в восьми - плоскоклеточным и в восьми - мелкоклеточным. Рак желудка диагностирован у семи пациентов, из которых у трёх определён перстневидно-клеточный рак и у четырёх - аде-нокарцинома. В исследование вошли три женщины с инвазивной карциномой молочной железы неспецифического типа, два пациента с плоскоклеточным раком пищевода, по одному пациенту с аденокарци-номой кишечника и аденокарциномой поджелудочной железы, у которых были проведены гемофиль-троцитологические исследования (см. таблицу). 12 человек были пролечены по поводу онкологического заболевания, в остальных случаях гемоцитофиль-трацию проводили у пациентов, впервые обратившихся в поликлинику онкологического диспансера.

ЦК в результате микропросеивания крови на фильтре обнаружены у 21 (43,8%) пациента: у десяти из них аденогенный рак лёгкого, у двух - плоскоклеточный и у четырёх - мелкоклеточный рак, у двух - перстневидно-клеточный рак желудка, по одному наблюдению - инвазивная карцинома молочной железы неспецифического типа, аденокарцинома кишечника и поджелудочной железы (см. таблицу).

При цитологическом исследовании на препаратах с наличием ЦК отмечали повышенное количество нейтрофильных гранулоцитов, которое составляло 12-15 в поле зрения, и большое число скоплений тромбоцитов. Количественный анализ на данном этапе исследования не проводили. Количество обнаруженных ЦК в препаратах было различным, максимальное значение 50-70 клеток. Репрезентативными считали препараты, в которых обнаруживали 5 ЦК и более. Обнаруженные ЦК в количестве более 5 клеток на препарате были представлены тремя вариантами клеток: циркулирующие фрагменты клеток в виде «голых» атипизированных ядер - у 16 (76,2%) пациентов (рис. 1, см. 2-ю полосу вклейки); одиночные сохранные опухолевые клетки наблюдали у трёх больных (14,3%) (рис. 2, см. 2-ю полосу вклейки); крупные бесформенные одиночные ЦК, вероятно, неэпителиальной природы - у двух (9,5%). Идентичными по форме и по размеру были циркулирующие

BASIC RESEARCH - PRACTICAL MEDICINE

Количество пациентов, у которых проводили определение ЦК в периферической крови

Заболевание Морфологический тип опухоли количество пациентов - Количество пациентов, у которых обнаружены ЦК в периферической крови Количество пациентов, у которых проведены иммуноцитохимические реакции

Аденогенный - 18 10 1 (позитивная на эпителиальные антитела)

Рак лёгкого Плоскоклеточный - 8 2

Мелкоклеточный - 8 4

Рак желудка Аденогенный - 4 - 1 (реакция неудачная)

Перстневидно-клеточный - З 2

Рак молочной железы Неспецифический тип - З 1 1 (реакция неудачная)

Рак пищевода Плоскоклеточный - 2 -

Рак кишечника Аденогенный - 1 1 1 (позитивная на эпителиальные антитела)

Рак поджелудочной железы Аденогенный - 1 1 1 (позитивная на эпителиальные антитела)

Всего 48 21 5

фрагменты клеток в виде «голых» атипизированных ядер, специфических признаков принадлежности их к морфологическому типу клеток обнаружить не удалось. По одиночным сохранным опухолевым клеткам при тщательном исследовании можно было предполагать принадлежность клеток к типу опухоли: были отмечены признаки плоскоклеточной диф-ференцировки (рис. 3, см. 3-ю полосу вклейки) и специфический признак «притёртости» клеток друг к другу при мелкоклеточном раке лёгкого (рис. 4, см. 3-ю полосу вклейки). Проведено сравнение ЦОК с опухолевыми клетками первичного образования. ЦОК были идентичны первичному образованию, диагностированному при цитологическом исследовании опухоли по материалу, полученному при бронхоскопии.

Крупные бесформенные одиночные ЦК, вероятно неэпителиальной природы, предположительно являются тромбобластами (инволютивные формы мега-кариоцитов) (рис. 5, см. 3-ю полосу вклейки). Также на препаратах были отмечены многочисленные мономорфные клетки среди тромбоцитов, вероятно мезенхимального происхождения, которые весьма напоминают эндотелиальные клетки (рис. 6, см. 3-ю полосу вклейки).

Визуализация ЦК представляет собой сложную задачу. Все обнаруженные ЦК в периферической крови имели общие черты, при цитологическом исследовании невозможно исключить, что на мембранах могла оседать примесь эпителиальных и эндо-телиальных клеток. Феномен эпителиально-мезен-химальной трансформации оказывает влияние на формирование гетерогенности ЦК, тем самым обуславливает трудности их идентификации при световой микроскопии. В связи с этим фактом были проведены иммуноцитохимические исследования.

Иммуноцитохимические исследования проводили с использованием моноклональных антител к эпителиальным антигенам (Epithelial Antigen Clone Ber-EP4 и Cytokeratin Clone C MNF116), а также по-ликлонального антитела к раково-эмбриональному антигену (Carcinoembryonic Antigen, poly). В каждом случае были приготовлены 4 препарата с примене-

нием цитоцентрифуги Cytospin-4. В результате проведённой световой микроскопии препаратов данных пациентов установлено, что единичных клеток и единичных комплексов, наблюдаемых при микроскопии, оказалось недостаточно для проведения им-муноцитохимических исследований. В связи с этим фактом удалось провести иммуноцитохимические исследования только у пяти пациентов с наличием ЦК при гемоцитофильтрации (см. таблицу). При им-муноцитохимических исследованиях фильтратов периферической крови в трёх случаях отмечен немногочисленный клеточный состав, имеющий позитивное цитоплазматическое окрашивание на эпителиальные антитела и раково-эмбриональный антиген, подтверждающий принадлежность клеток к числу эпителиальных (рис. 7, см. 3-ю полосу вклейки). В двух наблюдениях проведения иммуноцитохимиче-ской реакции клеточного состава для интерпретации было недостаточно, а у одиночных голо-ядерных ЦК реакция с эпителиальными антителами отсутствовала. Во всех случаях для окончательного заключения была необходима микроскопическая характеристика всей клетки и её компонентов (мембраны, цитоплазмы, ядра), оценка голоядерных элементов была некорректной. Иммуноцитохимические исследования могут быть использованы для фенотипирования ЦК для выделения не только эпителиальных клеток, но также эндотелиальных клеток и мегакарио-цитов. В связи с этим обязательным является и дополнительное окрашивание на общелейкоцитарный антиген CD45 (Leucocyte Common Antigen) Clo^s 2B11+PD7/26.CD45 для исключения тромбобластов, циркулирующих в периферической крови, и вимен-тина (Vimentin Clone V9), позволяющего исключить примесь эндотелиальных клеток.

Выводы

1) Полученные нами данные показывают, что цитологическое исследование, используемое в качестве диагностического метода в клинической онкологии, также актуально в области обнаружения ЦК в периферической крови.

2) Идентификация ЦК остаётся сложной задачей и

ФУНДАМЕНТАЛЬНАЯ НАУКА - ПРАКТИЧЕСКОМУ ЗДРАВООХРАНЕНИЮ

до сих пор ещё недоступна в практическом здравоохранении для рутинного использования.

3) При идентификации ЦК с использованием имму-ноцитохимических исследований необходимо достаточное количество (не менее 50-100) ЦК.

4) При идентификации ЦК следует учитывать присутствие в крови клеток, утративших эпителиальные и приобретших мезенхимальные антигены (феномен эпителиально-мезенхимальной трансформации).

5) При иммуноцитохимическом исследовании необходимо использовать кроме эпителиальных антигенов также общелейкоцитарный антиген и виментин.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.

ЛИТЕРАТУРА

1. Зубцов Д.А., Зубцова Ж.И., Лавров А.В., Легченко Е.В., Аладинский В.А., Потеряхина А.В., Гольдштейн Д.В. Циркулирующие опухолевые клетки (ЦОК) при раке молочной железы: прогностическая значимость и методы выделения. Труды МФТИ. 2012; 4(3): 18-26.

2. Ковалев А.А., Грудинская Т.В., Кузнецова Т.П., Ковалев К.А. Гетерогенность циркулирующих опухолевых клеток. Онкология. 2012; 14(2): 126-9.

3. Christiansen J.J, Rajasekaran A.K. Reassessing epithelial to mesenchymal transition as a prerequisite for carcinoma invasion and metastasis. Cancer Res. 2006; 66: 8319-26. DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-06-0410

4. Thiery J.P., Sleeman J.P. Complex networks orchestrate epithelial-mesenchymal transitions. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2006; 7(2): 131-42. DOI: 10.1038/nrm1835

5. Hayes D.F., Cristofanilli M., Budd G.T. et al. Circulating tumor cells at each follow-up time point during therapy of meta-static breast cancer patients predict progression-free and overall survival. Clin. Cancer Res. 2006; 12(14 Pt 1): 4218-24. DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-05-2821

6. Gaforio J.J., Serrano M.J., Sanchez-Rovira P. et al. Detection of breast cancer cells in the peripheral blood is positively correlated with estrogen-receptor status and predicts for poor prognosis. Int. J. Cancer. 2003; 107(6): 984-90. DOI: 10.1002/ijc.11479

7. Giatromanolaki A., Koukourakis M.I., Kakolyris S. et al. Assessment of highly angiogenic and disseminated in the peripheral blood disease in breast cancer patients predicts for resistance to adjuvant chemotherapy and early relapse. Int. J. Cancer. 2004; 108(4): 62-7. DOI: 10.1002/ijc.11593

8. Serrano M.J., Sanchez-Rovira P., Delgado-Rodriguez M., Gaforio J.J. Detection of circulating tumor cells in the context of treatment: prognostic value in breast cancer. Cancer Biol. Ther. 2009; 8(8): 671-5.

9. Бжадут О.Б., Гривцова А.Ю., Тупицын Н.Н., Тюляндин С.А. Циркулирующие опухолевые клетки в крови больных мест-но-распространённым и диссеминированным раком молочной железы. Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. 2007; 18(3): 19-22.

10. Ненахова Ю.Н., Лядов В.К., Поддубная И.В. Оценка динамики циркулирующих опухолевых клеток в процессе неоадъю-вантной химиотерапии у больных с местно-распространён-ным раком молочной железы. Современная онкология. 2017; 19(3): 64-8.

11. Григорьева В.Л. Циркулирующие опухолевые клетки как маркёры прогноза выживаемости больных раком лёгких. Сибирское медицинское обозрение. 2016; 5: 84-6.

12. Непомнящая Е.М., Никипелова Е.А., Нистратова О.В., Новикова И.А., Водолажский Д.И., Ульянова Е.П. Параллели между циркулирующими опухолевыми клетками и некоторыми морфо-генетическими показателями при колоректаль-ном раке. Журнал фундаментальной медицины и биологии. 2016; 2: 64-9.

13. Riethdorf S., Soave A., Rink M. The current status and clinical value of circulating tumor cells and circulating cell-free tumor DNA in bladder cancer. Transl. Androl. Urol. 2017; 6(6): 1090110. DOI: 10.21037/tau.2017.09.16

14. Li J., Fu W., Zhang W., Li P. High Number of Circulating Tumor Cells Predicts Poor Survival of Cutaneous Melanoma Patients in China. Med. Sci. Monit. 2018; 24: 324-31.

15. Грех И.Ф., Яковлева М.П. Методы обнаружения опухолевых клеток в кровяном русле. Ленинград : Медицина. Ленингр. отд-ние; 1966.

16. Pantel K., Woelfle U. Detection and molecular characterisation of disseminated tumour cells: implications for anticancer therapy. Biochim. Biophys. Acta. 2005; 1756(1): 53-64. DOI: 10.1016/j. bbcan.2005.07.002

17. Balic M., Dandachi N., Hofmann G., Samonigg H., Loibner H. et al. Comparison of two methods for enumerating circulating tumor cells in carcinoma patients. CytometryB. Clin. Cytom. 2005; 68(1): 25-30. DOI: 10.1002/cyto.b.20065

18. Kaiser J. Cancer's circulation problem. Science. 2010; 327(5969): 1072-4. DOI: 10.1126/science.327.5969.1072

19. Kowalewska M., Chechlinska M., Markowicz S., Kober P., Nowak R. The relevance of RT-PCR detection of disseminated tumour cells is hampered by the expression of markers regarded as tumour-specific in activated lymphocytes. Eur. J. Cancer. 2006; 42: 2671-4. DOI: 10.1016/j.ejca.2006.05.036

20. Ntouroupi T., Ashraf S., McGregor S. et al. Detection of circulating tumour cells in peripheral blood with an automated scanning fluorescence microscope. Br. J. Cancer. 2008; 99(5): 789-95. DOI: 10.1038/sj.bjc.6604545

21. Camara O., Jorke C., Hammer U. et al. Monitoring circulating epithelial tumour cells (CETC) to gauge therapy: in patients with disease progression after trastuzumab persisting CETC can be eliminated by combined lapatinib treatment. J. Cancer Res. Clin. Oncol. 2009; 135(4): 643-7. DOI: 10.1007/s00432-008-0498-8

22. Andreopoulou E., Yang L.-Y., Rangel K. et al. Comparison of assay methods for detection of circulating tumor cells in meta-static breast cancer: AdnaGen AdnaTest BreastCancer Select/Detect™ versus Veridex CellSearch™ system. Int. J. Cancer. 2011; 130(7): 1590-7. DOI: 10.1002/ijc.26111

23. Kagan M., Howard D., Bendele T. et al. A Sample Preparation and Analysis System for Identification of Circulating Tumor Cells. J. Clin. LigandAssay. 2002; 25(1): 104-10.

24. Van der Auwera I., Peeters D., Benoy I. et al. Circulating tumour cell detection: a direct comparison between the CellSearch System, the AdnaTest and CK19/mammaglobin RT-PCR in patients with metastatic breast cancer. Br. J. Cancer. 2010; 102(2): 27684. DOI: 10.1038/sj.bjc.6605472

25. Tewes M., Aktas B., Welt A. et al. Molecular profiling and predictive value of circulating tumor cells in patients with metastatic breast cancer: an option for monitoring response to breast cancer related therapies. Breast Cancer Res. Treat. 2009; 115(3): 58190. DOI: 10.1007/s10549-008-0143-x

26. Cristofanilli M. The biological information obtainable from circulating tumor cells. Breast. 2009; 18(3): 38-40. DOI: 10.1016/ S0960-9776(09)70270-X

27. Tan S., Yobas L., Lee G., Ong C., Lim C. Microdevice for the isolation and enumeration of cancer cells from blood. Biomed. Microdevices. 2009; 11(4): 883-92. DOI: 10.1007/s10544-009-9305-9

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

28. Sun Y.-F., Yang X.-R., Zhou J., Qiu S.-J., Fan J., Xu Y. Circulating tumor cells: advances in detection methods, biological issues, and clinical relevance. J. Cancer Res. Clin. Oncol. 2011; 137(8): 1151-73. DOI: 10.1007/s00432-011-0988-y

29. Hayashi N., Yamauchi H. Role of circulating tumor cells and dis-

seminated tumor cells in primary breast cancer. Breast Cancer. 2012; 19(2): 110-7. DOI: 10.1007/sl2282-011-0282-5

30. Hofman V.J., Ilie M.I., Bonnetaud C. et al. Cytopathologic Detection of Circulating Tumor Cells Using the Isolation by Size of Epithelial Tumor Cell Method. Am. J. Clin. Pathol. 2011; 135(1): 146-56. DOI: 10.1309/AJCP9X80ZBEIQVVI

31. Paterlini-Brechot P., Benali N.L. Circulating tumor cells (CTC) detection: clinical impact and future directions. Cancer Lett. 2007; 253(2): 180-204. DOI: 10.1016/j.canlet.2006.12.014

32. Weinberg R.A. Twisted epithelial-mesenchymal transition blocks senescence. Nat. Cell. Biol. 2008; 10: 1021-3. DOI: 10.1038/ncb0908-1021

REFERENCES

1. Zubtzov D.A., Zubtzova J.I., Lavrov A.V., Legchenko E.V., Ala-dinskiy V.A., Poteriakhina A.V., Goldshtein D.V. Circulating tumour cells in breast cancer: prognostic significance and extraction technique. Trudy MFTI; 2012; 4(3): 18-26. (in Russian)

2. Kovalev A.A., Grudinskaia T.V., Kusnetzova T.P., Kovalev K.A. Heterogeneity of circulating tumour cells. Onkologiya. 2012; 14(2): 126-9. (in Russian)

3. Christiansen J.J, Rajasekaran A.K. Reassessing epithelial to mes-enchymal transition as a prerequisite for carcinoma invasion and metastasis. Cancer Res. 2006; 66: 8319-26. DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-06-0410

4. Thiery J.P., Sleeman J.P. Complex networks orchestrate epithelial-mesenchymal transitions. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2006; 7(2): 131-42. DOI: 10.1038/nrm1835

5. Hayes D.F., Cristofanilli M., Budd G.T. et al. Circulating tumor cells at each follow-up time point during therapy of metastatic breast cancer patients predict progression-free and overall survival. Clin. Cancer Res. 2006; 12(14 Pt 1): 4218-24. DOI: 10.1158/1078-0432.CCR-05-2821

6. Gaforio J.J., Serrano M.J., Sanchez-Rovira P. et al. Detection of breast cancer cells in the peripheral blood is positively correlated with estrogen-receptor status and predicts for poor prognosis. Int. J. Cancer. 2003; 107(6): 984-90. DOI: 10.1002/ijc.11479

7. Giatromanolaki A., Koukourakis M.I., Kakolyris S. et al. Assessment of highly angiogenic and disseminated in the peripheral blood disease in breast cancer patients predicts for resistance to adjuvant chemotherapy and early relapse. Int. J. Cancer. 2004; 108(4): 62-7. DOI: 10.1002/ijc.11593

8. Serrano M.J., Sanchez-Rovira P., Delgado-Rodriguez M., Gaforio J.J. Detection of circulating tumor cells in the context of treatment: prognostic value in breast cancer. Cancer Biol. Ther. 2009; 8(8): 671-5.

9. Bzhadut O.B., Grivtzova A.Yu., Tupitzyn N.N., Tuylyandin S.A. Circulating tumour cells in blood of patients with local spread and disseminating breast cancer. Vestnik RONTs im. N.N. Blokhina RAMN. 2007; 18(3): 19-22. (in Russian)

10. Nenakhova Iu.N., Liadov V.K., Poddubnaia I.V. Evaluation of dynamics of circulating tumour cells during neoadjuvant chemotherapy of patients with local spread breast cancer. Sovremen-naya onkologiya. 2017; 19(3): 64-8. (in Russian)

11. Grigorieva V.L. Circulating tumour cells as markers of prognosis of survival rates of patients with lung cancer. Sibirskoe meditsin-skoe obozrenie. 2016;(5): 84-6. (in Russian)

12. Nepomnyschaya E.M., Nikipelova E.A., Nistratova O.V., Novikova I.A., Vodolazhsky D.I., Ulianova E.P. Parallels between circulating tumor cells and some morphological and genetic indicators in colorectal cancer. Zhurnal fundamental'noy meditsiny i biologii. 2016; (2): 64-9. (in Russian)

13. Riethdorf S., Soave A., Rink M. The current status and clinical value of circulating tumor cells and circulating cell-free tumor DNA in bladder cancer. Transl. Androl. Urol. 2017; 6(6): 1090110. DOI: 10.21037/tau.2017.09.16

14. Li J., Fu W., Zhang W., Li P. High Number of Circulating Tumor Cells Predicts Poor Survival of Cutaneous Melanoma Patients in China. Med. Sci. Monit. 2018; 24: 324-31.

BASIC RESEARCH - PRACTICAL MEDICINE

15. Grekh I.F., Iakovleva M.P. Methods of detection of tumour cells in bloodstream. Leningrad : Meditsina. Leningr. otd-nie; 1966. (in Russian)

16. Pantel K., Woelfle U. Detection and molecular characterisation of disseminated tumour cells: implications for anticancer therapy. Biochim. Biophys. Acta. 2005; 1756(1): 53-64. DOI: 10.1016/j. bbcan.2005.07.002

17. Balic M., Dandachi N., Hofmann G., Samonigg H., Loibner H. et al. Comparison of two methods for enumerating circulating tumor cells in carcinoma patients. Cytometry B. Clin. Cytom. 2005; 68(1): 25-30. DOI: 10.1002/cyto.b.20065

18. Kaiser J. Cancer's circulation problem. Science. 2010; 327(5969): 1072-4. DOI: 10.1126/science.327.5969.1072

19. Kowalewska M., Chechlinska M., Markowicz S., Kober P., Nowak R. The relevance of RT-PCR detection of disseminated tumour cells is hampered by the expression of markers regarded as tumour-specific in activated lymphocytes. Eur. J. Cancer. 2006; 42: 2671-4. DOI: 10.1016/j.ejca.2006.05.036

20. Ntouroupi T., Ashraf S., McGregor S. et al. Detection of circulating tumour cells in peripheral blood with an automated scanning fluorescence microscope. Br. J. Cancer. 2008; 99 (5): 789-95. DOI: 10.1038/sj.bjc.6604545

21. Camara O., Jorke C., Hammer U. et al. Monitoring circulating epithelial tumour cells (CETC) to gauge therapy: in patients with disease progression after trastuzumab persisting CETC can be eliminated by combined lapatinib treatment. J. Cancer Res. Clin. Oncol. 2009; 135(4): 643-7. DOI: 10.1007/s00432-008-0498-8

22. Andreopoulou E., Yang L.-Y., Rangel K. et al. Comparison of assay methods for detection of circulating tumor cells in meta-static breast cancer: AdnaGen AdnaTest BreastCancer Select/Detect™ versus Veridex CellSearch™ system. Int. J. Cancer. 2011; 130(7): 1590-7. DOI: 10.1002/ijc.26111

23. Kagan M., Howard D., Bendele T. et al. A Sample Preparation and Analysis System for Identification of Circulating Tumor Cells. J. Clin. LigandAssay. 2002; 25(1): 104-10.

24. Van der Auwera I., Peeters D., Benoy I. et al. Circulating tumour cell detection: a direct comparison between the CellSearch System, the AdnaTest and CK19/mammaglobin RT-PCR in patients with metastatic breast cancer. Br. J. Cancer. 2010; 102(2): 27684. DOI: 10.1038/sj.bjc.6605472

25. Tewes M., Aktas B., Welt A. et al. Molecular profiling and predictive value of circulating tumor cells in patients with metastatic breast cancer: an option for monitoring response to breast cancer related therapies. Breast Cancer Res. Treat. 2009; 115(3): 58190. DOI: 10.1007/s10549-008-0143-x

26. Cristofanilli M. The biological information obtainable from circulating tumor cells. Breast. 2009; 18(3): 38-40. DOI: 10.1016/ S0960-9776(09)70270-X

27. Tan S., Yobas L., Lee G., Ong C., Lim C. Microdevice for the isolation and enumeration of cancer cells from blood. Biomed. Microdevices. 2009; 11(4): 883-92. DOI: 10.1007/s10544-009-9305-9

28. Sun Y.-F., Yang X.-R., Zhou J., Qiu S.-J., Fan J., Xu Y. Circulating tumor cells: advances in detection methods, biological issues, and clinical relevance. J. Cancer Res. Clin. Oncol. 2011; 137(8): 1151-73. DOI: 10.1007/s00432-011-0988-y

29. Hayashi N., Yamauchi H. Role of circulating tumor cells and disseminated tumor cells in primary breast cancer. Breast Cancer. 2012; 19 (2): 110-7. DOI: 10.1007/s12282-011-0282-5

30. Hofman V.J., Ilie M.I., Bonnetaud C. et al. Cytopathologic Detection of Circulating Tumor Cells Using the Isolation by Size of Epithelial Tumor Cell Method. Am. J. Clin. Pathol. 2011; 135(1): 146-56. DOI: 10.1309/AJCP9X8OZBEIQVVI

31. Paterlini-Brechot P., Benali N.L. Circulating tumor cells (CTC) detection: clinical impact and future directions. Cancer Lett. 2007; 253(2): 180-204. DOI: 10.1016/j.canlet.2006.12.014

32. Weinberg R.A. Twisted epithelial-mesenchymal transition blocks senescence. Nat. Cell. Biol. 2008; 10: 1021-3. DOI: 10.1038/ncb0908-1021

Поступила 13.03.18 Принята к печати 19.04.18

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.