CC BY
32Ветеринарный врач. 2022 . № 4 . С. 35-42 ^e veterinarian. 2022; (4): 35-42
Научная статья
УДК 619:616:579.62
DOI 10.33632/1998-698Х.2021_35_42
Характеристика некоторых производственных и контрольных штаммов Erysipelothrix rhusiopathiae
Мария Анатольевна Кузьменко \ Лусине Гамлетовна Цатурян 2, Олег Дмитриевич Скляров 3, Ольга Сергеевна Пивоварова4
1 Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов, отдел бактериологии, Москва, Россия, [email protected]
2 Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов, отдел бактериологии, Москва, Россия, [email protected]
3 Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов, отдел планирования и научных исследований и НИР, Москва, Россия, [email protected]
4 Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов, сектор питательных сред, Москва, Россия, [email protected]
Автор, ответственный за переписку: Кузьменко Мария Анатольевна, [email protected]
Аннотация. Несмотря на широкое применение в ветеринарной практике живых и инактивированных вакцин против рожи свиней, заболевание имеет повсеместное распространение. Возможно это связано с широким бесконтрольным применением антибиотиков в первую очередь при выращивании молодняка животных, что снижает уровень и продолжительнось поствакцинального иммунитета, особенно в случае применения живых вакцин, а также способствующих формированию антибиотикорезистентных культур возбудителя. В связи с чем определенный интерес вызывают разработка и применение инактивированных вакцин, отчасти решающих эту проблему и представляющих интерес с экологической точки зрения. Разумеется, это не исключает возможности применения живых вакцин. Настоящая работа обусловлена необходимостью решения проблемы накопления бактериальной массы культур производственных штаммов в процессе изготовления вакцин, а также определения высокоиммуногенных вакцинных штаммов, из числа рекомендованных для применения на сегодняшний день.
В ходе выполнения настояшей работы, в опыте на белых мышах установлены различия в значениях показателей ИмД50 производственных вакцинных штаммов Erysipelothrix rhusiopathiae BP-2 и M-2, свидетельствующие о более высокой иммуногенной активности штамма M-2. Также показано что максимальное накопление бактериальной массы кульуры штамма Erysipelothrix rhusiopathiae обеспечило их выращивание на жидкой питательной среде «ГРМ-бульон» с добавлением лошадиной сыворотки и декстрозы.
Ключевые слова: Рожа свиней, иммуногенность, вакцина, оптическая плотность, КОЕ
Characterization of some production and control strains of Erysipelothrix rhusiopathiae
Maria A. Kuzmenko 1, Lusine H. Tsaturyan 2, Oleg D. Sklyarov 3, Olga S. Pivovarova 4
1 The Russian State Center For Animal Feed And Drug Standardization And Quality, Moscow, Russia
2 The Russian State Center For Animal Feed And Drug Standardization And Quality, Moscow, Russia
3 The Russian State Center for Animal Feed and Drug Standardization and Quality, Moscow, Russia
4 The Russian State Center for Animal Feed and Drug Standardization and Quality, Moscow, Russia Corresponding author: Kuzmenko Maria Anatolyevna, [email protected]
Abstract. Despite the widespread use in veterinary practice of live and inactivated vaccines against swine erysipelas, the disease is widespread. Perhaps this is due to the widespread uncontrolled use of antibiotics, primarily in the rearing of young animals, which reduces the level and duration of post-vaccination immunity, especially in the case of the use of live vaccines, as well as contributing to the formation of antibiotic-resistant pathogen cultures. In this connection, the development and use of inactivated vaccines, which partly solve this problem and are of interest from an environmental point of view, are of particular interest. Of course, this does not exclude the possibility of using live vaccines. This work is due to the need to solve the problem of the
accumulation of the bacterial mass of cultures of industrial strains during the manufacture of vaccines, as well as the determination of highly immunogenic vaccine strains recommended for use today.
In the course of this work, in the experiment on white mice, differences were established in the values of the IMD50 indices of the industrial vaccine strains Erysipelothrix rhusiopathiae BP-2 and M-2, indicating a higher immunogenic activity of the M-2 strain. It was also shown that the maximum accumulation of the bacterial mass of the Erysipelothrix rhusiopathiae strain culture ensured their cultivation on a liquid nutrient medium "GRM-broth" with the addition of horse serum and dextrose.
Keywords: erysipelas, immunogenicity, vaccine, optical density, CFU
Введение. Рожа свиней (Erysipelas suum) - инфекционная болезнь преимущественно свиней, характеризующаяся при остром течении явлениями септицемии, воспалительной эритемой кожи и лихорадкой, а при хроническом - эндокардитом и артритами. У животных племенных групп возможны аборты [3, 4, 7]. Отдельные вспышки болезни регистрируют у грызунов, индеек, уток фазанов и ягнят [1, 2, 5, 10]. Болеют рожей люди (Erysipeloid, Rosenbach's disease), работающие в мясной и рыбной промышленности [6, 8].
Примерно у 30-50% клинически здоровых свиней Erysipelothrix rhusiopathiae содержится в миндалинах или лимфоидных тканях и при снижении резистенности организма животных вызывают заболевание, или обусловливают развитие секундарной инфекции [9, 11].
Несмотря на широкое применение в ветеринарной практике живых и инактивированных вакцин против рожи свиней, заболевание имеет повсеместное распространение. Возможно это связано с широким бесконтрольным применением антибиотиков в первую очередь при выращивании молодняка животных, что снижает уровень и продолжительнось поствакцинального иммунитета, особенно в случае применения живых вакцин, а также способствующих формированию антибиотикорезистентных культур возбудителя. В связи с чем определенный интерес вызывают разработка и применение инак-тивированных вакцин, отчасти решающих эту проблему и представляющих интерес с экологической точки зрения. Разумеется, это не исключает возможности применения живых вакцин.
Настоящая работа также обусловлена необходимостью решения проблемы накопления бактериальной массы культур производственных штаммов в процессе изготовления вакцин и определения высокоиммуногенных вакцинных штаммов, из числа рекомендованных для применения на сегодняшний день.
С учетом вышеизложенного, выполнение исследований, направленных на совершенствование производства высокоиммуногенных и безопасных вакцин против рожи и методов контроля их качества является актуальной задачей.
Цель работы — изучение иммунобиологических свойств производственных и контрольных штаммов Erysipelothrix rhusiopathiae, разработка питательной среды, обеспечивающей максимальное накопление бактериальной массы культур производственных штаммов и методики определения количества бактерий (КОЕ/см3).
Материалы и методы. В работе использовали: культуры штаммов Erysipelothrix rhusiopathiae BP-2, M-2, 1329, 1689, 1933, 149, Матрикс Конева, Tuzok, NF-4, E1-6P, F26 полученные из Всероссийской государственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве (ФГБУ «ВГНКИ»); питательные среды - мясо-пеп-тонный бульон (МПБ), мясо-пептонный агар (МПА), колумбийский агар, сердечно-мозговой бульон (М210, HiMedia), триптон-соевый бульон (М11, HiMedia), обогащенный бульон (М429, HiMedia), питательный бульон для культивирования микроорганизмов (ГРМ-бульон) (ФБУН «ГНЦ ПМБ»), также использовали лошадиную сыворотку (RM1239, HiMedia) в качестве добавки к питательным средам, основа бульона с феноловым красным (М054) для биохимического теста и диски с углеводами производства HiMedia (DD002 - D-Глюкоза, DD004 - лактоза, DD005 - мальтоза, DD012 - сорбит, DD013 -сахароза, DD017 - фруктоза, DD027 - инозит), ОКСИ-тест полоски (Erba Lachema) для определение цитохромоксидазы бактерий.
Показатели качества штаммов возбудителя рожи свиней оценивали в соответствии с паспортными данными и требованиями нормативных документов на штаммы.
Морфологические и тинкториальные свойства бактерий изучали путем микроскопии (Nikon Eclipse Ni-U), используемых в работе культур штаммов, окрашенных по Граму. Куль-туральные свойства штаммов оценивали по характеру роста в жидких и на плотных питательных средах после инкубирования при 37 оС в течение 48 часов.
Ферментативные свойства культур штаммов определяли по способности микроорганизмов, выращенных на питательной среде М054 к ферментации углеводов, а также в тестах на оксидазу и каталазу. Оксидазную активность оценивали с использованием тест-полосок для
обнаружения бактериальной цитохромоксидазы, каталазную - в тесте с использованием перекиси водорода.
В тесте на определение разжижения полисахарида двухсуточные культуры штаммов, выращенных на МПА засевали уколом в толщу пищевого желатина в пробирках.
ИмД50 культур вакцинных штаммов Егу81ре1оШйх АшюраШае ВР-2 и М-2 определяли в тесте на белых мышах. Суспензии лио-филизированных культур штаммов в стерильном растворе натрия хлорида 0,9 %-ного изотонического с рН 7,2 с концентрацией 2 тыс./см3, 20 тыс. /см 3, 200 тыс./см и 2 млн/см клеток пред-
варительно титровали путем введения животным подкожно в области холки в объёме по 0,1 см3.
Через 21 сутки по десять иммунизированных и неиммунизированных (контрольных) белых мышей заразили культурой штамма Егу81реЫЬг1х гЬшюраШае 149 в дозе 8 тыс. живых клеток (100ЬБ50), которую вводили в область холки в объёме 0,1 см3 каждому животному. За животными наблюдали в течение 10 суток.
ИмД50 штаммов Егу81ре1оШг1х гЬшю-раШае ВР-2 и М-2 на белых мышах вычисляли по формуле:
^ИмД50 = ^ Д - ^ о (X и - 0,5), (1)
где Д - максимальная из испытанных доз;
^ о - логарифм отношения каждой последующей дозы к предыдущей, т.е. логарифм числа разведения;
Ы - отношение числа животных, выживших после заражения, к общему числу белых мышей, которым была введена каждая доза культуры штамма;
X Li - сумма значений найденных для всех испытанных доз; 0,5 - постоянный коэффициент.
Для определения ЬБ50 на белых мышах из лиофилизированной культуры штамма Erysipelothrix АшюраШае 149 готовили десятикратные последовательные разведения в стерильном растворе натрия хлорида 0,9 %-ного изотонического с рН 7,2 с концентрацией 80, 800, 8 тыс. и 80 тыс. клеток/см3.
Клинически здоровых белых мышей
сформировали в 4 группы по 10 голов в каждой и ввели им подкожно в области холки суспензии культуры контрольного штамма в объёме по 0,1 см3. За животными наблюдали в течение 10 суток.
Определение ЬБ50 штаммов Егу81ре1оШпх АшюраШае 149 проводили на белых мышах. Значение показателя вычисляли по формуле:
LD50 = lg Д - lg о (X Li - 0,5),
(2)
где Д - максимальная из испытанных доз;
^ о - логарифм отношения каждой последующей дозы к предыдущей, т. е. логарифм числа разведения;
Ы - отношение числа животных, павших при введении данной дозы штамма к общему числу белых мышей, которым была введена эта доза;
X Li - сумма значений найденных для всех испытанных доз; 0,5 - постоянный коэффициент.
Другие ферментативные и биохимические свойства культур штаммов Erysipelothrix rhusiopathiae BP-2, M-2, 1329, 1689, 1933, 149, Матрикс Конева, Tuzok, NF-4, E1-6P, F26 оценивали с использованием анализатора Vitek 2 Compact и карты GP (bioMerieux) с картой для определения 43 биохимических показателей. После культивирования посевов на колумбийском агаре в термостате при 35 оС в течение 48 ч, готовили суспензии культур штаммов с определенной оптической плотностью согласно рабочей инструкции анализатора. Полученные суспензии помещали в кассеты анализатора. Результаты тестирования учитывали через 8 часов.
С целью подбора оптимальной питательной среды, обеспечивающей максимальное накопления бакмассы культуры при производстве вакцины были протестированы следующие — питательные среды: сердечно-мозговой бульон; триптон-соевый бульон; обогащенный бульон (М429); питательный бульон для культивирования микроорганизмов (ГРМ-бульон).
Суспензию культуры производственного штамм Егу81ре1оШг1х гЬшюраШае были посеяны на питательные среды в следующих комбинациях: сердечно-мозговой бульон без добавок, - с лошадиной сывороткой, - с декстрозой и с двумя этими компонентами; триптон-соевый
бульон без добавок, с лошадиной сывороткой, с декстрозой и с двумя компонентами; обогащенный бульон (М429) - без добавок и с лошадиной и с двумя компонентами. В обогащенный бульон М429 не добавляли декстрозу, поскольку в коммерческой среде содержится 5 грамм глюкозы из расчета на 1 литр.
Посевы инкубировали в термостате при температуре 37 оС в течение 24 ч. Концентрацию клеток определяли с помощью спектрофотометра УФ-3000 (Ecoview). Измерение и контроль оптимального уровня pH для Erysipelothrix rhusiopathiae в питательных средах осуществляли при помощи анализатора жидкости SevenCompact S220 (Mettler toledo). Образцы вносили в кюветы для флуориметра в объеме по 2 мл параллельно вместе с эталонными образцами каждого вида питательной среды помещали в спектрофотометр и при длине волны 600 нм и учитывали результат - значение пропускаемого светового потока в процентах. В качестве эталона использовали аналогичную чистую питательную среду без микроорганизмов. После учета результатов образцы питательных сред с культурой разводили последовательно десятикратно до 10-6 и высевали по 0,1 см3 на поверхность мясопептонного агара в чашках Петри, подсушен-ного при температуре 37 оС в течение 24 ч. Для посева каждого разведения использовали по 5 чашек с питательной средой. Посевы инкубировали в термостате при температуре 37 оС в течение 48 ч, после этого подсчитывали количество колоний, выросших на питательной среде в каждой чашке. Полученные значения сумммировали, делили на число, равное количеству чашек, и добавляли количество нолей, равное степени разведения. Умножив полученное среднее на 10, определяли значение КОЕ/см3 вакцинного штамма, выросшего на каждой из испытуемых питательных сред. Определение данного показателя проводили в трех повторностях.
Для обработки полученных данных методом вариационной статистики использовали Microsoft Excel 2016.
Результаты исследований. Культуры теститруемых штаммов Erysipelothrix rhusiopathiae на МПА спустя 48 ч формировали круглые, контурированные, умеренно выпуклые, прозрачные, гладкие, колонии в S-форме, около 1 мм в диаметре. Рост культур в МПБ характеризовался равномерным помутнением среды с нежной волнистостью «муаровые волны». Согласно результатам микроскопии мазков, окрашенных по Граму бактерии Erysipelothrix rhusio-pathiae представляли собой мелкие, тонки прямые и слегка изогнутые грамположительные палочки.
При оценке ферментативных свойств культур было установлено, что культуры всех
сывороткой; питательный бульон для культивирования микроорганизмов (ГРМ-бульон) - без добавок, с лошадиной сывороткой, с декстрозой штаммов не продуцировали каталазу (отсутствовало образование пузырьков, при добавлении на колонии культуры капли Н2О2); дали: отрицательные результаты в тестах на оксидазу (изменения цвета тест-полосок не происходило), расщепление сахарозы, сорбитола, инозитола разжижения желатина и положительные результаты в тесте на глюкозу (без образования газа), лактозу, мальтозу, фруктозу.
Показатели ИмД50 на белых мышах для производственных вакцинных штаммов Erysi-pelothrix rhusiopathiae BP-2 и M-2, составили соответственно 200 тыс. и 20 тыс. живых микробных клеток.
Значение показателя LD50 заражающей культуры штамма Erysipelothrix rhusiopathiae 149 на белых мышах составила 80 живых клеток.
Результаты определения других ферментативных и биохимических свойств культур изучаемых штаммов Erysipelothrix rhusiopathiae представлены в таблице 1.
Как видно из материалов таблицы 1, степень идентификация разных штаммов Erysipelothrix rhusiopathiae составила от 94 до 99%. Данные выполненных исследований показывают, что у всех 11 исследованных штаммов выявлены ферменты бета-галактопиранозидаза (BGAR) и L-пирролидонилариламидаза (PyrA). У 9 штаммов, за исключением 1329 и 1933, обнаружен фермент бета-галактозидаза (BGAL). Фермент тирозинариламидаза (TyrA) обнаружен у всех штаммов, за исключением BP-2 и 1689, а фермент L-аспартатариламидаза (AspA) - за исключением Матрикса Конева и E1-6P. У штаммов BP-2, M-2, 1933, Матрикс Конева, Tuzok, E1-6P выявлен фермент L-пролинариламидаза (ProA), у штаммов BP-2, 1933, Матрикс Конева и E1-6P -фермент аргининдегидролаза 1 (ADH1), у штаммов 1329, 1689 и F26 - фермент аланинари-ламидаза (AlaA), у штаммов Матрикс Конева и E1-6P - фермент аргининдегидролаза 2 (ADH2s).
Устойчивость к новобицину (NOVO) установлена только у штамма E1 -6P, а устойчивость к D-маннитолу (dMAN) у штамма 1933. Наличие D-амигдалина было выявлено только у штамма E1-6P. Фермент Ala-Phe-Pro-арила-мидаза (APPA) был выявлен только у Матрикса Конева.
Сходство по ряду одинаковых показателей было установлено только у штаммов 149 и NF4.
Результаты сравнительного определения ростообеспечивающих свойств питательных сред, используемых для получения бакмассы культур производственных штаммов Erysipe-lothrix rhusiopathiae представлены в таблице 2.
Таблица 1 - Результаты дифференциации штаммов Егу81ре1оШпх гЬшюраШае по биохимическим показателям
Определяемые показатели BP-2 M-2 1329 1689 1933 149 Матрикс Конева Tuzok NF4 E1-6P F26
Идентификация штаммов, %
99 99 99 99 94 99 98 99 99 94 99
AMY - - - - - - - - - + -
ADH1 + - - - + - + - - + -
BGAL + + - + - + + + + + +
APPA - - - - - - + - - - -
AspA + + + + + + - + + - +
BGAR + + + + + + + + + + +
ProA + + - - + - + + - + -
PyrA + + + + + + + + + + +
AlaA - - + + - - - - - - +
TyrA - + + - + + + + + + +
NOVO - - - - - - - - - + -
dMAN - - - - + - - - - - -
ADH2s - - - - - - + - - + -
Примечание: AMY - D-амигдалин, ADH1 - аргининдегидролаза 1, BGAL - бета-галактозидаза, APPA - Ala-Phe-Pro-ариламидаза, AspA - L-аспартатариламидаза, BGAR - бета-галактопиранозидаза, ProA - L-пролинариламидаза, PyrA - L-пирролидонилариламидаза, AlaA - аланинариламидаза, TyrA - тирозинариламидаза NOVO - устойчивость к новобиоцину, dMAN - D-маннитол, ADH2s - аргининдегидролаза 2
Таблица 2 - Оценка ростообеспечивающих свойств питательных сред в отношении культур производственных штаммов Егу81ре1оШпх гЬшюраШае
Наименование питательная среды Характер роста культуры штамма
Без сыворотки С сывороткой С декстрозой С декстрозой и сывороткой
Сердечно-мозговой бульон (ШМе&а М210) слабый рост средний рост слабый рост выраженный рост
Соевый бульон с казеиновым переваром (триптон-соевый бульон) (ШМе&а М11) слабый рост средний рост слабый рост выраженный рост
Обогащенный бульон (ШМе&а М429) слабый рост выраженный рост н/с н/с
Питательный бульон для культивирования микроорганизмов сухой (ГРМ-бульон) (ФБУН «ГНЦ ПМБ») слабый рост слабый рост слабый рост выраженный рост
* - слабый рост - легкое помутнение питательное среды и опалесценция; ** - средний рост - выраженное помутнение питательй среды и незначительный рыхлый осадок на дне флакона; *** - выраженный рост - выраженное помутнение питательй среды и значительный рыхлый осадок на дне флакона; **** н/с - в Обогащенный бульон (HiMedia М429) декстрозу не добавили, так как она содержится в составе питательной среды.
Как видно из материалов таблицы 2, выраженный рост культуры штамма наблюдался в средах, содержащих 0,5 % декстрозы и 10% лошадиной сыворотки.
В питательных средах без добавления сыворотки крови лошади отмечалась слабая опалесценция.
Значение показателей КОЕ культуры производственного штамма в сердечно-мозговом бульоне, соевом бульоне с казеиновым перева-
ром, ГРМ-бульоне с содержанием лошадиной сыворотки и декстрозы, а также в обогащенном бульоне с лошадиной сывороткой соответственно составило 534 млн/см3, 221 млн/см3, 1170 млн/см3 и 311 млн/см3.
Порядок расчета достоверности определения показателя КОЕ при выращивании культур производственных штаммов на питательных средах представлен на рисунке 1.
1600
1400
1200
н
м 1000
ro
м
о 800
T—
и
W 600
О
«
400
200
0
0
Ч
10
20
30
%T при 600 нм
40 50 60
y = 3001,6e-0,067x
• КОЕ в 1 см3, млн ......... Экспоненциальная (КОЕ в 1 см3, млн)
Рисунок 1 - Экспоненциальная аппроксимация КОЕ Erysipelothrix rhusiopathiae
Заключение. Результаты испытания штаммов Erysipelothrix rhusiopathiae, не различающихся по культурально-морфологическим свойствам, позволяют утверждать о наличии существенных различий между ними, выявленных при определении биохимических показателей и иммунобиологических свойств. В частности, было установлено, что вакцинный штамм Erysipelothrix rhusiopathiae М2 обладает более выраженными иммуногенными свойствами в сравнении со вакцинным штаммом Erysipelothrix rhusiopathiae ВР-2.
Максимальное накопление бактериальной массы культуры штамма Erysipelothrix Ашь opathiae обеспечило ее культивирование на питательной среде «ГРМ-бульон» с добавлением лошадиной сыворотки и декстрозы и составило 1170 млн/см3, что обусловило возможность рекомендовать ее для применения при произво-
дстве вакцин против рожи свиней, тогда как в сердечно-мозговом бульоне, соевом бульоне с казеиновым переваром, а также в обогащенном бульоне с лошадиной сывороткой значения этих показателей составило соответственно 534 млн/см3, 221 млн/см3 и 311 млн/см3.
Результаты спектрофотометического определения количества живых микробных клеток культур вакцинных штаммов Erysipelothrix rhusiopathiae коррелируют с результатами их определения культуральным методом. Согласно экспоненциальной зависимости полученных данных при показателе значения ОП равном 15% количество КОЕ /см3 составило 1099 млн, 20% -786 млн, 25% - 562 млн и т.д. Это позволяет рекомендовать проведение оценки данного показателя методом спектрофотометрии, исключающим необходимость выращивания культур штаммов на плотных питательных средах.
Список источников
1. Ветеринарное законодательство: Вет. Устав Союза ССР, положения, указания, инструкции, направления, правила по вет. делу. Т. 3/Под об. Ред. А.Д. Третьякова. - М.: Колос, 1981. - 640 с.
2. Кириллов, Л.В. Оценка качества производственных штаммов микроорганизмов / Л.В., Кириллов, Н.Т Татаринцев // Сборник науч. тр. / ВГНКИ. - М., 2001. - Т.62. - С. 97-100.
3. Панин, А.Н. Состояние и перспективы профилактики рожистой инфекции /А.Н. Панин, Р.В. Душук // Состояние, проблемы и перспективы развития ветеринарной науки в России. - М., 1999. - Т. 1. - С. 216-219.
4. Проектный подход в создании инновационных биотехнологических препаратов / Г.А. Скотникова, Л.А. Неминущая, Н.К. Еремец [и др.] // Вестник Казанского технологического ун-та. -2012. - Т. 15, № 4. - С. 82-86.
5. Erysipelas in laying hens is associated with housing system/ H. Eriksson, A.K. Nyman, C. Fellstrom [et al.] // Veterinary Record. - 2013. - №173. - P. 18.
6. Erysipelas vaccination protocols in dolphins Tursiops truncatus evaluated by antibody responses over twenty continuous years / G. Lacave, Y. Cui, A. Salbany [et al.] // Diseases of Aquatic Organisms. - 2019. -№134. - P. 237-255.
7. Erysipelas/ Diseases of Swine // J.J. Zimmerman, L.A. Karriker, A. Ramirez [et al.]. - Hobokon, NJ: Wiley Blackwell, 2019. - P. 835-843.
8. Identification of the chromosomal region essential for serovar-specific antigen and virulence of serovar 1 and 2 strains of Erysipelothrix rhusiopathiae / Y. Ogawa, K. Shiraiwa, S. Nishikawa [et al.] //Infectious Immunology - 2018. - №86. - P. 324-342.
9. Opriessnig, T. Erysipelothrix spp.: past, present, and future directions in vaccine research / T. Opriessnig, T. Forde, Y. Shimoji // Frontiers in Veterinary Science. - 2020. - №4. - P. 174-181.
10. Serotypes and Spa types of Erysipelothrix rhusiopathiae isolates from British pigs (1987 to 2015) / M. McNeil, P.F. Gerber, J. Thomson [et al.] // Veterinary Journal. - 2017. - №225. - P.13-22.
1. Wang, Q. Erysipelothrix rhusiopathiae/ Q. Wang, B.J. Chang, T.V. Riley // Vet. Microbiol. - 2010. -№140. - P. 405-417.
Referenses
1. Veterinary legislation: Vet. Charter of the USSR, provisions, instructions, instructions, directions, rules for the vet. case. T. 3 / Under vol. Ed. HELL. Tretyakov. - M.: Kolos, 1981. - 640 p.
2. Kirillov, L.V. Evaluation of the quality of production strains of microorganisms / L.V., Kirillov, N.T. Tatarintsev // Collection of scientific tr. / VGNKI. - M., 2001. - Vol.62. - pp. 97-100.
3. Panin, A.N. The state and prospects of prevention of erysipelas infection / A.N. Panin, R.V. Dushuk // State, problems and prospects of development of veterinary science in Russia. - M., 1999. - Vol. 1. - pp. 216219.
4. Project approach in the creation of innovative biotechnological preparations / G.A. Skotnikova, L.A. Neminuschaya, N.K. Eremets [et al.] // Bulletin of the Kazan Technological University. - 2012. - Vol. 15, No. 4. - pp. 82-86.
5. Erysipelas in laying hens is associated with housing system/ H. Eriksson, A.K. Nyman, C. Fellstrom [et al.] // Veterinary Record. - 2013. - №173. - P. 18.
6. Erysipelas vaccination protocols in dolphins Tursiops truncatus evaluated by antibody responses over twenty continuous years / G. Lacave, Y. Cui, A. Salbany [et al.] // Diseases of Aquatic Organisms. - 2019. -№134. - P. 237-255.
7. Erysipelas/ Diseases of Swine // J.J. Zimmerman, L.A. Karriker, A. Ramirez [et al.]. - Hobokon, NJ: Wiley Blackwell, 2019. - P. 835-843.
8. Identification of the chromosomal region essential for serovar-specific antigen and virulence of serovar 1 and 2 strains of Erysipelothrix rhusiopathiae / Y. Ogawa, K. Shiraiwa, S. Nishikawa [et al.] //Infectious Immunology - 2018. - №86. - P. 324-342.
9. Opriessnig, T. Erysipelothrix spp.: past, present, and future directions in vaccine research / T. Opriessnig, T. Forde, Y. Shimoji // Frontiers in Veterinary Science. - 2020. - №4. - P. 174-181.
10. Serotypes and Spa types of Erysipelothrix rhusiopathiae isolates from British pigs (1987 to 2015) / M. McNeil, P.F. Gerber, J. Thomson [et al.] // Veterinary Journal. - 2017. - №225. - P.13-22.
1. Wang, Q. Erysipelothrix rhusiopathiae/ Q. Wang, B.J. Chang, T.V. Riley // Vet. Microbiol. - 2010. -№140. - P. 405-417.
Вклад авторов:
Кузьменко М.А. - участие в разработке учебных программ и их реализации; написание исходного текста; итоговые выводы.
Цатурян Л.Г. - научное руководство; концепция исследования; участие в разработке учебных программ и их реализации; итоговые выводы.
Скляров О.Д. - научное руководство; концепция исследования; участие в разработке учебных программ и их реализации; итоговые выводы.
Пивоварова О.С. - участие в разработке учебных программ и их реализации; итоговые выводы. Все авторы сделали эквивалентный вклад в подготовку публикации. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Contribution of the authors:
Maria A. Kuzmenko - participation in the development of training programs and their implementation; writing the original text; final conclusions.
Lusine G. Tsaturyan- scientific guidance; research concept; participation in the development of training programs and their implementation; final conclusions.
Oleg D. Sklyarov - scientific guidance; research concept; participation in the development of training programs and their implementation; final conclusions.
Olga S. Pivovarova - participation in the development of training programs and their implementation; final conclusions.
All authors made an equivalent contribution to the preparation of the publication. The authors declare no conflict of interest.
Статья поступила в редакцию 17.05.2022; одобрена после рецензирования 12.07.2022; принята к публикации 17.07.2022
The article was submitted 17.05.2022; approved after reviewing 12.07.2022; accepted for publication 17.07.2022
© Кузьменко М. А., Цатурян Л. Г., Скляров О. Д. 2022
