CC BY
67
ИДЕНТИФИКАЦИЯ ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ СУХОГО ЭКСТРАКТА, ПОЛУЧЕННОГО ИЗ СБОРА ОДУВАНЧИКА ЛЕКАРСТВЕННОГО ТРАВЫ И ЛОПУХА БОЛЬШОГО ЛИСТА
Л.М. Федосеева, Ю.И. Чистова
ФГБОУ ВО «Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России; Россия, 656038 Барнаул, пр-т Ленина, 40
Контакты: Юлия Игоревна Чистова [email protected]
Цель исследования — изучение фенольных соединений сухого экстракта сбора одуванчика лекарственного травы и лопуха большого листа.
Материалы и методы. Разделение и идентификацию фенольных соединений изучаемого экстракта проводили методами тонкослойной хроматографии и высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детектированием. Результаты. В результате исследований установлено, что оптимальной для разделения фенольных соединений методом тонкослойной хроматографии является система этилацетат — кислота муравьиная — вода (10:2:3). На хроматограмме обнаруживаются 4 зоны адсорбции, по положению и флуоресценции в ультрафиолетовом свете соответствующие флавоно-идам группы флавона и фенолокислотам (хлорогеновая и кофейная кислоты). Для дальнейшей идентификации фенольных соединений использовали метод высокоэффективной жидкостной хроматографии. В ходе работы обнаружено 8 пиков, которые по временам удерживания и спектральным характеристикам соответствуют фенологликозидам, хлорогеновой кислоте, производным кофейной кислоты, феруловой кислоты, умбеллиферона.
Заключение. Установлено, что экстракт сбора одуванчика лекарственного травы и лопуха большого листа сухой содержит гидроксикоричные кислоты и их производные, соединения кумариновой природы, фенологликозиды.
Ключевые слова: фенольные соединения, тонкослойная хроматография, высокоэффективная жидкостная хроматография, экстракт сбора одуванчика лекарственного травы и лопуха большого листа сухой
DOI: 10.17650/1726-9784-2019-18-2-73-77
IDENTIFICATION OF PHENOLIC COMPOUNDS OF DRY EXTRACT OF DANDELION HERB
AND LARGE BURDOCK LEAF TEA
L.M. Fedoseeva, Yu. I. Chistova
Altai State Medical University of the Ministry of Health of Russia; 40 Prospekt Lenina, Barnaul 656038, Russia
The purpose of this work is to study of phenolic compounds in the dry extract of dandelion herb and large burdock leaf tea. Materials and methods. The separation and identification of phenolic compounds of dry extract of dandelion herb and large burdock leaf tea by thin-layer chromatography and high-performance liquid chromatography with UV-detectionhas been carried out. Results. As a result of research, it has been established that during TLC the optimal system for the separation of phenolic compounds is the ethyl acetate — formic acid — water system (10:2:3). On the chromatogram four spots were found corresponding to the value of Rf and fluorescence in UV-light to flavonoids of the flavone group and phenolic acids (chlorogenic and caffeic acids). For further identification of phenolic compounds using HPLC, eight peaks were found, which in terms of retention time and spectral characteristics correspond to phenologlycosides, chlorogenic acid, caffeic acid derivatives, ferulic acid, umbelliferone.
Conclusions. Thus, the dry extract of dandelion herb and large burdock leaf tea contains hydroxycinnamic acids and their derivatives, compounds of coumarin nature, phenologlycosides.
Key words: phenolic compounds, thin-layer chromatography, high-performance liquid chromatography, dry extract of dandelion herb and large burdock leaf tea
Введение пуха большого листа сухого методом ремацерации.
Нами разработана технология получения экс- Экстрагент — вода очищенная, соотношение «сырье: тракта сбора одуванчика лекарственного травы и ло- экстрагент» — 1:10. Одним из этапов исследования
74 Оригинальные статьи
лекарственных препаратов из растительного сырья реактивами (1 % спиртовой раствор алюминия (III) является изучение качественного состава основных хлорида, пары аммиака). групп биологически активных веществ. В ходе про- Фиксировали изменения окраски зон адсорбции веденных химических реакций установлено наличие в исследуемых пробах и сравнивали их окраску и по-флавоноидов групп флавона и флавонола, гидроли- ложение (величину Rf) с соответствующими зонами зуемых и конденсированных дубильных веществ, адсорбции в пробах стандартных образцов. Опреде-полисахаридов [1]. При изучении специфической ление проводили в 5 повторностях. активности экстракта сбора одуванчика лекарствен- Последующее разделение и идентификацию фе-ного травы и лопуха большого листа сухого доказан нольных соединений спиртового раствора экстракта его диуретический эффект, что можно объяснить проводили методом высокоэффективной жидкостной входящими в состав соединениями фенольной при- хроматографии на микроколоночном жидкостном роды [2]. Однако одним из недостатков сухих экс- хроматографе «Милихром А-02» (ЭкоНова, Россия) трактов является высокая гигроскопичность, вслед- с ультрафиолетовым детектором. Условия хроматогра-ствие чего ухудшается их сыпучесть, снижается фирования: колонка ProntoSIL 120-5-C18 AQ, 2,0 х качество. По этой причине мы планируем разрабо- 75 мм. Элюент А — раствор трифторуксусной кислоты тать лекарственную форму с экстрактом сбора сухим водный 0,01 %, элюент Б — 100 % ацетонитрил. Сков виде твердых капсул. рость подачи элюента — 100 мкл/мин, объем пробы — Цель исследования — изучение фенольных соеди- 2 мкл, температура колонки — 35 °С; градиент 5—55 % нений в экстракте сбора одуванчика лекарственного элюента Б за 30 мин. Детектирование осуществляли при травы и лопуха большого листа сухом физико-хими- длинах волн 220, 254, 268, 300, 324, 330 и 360 нм. Соеди-ческими методами. нения идентифицировали по временам удерживания (т, мин) и спектральным характеристикам , нм), Материалы и методы сравнивая их с аналогичными характеристиками Объект исследования — экстракт сбора одуван- стандартных образцов и данными литературы [8, 9]. чика лекарственного травы и лопуха большого листа сухой. Результаты и обсуждение Для разделения и идентификации фенольных В ходе предварительных исследований установи-соединений экстракта использовали методы тон- ли, что для разделения фенольных соединений ме-кослойной хроматографии и высокоэффективной тодом тонкослойной хроматографии оптимальной жидкостной хроматографии. системой растворителей является этилацетат — кис- В ходе исследования 0,2 г экстракта растворяли лота муравьиная — вода (10:2:3). в 5,0 мл 70 % этилового спирта, затем фильтровали В результате исследования на хроматограмме через бумажный фильтр (синяя лента, ООО «Бавер»), обнаружены 4 пятна с желтой и голубой флуоресцен-по 5 мкл фильтрата наносили на хроматографические цией, что характерно для флавоноидов группы фла-пластинки Sorbfil (силикагель, ПТСХ-УФ). Хрома- вона и фенолокислот. По значению Rf и цвету зон тографическое исследование проводили с использо- адсорбции до и после обработки хромогенными ре-ванием 6 систем растворителей: н-бутанол—кислота активами в дневном и ультрафиолетовом свете иден-уксусная ледяная—вода (4:1:1 и 4:1:2), этилацетат— тифицированы кофейная (Rf = 0,66) и хлорогеновая кислота уксусная ледяная—вода (7:1:2), этилацетат— (Rf = 0,81) кислоты (табл. 1). кислота муравьиная—вода (10:2:3), этилацетат-кис- Для дальнейшей идентификации фенольных лота муравьиная—кислота уксусная ледяная—вода соединений использовали метод высокоэффектив-(100:11:11:26), хлороформ—спирт этиловый 96 %-во- ной жидкостной хроматографии. да (26:16:3) [3—7]. В результате эксперимента на хроматограмме В качестве стандартных образцов использовали спиртового раствора экстракта зарегистрировано 0,1 % спиртовые растворы рутина (каталожный но- 8 пиков. В процессе исследования снимали элек-мер R5143), лютеолина (L9283), кверцетина (Q4951), тронные спектры поглощения индивидуальных ве-кверцитрина (83388), нарингенина (N5893), ориен- ществ, соответствующих пикам на хроматограмме. тина (O9765), хлорогеновой кислоты (С3878), кофей- Идентификацию индивидуальных веществ проводи-ной кислоты (С0625), феруловой кислоты (PHR1791), ли по временам удерживания (т, мин) и спектраль-п-кумаровой кислоты (C9008), приобретенных в ком- ным характеристикам , нм) в сравнении с анало-пании ООО «Сигма-Алдрич Рус». После хроматогра- гичными характеристиками стандартных образцов фирования пластинки высушивали при комнатной или данными литературы [8, 9]. температуре на воздухе до исчезновения запаха рас- Установлено, что спиртовой раствор экстракта творителей и просматривали в дневном и ультрафи- содержит хлорогеновую кислоту, фенологликозиды, олетовом свете до и после обработки хромогенными производные кофейной и феруловой кислоты,
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ | RUSSiAN JOURNAL OF BiOTHERAPY 2'2019 том 181 vol. 18
Таблица 1. Результаты тонкослойной хроматографии экстракта сбора одуванчика лекарственного травы и лопуха большого листа сухого в системе растворителей этилацетат — кислота муравьиная — вода (10:2:3)
Table 1. Results of thin-layer chromatography of common dandelion and dried greater burdock extracts in the system of solvents ethyl acetate — formic acid — water (10:2:3)
Окрашивание после детектирования Staining after detection
Исследуемый образец Rf УФ-свет A1CI3 раствор спиртовой 1 % Аммиака пары Идентифицированное соединение
uV ligh t t т ■ЫШаЩйк Ж
Studied sample Видимый свет УФ-свет Видимый свет УФ-свет Identified compound
Экстракт сбора: Extract: пятно 1 blot 1 0,55 ± 0,03 Желтое Yellow Желтое Yellow Желто-зеленое Greenish yellow Желто-коричневое Brownish yellow Серое Grey Флавоноид группы флавона Flavone type flavonoid
пятно 2 blot 2 0,66 ± 0,02 Голубое Blue - Серо-зеленое Greyish green - Голубое Blue Кофейная кислота Caffeic acid
пятно 3 blot 3 0,72 ± 0,03 Желтое Yellow Желтое Yellow Желто-зеленое Greenish yellow Желтое Yellow Серое Grey Флавоноид группы флавона Flavone type flavonoid
пятно 4 blot 4 0,81 ± 0,02 Голубое Blue - Серо-зеленое Greyish green Желто-зеленое Greenish yellow Голубое Blue Хлорогеновая кислота Chlorogenic acid
Примечание. УФ — ультрафиолетовый. Note. UV — ultraviolet.
Таблица 2. Результаты идентификации фенольных соединений спиртового раствора экстракта сбора одуванчика лекарственного травы и лопуха большого листа сухого методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Table 2. Results of identification ofphenolic compounds in alcohol solution of common dandelion and dried greater burdock extracts using highperformance liquid chromatography
№ пика, п/п Время удерживания, мин Максимум поглощения, нм Идентифицированное соединение
Peak No. Retention time, min Maximum absorption, nm Identified compound
1 4,9 300 Фенологликозид Phenolic glycoside
2 8,7 216, 230 пл.,* 290 пл., 324 216, 23G sh*, 29G sh, 324 Производное феруловой кислоты Derivative of ferulic acid
3 10,6 218, 235 пл., 297 пл., 330 218, 235 sh, 297 sh, 33G Хлорогеновая кислота Chlorogenic acid
4 13,4 218, 230 пл., 295 пл., 329 218, 23G sh, 295 sh, 329 Производное кофейной кислоты Derivative of caffeic acid
5 14,8 320 Фенологликозид Phenolic glycoside
6 15,3 209 пл.; 229 пл., 292, 325 2G9 sh; 229 sh, 292, 325 Производное умбеллиферона
7 16,1 290, 328 Derivative of umbelliferone
8 16,9 212, 230 пл., 290, 330 212, 23G sh, 29G, 33G Производное кофейной кислоты Derivative of caffeic acid
Стандартные образцы
1 10,6 218, 235 пл., 297 пл., 330 218, 235 sh, 297 sh, 33G Хлорогеновая кислота Chlorogenic acid
2 12,0 217, 242, 298 пл., 328 217, 242, 298 sh, 328 Кофейная кислота Caffeic acid
3 15,0 218, 234, 293 пл., 323 218, 234, 293 sh, 323 Феруловая кислота Ferulic acid
*Пл. — плечо. *Sh — shoulder.
76 Оригинальные статьи
с а -о
-о
2 -
1 -
0123456789 101112131415161718192021222324252627282930
Время, мин / Time, min
■а ■t
\
\ \ / \ flu-
\ : ч
\ - \
L
IK тч х :н -.-! и: м jw 1
тс г: л: тк тщ ™ к jk 2
l
\ \ / \
\ / Л у
f
n
fi Ï в a ; я if >»i»
î;
lT
Е
4
е е - !J \ u
§ и «2T» \
■J и I £1 \
Ё О \ л * Ф" V
::: - s Ы II
\
\
\ N --- \
V. /
т« a-5 ¿к ж Ï:3 iK зк
■kî: a: .'к ж м ие мс
б
Длина волны / Wavelength
7
8
Хроматограмма и спектры индивидуальных веществ спиртового раствора экстракта сбора травы одуванчика лекарственного и листа лопуха большого сухого: 1 — фенологликозид; 2 — производное феруловой кислоты; 3 — хлорогеновая кислота; 4 — производное кофейной кислоты; 5 — фенологликозид; 6 — производное умбеллиферона: 7 — производное умбеллиферона; 8 — производное кофейной кислоты Chromatogram and spectra of individual compounds of alcohol solutions of common dandelion and dried greater burdock: 1 — phenolic glycoside; 2 — derivative of ferulic acid; 3 — chlorogenic acid; 4 — derivative of caffeic acid; 5 — phenolic glycoside; 6 — derivative of umbelliferone; 7 — derivative of umbelliferone; 8 — derivative of caffeic acid
умбеллиферона. Результаты представлены в табл. 2 и на рисунке.
Таким образом, в результате высокоэффективной жидкостной хроматографии удалось идентифицировать гидроксикоричные кислоты и их производные, соединения кумариновой природы, фенологликозиды.
Заключение
Для разделения и идентификации фенольных соединений экстракта сбора методом тонкослойной
хроматографии использовали систему растворителей этилацетат — кислота муравьиная — вода (10:2:3). Применение данной системы позволяет обнаружить 4 зоны адсорбции с желтой и голубой флуоресценцией в ультрафиолетовом свете со значениями Rf = 0,55, 0,72 и Rf = 0,66, 0,81 соответственно. Желтая флуоресценция характерна для флавоноидов группы флавона. Пятна с голубой флуоресценцией идентифицированы как кофейная и хлорогеновая кислоты. В результате идентификации
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в спиртовом растворе экстракта сбора обнаружены хлорогеновая кислота, производные феруловой и кофейной кислот, умбеллиферона
и фенологликозиды. Полученные результаты будут использоваться для стандартизации экстракта сбора одуванчика лекарственного травы и лопуха большого листа сухого.
ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES
1. Чистова Ю.И., Федосеева Л.М. Качественный анализ экстракта сбора одуванчика лекарственного травы и лопуха большого листа сухого. Молодежь — Барнаулу: материалы XVII— XIX городской научно-практической конференции молодых ученых. Барнаул, 2018. С. 899—901. [Chistova Yu.I., Fedoseeva L.M. Qualitative analysis
of the dry extract of dandelion herb and large burdock leaf specie. Youth — Barnaul: materials of XVII—XIX municipal scientific-practical conference of young scientists. Barnaul, 2018. P. 899—901. (In Russ.)].
2. Чистова Ю.И., Федосеева Л.М. Изучение диуретической активности экстракта сбора одуванчика лекарственного травы и лопуха большого листа. SCIENTIST 2018;1(1):69—72. [Chistova Yu.I., Fedoseeva L.M.
the study of the diuretic activity of the extract of dandelion herb and large burdock leaf specie. SCIENTIST 2018;1(1):69—72. (In Russ.)].
3. Галиахметова Э.Х., Кудашкина Н.В., Чуйкин С.В., Егорова Е.Г. Использование денситометрии в качественном анализе флавоноидов листьев лимонника китайского. Медицинский вестник Башкортостана 2016;5(65):70—3. [Galiakhmetova E.H., Kudashkina N.V., CHujkin S.V., Egorova E.G. the use
of densitometry in the qualitative analysis of flavonoids of schisandrachinensis leaves. Meditsinskiy vestnik Bashkor-tostana = Bashkortostan Medical Journal 2016;5(65):70—3. (In Russ.)].
4. Куркин В.А., Рязанова Т.К., Платонов И.А., Павлова Л.В. Количественное определение арбутина в листьях толокнянки обыкновенной. Химия растительного сырья 2015;1:95—100. DOI: 10.14258/jcprm.201501410. [Kurkin V.A., Ryazanova T.K., Platonov I.A., Pavlova L.V. Quantitative determination of arbutin in the leaves of arctostaphylosuva-ursi (L.) spreng. Khimiya rastitel'nogo syr'ya = Chemistry of plant raw material 2015;1:95—100. (In Russ.)].
5. Латыпова Г.М. Вопросы стандартизации листьев первоцвета весеннего. Вестник Оренбургского государственного университета 2009;6:195—7. [Latypova G.M. Issues of standardization of primrose leaves. Vestnik Orenburg-skogo gosudarstvennogo universiteta = Vestnik of the Orenburg State University 2009;6:195—7. (In Russ.)].
6. Сумина Е.Г., Штыков С.Н., Сорокина О.Н. и др. Тонкослойная хроматография флавоноидов на силикагеле
в модифицированных мицеллярных подвижных фазах на основе додецил-сульфата натрия. Сорбционные
и хроматографические процессы 2014;14(1):52—64. [Sumina E.G., Shtykov S.N., Sorokina O.N. et al. TLC on silicagelin flavonoids modified micellar mobile phases based on sodium dodecyl-sulfate. Sorbtsionnyye i khromatografi-cheskiye protsessy = Sorption and chromatographic processes 2014;14(1):52—64. (In Russ.)].
7. Шаталова Т.А., Вдовенко-Мартыно-ва Н.Н., Айрапетова А.Ю. и др. Разработка технологии и анализа косметического крема на основе травы мелиссы лекарственной. Современные проблемы науки и образования 2015;4. URL: http://science-education. ru/ru/article/view?id=20993. [Shata-lova T.A., Vdovenko-Martynova N.N., Ajrapetova A.Yu. et al. Development
of technology and the analysis of cosmetic cream on the basis of the grass оf melissa officinalis. Modern problems of science and education 2015;4. URL: http://science-education. ru/ru/article/view?id=20993. (In Russ.)].
8. Wagner H., Bauer R., Melchart D. et al. Chromatographic Fingerprint Analysis of Herbal Medicines. New-York: Springer, 2011. 1012 p.
9. Mabry T.J., Markham K.R., Thomas M.B. the Systematic Identification
of Flavonoids. New-York: Springer, 1970. 354 p.
ORCID авторов/ORCID of authors
Ю.И. Чистова/Yu.I. Chistova: https://orcid.org/0000-0003-1923-8097 Вклад авторов
Л.М. Федосеева: разработка дизайна исследования, анализ полученных данных;
Ю.И. Чистова: получение данных для анализа, анализ полученных данных, написание текста статьи, обзор публикаций по теме статьи. Author's contributions
L.M. Fedoseeva: developing the research design, analysis of the obtained data;
Yu.I. Chistova: obtaining data for analysis, analysis of the obtained data, article writing, reviewing of publications of the article's theme.
Конфликт интересов: Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Conflict of interest: The authors declare no conflict of interest.
Финансирование. Исследование проведено без спонсорской поддержки. Financing. The study was performed wishout external funding.
Статья поступила: 13.02.2019. Принята в печать: 12.04.2019. Article reseived: 13.02.2019. Accepted for publication: 12.04.2019.
