Гормон боли как модулятор функциональной активности клеток иммунной системы и опухолей Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Оригинальные статьи

© 2004, СПб РО РААКИ

ГОРМОН БОЛИ КАК МОДУЛЯТОР ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ КЛЕТОК ИММУННОЙ СИСТЕМЫ И ОПУХОЛЕЙ

Гариб В.Ф.

Ташкентский Институт Усовершенствования Врачей, Узбекистан Институт Иммунологии Университета Виттен/Хердеке, Виттен, Германия

Резюме. Болевой синдром ведет к развитию стресс-ответа, представляющего совокупность эндокринных и метаболических процессов и выделению стресс-гормонов, в том числе гормона боли (субстанции Р). В связи с тесным взаимодействием нейро-эндокринной и иммунной систем с канцеронегезом, целью настоящего исследования явилось изучение прямого влияния гормона боли на функциональную активность натуральных киллеров и клеток опухоли. Субстанция Р, внесенная в систему трехмерного коллагенового матрикса, способствует снижению локомоторной активности натуральных киллеров с 15,7± 1,9% до 8,6±2,0%. Отмечено усиление цитотоксической активности натуральных и лимфокин-активированных киллеров под воздействием субстанции Р в 6 из 8 экспериментов. Увеличение миграционной активности клеток аденокарциномы молочной железы линии MDA-MB-468 под влиянием субстанции Р связано со специфическим воздействием на нейрокинин-1 рецепторы, презентируемые опухолевыми клетками. Данный процесс активации ингибируется антагонистом нейрокинин-1 рецептора - L-733,060. Клетки карциномы простаты РСЗ миграционно-ареактивны по отношению к субстанции Р.

Ключевые слова: гормон боли, субстанция Р, натуральные киллеры, рак молочной железы, рак простаты.

Garib V.F.

PAIN HORMONE EFFECTS ON THE FUNCTIONAL ACTIVITY OF IMMUNE AND TUMOR CELLS Abstract. The pain syndrome cause to the development of stress-respond and release of stress-hormones, in particularly, “pain hormone” or substance P. While strong interaction of the neuro-endocrine and immune system with cancerogenesis had been found previously, the investigation of substance P direct influence on immune and tumor cells is missing. In the present study we have analyzed the function of the pain hormone on the activity of natural killer cells, as well as breast- and prostate adenocarcinoma cells. Substance P, is added in 3-dimentional-collagen matrix, reduces the migration activity of natural killer cells from 15, 7±1,9% to 8,6±2,0%. The stimulatory effect of natural killer cells cytotoxicity had been noted. Substance P predominantly binds to the neurikinin-1 receptor, is presented on MDA-MB-468 cells and increases human breast adenocarcinoma cells migratory activity. Specific NK-1 receptor antagonist L-733,060 completely inhibits the substance P mediated increase of cell migration. There is no change in regulation of PC3 prostate carcinoma cells spontaneous migration in presence of substance P. (Med.Immunol., 2004, vol.6, № 6, pp 529-536)

Введение Рии’ так и в головном мозге, где он локализуется в

Наличие любого онкологического заболевания областях, координирующих реакции на стресс (на-

вызывает достаточно высокое психоэмоциональное пРимеР’в locus coeruleus и amygdala). Субстанция Р

напряжение у пациента, что на фоне неадекватной активно мечена в обмен норадреналина и серото-

анестезии оказывает выраженное влияние на выде- нина’ и предполагается, что это серьезным образом

ление стресс-гормонов, в том числе гормона боли [2]. влияет на патофизиологию депрессии и тревоги.

Гормон боли (субстанция Р) представляет собой Было установлено, что болевой синдром ведет к раз-

нейропептид, активно работающий как на перифе- витию стресс-ответа, представляющего совокупность

_____________________________________________ эндокринных и метаболических процессов, небла-

Адрес для переписки: гоприятным образом влияющих на организм паци-

Гариб В.Ф. 700007, Узбекистан, Ташкент, ента в целом и на развитие онкозаболевания.

Институт Усовершенствования врачей, Большинство онкологических больных погибают

Паркентская, 51. Тел./факс: 998-712-68-24-57. в результате диссеминирования неопластического

E-mail: [email protected] процесса. Развитие метастазов представляет собой

многокомпонентный процесс, в течение которого клетки опухолевого клона приобретают способность к активной миграции за пределы первичной опухоли. В свою очередь для осуществления иммунологического надзора, клетки иммунной системы также должны обладать способностью к активной миграции. При развитии онкологического процесса основными эффекторными клетками выступают две субпопуляции лимфоцитов - натуральные киллеры и цитотоксические Т-лимфоциты.

Активная миграция клеток может быть стимулирована непосредственно экстрацеллюлярным матриксом [4]. В то же время триггерами клеточного передвижения могут явиться растворимые цитокины и нейротрансмиттеры [8], воздействующие на специфические рецепторы клеток. Так, ранее было продемонстрировано, что индукция миграции клеток рака молочной железы с фенотипом EGFR/c-erbB-2 основана на изменении кинетики фосфолипазы C-g в результате сигнала активации данного рецептора [6]. Активация натуральных киллеров и их конверсия в лим-фокин-активированные киллеры происходит при участии интерлейкина-2 (IL-2) [16]. Данный процесс обеспечивается благодаря экспрессии полного рецептора к IL-2 на поверхности натуральных киллеров без первичной антигенной стимуляции.

Клеточный уровень воздействия гормона боли подразумевает связывание субстанции Р с клеточными нейрокинин-1 рецепторами. На молекулярном уровне было показано, что субстанция Р вовлечена в процессы активации факторов транскрипции и связывающего протеина CREB, являющихся регуляторами миграционной активности клеток [13].

Таким образом, к настоящему времени созданы теоретические предпосылки к определению прямого влияния гормона боли на процессы канцерогенеза с позиций его воздействия на клетки иммунной системы и опухоли.

Материал и методы

Клеточная культура. Клеточная культура человеческой карциномы простаты PC-3 (DSMZ, Германия) культивировалась в средах НАМ и RPMI в соотношении 1:1, содержащих 10% бычью сыворотку. MDA-MB-468 (аденокарцинома молочной железы) была получена из американской коллекции клеточных культур (АТСС, Rockville, MD). Клетки культивировали в среде Leibovitz’s 15, обогащенной 10% инактивированной бычьей сывороткой, 100 ед/ мл пенициллином и 100 мкг/мл стрептомицином. Обе клеточные линии содержались в условиях инкубатора с постоянной температурой 37°С. Пассаж клеток производился каждую неделю после трипси-низации монослоя клеток, выросших в пластиковых плашках (Falcon).

Культура клеток К-562 использовалась в качестве клеток-мишеней при выполнении исследований для определения цитотоксической активности натуральных и лимфокинактивированных киллеров. Клеточная культура была получена от больной с хронической эритроцитарной лейкемией в стадии терминального бластного криза. Клетки культивировали в инкубаторе в среде RPMI-1640, обогащенной 10% не-инактивированной бычьей сывороткой. Особенностью клеток является их неспособность оседать на дне плашки, в связи с чем, пассаж осуществляли без предварительной трипсинизации.

Выделение натуральных киллеров. В экспериментах использовали натуральные киллеры здоровых доноров. На первом этапе популяцию лимфоцитов из гепаринизированной периферической крови изолировали посредством градиент-опосредован-ного центрифугирования, используя Ficoll-Hypaque (ICN, Meckenheim, Germany). Негативная селекция натуральных киллеров осуществлялась при помощи набора Magnetic Cell Separation Kit (Dynal, Hamburg, Germany). Мононуклеарные клетки периферической крови инкубировали с моноклональными антителами (CD3, CD14, CD36, CDwl23, HLA class II DR/ DP) в течение 10 минут при температуре 4°С. Затем клетки, связавшиеся с данными антителами и прореагировавшие с намагниченными бусами (Dynal), были притянуты к стенкам магнитной камеры и в дальнейшем удалены из системы. Все этапы производили с использованием стерильного физиологического раствора, содержащего 0,1% сывороточный бычий альбумин. Контроль за чистотой выделенной популяции натуральных киллеров осуществляли при помощи проточной цитофлуориметрии (Becton Dickinson, Heidelberg, Germany). Клетки метили флуоресцеин изотиоцианат- (РГГС)-коньюгирован-ными анти-С056 и фикоэритрин- (РЕ)-коньюгиро-ванными анти-CD 16 моноклональными антителами (Becton Dickinson, Heidelberg, Germany).

Выделенная популяция натуральных киллеров состояла более, чем на 88% из CD16 С056-позитив-ных клеток и содержала менее 5% клеток с фенотипом CD3+, что соответствовало рекомендациям производителя набора для негативной изоляции натуральных киллеров.

После выделения натуральные киллеры в течение ночи были инкубированы в среде RPMI-1640 (Life Technologies, Karlsruhe, Germany), обогащенной 10% термически инактивированной сывороткой телят (PAA Laboratories, Linz, Austria) при 37°С.

В целях конверсии в лимфокин-активированные киллеры, часть выделенных натуральных киллеров инкубировали со средой RPMI, содержащей ЮОнг/ мл IL-2.

Проточная цитофлуориметрия (FACS). Наряду с контролем за чистотой выделения популяции натуральных киллеров, проточная цитофлуоримет-

рия использовалась для определения степени конверсии натуральных киллеров в лимфокин-активи-рованные киллеры путем измерения экспрессии рецептора активации CD69.

Экспрессия нейрокининовых рецепторов клетками аденокарциномы молочной железы и простаты также определялась при помощи проточной цитоф-луометрии [1]. Десять тысяч клеток каждой линии были инкубированы с первичными (козьими) антителами к NK-1 рецепторам в течение 10 минут при комнатной температуре. После чего клетки были отмыты и подвержены вторичной 10-минутной инкубации с FITC-меченными анти-козьими антителами. Неспецифическая реакция связывания контролировалась при помощи изотип-контроля (неспецифические козьи антитела).

Метод изучения клеточной миграции. Культивируемые PC-З и MDA-MB-468 клетки были удалены из пластиковых плашек при помощи 0,25% раствора трипсина (Sigma, Deisenhofen, Germany).

Исследование клеточной подвижности проводилось в 3-х мерном коллагеновом матриксе при использовании 10-часовой видеомикроскопии и последующего компьютерного анализа.

Приготовление коллагенового матрикса. В суспензию опухолевых клеток (60х103) был внесен раствор коллагена I типа (Collagen Corporation, Fremont, СА), MEM (Sigma, Deisenhofen, Germany) (pH 7.4) до конечного объема 135 мкл с последующим добавлением субстанции Р и (или) антагониста L-733,060. Конечная концентрация субстанции Р

составила 1 мкМ, предварительно оцененная как минимальная дозовая, но максимальная по эффективности концентрация [7]. АнтагонистЫК-1 рецептора Ь-733,060 был использован в эквивалентной субстанции Р молярности. Полученная суспензия переносилась в стеклянную камеру для последующей полимеризации при 37°С и наличии 5% С02 в атмосфере инкубатора на 30 минут.

Видеомикроскопия. Запись клеточной миграции производилась в течение последующих 10 часов с замедленной съемкой, в 1920 раз отличающейся от реальной скорости движения клеток. Одновременно, в эксперименте были задействованы 4 аналогичные видеосистемы, дополнительно оснащенные блоком поддержания оптимальной температуры в камерах в пределах 37+3° С.

В дальнейшем, 30 рандомизированно отобранных клеток, находящихся в поле зрения оператора, были подвергнуты компьютерному анализу миграции с шагом в 20 минут.

Для оценки миграционной активности использовались такие параметры, как количество мигрирующих клеток популяции; скорость движения, исключающая периоды остановки; общая дистанция передвижения в течение исследуемого времени.

Каждый экспериментальный блок включал в себя 3 независимых эксперимента, т.е. влияние субстанции исследовалось на 120 опухолевых клетках. Разница миграционной активности оценивалась по отношению к контролю - движению спонтанно мигрирующих клеток.

100

ПЗ

ш

о

Cl

S

со

S

с,

контроль

1

После инкубации с субстанцией Р 3 4 5 6 7

Рис.1. Сравнительная оценка цитотоксической активности натуральных киллеров (ЫК) и лимфокин-активированных киллеров (1_АК) в контроле и после их инкубации с субстанцией Р (эксперименты 1 -8). Примечание: Цитотоксическая активность оценивалась в процентном соотношении от химически индуцированного лизиса клеток-мишеней К-562.

Миграция натуральных киллеров изучалась в аналогичной системе с использованием 200х103 клеток в 50 мкл среды RPMI и 100 мкл раствора коллагена I типа.

Цитотоксический тест. Литическую активность натуральных киллеров и лимфокин-активиро-ванных киллеров изучали с использованием нерадиоактивного цитотоксического теста (Promega, Мап-heim, Germany). В качестве клеток-мишеней была использована культура клеток человеческой миело-идной лейкемии линии К-562 (DSMZ, Braunschweig, Germany). При отработке метода использовали различные варианты соотношений эффектор:мишень. Наиболее оптимальным соотношением для изучения влияния субстанции Р на литическую активность было избрано 10:1. Цитотоксический тест был выполнен в соответствии с инструкциями производителя.

Характеристика препаратов. В исследованиях использован нейротрансмиттер - субстанция Р (Calbiochem, Bad Soden, Germany), представляющая собой синтетический пептид H-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-OH с молекулярной

формулой С Н N О S и молярной массой 1348,6. 7, 63 97г17 14 -г*

Учитывая, что субстанция Р оказывает свое воздействие посредством активации нейрокининовых рецепторов 1 типа, в исследованиях был использован также антагонист данных рецепторов L-733,060 (Sigma, Deisenhofen, Germany). Конечная концентрация субстанции Р и L-733,060 в системе составила 1 мкМ.

Статистический анализ. В зависимости от избранного метода исследования для проведения экспериментов и параметров, статистический анализ выполнялся по нескольким программам. Помощь в проведении статистического анализа была оказана Dr.mat. Klaus Reichard из Института Математики Университета Виттен/Хердеке, Германия.

Различия в проценте мигрирующих клеток популяции под влиянием препаратов оценивали по отно-

шению к контрольной группе - спонтанно передвигающихся клеток. В связи с тем, что временное изменение процента мигрирующих клеток (миграция -отсутствие миграции) является биноминальным распределением, из среднего значения всех экспериментов одной серии с тремя различными концентрациями препарата и контроля в каждую временную точку вычитали актуальное значение соответственного времени. Используя данный фактор коррекции, среднее значение и размах во все время исследования калькулировали и вносили в z-test (Gauss-test) для статистической обработки при миграционной характеристике «процент мигрирующих клеток».

При изучении экспрессии антигенов статистический анализ выполняли при помощи программы, инсталлированной в Macintosh версии 2.03 f.

Результаты исследований

Влияние гормона боли на функциональную активность натуральных киллеров. Цитотоксичес-кая активность натуральных киллеров, использованных по отношению к клеткам-мишеням в соотношении 10:1, составила 35±17,1% от индуцированного лизиса К-562 клеток. Данный показатель увеличивался после конверсии клеток в лимфокин-ак-тивированные клетки под влиянием IL-2 до 50 ± ± 15,2% лизированных К-562 клеток (рис.1). Высокие данные разброса показателя свидетельствуют

о широкой вариабельности среди здоровых доноров. Тем не менее, для изучения влияния субстанции Р на цитотоксическую активность натуральных киллеров также использовались параметры средних величин. Данные восьми независимых экспериментов представлены на рисунке. Внесение в систему субстанции Р в конечной концентрации 1мкМ способствовало стимуляции данного эффекта в 6 из 8 экспериментов. Данная тенденция сохранялась при изучении цитотоксической активности лимфокин-активированных киллеров.

время (минуты)

Рис.2. Миграционная активность натуральных киллеров в системе трехмерного коллагенового матрикса. Примечания: контроль (А) и при наличии в данной системе субстанции Р (Б).

В отличие от донор-зависимых различий показателя цитотоксичности, миграционная активность натуральных киллеров, изолированных от доноров, отмечена как гомогенная. Среднее количество вовлеченных в спонтанную миграцию натуральных киллеров составило 15,7+1,9% от общего числа клеток данной популяции, внесенных в систему трехмерного коллагенового матрикса. При наличии в системе субстанции Р отмечено угнетение локомоторной активности натуральных киллеров, что выразилось в уменьшении числа мигрирующих клеток до 8,6±2,0% (рис. 2).

Влияние гормона боли на миграцию клеток аденокарциномы молочной железы и простаты.

При появлении болевой стимуляции субстанция Р (SP) способствует активации нейрокинин-1 рецепторов (NK-1). Анализ экспрессии NK-1 рецепторов показал, что данный тип рецепторов презентирован клетками аденокарциномы молочной железы. Так, средняя FITC-флуоресценция десяти тысяч опухолевых клеток линии MDA в контроле составила 7,78. Опытная группа аналогичных клеток, инкубированных со специфическими антителами к нейрокинин-

1 рецептору, в среднем показывала флуоресценцию 21,45 (рис. ЗА).

Проведение FACS анализа не выявило экспрессии NK-1 рецептора на поверхности клеток карциномы простаты. Так, флуоресценция клеток линии РСЗ при наличии антител к NK-1 рецептору прак-

тически не отличалась от изотопического контроля (рис. ЗБ).

Сравнительное изучение процента мигрирующих клеток линии аденокарциномы молочной железы МОА-МВ-468 (МБА) в зависимости от наличия 1 мкМ субстанции Р в системе показало статистически достоверное увеличение числа мигрирующих клеток под влиянием данного пептида (рис. 4А).

Спонтанное передвижение клеток карциномы простаты РС-3 в стандартных условиях эксперимента присуще 20% клеток популяции. Внесение в систему 1 мкМ субстанции Р не оказывает воздействие на динамику данного параметра на протяжении 10 часов непрерывного наблюдения. (рис.4Б).

На основе представленных сопоставлений 5Р-индуцированной динамики миграционного процесса ЫК-1 позитивных и 1ЧК-1 негативных клеточных линий, возникли предпосылки к раскрытию одного из механизмов воздействия субстанции Р на процессы клеточного движения.

Теоретически, препарат, блокирующий N1*^-1 рецептор, может быть способен предотвратить БР- индуцированную клеточную миграцию. В связи с этим, в рамках миграционного эксперимента был использован специфический антагонист ЫК-1 рецепторов Ь-733,060.

Внесение Ь-733,060 в коллагеновый матрикс полностью блокирует влияние субстанции Р на процент мигрирующих МОА клеток, сохраняя их на уровне

MDA-MB-468

СФИ изо 7.78 СФИ NK-1 27.45

ю( 102 103

FITC-Fluoreseence

10'

РСЗ

101 102 103 FITC-Fluorescence

10*

Рис.З. Анализ экспрессии ЫК-1 рецепторов на поверхности клеток аденокарциномы молочной железы МОА-МВ-468 (А) и карциномы простаты РСЗ (Б). Примечания: ПТС-флуоресценция связавшихся специфических антител (серая линия) сопоставлена с неспецифическим контролем (черная линия). СФИ = средняя флуоресцентная интенсивность специфического и неспецифического (изо) связывания.

MDA-M В-468

Ф 80 -

5

ф 60

s

3

2 40

>>

о.

5 0 Н-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1

01 23456789 10

время (часы)

■*— Control —A—SP —Ф—L-733,060 SP+L733.060

Ф

s

3

2

>.

а

s

а

100 90 80 70 60 50 -40 -30 20 -10 -0

Control

01 23456789 10

время (часы)

Рис.4. Динамика миграции клеток аденокарциномы молочной железы М0А-МВ-468 под воздействием субстанции Р и антагониста нейрокинин-1 рецептора 1-733,060. Примечания: (А), ареактивность миграционных характеристик клеток аденокарциномы простаты РСЗ к гормону боли (Б). В качестве контроля использованы клетки линий аденокарциномы молочной железы и простаты без внесения изучаемых субстанций в коллагеновый матрикс.

контрольных показателей (рис.4А). Необходимо подчеркнуть, что данный препарат L-733,060 при его использовании в виде монотерапии не оказывает воздействия на спонтанную миграцию клеток РСЗ и MDA.

Обсуждение

Вовлечение психологических факторов в возникновение и развитие опухолевого процесса обсуждается на протяжении десятилетий, что нашло свое отражение в обзорной работе Heffner с соавт. [10]. В поддержку психоневроонкологической концепции канцерогенеза выступает также исследование по идентификации нейротрансмиттеров, индуцирующих миграцию клеток рака молочной железы [5]. Как

известно, способность клеток к миграции является необходимым компонентом в развитии метастазов.

Результаты данного исследования убедительно показывают, что гормон боли способствует вовлечению в процесс миграции большего числа клеток аденокарциномы молочной железы линии МОА-МВ-468. Воздействие при этом осуществляется посредством связывания субстанции Р с нейрокинин-1 рецепторами, презентируемыми на поверхности клеток данной линии. Интересно отметить, что клетки карциномы простаты РСЗ, не несущие данный тип рецепторов, миграционно-ареактивны по отношению к субстанции Р.

В связи с тем, что гормон боли участвует в формировании симптомокомплекса тревоги, препараты - ингибиторы функции субстанции Р, находящиеся

в стадии разработки и клинических испытаний, будут в дальнейшем использоваться в лечении депрессии и ассоциированным с ней состоянием тревоги [15]. Одной из таких субстанций является Ь-733,060.

Как показали результаты исследования, антагонист ЫК-1 рецепторов, антидепрессант Ь-733,060, способен ингибировать миграцию клеток аденокарциномы молочной железы, инициированную гормоном боли.

Однако, клеточная локомоция присуща не только клеткам опухоли. Функциональная состоятельность лейкоцитов также предполагает их активную миграцию для осуществления иммунологического надзора [9]. По сравнению с контрольными показателями миграционной активности натуральных киллеров, наличие в системе субстанции Р приводит к 2х-кратному уменьшению числа мигрирующих клеток данной популяции.

Данные литературы, освещающие влияние субстанции Р на миграционную активность лейкоцитов противоречивы. В то время как Вопаппп с соавторами не удалось обнаружить нарушения клеточной миграции в ответ на гормон боли, другие авторы отмечают стимулирующее влияние субстанции на миграцию нейтрофилов [11]. Субстанция Р способствовала снижению адгезивной способности Т-лимфоцитов на фибронектине [14], что также может влиять на их миграционные характеристики.

Необходимо подчеркнуть, что некоторые популяции клеток иммунной системы обладают способностью к продукции целого спектра нейротрансмиттеров, в том числе, субстанции Р. К таким продуцентам относятся Т-лимфоциты, моноциты и дендритные клетки [12]. В то же время, иммуносупрессия находится в прямой взаимосвязи с болевым синдромом. Так, интенсивность боли ассоциирована со степенью снижения функциональной активности клеток иммунной системы у пациентов [5].

Субстанция Р способствовала стимуляции ци-тотоксической активности натуральных киллеров и, как было описано выше, снижению их миграционной активности. Эта находка очень интересна с позиций самого процесса по осуществлению натуральными киллерами эффекторных функций. Натуральные киллеры не могут осуществлять обе функции одновременно: они либо мигрируют к клетке-мишени, либо разрушают ее. В таком случае, должен быть молекулярный механизм для переключения этих функций под воздействием субстанций передачи сигнала. В такой роли может выступать гормон боли.

Таким образом, гормон боли способен оказывать влияние на функциональную активность клеток иммунной системы (натуральные киллеры) и опухоли (аденокарцинома молочной железы), что может отражать процессы патогенеза у больных злока-

чественными новообразованиями, особенно при неадекватной анестезии. При этом антидепрессанты как антагонисты нейрокининового рецептора-1, вероятно, могут быть использованы для профилактики развития метастатического процесса.

Благодарность

Автор выражает признательность профессору К.З.Ценкеру за предоставление возможности выполнения данной работы на базе Института Иммунологии Университета Виттен/Хердеке (Германия). Спонсором проекта является немецкая ассоциация анестезиологов и реаниматологов (Deutsche Gesselschaft fuer Anaesthesiologie und Intensiv-medizin).

Список литературы

1. Гариб В.Ф., Сабиров Д.М., Ценкер К.С. Влияние ремифентанила на миграцию клеток аденокарциномы молочной железы в эксперименте // Теоре-тич. и клин. мед. - 2003. -1. - С. 6-11.

2. Жданов О.Н., Пасько В.Г. Анестезиологическое обеспечение хирургического лечения новообразований // Тезисы IV сессии МНОАР. - 2003. -С. 56.

3. Bonamin L.V., Malucelli В.Е. Substance P. does not modify mononuclear cell migration into Ehrlich tumor mass // Braz.J Med. Biol. Res. -1996. - Vol. 29. -P. 359-362.

4. Caplan A.I. The extracellular matrix is instructive // Bioassays. -1986. - Vol. 5. - P. 129-132.

5. Cabot P.J. Immune-derived opioids and peripheral antinociception // Clin Exp Pharmacol Physiol. -2001. - Vol. 28. - P. 230-232.

6. Dittmar Т., Husemann A., Schewe Y. Induction of cancer cell migration by epidermal growth factor is initiated by specific phosphorylation of tyrosine 1248 of c-erbB-2 receptor via EGFR // FASEB J. -2002. -Vol. 16. - P.1823-191825.

7. Drell T.L. 4th, Joseph J„ Lang K., Niggemann B., Zaenker K.S., Entschladen F. Effects of neurotransmitters on the chemokinesis and chemotaxis of MDA-MB-468 human breast carcinoma cells // Breast Cancer Res Treat. -2003. - Vol.80. - P.63-70.

8. Entschladen F., Zaenker K.S. Locomotion of tumor cells: a molecular comparison to migrating pre- and postmitotic leukocytes //]. Cancer Res. Clin. Oncol. -2000.-Vol. 126.-P. 671-681.

9. Entschladen F., Lang K., Drell T.L., Joseph J., Zaenker K.S. Neurotransmitters are regulators for the migration of tumor cells and leukocytes // Cancer Immunol Immunother. -2002. -Vol. 51. -P.467-82.

10. Heffner K.L., Loving T.J., Robles T.F., Kiecolt-Glaser J.K.. Examining psychosocial factors related to

cancer incidence and progression: In search of the silver lining // Brain Behav Immun. -2003. - Vol.17. - P. 109-111.

11. Kahler C.M., Pischel A.B., Haller T„ Meierhofer C., Djanani A., Kaufmann G., Wiedermann C.J. Signal transduction pathways in directed migration of human monocytes induced by human growth hormone in vitro // Int Immunopharmacol. -2001. -Vol. 1. -P.1351-1361.

12. Lambrecht B.N. Immunologists getting nervous: neuropeptides, dendritic cells and T cell activation // Respir Res. -2001. -Vol. 2. -P. 133-8.

13. Lang K., Drell T.L., Niggemann B., Zanker K.S., Entschladen F. Neurotransmitters regulate the migra-

tion and cytotoxicity in natural killer cells // Immunol Lett. -2003-Vol. 90.-P. 165-72.

14. Levite М., Cahalon L., Hershkoviz R., Steinman L., Lider O. Neuropeptides, via specific receptors, regulate T cell adhesion to fibronectin //J Immunol. -1998. -Vol. 160.-P. 993-1000.

15. Mantyh P.W. Neurobiology of substance P and theNKl receptor //J Clin Psychiatry. -2002. -Vol.63. -Suppl 11. -P. 6-10.

16. Yu Т.К., Caudell E.G., Smid C., Grimm E.A. IL-

2 activation ofNK cells: involvement of MKK1/2/ERK but not p38 kinase pathway // J Immunol. -2000. -Vol.164. -P.6244-6251.

поступила в редакцию 20.03.2004 отправлена на доработку 30.03.2004 принята к печати 05.04.2004