CC BY
1УДК 574.24+669.018.674-026.86 Е.П. ЖИВИЦКАЯ
старший преподаватель кафедры экологической медицины и радиобиологии1 E-mail: [email protected]
А.Г. СЫСА, канд. хим. наук, доцент, доцент кафедры биохимии и биоинформатики2 E-mail: [email protected]
А.К. ГАЛАХ
студент1
A.П. ЯК ОВЛЕВА
студент1
1 Международный государственный экологический институт им. А.Д. Сахарова Белорусского государственного университета, г. Минск, Республика Беларусь
И.Э. БУЧЕНКОВ, канд. с.-х. наук, доцент, доцент кафедры биохимии и биоинформатики2 E-mail: [email protected]
B.О. ЛЕМЕШЕВСКИЙ, канд. с.-х. наук, доцент, заведующий кафедрой биохимии и биоинформатики2 E-mail: [email protected]
2Полесский государственный университет, г. Пинск, Республика Беларусь
Статья поступила 24 сентября 2024 г.
ХАРАКТЕРИСТИКА ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИХ ЭФФЕКТОВ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ НА ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ БОЛЬШОЙ ДАФНИИ (DAPHNIA MAGNA)1
В работе исследовано влияние элементов группы тяжелых металлов меди (II), железа (II), свинца и никеля на острую иммобилизацию организмов Daphnia magna. Для построения моделей доза-эффект в настоящей работе использована лог-логистическая модель с четырьмя параметрами LL.4 библиотеки drm в среде статистических вычислений R. Характер кривых изменения иммобилизации большой дафнии (Daphnia magna) в области исследованных концентраций свидетельствует о том, что эффективность угнетения двигательной активности снижается в ряду Cu2+ > Cd2+ > Pb2+ > Ni2+, что подтверждается рассчитанными значениями ECo EC50 Cu2+ (0,11 мг/л) ~ EC50 Cd2+ (0,14 мг/л) < EC50 Pb2+ (1,41 мг/л) < EC50 Ni2+ (2,84 мг/л). Также исследовано влияние на подвижность Daphnia magna бинарных смесей катионов. Показано для ионов Pb2+ и Cd2+ в области низких концентраций (0,05-0,7 мг/л и 0,05-0,1 мг/л соответственно), что при добавлении Cu2+ наблюдался синергетический эффект, а в области высоких концентраций совместный эффект менялся на антагонистический. Что касается ионов Ni2+, то во всем диапазоне концентраций наблюдался антагонистический эффект при добавлении Cu2+. При исследовании эффектов смеси катионов Ni2+ с ионами Cu2+, Cd2+ и Pb2+ все изученные смеси ионов металлов приводили к усилению угнетения подвижности рачков дафнии, т.е. наблюдается синергетический эффект. Порядок токсичности смесей для Daphnia magna уменьшался в ряду Cd+Ni > Cu+Ni > Pb+Ni.
1 Работа выполнена при финансовой поддержке и в рамках проекта 10.3.05.09 ГПНИ «Природные ресурсы и
окружающая среда» подпрограмма 3 «Радиация и биологические системы» на 2021-2025 годы (№ ГР 20211863).
Ключевые слова: гидробионты, биоиндикация, токсичность, экологический мониторинг, угнетение подвижности.
ZHYVITSKAYA Alena P.
Senior Lecturer of the Department of Environmental Medicine and Radiobiology1
SYSA Aliaksei G., PhD in Biochemistry Sc., Associate Professor, Associate Professor of the Department of Biochemistry and Bioinformatics2
HALAKH Anastasia K., Student, Environmental Medicine Faculty1
YAKOVLEVA Alina P., Student1
international Sakharov Environmental Institute of Belarusian State University, Minsk, Republic of Belarus
BUCHENKOV Igor E., PhD in Agriculture Sc., Associate Professor Associate Professor of the Department of Biochemistry and Bioinformatics2
LEMIASHEUSKI Viktar A., PhD in Agriculture Sc., Associate Professor, Head of the Department of Biochemistry and Bioinformatics2 2Polessky State University, Pinsk, Republic of Belarus
CHARACTERISTICS OF THE TOXICOLOGICAL EFFECTS OF HEAVY METALS ON THE PHYSIOLOGICAL PARAMETERS OF DAPHNIA MAGNA
The effects of heavy metals copper (II), iron (II), lead and nickel on the acute immobilization of Daphnia magna were studied. To build dose-effect models in this work, a log-logistic model with four parameters LL.4 of the drm library in the statistical computing environment R is used. The shapes of dose-effect curves of the immobilization of Daphnia magna in the area of the studied concentrations indicates that the effectiveness of inhibition of motor activity decreases in the range Cu2+ > Cd2+ > Pb2+ > Ni2+, which is confirmed by the calculated values of EC50: EC50 Cu2+ (0.11 mg/l) ~ EC50 Cd2+ (0.14 mg/l) < EC50 Pb2+ (1.41 mg/l) < EC50 Ni2+ (2.84 mg/l). The effect of binary mixtures of cations on the mobility of Daphnia magna has also been investigated. It was shown for Pb2+ and Cd2+ ions at low concentrations (0.05-0.7 mg/l and 0.05-0.1 mg/l, respectively) that the addition of Cu2+ had a synergistic effect, and at high concentrations the combined effect changed to antagonistic. As for Ni2+ ions, an antagonistic effect was observed in the entire concentration range when Cu2+ was added. When studying the effects of a mixture of Ni2+ cations with Cu2+, Cd2+ and Pb2+ ions, all the studied mixtures of metal ions led to increased inhibition of the mobility of daphnia crustaceans, i.e. a synergistic effect is observed. The order of toxicity of mixtures for Daphnia magna decreased in the series Cd+Ni > Cu+Ni > Pb+Ni.
Keywords: hydrobionts, bioindication, toxicity, environmental monitoring, specific growth rate.
Научная новизна
В работе впервые рассматриваются совместные токсические эффекты нескольких ионов металлов на физиологические показатели Daphnia magna в условиях, характерных для водоемов Республики Беларусь.
What this paper adds
For the first time the joint toxic effects of several metal ions on physiological parameters of Daphnia magna in conditions typical for water bodies of the Republic of Belarus are considered in this work.
Введение. Токсичность ионов металлов по отношению к водным организмам изучается на протяжении многих десятилетий [13], но понимание того, как различные присутствующие в водных системах ионы ме-
таллов вызывают токсичность, по настоящее время остается недостаточным. Отсутствие точного понимания механизмов воздействия затрудняет количественный прогноз токсичности ионов металлов как по отдельности,
так и в различных их комбинациях [4]. Промышленные сточные воды, как правило, содержат смесь токсичных и вредных веществ, которые могут оказывать неблагоприятное воздействие на здоровье человека и водные экосистемы. Ежегодно большое количество сточных вод, содержащих тяжелые металлы, сбрасывается предприятиями автомобильной, горно-обогатительной и металлургической промышленности [5]. Они могут вносить значительный вклад в риск для окружающей среды и загрязнение принимающей водной системы [6]. Указанные загрязнители вызывают экологические проблемы из-за их высокой токсичности даже при низких концентрациях [7], поэтому наличие металлов (Cr, Ni, Fe, Cu) в таких сточных водах необходимо строго контролировать. Тяжелые металлы токсичны, они, как правило, не удаляются рутинными способами очистки сточных вод и не подвергаются биологическому разложению в окружающей среде, поэтому их воздействие даже в низких концентрациях на человека, наземные и водные организмы может иметь серьезные неблагоприятные последствия. Острое воздействие некоторых из этих тяжелых металлов на животных и окружающую среду может вызывать тошноту, рвоту, поражение почек и печени, раздражение кожи и рак легких [8].
В настоящее время важными инструментами для оценки негативных последствий и предотвращения деградации окружающей среды считаются подходы, основанные на биоиндикации. Одним из наиболее широко используемых в мире биоиндикаторных тестов для мониторинга токсичности водных ресурсов является тест на острую токсичность, проводимый с Daphnia magna. Этот тест стандартизирован, относительно легко выполним, и в то же время экологически значим.
Обоснованием его использования является широкий диапазон местообитания дафний, их относительно короткий жизненный цикл, небольшие размеры, высокая чувствительность к загрязнению окружающей среды, а также тот факт, что их относительно легко культивировать в лабораторных условиях [9, 10]. Доказанная эффективность тестов с использованием дафний привела к стандартизации процедур проведения испытаний несколькими национальными и международ-
ными организациями, занимающимися охраной окружающей среды [11-15]. В Республике Беларусь объекты Daphnia magna также рекомендованы для использования в качестве биоиндикатора в тестах на токсичность. Дафнии подвергаются воздействию изучаемого экотоксиканта, добавляемого в воду в различных концентрациях, в течение 24 или 48 часов. В тестах используется статическая система, в которой растворы не обмениваются во время воздействия. При воздействии стрессоров окружающей среды у дафний наблюдается значительное снижение репродукции, нарушение вертикальной подвижности и моделей поведения и, в конечном итоге, фенопластичность [16-18].
К настоящему времени накоплено большое количество данных, особенно для отдельных соединений (отдельных ионов металлов), однако исследований, проведенных с использованием смесей различных ионов металлов, меньше, хотя подобные исследования чрезвычайно важны с практической точки зрения с учетом возможных взаимодействий между различными металлами. Это может привести к уменьшению или увеличению диапазона безопасных для живых организмов концентраций в смесях металлов по сравнению с диапазонами для отдельных элементов.
Цель работы - определить влияние вод, содержащих элементы группы тяжелых металлов меди (II), железа (II), свинца и никеля, на острую иммобилизацию организмов Daphnia magna.
Новизна настоящего исследования заключается в том, что в работе впервые рассматриваются совместные токсические эффекты нескольких ионов металлов на физиологические показатели Daphnia magna в условиях, характерных для водоемов Республики Беларусь. Важно отметить, что результаты данного исследования помогут более точно оценить экологические риски и разработать рекомендации по охране водных ресурсов страны.
Практическая значимость исследований заключается в их применении для мониторинга качества водоемов, оценки воздействия тяжелых металлов на экосистемы и разработки эффективных методов очистки сточных вод. Полученные данные могут быть использованы для формирования экологической
политики и установления норм для контроля загрязнения водных ресурсов в Республике Беларусь, что, в свою очередь, будет способствовать улучшению состояния здоровья населения и экосистемы в целом.
Материалы и методы исследования. В работе использованы разведения стандартных водных растворов Pb(NO3)2, Cu(NO3)2, Cd(NO3)2, Ni(NO3)2 (с содержанием тяжелых металлов 1 мг/мл).
В качестве контроля использовали искусственную пресную воду, которую готовили с использованием деионизированной воды с добавлением KCl (1,2 мг/л), NaHCO3 (13,0 мг/л), MgSO4-7H2O (24,7 мг/л), CaCl2-2H2O (58,5 мг/л) [19]. Учитывая, что значение рН природной пресной воды обычно составляет 6-8 [20], начальное значение рН водного раствора, используемого в качестве контроля, было скорректировано до 7,0±0,1 с использованием раствора NaHCO3.
Определение острой токсичности с использованием Daphnia magna
В работе был проведен 48-часовой тест на острую иммобилизационную токсичность Daphnia magna. Для каждой повторности пять особей Daphnia magna в возрасте менее 24 часов помещали в 10 мл искусственной пресной среды (контроль) и раствор тестируемого загрязнителя в контрольной среде.
После 48-часового воздействия визуально оценивали количество иммобилизованных организмов, подвергшихся воздействию каждого тестируемого раствора. Токсический эффект выражали как средний процент иммобилизации организмов. Организмы считались неподвижными, когда они не могли плыть вперед в течение 15 с после встряхивания образца, даже если они все еще могли двигать своими усиками. Тесты, которые не соответствовали критерию валидности - максимальной 10% иммобилизации в контрольных группах (содержащие только контрольную среду), считались недействительными и исключались из оценки.
Острая токсичность по отношению к организмам Daphnia magna определялась как средняя концентрация, которая вызывала иммобилизующий эффект у 50% тестируемых организмов (EC50). На основании проведенного исследования были определены значения EC50, которые, в свою очередь, определяют концентрацию вещества, вызвавшего
эффект иммобилизации у 50% тестируемых организмов.
Статистический анализ Для построения моделей доза-эффект в настоящей работе использована лог-логистическая модель с четырьмя параметрами (b, c, d, e) LL.4 библиотеки drm в среде статистических вычислений R (GraphPad Software, Inc.), которая имеет вид:
ф(х) = С + efo(logx-log е^
где c и d - параметры, определяющие нижнюю и верхнюю горизонтальные асимптоты сигмоид-ной кривой,
e - соответствует положению точки перегиба, b - соответствует коэффициенту угла наклона в области переходного состояния.
Оцениваемые параметры моделей имеют вполне определенный физический смысл.
Подгонка параметров моделей к анализируемым эмпирическим данным осуществлялась с использованием метода наименьших квадратов с учетом специально подбираемых весовых коэффициентов.
Статистический анализ оцениваемых параметров проводился с использованием t-критерия Стьюдента, с помощью которого проверялась гипотеза о равенстве каждого коэффициента нулю и рассчитывались р-значения, определяющие достигнутый уровень значимости. Проверка статистической значимости модели в целом осуществлялась путем ее сравнения с моделью простой линейной регрессии, имеющей нулевой коэффициент наклона (горизонтальная линия регрессии соответствует отсутствию зависимости доза-эффект).
Результаты и обсуждение. Количество иммобилизованных организмов - основной параметр, используемый при тестировании воды на токсичность с использованием Daphnia magna, при этом рекомендуемая продолжительность воздействия - 48 часов. Результаты исследований приведены на рисунке 1.
Катионы кадмия и меди оказывали более выраженный эффект на двигательную активность рачков дафний.
Рисунок 1. - Уровень иммобилизации больших дафний (Daphnia magna) в зависимости от концентрации изученных катионов по итогам 48-часового культивирования после воздействия
Таблица 1. - Оценка параметров модели влияния катионов кадмия (II), меди (II), свинца и никеля на уровень иммобилизации рачков дафнии (Daphnia magna)
=r 80
пз
п
ю о
60
40
j
х 20 Q3 CD О
& 0
—<е- Pb(ll) Cu(ll) 4уф
Cd(ll) 1//Ф //* 1/ а/ $
N¡(11)
-2 -1 0 ]од[концентрации]
Параметр Значение параметра Ст. ошибка ¿-критерий р-значение
Ь: наклон области перегиба (са2+) -0,7 0,07 -9.4724 6,5* Ю-16***
Ь: наклон области перегиба (Си2+) -1,6 0,2 -8,1238 7,3* 10-13***
Ь: наклон области перегиба (№2+) -1,5 0,1 -12,4583 < 2,2* 10"16***
Ь: наклон области перегиба (РЬ2+) -0,9 0,1 -7,9053 2,2* 10-12***
с: нижний предел, % -3,8 1,7 -2,222 0.028*
а?: верхний предел, % 106,3 4,08 26,0306 <2,2* 10-16***
е: ЕС50 (Cd2+), (мг/л) 0,14 0,03 5,3526 4,8* 10-7***
е: ЕС50 (Си2 ), (мг/л) 0,11 0,01 10,6609 <2,2* 10-16***
е: ЕС50 (№2+), (мг/л) 2,84 0,22 12,9283 <2,2* 10-16***
е: ЕС50 (РЬ2+), (мг/л) 1,41 0,21 6,7513 7,2* 10-10***
Примечание - Уровень значимости * - р < 0,05; *** - р < 0,001
Так, уже при концентрации ионов 0,05 мг/л наблюдалась иммобилизация 26,6±1,5% организмов модельного объекта в случае ионов кадмия и 19,6±1,4% - в случае ионов меди. Для катионов РЬ2+ и №2+ подобный эффект наблюдался при концентрациях 0,7 мг/л и 1,0 мг/л соответственно.
Статистический анализ значимости оцененных параметров модели для исследуемых
соединений по 1>критерию представлен в таблице 1.
Установлено, что коэффициенты наклона (Ь), верхнего и нижнего пределов (с и О), а также значений ЕБ50 статистически значимы для всех изученных катионов. Зависимость уровня иммобилизации от концентрации катионов через 48 часов описываются уравнениями:
1) для иона Си2+:
уровень иммобилизации = -3,8
106,3 + 3,8
2) для катиона Cd2+:
уровень иммобилизации = -3,8
106,3 + 3,8
^ 1 + e-0,7*(logC(M^)-logO,14)
3) для иона Pb2+:
уровень иммобилизации = -3,8
106,3 + 3,8
^ 0^9*(1о^С(Мг7л)—logl,4lJ
4) для катиона Ni2+:
уровень иммобилизации = -3,8
106,3 + 3,8
Характер кривых изменения иммобилизации большой дафнии (Daphnia magna) в области исследованных концентраций свидетельствует о том, что эффективность угнетения двигательной активности особей большой дафнии снижается в ряду Cu2+ > Cd2+ > Pb2+ > Ni2+, что подтверждается рассчитанными значениями EC50: EC50 Cu2+ (0,11 мг/л) И EC50 Cd2+ (0,14 мг/л) < EC50 Pb2+ (1,41 мг/л) < EС50 Ni2+ (2,84 мг/л).
Далее в работе исследованы эффекты бинарных смесей изучаемых тяжелых металлов. Исследовано влияние на подвижность Daphnia magna смеси катиона, показавшего максимальную эффективность: Cu2+ в концентрации равной EC50 (0,11 мг/л) - и ионов кадмия, свинца и никеля в концентрациях как в случае моноэкспериментов (рисунок 2). Аналогичным способом исследованы эффекты смеси катионов никеля (самый неэффективный с точки зрения угнетения подвижности) в концентрации равной EQ0 (2,84 мг/л) с ионами меди, кадмия и свинца (рисунок 3).
Как следует из данных, представленных на рисунке 2, для ионов свинца и кадмия в области низких концентраций (0,05-0,7 мг/л и 0,05-0,1 мг/л соответственно) с добавлением меди наблюдался синергетический эффект (совместный эффект больше суммы эффектов при их независимом действии), т.е. низкие концентрации Pb и Cd потенцировали угнетение подвижности рачков ионами меди. В тоже время в области высоких концентраций совместный эффект менялся на антагонистический (общий эффект меньше суммы эффектов каждого фактора). Что касается ионов никеля, то во всем диапазоне концентраций наблюдался антагонистический эффект.
Концентрация, мг/л
Рисунок 2. - Логарифмические кривые зависимости доза-эффект влияния на подвижность Daphnia magna металлов Pb, Ni и Cd в присутствии Cu
Концентрация, мг/л
Рисунок 3. - Логарифмические кривые зависимости доза-эффект влияния на подвижность Daphnia magna металлов Pb, Cu и Cd в присутствии Ni
Совершенно иные результаты получены при исследовании эффектов смеси катионов никеля (самый неэффективный с точки зрения угнетения подвижности) в концентрации, равной ЕС50 с ионами меди, кадмия и свинца. Как следует из данных, представленных на рисунке 3, все изученные смеси ионов металлов приводят к усилению угнетения подвижности рачков дафнии, т.е. наблюдается синергетический эффект. Порядок токсичности смесей для Daphnia magna уменьшался в ряду Cd+Ni > Cu+Ni > Pb+Ni.
В ряду исследований показано, что тяжелые металлы взаимодействуют друг с другом, вызывая синергетические, антагонистические и аддитивные эффекты при попадании в водные организмы.
Например, воздействие смеси Cd и Zn на четырех различных дафнид (Ceriodaphnia dubia, Daphnia magna, Daphnia ambigua и Daphnia pulex) вызывало антагонистические эффекты из-за конкуренции этих двух элементов за сайты связывания у всех этих видов, за исключением D. magna [21].
Аналогичным образом токсичность смеси Cd и Zn была слабее, чем токсичность отдельных металлов для мангрового барвинка, Tympanotonus fuscatus var radula [22].
Однако в исследовании, проведенном Meng et al. [23], было обнаружено, что смесь Hg, Cd, Cu, Pb и Cr синергически взаимодей-
ствует с D. magna. Кроме того, Hagopian-Schlekat et al. [24] показали, что смесь Cd, Cu, Ni, Pb и Zn оказывала более сильное токсическое воздействие, чем воздействие отдельных металлов на моллюсков Amphiascus tenuiremis. Эти результаты свидетельствуют о том, что комбинированное воздействие различных смесей металлов является сложным и нуждается в дальнейшем изучении у различных водных видов.
Заключение. В работе изучено влияние вод, содержащих элементы группы тяжелых металлов меди (II), железа (II), свинца и никеля, на острую иммобилизацию организмов Daphnia magna. Показано, что:
1) эффективность угнетения двигательной активности особей большой дафнии (Daphnia magna) снижается в ряду Cu2+ > Cd2+ > Pb2+ >
Ni2+;
2) при исследовании эффектов смеси катионов меди (самый эффективный с точки зрения угнетения подвижности) для ионов свинца и кадмия в области низких концентраций (0,05-0,7 мг/л и 0,05-0,1 мг/л, соответственно) с добавлением меди в концентрации, равной EQ0, наблюдался синергетиче-ский эффект, а в области высоких концентраций совместный эффект менялся на антагонистический. Что касается ионов никеля, то во всем диапазоне концентраций наблюдался антагонистический эффект;
3) при исследовании эффектов смеси катионов никеля (самый неэффективный с точки зрения угнетения подвижности) в концентрации, равной EQ0 с ионами меди, кадмия и свинца все изученные смеси ионов металлов приводили к усилению угнетения подвижности рачков дафнии, т.е. наблюдается синергетический эффект. Порядок токсичности смесей для Daphnia magna уменьшался в ряду Cd+Ni > Cu+Ni > Pb+Ni.
Список литературы
1. Ali, H. Bioaccumulation of non-essential hazardous heavy metals and metalloids in freshwater fish / H. Ali, E. Khan // Risk to human health. Environ. Chem. Lett. - 2018. - № 16. - Р.903-917.
2. Tchounwou, P. B. Heavy Metal Toxicity and the Environment / P. B.Tchounwou, C. G.Yedjou, A. K. Patlolla [et al.] // Molecular, Clinical and Environmental Toxicology. -2012. - № 101. - Р. 133-164.
3. Tepanosyan, G. Continuous impact of mining activities on soil heavy metals levels and human health / G. Tepanosyan, L. Sahakyan, O. Belyaeva [et al.] // Sci. Total Environ. -2018. - № 639. - Р. 900-909.
4. Nys, C. Systematic evaluation of chronic met-
al-mixture toxicity to three species and implications for risk assessment / C. Nys, L. Versieren, K.I. Cordery [et al.] // Environ. Sci. Technol. - 2017. - № 51. - Р. 46154623.
5. Kim, T. K. Removal of heavy metals in electroplating wastewater by powdered activated carbon (PAC) and sodium diethyldithiocar-bamate-modified PAC. / T. K. Kim, T .Kim, W. S. Choe [et al.] // Environ. Eng. Res. -2018. - № 23(3). - Р. 301-308.
6. Jaishankar, M. Toxicity, mechanism and health effects of some heavy metals / M. Jaishankar, T. Tseten, N. Anbalagan [et al.] // Interdiscipl. Toxicol. - 2014. - № 7. - Р. 60-72.
7. Sall, M. L. Toxic heavy metals: impact on the environment and human health, and treatment with conducting organic polymers, a review / M. L. Sall, A. K. D. Diaw, D. Gningue-Sall [et al.] // Environ. Sci. Pollut. Control Ser. - 2020. - № 27 (24). - Р. 29927-29942.
8. Jan, A. T. Heavy metals and human health: mechanistic insight into toxicity and counter
defense system of antioxidants / A.T. Jan, M. Azam, K. Siddiqui [et al.] // Int. J. Mol. Sci. - 2015. - № 16. - P. 29592-29630.
9. Bacchetta, R. Chronic toxicity effects of ZnSO4 and ZnO nanoparticles in Daphnia magna / R. Bacchetta, N. Santo, M. Marelli [et al.] // Environ. Res. - 2017. - № 152. - P. 128-140.
10. Methneni, N. Persistent organic and inorganic pollutants in the effluents from the textile dyeing industries: ecotoxicology appraisal via a battery of biotests / N. Methneni, J. A. Morales-Gonza lez, A. Jaziri [et al.] // Environ. Res. - 2021. - 196. - 110956 p.
11. Determination of the Inhibition of the Mobility of Daphnia Magna Straus (Cladocera, Crustacea) - Acute Toxicity Test. ISO standard 6341; 1996. - URL.: https://cdn.standards.iteh.ai/samples/54614/b c25430113c94dcab3ccdb6e6a097e6c/IS0-6341-2012.pdf (accessed 18 March 2024).
12. Methods for the Determination of Ecotoxici-ty: L 383 A/172 - Acute Toxicity for Daphnia. Official Journal of the European Communities; 1992. - URL.: https://eur-lex.europa.eu/legal-
con-
tent/EN/TXT/HTML/?uri=CELEX%3A3199 2L0069 (accessed 18 March 204).
13. Biological Test Method: EPS 1/RM/11 -Acute Lethality Test Using Daphnia Spp. Environment Canada; 1996. - URL.: https://www.canada.ca/content/dam/eccc/mig ration/main/faunescience-wildlifescience/dfad4a5b-4216-4ed8-af90-98a6de8f7b6b/rm11e.pdf (accessed 18 March 2024).
14. Standart EPA-821-R-02-012: Methods for measuring the acute toxicity of effluents and receiving waters to freshwater and marine organisms; 2015. U.S. Environmental Protection Agency; - URL.: https://www.epa.gov/sites/default/files/2015-08/documents/acute-freshwater-and-marine-wet-manual_2002.pdf (accessed 18 March 2024).
15. Test No. 202: Daphnia Sp. Acute Immobilisation. OECD Guideline for the Testing of Chemicals; 2004. - URL.: https://www.oecd-ilibrary.org/environment/test-no-202-daphnia-sp-acute-immobilisation-
test 9789264069947-en (accessed 18 March 2024).
16. Coors, A. Synergistic, antagonistic and additive effects of multiple stressors: prédation threat, parasitism and pesticide exposure in Daphnia magna. J. / A. Coors, L. De Meester // Appl. Ecol. - 2008. - № 45. - P. 18201828.
17. Deleebeeck, N. M. E. A novel method for predicting chronic nickel bioavailability and toxicity to Daphnia magna in artificial and natural waters / N. M. E Deleebeeck, K. A. C. D. Schamphelaere, C. R Janssen // Environ. Toxicol. Chem. 2008. - № 27. - P. 2097-2107.
18. Hall, M. D. Interactions between environmental stressors: the influence of salinity on host-parasite interactions between Daphnia magna and Pasteuria ramosa / M. D. Hall, A. Vettiger, D. Ebert // Oecologia. - 2013. - № 171. - P. 789-796.
19. Akkanen, J. Biotransformation and bioconcentration of pyrene in Daphnia magna / J. Akkanen, J. V. K. Kukkonen // Aquat. Toxicol. - 2003. - № 64. - P. 53-61.
20. Cardwell AS, Adams WJ, Gensemer RW et al. Chronic toxicity of aluminum, at a pH of 6, to freshwater organisms: empirical data for the development of international regulatory standards/criteria / A. S. Cardwell, W. J. Ad-
ams, R. W. Gensemer [et al.] // Environ. Toxicol. Chem. - 2018. - № 37. - P. 36-48.
21. Shaw, J. R. Comparative toxicity of cadmium, zinc, and mixtures of cadmium and zinc to daphnids / J. R. Shaw, T. D. Dempsey, C. Y. Chen [et al.] // Environ. Toxicol. Chem. -2006. - № 25 (1). - P. 182-189.
22. Otitoloju, A. A. Evaluation of the joint-action toxicity of binary mixtures of heavy metals against the mangrove periwinkle Tympanotonus fuscatus var radula (L.) / A. A. Otitoloju // Ecotoxicol. Environ. Saf. -2002. - № 53 (3). - P. 404-415.
23. Meng, Q. The Acute and Chronic Toxicity of Five Heavy Metals on the Daphnia magna / Q. Meng, X. Li, Q. Feng, Z. Cao // The 2nd International Conference on Bioinformatics and Biomedical Engineering (iCBBE 2008), May 16-18; Shanghai; China. Shanghai. -2008. - P. 4555.
24. Hagopian-Schlekat T, Chandler GT, Shaw TJ. Acute toxicity of five sediment-associated metals, individually and in a mixture, to the estuarine meiobenthic har-pacticoid copepod Amphiascus tenuiremis / T. Hagopian-Schlekat, G.T. Chandler, T. J. Shaw // Mar. Environ. Res. 2001. - № 51. -P. 247 p.
Received 24 September 2024
