CC BY
4Актуальность
Механизм действия Notch играет значимую роль в развитии эпителиально-мезенхимального перехода и метастазирования. Все четыре рецептора Notch проявляют онкогенные свойства, однако их пути воздействия остаются до конца не изученными и требуют дополнительного анализа. На данный момент большой интерес представляет исследование белка Notch3, ли-гандом которого может выступать многофункциональный ДНК/РНК-связывающий белок YB-1.
Цель
Изучить влияние активации белка Notch3 под воздействием его лиганда белка YB-1 на пролиферацию клеток рака поджелудочной железы (РПЖ) и рака молочной железы (РМЖ). Определить экспрессию и локализацию белка в опухолевых клетках.
Материалы и методы
Для анализа мы использовали четыре клеточные линии РПЖ: PANC-1, MiaPaCa-2, AcPS-1, Capan-2; нетуморогенные эпителиальные клетки молочной железы MCF10A и две клеточные линии РМЖ: MCF7, MDA-MB-453. Экспрессию гена Notch3 определяли с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени, а его локализацию в клетках — иммуноци-тохимическим методом с помощью флуоресцентного микроскопа Carl Zeiss. Также была произведена оценка уровня пролиферации клеток под воздействием rYB-1, подсчет выполнялся в камере Горяева.
Результаты
При оценке клеток РПЖ самую низкую экспрессию гена Notch3 показала линия AcPS-1 (p <0,01),
а самую высокую — линия Capan-2 (р <0,01). Проведено сравнение экспрессии гена Notch3: в Capan-2 экспрессия Notch3 в среднем в 9 раз выше, чем в MiaPaca-2 (р = 0,006), в 37 раз выше, чем в Panc-1 (р = 0,004), более чем в 3000 раз выше, чем в AcPS-1 (р = 0,004). При оценке клеток РМЖ самую низкую экспрессию гена Notch3 показала нетумо-рогенная линия MCF10A. Максимальная экспрессия гена Notch3 наблюдалась в клетках MDA-MB-453 (р <0,01) и превышала экспрессию нетуморогенных клеток MCF10A в 32 раза (р = 0,004). Экспрессия клеток MCF7 была выше экспрессии MCF10A в 5 раз (р = 0,006). В клетках РПЖ белок Notch3 был обнаружен в ядрах клеток у Panc-1. В линиях MiaPaca-2 и Capan-2 клетки с ядерной и цитоплаз-матической локализацией встречались с одинаковой частотой. У клеточной культуры MCF10A была выявлена ядерная локализация белка. Клетки РМЖ линии MCF7 и MDA-MB-453 имели мембранную локализацию с небольшим количеством белка в цитоплазме. Ни в одной из культур РПЖ пролиферация не увеличивалась под действием rYB-1. Тогда как в культурах РМЖ было выявлено увеличение пролиферации.
Выводы
Экспрессия гена Notch3 различается между всеми четырьмя исследованными линиями РПЖ и тремя линиями РМЖ. Локализация белка Notch3 может быть как в цитоплазме, так и в ядрах клеток линий РПЖ. В клетках РМЖ наблюдалась мембранная локализация белка. Только в культурах РМЖ под действием гУБ-1 увеличивалась пролиферация опухолевых клеток.
Список литературы
1. Alexey A . Leontovich, Mohammad Jalalirad, Jeffrey L et al . . Notch3 expression is linked to breast cancer seeding and distant metastasis // Breast Cancer Research . 2018 . 20 . Р105 .
Хроническая нейрогенная боль нарушает баланс свободно-радикальных процессов и антиоксидантной защиты в митохондриях клеток сердца
Авторы
Черярина Наталья Дмитриевна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Франциянц Елена Михайловна, [email protected], ФГБУ ««НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Нескубина Ирина Валерьевна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Шихлярова Алла Ивановна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Бандовкина Валерия Ахтямовна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Сурикова Екатерина Игоревна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Немашкалова Людмила Анатольевна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Каплиева Ирина Викторовна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Трепитаки Лидия Константиновна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Качесова Полина Сергеевна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Погорелова Юлия Александровна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Шейко Елена Александровна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Ключевые слова:
митохондрии, сердце, меланома В16^10, хроническая нейрогенная боль
Актуальность
Сердце постоянно потребляет большое количество энергии, преимущественно для сокращения сердечной мышцы и циркуляции крови. При патологических процессах возникает дисфункция митохондрий сердца [1].
Цель
Изучить показатели свободно-радикального окисления и антиоксидантной защиты в митохондриях клеток сердца мышей-самок линии С57ВL/6 при росте экспериментальной меланомы В16/Б10 на фоне хронической нейрогенной боли.
Материалы и методы
Использовали мышей-самок (п = 63) линии С57ВL/6. Группы: интактная (п = 21), контрольная (п = 21) — хроническая нейрогенная боль (ХНБ) — перевязка седалищного нерва с двух сторон; группа ХНБ+М (п = 21), меланому В16/Б10 перевивали подкожно через 3 недели после создания ХНБ. Животных декапитировали через 3 недели после создания ХНБ и через 3 недели роста меланомы (группа ХНБ+М). В образцах митохондрий сердца методом ИФА определяли концентрацию супероксиддисмутазы-2 (СОД-2) (пг/мг белка), 8-гидрокси-2'-дезоксигуанозина (8-OHdG) (нг/мг белка), малонового диальдегида (МДА) (мкмоль/ мг белка), окисленного глутатиона (GSSG) (нМ/г белка), восстановленного глутатиона (GSH) (нМ/г белка), глутатионредуктазы (ГР) (нг/г белка), глу-
татионпероксидазы-1 (ГПО-1) (нг/г белка), общую СОД-активность (Ед/мг белка), активность ^^п СОД (Ед/мг белка), активность Mn-СОД (Ед/мг белка). Статистический анализ — Statistica 10.0.
Результаты
Найдено, что ХНБ в митохондриях сердца мышей снижала уровни СОД-2 в 2,9 раза, общей СОД-активности в 1,54 раза (р <0,05) и активности ^^п СОД в 2,7 раза по сравнению с интактными значениями. Не обнаружено изменения уровня 8-OHdG и МДА. Далее у самок с ХНБ в митохондриях сердца уровень GSSG превосходил интактные величины в 1,6 раза (р <0,05), ГР в 1,36 раза (р <0,05), а ГПО-1 был снижен в 1,4 раза (р <0,05). Содержание GSH и ГТ в митохондриях сердца с ХНБ было в пределах интактных значений. Сочетание ХНБ+М повышало в митохондриях сердца уровни СОД-2 в 3,6 раза, общей СОД-активности в 1,7 раза (р <0,05), Mn-СОД в 2 раза по сравнению с уровнем в митохондриях сердца с ХНБ, при этом 8-OHdG и МДА были в пределах контрольных величин. Обнаружено, что у самок с ХНБ и меланомой снижался уровень GSH в 1,5 раза (р <0,05), а ГПО-1 и ГР повышались в 2,9 и 4,3 раза соответственно.
Выводы
Хроническая нейрогенная боль, сопутствующая меланоме, изменяет работу ферментов антиоксидант-ной защиты организма, вызывая дисфункцию митохондрий клеток сердца.
Список литературы
1. Frantsiyants E . M . , Neskubina I . V , Shikhlyarova A . I . et al . Content of apoptosis factors and self-organization processes in the mitochondria of heart cells in female mice C57BL/6 under growth of melanoma B16/F10 linked with comorbid pathology // Cardiometry. 2021. № 18 . С . 121-130 .
