ГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПОЛИМОРФИЗМ -308A TNFα, АССОЦИИРОВАННЫЙ С РАЗВИТИЕМ ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ III СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

УДК 575.17

ГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПОЛИМОРФИЗМ -308A TNF», АССОЦИИРОВАННЫЙ С РАЗВИТИЕМ ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ III СТЕПЕНИ ТЯЖЕСТИ

И.В. КРИВОШЕЙ1 С.Н. МИЛАНОВА1 Н.И. ЖЕРНАКОВА1 Т.И. ЯКУНЧЕНКО1 П.К. АЛФЕРОВ1, 2

1) Белгородский государственный национальный исследовательский университет

2) Белгородская областная клиническая больница Святителя Иоасафа

e-mail: [email protected]

В настоящее время гипертоническая болезнь (ГБ) занимают лидирующие позиции среди причин ранней инвалидизации и смертности населения в большинстве развитых стран мира [1, 2, з]. Среди взрослого населения России более 40% имеют повышенные цифры артериального давления [4]. ГБ оказывает выраженное неблагоприятное влияние на риск развития кардиоваску-лярных событий. Это важнейший фактор риска развития ишемической болезни сердца, сердечной недостаточности, а также таких грозных сердечно-сосудистых осложнений как инфаркт миокарда, острые нарушения мозгового кровообращения [5, 6, 7, 8]. Согласно литературным данным, снижение высоких цифр артериального давления (АД) ассоциируется с уменьшением риска возникновения на 50% сердечной недостаточности, на 20-25% инфаркта миокарда и инсульта на 35-40% [9].

ГБ представляет собой мультифакториальное заболевание, характеризующееся стойким и длительным повышением АД, обусловленным первоначальным изменением разных механизмов его регуляции [10].

Генетические факторы оказывают детерминирующее влияние на изменчивость систолического и диастолического АД, при этом они составляют 38% и 42% соответственно, а роль средовых факторов относительно незначима и равна 5,7% и 4% [10].

Важную роль в патогенезе ГБ играют цитокины, в частности факторы некроза опухолей и их рецепторы, которые обладают рядом патогенетически значимыми для ГБ медико-биологическими эффектами (оказывают провоспалительное, иммуномодулирующее, цитоток-сическое действие, активируют систему гемостаза, индуцируют апоптоз и др.) [11, 12]. Поскольку активность цитокинов находится под контролем соответствующих генов, представляется целесообразным поиск генетических маркеров, ответственных за предрасположенность к развитию ГБ и особенности ее клинического течения.

Цель работы - анализ ассоциаций генетических вариантов факторов некроза опухолей и их рецепторов со степенью тяжести ГБ.

Материалом для исследования послужили образцы ДНК, выделенные из цельной венозной крови методом фенол-хлороформной экстракции: 452 больных ГБ и 531 человек контрольной группы. Среди 452 больных ГБ 67,04% составили мужчины (303 человека), 32,96% -женщины (149 человек). В контрольной выборке (п=531) процентное соотношение было аналогичным: мужчины - 67,04% (356 человек), женщины - 32,96% (175 человек) (р>0,05). У пациентов с ГБ средний возраст был равен 54,74±13,08 лет (от 32 до 76 лет), а в контрольной группе -52,20±14,68 лет (от 31 до 79 лет) (р>0,05). В выборки больных и контроля включались индивидуумы русской национальности, являющиеся уроженцами Центрального Черноземья и не имеющие родства между собой. Также, критериями включения послужили: отсутствие тяжелой соматической патологии, согласие на участие в исследовании. Пациенты включались в соответствующую группу больных только после установления диагноза заболевания, подтвержденного с помощью клинических и лабораторно-инструментальных методов обследования. Клинико-лабораторное и инструментальное обследование больных осуществлялось в кардиологическом

В статье изложены результаты исследования полиморфизмов генов цитокинов у больных гипертонической болезнью. Установлено, что генетический вариант -308A TNFa (ОИ=1,44) вовлечен в подверженность к формированию гипертонической болезни III степени тяжести.

Ключевые слова: гипертоническая болезнь, степень тяжести заболевания, полиморфизм генов цитокинов.

отделении областной клинической больницы Святителя Иоасафа города Белгорода. В контрольную группу включались индивидуумы без заболеваний сердечно-сосудистой системы.

Измерение АД осуществлялось по методу Короткова Н.С. ртутным сфигмоманометром с соблюдением следующих правил: больной находился в сидячем положении, в удобной позе с рукой, расположенной на плоскости стола. На плечо накладывали манжету на уровне сердца, нижний край которой располагался выше локтевого сгиба на 2 см. Измерение осуществляли в покое после 5-минутного отдыха. Уровень АД оценивали на двух руках, выполняя не менее 3 измерений с интервалом около 1 мин, при разнице 5 мм рт. ст. проводились еще 2 измерения. За окончательное значение брали среднее из двух последних измерений. В дальнейшем измерение проводили на той руке, где АД выше [13]. Также нами учитывался уровень привычного АД у больных ГБ на фоне лекарственной терапии за время пребывания в стационаре.

Изучались следующие генетические полиморфизмы: фактор некроза опухоли а (-308G/A TNFa), лимфотоксин а (+250A/G Lta), рецептор фактора некроза опухоли 1-го типа (+36A/G TNFRl), рецептор фактора некроза опухоли 2-го типа (+1663A/G TNFR2). Анализ изучаемых локусов осуществлялся с использованием стандартных олигонуклеотидных праймеров и зондов методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК на амплификаторе IQ5 (Bio-Rad) с последующим анализом полиморфизма методом дискриминации аллелей. Статистическая обработка данных проводилась с использованием программных пакетов «STATISTICA for Windows 6.0» и «Microsoft Ехсе1 2007». Для сравнения частот аллелей и генотипов между различными группами использовали критерий х2 с поправкой Йетса на непрерывность. Вычисления производили в таблицах сопряженности 2х2 [14].

Результаты. В исследуемой нами группе больных ГБ, I степень тяжести заболевания диагностирована у 78 пациентов (17,26%), II степень выявлена у 175 больных (38,72%) и III степень наблюдалась у 199 пациентов (44,02%). Преимущественно, в 50,22% случаев, среди больных ГБ была установлена 1 степень ожирения - у 227 человек, 2 степень регистрировалась у 76 пациентов (16,82%) и 3 степень у 19 индивидуумов (4,20%). Высокой оказалась и частота выявления избыточной массы тела - 108 человек (23,89%). Нормальная масса тела отмечалась только у 22 пациентов (4,87%).

Получено, что у больных ГБ при поступлении в кардиологическое отделение медиана систолического АД равнялась 175,00 мм рт.ст., диастолического АД - Me=100,00 мм рт.ст, пульсового - Me=70,00 мм рт.ст и среднего АД - Me=125,00 мм рт. ст., а медиана привычного систолического АД была равна 140,00 мм рт.ст., диастолического АД- Me=90,00 мм рт.ст, пульсового АД - Me=50,0 мм рт.ст., среднего АД - Me=106,60 мм рт.ст.

Среди 452 больных ГБ 205 человек (45,35%) имели наследственную отягощенность по ГБ среди родственников 1 степени родства. Больные ГБ, имеющие отягощенный семейный анамнез, характеризуются высоким удельным весом индивидуумов с III степенью тяжести заболевания (p=0,03) и наибольшими показателями диастолического АД и среднего АД при поступлении и привычного диастолического АД и среднего АД (p=0,02-0,05) по сравнению с больными, не имеющими наследственную отягощенность по ГБ.

Установлено, что до развития заболевания, 188 больных (41,59%) имели длительный стаж курения, 72 пациента (15,93%) отмечают пассивное курение (наличие курящих в семье и/или на работе), 16 больных (3,54%) регулярно употребляли алкоголь.

Проведён анализ структуры сопутствующей патологии в исследуемой группе больных ГБ. Наиболее часто в анамнезе имела место патология сердечно-сосудистой системы: 305 (67,48%) пациентов страдали ишемической болезнью сердца, нарушения ритма наблюдались у 99 индивидуумов (21,90%). Вторыми по частоте встречаемости были заболевания эндокринной системы - сахарный диабет II типа диагносцирован у 246 больных (54,42%). Заболевания желудочно-кишечного тракта, такие как гастрит (22,57%), язвенная болезнь желудка (12,61%), желчнокаменная болезнь (8,63%) и гепатит (4,42%) занимали третье место по частоте встречаемости.

При изучении распределения полиморфных генетических маркеров цитокинов среди больных ГБ с различной степенью тяжести заболевания, а также в контрольной группе установлены статистически достоверные различия в частотах генотипов и аллелей по локусу -308G/A TNFa (таблица). Выявлено, что у пациентов с III степенью ГБ концентрация молеку-лярно-генетического маркера -308A фактора некроза опухоли а составляет 15,58% и является наибольшей по сравнению как с контрольной группой (11,39%, %2=4,25, р=0,04, OR=1,44, 95% CI 1,02-2,02), так и с больными, имеющими другие степени ГБ (8,97% при I степени и 12,29% при II степени). Закономерностей в ассоциациях генетических полиморфизмов +250A/G Lta, +36A/G TNFRl, +1663A/G TNFR2 со степенью тяжести ГБ не установлено.

Таким образом, в результате проведённого исследования установлено важное патогенетическое значение для ГБ фактора некроза опухоли а (-308G/A TNFa). Фактором риска развития III степени тяжести ГБ следует считать аллель -308A TNFa (OR=1,44), а протективную направленность имеет молекулярно-генетический маркер -308G TNFa (OR=0,70).

Работа выполнена в рамках гос. задания № 2014/511 «Изучение генетических факторов риска развития мультифакториальных заболеваний человека».

Таблица

Частоты генетических вариантов изучаемых локусов цитокинов у больных ГБ в зависимости от степени тяжести заболевания

Полиморфизм Аллели, генотипы Контрольная группа (п=531) Больные ГБ (11=452)

с I степенью ГБ (11=78) со II степенью ГБ (п=175) с III степенью ГБ (11=199)

11 % 11 % Х2 (Р) (Ж (95% СО 11 % Х2 (Р) (Ж (95% С1) 11 % Х2 (Р) (Ж (95% С1)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 и 12 13 14 15 16

1 00 о ср -3080 941 88,61 142 91,03 0,58 (0,45) 1,30 (0,71-2,44) 307 87,71 0,13 (0,72) 0,92 (0,62-1,35) 336 84,42 4,25 (0,04) 0,70 (0,49-0,98)

-308А 121 П,39 14 8,97 0,77 (0,41-1,41) 43 12,29 1,09 (0,74-1,60) 62 15,58 1,44 (1,02-2,02)

-30800 417 78,53 65 83,33 0,68 (0,41) 1,37 (0,70-2,70) 135 77Д4 0,08 (0,78) 0,92 (0,60-1,42) 144 72,36 2,76 (о,ю) 0,72 (0,49-1,06)

-3080А 107 20,15 12 15,38 0,70 (0,40) 0,72 (0,36-1,43) 37 21,14 0,03 (0,86) 1,06 (0,68-1,65) 48 24,12 1Д4 (0,29) 1,26 (0,84-1,89)

-308АА 7 1,32 1 1,28 0,00 (1,00) 0,97 (0,04-8,00) 3 1,72 0,00 (0,99) 1,31 (0,27-5,66) 7 3,52 2,65 (о,ю) 2,73 (0,85-8,77)

1 о 10 + +2500 286 26,93 37 23,72 0,57 о,45) 0,84 (0,56-1,27) 89 25,43 0,23 (0,63) о,93 (0,70-1,23) 120 30,15 1,34 (0,25) 1Д7 (0,90-1,52)

+250А 776 73,07 П9 76,28 1Д9 (0,79-1,79) 2б1 74,57 1,08 (0,81-1,44) 278 69,85 0,85 (0,66-1,11)

+250 ОО 33 6,22 4 5ДЗ 0,02 (0,90) 0,82 (0,24-2,51) 13 7,43 0,15 (0,70) 1,21 (0,59-2,46) 18 9,05 1,38 (0,24) 1,50 (0,79-2,83)

+250АО 220 41,43 29 37,18 0,35 (0,56) 0,84 (0,50-1,40) 63 Зб,оо 1,40 (0,24) о,8о (о,55-1Д5) 84 42,21 0,01 (0,92) 1,03 (0,73-1,46)

+250 АА 278 52,35 45 57,69 0,58 (о,45) 1,24 (0,75-2,06) 99 56,57 0,78 (0,38) 1Д9 (0,83-1,70) 97 48,74 0,62 (о,43) 0,87 (0,62-1,22)

Окончание табл.

Частоты генетических вариантов изучаемых локусов цитокинов у больных ГБ в зависимости от степени тяжести заболевания

Полиморфизм Аллели, геноти-пы Контрольная группа (п=531) Больные ГБ (11=452)

с I степенью ГБ (11=78) со II степенью ГБ (п=175) с III степенью ГБ (11=199)

11 % 11 % Х2 (Р) ОИ (95% С1) 11 % Х2 (Р) ОИ (95% С1) 11 % Х2 (Р) ОИ (95% С1)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 и 12 13 14 15 16

1 1 СО + +36С 534 50,28 90 57,69 2,70 (0,10) 1,35 (0,95-1,92) 187 53,43 0,92 (0,34) 1ДЗ (0,88-1,46) 211 53,02 0,76 (0,38) 1,12 (0,88-1,42)

+36 А 528 49,72 66 42,31 0,74 (0,52-1,06) 163 46,57 0,88 (0,69-1,13) 187 46,98 0,90 (0,71-1,14)

+36 ОО 128 24,п 26 33,33 2,60 (0,11) 1,57 (0,91-2,70) 53 30,29 2,32 (0,13) 1,37 (0,92-2,03) 48 24,12 0,00 (1,00) 1,00 (0,67-1,49)

+36 АО 278 52,35 38 48,72 0,23 (0,63) 0,87 (0,52-1,43) 81 46,29 1,70 (0,19) 0,78 (0,55-1,12) П5 57,79 1,51 (0,22) 1,25 (0,89-1,76)

+36АА 125 23,54 14 17,95 0,91 (о,34) 0,71 (0,37-1,36) 41 23,42 0,00 (1,00) 0,99 (0,65-1,52) 36 18,09 2,19 (0,14) 0,72 (0,47-1,10)

С\| 1 1 + +1663 О 457 54,80 97 62,18 2,62 (0,11) 1,36 (0,94-1,96) 205 58,57 1,28 (0,26) 1Д7 (0,90-1,51) 226 56,78 0,35 (о,55) 1,08 (0,85-1,39)

+1663 А 377 45,20 59 37,82 0,74 (0,51-1,06) 145 41,43 0,86 (0,66-1,11) 172 43,22 0,92 (0,72-1,18)

+1663 ОО 122 29,26 31 39,74 2,91 (0,09) 1,60 (0,94-2,71) 60 34,29 1,24 (0,27) 1,26 (0,85-1,87) 61 30,65 0,07 (о,8о) 1,07 (0,73-1,57)

+1663 АО 213 51,08 35 44,87 0,78 (0,38) 0,78 (0,47-1,30) 85 48,57 0,22 (0,64) 0,91 (0,63-1,31) 104 52,26 0,04 (0,85) 1,05 (0,74-1,49)

+1663 АА 82 19,66 12 15,38 0,53 (0,47) 0,74 (0,36-1,50) 30 17Д4 0,36 (0,55) 0,85 (0,52-1,37) 34 17,09 о,43 (0,51) 0,84 (0,53-1,34)

Литература

1. Al-Ansary, L. A. A Systematic Review of Recent Clinical Practice Guidelines on the Diagnosis, Assessment and Management of Hypertension / L. A. Al - Ansary, A. C. Tricco, S. E. Straus // PLoS One - 2013. - Vol. 8 (1). -P. 537-44. ... . . .

2. Efficacy and safety of dual blockade of the renin-angiotensin system: meta-analysis of randomised trials /

H. Makani [et al.] //BMJ: British Medical Journal. - 2013. - Т. 346.

3. Associations of Cytokines Genetic Polymorphisms with Hypertension Progress / I. V. Krivoshei [et al.] / / Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical, Nov. - Dec. - 2014. - № 5 (6). - P. 1348-1351.

4. Костюкевич, О.И. Артериальная гипертензия и болезни печени: в поисках компромисса / О.И. Ко-стюкевич // Русский медицинский журнал. - 2011. - № 5. - С. 338-342.

5. Stroke risk factors and subtypes in different age groups: A hospital-based study / C. Y. Wu[et al.] // Neurol India - 2010. - Vol. 58. - № 6. - P. 863-868.

6. Кривошей, И. В. Полиморфизм генов цитокинов и формирование сахарного диабета у больных гипертонической болезнью / И. В. Кривошей, П. К. Алферов, М. И. Чурносов // Научные ведомости БелГУ. Сер. Медицина. Фармация. - 2013. - № 4 (147). - Вып. 21. - С. 165-169.

7. Кривошей, И. В. Изучение ассоциаций полиморфизма генов цитокинов со стадией гипертонической болезни / И. В. Кривошей // Научные ведомости БелГУ. Сер. Медицина. Фармация. - 2013. - № 25 (168). -Вып. 24. - С. 165-169.

8. The C718T polymorphism in the 3'-untranslated region of glutathione peroxidase-4 gene is a predictor of cerebral stroke in patients with essential hypertension / A. V. Polonikov [et al.] // Hypertens Res. - 2012 May. - 35 (5). -P. 507-512. doi: 10.1038/hr.2011.213. Published: 2012 Dec 8.

9. Reappraisal of European guidelines on hypertension management: a European Socieety of Hypertension Task Force document / G. Mancia [et al.] // Hypertension. - 2009. - Vol. 27. - P. 2121-2158.

10. Martinez-Aguayo, C. Genetics of hypertensive syndrome / C. Martinez-Aguayo, A. Fardella / / Horm Res. -2009. - Vol. 71. - № 5. - P. 253-259.

11. Yan-Yan Li Tumor Necrosis Factor-Alpha G308a Gene Polymorphism and Essential Hypertension: A Meta-Analysis Involving 2244 Participants / Li Yan-Yan // PLoS One. - 2012. - ol. 7 (4). - P. 792-805.

12. Karunakaran, I. High Sensitivity C-Reactive Protein, Tumor Necrosis Factor-a, Interleukin-6, and Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Levels in Asian Indians with Metabolic Syndrome and Insulin Resistance (CURES-105) /

I. Karunakaran, S. Jayagopi, M. Viswanathan // Diabetes Science and Technology. 2011. - Vol. 5 (4). - P. 982-88.

13. ESH/ESC guidelines for the management of arterial hypertension / G. Mancia[et al.] / / Eur Heart J 2013; DOI: 10.1093/eurheartj/eht.151.

14. Реброва, О. Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA // О. Ю. Реброва. - М.: Медиасфера, 2006. - 305 с.

GENETIC POLYMORPHISM -308A TNFn ASSOCIATED WITH THE DEVELOPMENT

HYPERTENSION III DEGREE

The article presents the results of a study of polymorphisms of cytokine genes in patients with hypertension. It was found that the genetic variant -308A TNFa (OR=l.44) is involved in the susceptibility to the formation of hypertension III degree.

1) Belgorod National Research University Key words: hypertension, severity of disease, polymorphisms of cy-

tokine genes.

2) Belgorod Regional Clinical Hospital of Prelate Ioasaf

I.V. KRIVOSHEI1 S.N. MILANOVA1 N.I. ZHERNAKOVA1 T.I. YAKUNCHENKO1 P.K. ALFEROV 2

e-mail: [email protected]