Гистология мочевого пузыря при синдроме недержания мочи у соболей
В.Е. Соболев, к.в.н, НИИ гигиены, профпатологии и экологии человека; С.И. Жданов, аспирант, Санкт-Петербургская ГАВМ
В настоящее время основной этиологический фактор синдрома недержания мочи, поражающего молодняк норок и соболей (преимущественно самцов) и связанного с непроизвольным мочеиспусканием и повреждением меха и кожи животных в области живота, неизвестен. Ранее используемые в отечественной и англоязычной литературе термины «подмокание» и «wet belly» [1, 2] не отвечают современным требованиям ветеринарной нозологии, в которых необходимо учитывать не только область патологического процесса, но и основные этиологические или патогенетические факторы. В связи с этим авторы предлагают новую терминологическую единицу — «синдром недержания мочи» (СНМ) у пушных зверей. Известны результаты зарубежных исследований, посвящённых изучению влияния зоогигиенических параметров, условий кормления и содержания зверей, на развитие заболевания у норок [3—8]. Однако практически отсутствуют работы, посвящённые изучению морфологических изменений в мочевом пузыре у больных животных. Целью настоящей работы является изучение гистологической картины в мочевом пузыре у соболей, больных синдромом недержания мочи.
Материалы и методы. В течение 2009—2011 гг. в звероводческом хозяйстве Ленинградской об-
ласти в соответствии с технологическим циклом зверохозяйства в период убоя животных проведено патологоанатомическое вскрытие 76 голов молодняка соболей (64 — самцы; 12 — самки) с диагнозом синдром недержания мочи. При этом признаки воспалительного процесса в мочевом пузыре выявлены в 28,1% случаев у самцов и в 41,6% случаев — у самок. В 26,5% случаев у самцов и в 33,3% случаев у самок больных животных патологические изменения в мочевом пузыре отсутствовали. Для гистологического исследования отбирали по пять мочевых пузырей от больных животных с признаками цистита, без признаков цистита и от здоровых животных (всего 15 шт.). Мочевые пузыри животных фиксировали в 10-процентном нейтральном формалине или жидкости Карнуа. Гистологические срезы мочевого пузыря толщиной 5—7 мкм получали на роторном микротоме Slee Cut 5062. Срезы окрашивали гематоксилин — эозином, альциановым синим и по методу Хейла для выявления мукополисахаридов. Гистологические срезы изучали с помощью микроскопа Zeiss Axio Observer A1, микрофотографии получали при помощи устройства захвата изображения Pixera Penguin 150 CL. Морфометрические измерения в срезах мочевого пузыря проводили с помощью программы «Видеотест-размер 5.0».
Статистическая обработка полученных данных выполнена в программе GraphPad Prizm 5.0 для Windows XP. Нормальность распределения
выборки проверяли с помощью теста Шапиро-Уилка. Полученные данные оценивали методами описательной статистики, с определением средних значений и стандартного отклонения в формате М+s. Статистическую значимость различий показателей сравниваемых групп определяли методом однофакторного дисперсионного анализа (one way ANOVA). Для сравнения парных выборок, не отвечающих критериям нормальности, использовали U-критерий Манна-Уитни. Различия сравниваемых показателей считали статистически значимыми при уровне р<0,05.
Результаты и обсуждение. Для сравнительного анализа гистологических изменений в мочевом пузыре были сформированы три группы животных, от которых отбирали секционный материал. У зверей I гр. (контрольной) клинические признаки заболевания и патологические изменения в мочевом пузыре отсутствовали. Во II и III гр. включили соболей с клиническими признаками недержания мочи и воспалительного процесса в мочевом пузыре соответственно. У соболей II гр. при патологоанатомическом вскрытии диагностировали катаральный цистит. Материал от животных III гр. — мочевые пузыри с признаками очагового геморрагического цистита (рис. 1).
В отличие от здоровых животных, мочевые пузыри соболей II и III гр. содержали большее количество остаточной мочи. У животных III гр. наблюдались признаки устойчивой дилатации мочевого пузыря (рис. 1).
При изучении гистологических срезов мочевого пузыря у больных животных III гр. выявлено наличие геморрагических участков с дегенеративными изменениями структуры соединительной ткани подслизистой основы и мышечных волокон в мышечной оболочке органа. При окрашивании срезов методом Хейла и альциановым синим отмечается интенсивное окрашивание собственной пластинки слизистой оболочки (рис. 2). Этот факт, вероятно, указывает на накопление гликозаминогликанов, защищающих, как известно, слизистую оболочку мочевого пузыря от воздействия повреждающих факторов [9].
Методами количественной морфометрии у здоровых и больных животных выявлены статистически значимые отличия по ряду линейных и объёмных характеристик тканей и клеток в срезах мочевого пузыря. Результаты представлены в таблице.
Из данных таблицы можно увидеть некоторые закономерности в сравниваемых показателях.
Рис. 1 - Геморрагический цистит:
1 - мочевой пузырь;
2 - геморрагический участок
Рис. 2 - Мочевой пузырь соболя, группа III. Геморрагический цистит Х 10; окраска по методу Хейла:
1 - слизистая оболочка; 2 - геморрагические участки
Результаты количественной морфометрии мочевого пузыря соболей
Показатели Группы животных
I II III
гистометрические
Толщина слизистой, мкм: Толщина собственной пластинки, мкм: Толщина подслизистой основы, мкм: Толщина мышечной оболочки, мкм: 130,7±33,4 71,0± 6,9 141,9± 19,1 1276± 340,3 47,9±6,2** 123,3± 24,6** 84,3± 9,1* 834,9± 101,2* 48,7±7,2** 55,0± 5,9* 53,78± 7,2** 340,3± 50,2**
цитометрические
Площадь эпителиоцита, мкм2: Объём ядра эпителиоцита, мкм3: Объём эпителиоцита, мкм3: ЯЦО 252,1± 110,6 719,8±468,7 2098±1514 0,61±0,15 601,9± 165,0** 909,1±520,0 9763±3734** 0,87±0,07** 677,9± 173,1** 2297±1076** 11526±4661** 0,72±0,09
Примечания: ЯЦО — ядерно-цитоплазматическое отношение; * — р<0,05; ** — р<0,01
Рис. 3 - Срез стенки мочевого пузыря соболя, группа III Х10; альциановый синий:
1 - слизистая оболочка; 2 - собственная пластинка слизистой оболочки; 3 - продольный слой мышечной оболочки
Так, у животных II и III гр. слизистая оболочка и подслизистая основа, представленная элементами рыхлой соединительной ткани, значительно тоньше, чем в контрольной группе. Истончение слизистой оболочки объясняется усилением эксфолиации эпителиоцитов под влиянием воспалительного процесса в мочевом пузыре. У животных II гр. наблюдается утолщение и отёк собственной пластинки слизистой оболочки, характерные для катарального воспалительного процесса. Уменьшение толщины мышечной оболочки мочевого пузыря у соболей II и III гр. отражает состояние функциональной неполноценности мочевого пузыря, в частности его атонию и последующую дилатацию. На рисунке видно растяжение мышечных волокон продольного слоя мышечной оболочки по сравнению с мочевым пузырём здоровых животных (рис. 4). Значительный объём остаточной мочи в мочевом пузыре у животных II и III гр. является вероятным резервуаром для развития инфекции и повреждения слизистой оболочки.
Цитометрические и кариометрические показатели эпителиоцитов мочевого пузыря соболей II и III гр. отличаются от показателей контрольной группы с высоким уровнем статистической значимости. Клетки эпителия у больных животных имеют большую площадь и объём. Ядерно-цитоплазматическое отношение клеток эпителия мочевого пузыря, представляющее собой объёмную долю цитоплазмы в эпителиальных клетках, существенно выше в эпителиоцитах соболей II гр. Увеличение ЯЦО в эпителиоцитах соболей II гр. косвенно свидетельствует о повреждении эпителиальных клеток, в то время как у животных III гр. этот показатель отличается от группы сравнения незначительно. Это различие, по-видимому, объясняется воздействием повреждающих факторов. Если у животных II гр. развитие катарального
Рис. 4 - Срез стенки мочевого пузыря соболя, группа I Х10;
альциановый синий:
1 - слизистая оболочка; 2 - собственная пластинка;
3 - подслизистая основа; 4 - мышечная оболочка
воспалительного процесса связано с повреждением слизистой оболочки, то у соболей III гр. очаговый геморрагический цистит связан с повреждением подслизистой основы и мышечного слоя мочевого пузыря, которые, как известно, хорошо снабжены системой кровеносных сосудов. Нарушение проницаемости сосудистой стенки является в данном случае одним из звеньев патогенеза геморрагического циститы.
Выводы. В результате проведённых исследований впервые получена информация о гистологических изменениях в тканях мочевого пузыря соболей, больных синдромом недержания мочи. В проведённых нами исследованиях у 28,1% самцов и 41,6% самок выявлен катаральный или геморрагический цистит.
В зарубежных публикациях, посвящённых гистологии мочевого пузыря у норок, больных wet belly, информация о воспалительном процессе в мочевом пузыре отсутствует [10, 11].
С помощью методов гистохимического исследования выявлены признаки накопления гликозаминогликанов в собственной пластинке мочевого пузыря у больных животных. В настоящее время клинически доказана защитная роль гликозаминогликанов, присутствующих в слизистой оболочке мочевого пузыря [5]. Для доказательства повышения содержания кислых мукополисахаридов в слизистой оболочке мочевого пузыря у больных синдромом недержания мочи зверей требуется проведение дальнейших исследований с использованием методов биохимического определения содержания этих соединений в крови и моче.
Методами количественной морфометрии выявлены статистически значимые отличия в морфологии мочевого пузыря соболей, больных синдромом недержания мочи. Основными отличиями являются уменьшение толщины слизистой оболочки, подслизистой основы и мышечной
оболочки у больных животных, что может быть обусловлено повышением уровня эксфолиации эпителиальных клеток и явлениями атонии и дилатации мочевого пузыря больных животных.
Таким образом, полученные результаты исследований подтверждают гипотезу о наличии воспалительного процесса в мочевом пузыре у животных, больных синдромом недержания мочи.
Литература
1. Данилевский В.М., Забалуев Г.И. Словарь ветеринарных терапевтических терминов. М.: Росагропромиздат, 1989.
C, 88.
2. Saunders comprehensive veterinary dictionary — 2nd ed. / Blood
D.C; Studdert K.P.: WB Saunders, 1999. P. '1226.
3. Aulerich R., Shelts G., Schaibie P.J. Influence of the dietary calcium level on the incidence of urinary incontinence and «wet
belly» ill mink // Michigan Quarterly bull., 1963. Vol. 45. № 3. P. 444-449.
4. Aulerich R., Ringer R.K., Schaibie P.J. Mink pelts affected with «wet belly» // Michigan Quarterly bull. 1962. Vol. 44. № 3. P. 484-491.
5. Aulerich R., Schaibie P.J. The use of spent chickens for mink feeding // Michigan Quarterly bull. 1965. Vol. 47. № 3. P. 451-458.
6. Experiments in Mink nutrition: progress report 1963/Agricult. Exp. St. Oregon St. University, 1964. 32 p.
7. Nutrient Requirements of Mink and Foxes - 2nd ed., 1982. P.19.
8. Mink research: progress report 1970/ Agricult. Exp. St. Oregon St. University, 1972. 34 p.
9. Bhavanandan V.P. Glycosaminoglycans and Glycoproteins of Animal Bladder. // Journal Connect Tissue 2001. Vol. 33. № 3. P. 245-252.
10. Bostrom R.E., AulerichR.J., Schaibie P.J. Hystologic observation on the urinary system of male mink affected with «wet belly» // Michigan Quaterly bull. 1967. Vol. 50. № 1. P. 100-105.
11. Bostrom R.E., Aulerich R.J., Schaibie P.J. Hystologic features of inguinal skin of «wet belly» and normal mink (Mustella vision) //Am. J Vet. Res. 1967. Vol. 28. № 126. P. 1549-1554.