CC BY
13
Полякова Людмила Викторовна, кандидат медицинских наук, ассистент кафедры патологической анатомии, ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Минздрава России, Россия, 400131, г. Волгоград, пл. Павших Борцов, д. 1, тел.: 8-906-405-80-42, е-таП: [email protected].
Калашникова Светлана Александровна, ассистент кафедры патологической анатомии, ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Минздрава России, Россия, 400131, г. Волгоград, пл. Павших Борцов, д. 1, тел.: 8-902-384-84-47, е-таП: [email protected].
УДК 611.832 © В.В. Порсева, 2012
В.В. Порсева
ХАРАКТЕРИСТИКА NADPH-Д+-НЕЙРОНОВ КРЕСТЦОВОГО ЧУВСТВИТЕЛЬНОГО УЗЛА В ПЕРВЫЙ ГОД ЖИЗНИ БЕЛОЙ КРЫСЫ
ГБОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия» Минздрава России
Морфологические особенности NADPH-диафораза-позитивных нейронов (NADPH-д^ изучены в чувствительном узле крестцового спинномозгового нерва у крыс 3-, 10-, 20-, 30-, 60-, 90-, 180- и 360-дневных возрастов. NADPH-д+-нейроны отличались по своим морфометрическим характеристикам. Позитивные нейроны имели очень малые и малые размеры, в течение первого года жизни количество NADPH-д+-нейронов уменьшалось.
Ключевые слова: чувствительный узел, NADPH-диафораза, нейроны, онтогенез, крыса.
V.V. Porseva
THE CHARACTERISTIC NADPH-D+-NEURONS OF SACRAL SPINAL GANGLION IN THE FIRST YEAR OF LIFE OF WHITE RAT
The morphological features of the NADPH- diaphorase-positive neurons was studied in sacral spinal ganglion in 3, 10-, 20-, 30-, 60-, 90-, 180- and 360 day-old rats. NADPH-d+-neurons differed on their morphometrical characteristics. The positive neurons had very small and small sizes, the number of NADPH-d+-neurons was reduced in the first year of life of white rat.
Key words: spinal ganglion, NADPH-diaforase, neurons, ontogenesis, rat.
Введение. Оксид азота (NO) обнаруживается в функционально различных нервных структурах, при этом возможностью синтезировать NO обладают не все популяции клеток нервной системы. О количественном синтезе NO судят по гистохимической реакции на выявление активности NADPH-диафоразы [5, 7]. Исследование активности NADPH-диафоразы в нейроцитах спинномозговых узлов различных сегментарных уровней у крыс указывает на различное распределение фермента, которое является зависимым от спинального уровня и от периода онтогенеза [2, 3, 4, 5].
Цель: установить возрастные морфометрические характеристики популяции NADPH-диафораза-позитивных нейронов чувствительных узлов крестцовых спинномозговых нервов.
Материал и методы. Исследование проведено на 40 белых крысах-самках линии Вистар в возрасте 3, 10, 20, 30, 60, 90, 180 и 360 суток после рождения. Морфометрические и гистохимические характеристики NADPH-диафораза-позитивных нейронов (NADPH-д) изучали в чувствительных узлах второго крестцового спинномозгового нерва. Из фиксированного материала на криостате готовили срезы толщиной 20 мкм. Для выявления активности NADPH-диафоразы использовали тетразо-лиевый метод. Анализ препаратов проводили на микроскопе МБИ-15У4.2 (ЛОМО, Россия) с установленной цифровой фотокамерой OLIMPUS CAMEDIA C4000 ZOOM с фотоадаптером OLIMPUS C3040-ADUS (Япония). На цифровых изображениях гистологических препаратов узлов при увеличении х 400 по программе Image J (NIH, США) оценивали площадь сечения и производили подсчет NADPH-д-нейронов на площади квадрата 100 мкм2 квадратно-счетной вставки. Долю позитивных нейронов определяли как их отношение к общему числу нейронов, которое принимали за 100 %. Для характеристики нейронов узла по площади сечения использовали 5 размерных классов: до 300 мкм2 (очень малые), 301-600 мкм2 (малые), 601-900 мкм2 (средние), 901-1200 мкм2 (крупные), более 1201 мкм2
(очень крупные). Анализу подвергались только клетки, срез которых прошел через ядро с видимым ядрышком, а цитоплазма имела выраженную активность фермента, что документировалось интенсивно-синим окрашиванием диформазана, превышающим фоновую окраску среза в 1,5 раза. Статистический анализ включал в себя определение средней арифметической и ее стандартной ошибки (х ± sx). О значимости различий судили по величине критерия Стьюдента (t) при р < 0,05.
Результаты и их обсуждение. В чувствительных узлах изученного уровня выявлялись как NADPH-д-нейроны, так и NADPH-д'-нейроны во всех исследуемых возрастных периодах крысы, что соответствует данным других исследований [3, 6].
В 3-дневном возрасте доля NADPH-д -нейронов составляла 9,4 %. В 10-дневном возрасте доля позитивных нейронов увеличилась в 1,3 раза, в 20-, 30- и 60-дневных возрастах наблюдалась относительная стабильность показателя: 17-18-19 %. В 90-дневном возрасте доля позитивных нейронов незначительно снизилась до 15,2 %. В последующие возрастные периоды количество NADPH-д -нейронов продолжало снижаться и в 360-дневном возрасте составило 6,5 %. Таким образом, на протяжении исследуемого возраста содержание NADPH-д-нейронов в чувствительных узлах уменьшилось в 1,4 раза. При этом максимальное снижение отмечено в 6-месячном возрасте.
Анализ средней площади сечения NADPH-д -нейронов показал, что в течение года жизни крысы наблюдалось увеличение размеров в 1,7 раза. NADPH-д -нейроны значимо не меняли своих размеров до 30-дневного возраста крысы, в 60-дневном возрасте средняя площадь клеток увеличилась в 2,5 раза, в 90-дневном возрасте уменьшилась в 1,2 раза и в 180-дневном возрасте вновь увеличилась в 1,5 раза (р < 0,05), после чего размеры позитивных нейронов уменьшились в 360-дневном возрасте в 1,8 раза (р < 0,05). При анализе размерных классов NADPH-д-нейронов выявлена неоднородность клеточного состава узла в различных возрастах крысы. Так, в 3-, 10-, 20- и 30-дневных возрастах присутствовали нейроны только очень малых и малых размеров. В 60-, 90- и 180-дневных возрастах в узле выявлялись нейроны всех пяти размерных классов, при этом большая часть NADPH-д-нейронов была представлена нейронами очень малых, малых и средних размеров. Клеточный состав в указанные возрастные периоды не менялся: в 60-, 90- и 180-дневных возрастах преобладали нейроны малых размеров - 48, 42 и 38 %, соответственно, что совпадает с данными других исследований [1, 4]. В 360-дневном возрасте в популяции NADPH-д-нейронов количество малых нейронов увеличилось и составило 60 %, а нейроны крупных и очень крупных размеров не встречались.
Заключение. В течение первого года жизни крысы происходит увеличение средней площади сечения NADPH-д-нейронов. Максимальная площадь сечения диафораза-позитивных нейронов отмечена в 2- и 6-месячном возрасте. Относительное количество NADPH-д -нейронов в чувствительном узле с возрастом крысы уменьшается. В первый месяц жизни активность NADPH-диафоразы выявляется в нейронах очень малых размеров, в последующем - в нейронах малых размеров.
Список литературы
1. Елисеева, Е. В. Нитрооксидсинтаза нейронов заднего ядра и узловатого ганглия блуждающего нерва и ее изменения при ингаляциях ацетилхолина в норме и при экспериментальной бронхиальной астме / Е. В. Елисеева, Н. Е. Романова, В. Ф. Баранов и др. // Морфология. - 2002. - Т. 122, № 4.- С. 32-39.
2. Alm, P. Nitric oxide synthase-containing neurons in rat parasympathetic, sympathetic and sensory gandlia : a comparative study / P. Alm, B. Uvelius, J. Ekstrom // J. Histochem. - 1995. - Vol. 27, № 10. -P. 819-831.
3. Porseva, V. V. NADPH-diaphorase-positive structures in the spinal cord and spinal ganglia / V. V. Porseva, V. V. Shilkin // Neuroscience and Behavioral Physiology. - 2011. - Vol. 41, № 3. - P. 223-227.
4. Rybarova, S. Detection of peptidergic and nitrergic structures in the spinal ganglia of rabbits / S. Rybarova, D. Kluchova, M. Kocisova et al. // Bratisl. Lek. Listy. - 2000. - Vol. 101, № 5. - P. 280-287.
5. Vizzard, M. A. Localization o f NADPH diaphorase in the lumbosacral spinal cord and dorsal root of the cat / M. A. Vizzard, S. L. Erdman, V. L. Erickson et al. // J. Comp. Neurol. - 1994. - Vol. 339, № 1. -P.62-75.
6. Wetts, R. Transient expression of beta-NADPH diaphorase in developing rat dorsal root ganglia neurons / R. Wetts, J. E. Vaughn // Brain Res. Dev. Brain Res. - 1993. - Vol. 17, № 76 (2). - P. 278-282.
7. Zhou, Y. Localization of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate-diaphorase reactivity and nitric oxide synthase immunoreactivity in the lumbosacral dorsal root ganglia in guinea pigs / Y. Zhou, P. O. Mack, E. A. Ling // J. Hirnforsch. - 1998. - Vol. 39, № 2. - P. 119-127.
