CC BY
34
© Коллектив авторов, 2022
Седова Е.С.1, Первойкина К.А.1, Щербинин Д.Н.1, Шмаров М.М.1 2
Генетические конструкции, выполняющие функции адъювантов, в составе вакцин на основе аденовирусных векторов
1 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации, 123098, г. Москва, Российская Федерация
2 Федеральное автономное образовательное учреждение высшего образования Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет), 119991, г. Москва, Российская Федерация
Резюме
На сегодняшний день применение рекомбинантных аденовирусов (rAd) для создания вакцин против различных заболеваний является актуальной задачей. Как правило, rAd-вакцины сами по себе являются высокоиммуногенными и не требуют использования адъювантов. Однако в некоторых случаях - как правило, при использовании в составе rAd в качестве антигенов секретируемых или цитоплазматических белков патогена, -требуются средства для повышения иммуногенности и защитных свойств вакцины.
Введение молекулярных адъювантов в качестве вспомогательных веществ в состав rAd-вакцин на сегодняшний день показало противоречивые результаты и не нашло широкого применения. Более перспективным подходом видится введение адъювантов в состав rAd-вакцин в качестве генетических конструкций.
В обзоре рассматриваются различные генетические конструкции, способствующие повышению иммуногенности и защитных свойств вакцин против инфекционных заболеваний на основе rAd.
Ключевые слова: вакцины на основе рекомбинантных аденовирусных векторов; молекулярные адъюванты; кальретикулин; С4-связывающий белок; MHC-II-ассоциированная инвариантная цепь; лиганд CD40L; цито-кины; белки теплового шока; агонисты Толл-подобных рецепторов
Статья поступила 16.11.2021. Принята в печать 19.01.2022.
Для цитирования: Седова Е.С., Первойкина К. А., Щербинин Д.Н., Шмаров М.М. Генетические конструкции, выполняющие функции адъювантов, в составе вакцин на основе аденовирусных векторов. Иммунология. 2022; 43 (1): 5-17. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-6-5-17
Финансирование. Исследование не имело спонсорской поддержки.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Авторский вклад. Написание текста - Седова Е.С., Щербинин Д.Н., редактирование и ответственность за целостность всех частей статьи - Первойкина К.А., утверждение окончательного варианта статьи -Шмаров М.М.
Sedova E.S.1, Pervoykina K.A.1, Shcherbinin D.N.1, Shmarov M.M.1 2
Genetic constructs as adjuvants in vaccines based on adenoviral vectors
1 Federal Research Centre for Epidemiology and Microbiology named after the Honorary Academician N.F. Gamaleya of the Ministry of Health of the Russian Federation, 123098, Moscow, Russian Federation
2 I.M. Sechenov First Moscow State Medical University of Ministry of Health of the Russian Federation (Sechenov University), 119991, Moscow, Russian Federation
Abstract
The use of recombinant adenoviral (rAd) vectors for the production of vaccines against various diseases is an urgent task. Usually, rAd vaccines are highly immunogenic and do not require the use of adjuvants. However, in some cases, when antigen is secreted or cytoplasmic, need to increase the immunogenicity and protective properties of the vaccine. The introduction
Для корреспонденции
Седова Елена Сергеевна -кандидат биологических наук, научный сотрудник лаборатории молекулярной биотехнологии ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-6959-9988
of molecular adjuvants in the composition of rAd vaccines as an auxiliary substance has shown conflicting results and has not found widespread use. A more promising approach is the introduction of adjuvants into the composition of rAd vaccines as genetic constructs. The review considers various genetic constructs that enhance the immunogenicity and protective properties of vaccines based on rAd vectors against various infectious diseases.
Keywords: vaccines based on recombinant adenoviral vectors; molecular adjuvants; calreticulin; C4 binding protein; MHC-II associated invariant chain; ligand CD40L; cytokines; heat shock proteins; Toll-like receptor agonists
Received 16.11.2021. Accepted 19.01.2022.
For citation: Sedova E.S., Pervoykina K.A., Shcherbinin D.N., Shmarov M.M. Genetic constructs as adjuvants in vaccines based on adenoviral vectors. Immynologiya. 2022; 43 (1): 5-17. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-6-5-17 (in Russian)
Funding. The study had no sponsor support.
Conflict of interests. The authors declare no conflict of interests.
Authors' contribution. Writing the text - Sedova E.S., Shcherbinin D.N., editing and responsibility for the integrity of all parts of the article - Pervoikina K.A., approval of the final version of the article - Shmarov M.M.
For correspondence
Elena S. Sedova -PhD, Researcher of Laboratory of Molecular Biotechnology, N.F. Gamaleya FRCEM of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-6959-9988
Введение
Рекомбинантные аденовирусные векторы являются успешной платформой для создания различных вакцинных препаратов. Принцип создания таких вакцин заключается в том, что определенный ген или участок генома патогена встраивается в геном рекомбинант-ного аденовируса (rAd) человека или животного. При введении в организм rAd обеспечивает попадание генетического материала в клетки хозяина и экспрессию в них генов, кодирующих целевые антигены. В результате целевые антигены распознаются иммунной системой и индуцируют иммунный ответ против целевого патогена [1, 2].
В 2015 г. в России были зарегистрированы 2 первых вакцинных препарата на основе rAd человека - вакцины против вируса лихорадки Эбола «Гам-Эвак» и «Гам-Эвак Комби» [3]. В 2020 г. в России впервые в мире были зарегистрированы вакцинные препараты против новой коронавирусной инфекции SARS-CoV-2 [4] на основе rAd человека 5-го и 26-го серотипов (rAd5 и rAd26), несущих ген S-белка SARS-CoV-2: «Гам-Ковид-Вак» (Sputnik V), «Гам-Ковид-Вак Лио» и «Спутник Лайт» [5, 6]. В дальнейшем в мире были зарегистрированы еще 3 вакцины на основе rAd человека и шимпанзе против COVID-19 - заболевания, вызываемого SARS-CoV-2, - Ad5-nCov (CanSino Biologicals, Китай) [7], COVID-19 Ad26CovS1 (Johnson&Johnson/Jans-sen-Cilag, Нидерланды/США) [8] и ChAdOx1 nCoV-19 или Covishield (AstraZeneca plc/University of Oxford, Великобритания) [9].
Как известно, аденовирусы (Ad) способны эффективно активировать врожденный иммунный ответ, в том числе связываясь с Толл-подобным рецептором (TLR, Toll-like receptor) 9 [10]. Поэтому большинство исследователей полагают, что вакцины на основе rAd не нуждаются в адъювантах. Однако в некоторых случаях кандидатные вакцины на основе rAd-векторов все же не показали достаточную иммуногенность и/или протек-
тивность, они явно требуют различных способов ее повышения. Как правило, такая ситуация характерна для векторов, несущих секретируемые антигены различных патогенов (в частности, антигены малярийного плазмодия [11], Micobacterium tuberculosis [12] и др.). Кроме того, при создании Ad-вакцин широкого спектра действия против высокоизменчивых вирусов в качестве антигенов часто используют высококонсервативные внутренние вирусные белки, активирующие Т-клеточное звено иммунитета. В таких случаях также могут потребоваться адъюванты, способные усиливать активацию именно Т-клеточного звена.
Исследования последних 10-15 лет показали, что большинство адъювантов активируют антиген-презен-тирующие клетки (АПК) через рецепторы, распознающие патоген-ассоциированные молекулярные паттерны (patogene-associated molecular patterns - PAMP) или молекулярные паттерны, ассоциированные с повреждением клеток (damage-associated molecular patterns -DAMP). Чаще всего активация АПК адъювантами происходит через TLRs. По этой причине большинство используемых и изучаемых на сегодняшний момент молекулярных адъювантов представляют собой очищенные или синтетические агонисты TLR. Теоретически одновременная активация нескольких видов TLRs при введении в организм rAd в сочетании с молекулярными адъювантами должна существенно усиливать иммуногенность векторной вакцины. Однако работы на эту тему показали противоречивые результаты. Так, введение животным лиганда для TLR-3 Poly[I:C] синтетического двухцепочечного сополимера полиино-зиновой и полицитидиловой кислот или их комплекса с полилизином и карбоксиметилцеллюлозой (Poly[IC:LC]) в некоторых случаях усиливало иммуногенность вакцин на основе rAd и повышало активацию цитотокси-ческих Т-лимфоцитов [13-15], в некоторых случаях способствовало снижению ответов антиген-специфических Т-клеток [16], а также приводило к усилению или ингибированию Т-клеточных ответов в зависимости
от дозы rAd [17]. Введение лабораторным животным вакцин на основе rAd совместно с лигандами TLR4 в одних работах существенно увеличивало специфический клеточный иммунный ответ [16-19], тогда как в других работах приводило к очевидному снижению защиты [20]. Таким образом, стратегия введения в состав rAd-вакцин агонистов TLRs в качестве вспомогательного вещества пока не показала значительных успехов.
Исходя из вышесказанного, более перспективным нам видится введение различных молекулярных адъ-ювантов в состав векторов на основе rAd в качестве генетических конструкций. Они могут представлять собой как отдельный ген, кодирующий целевую иммуностимулирующую молекулу, так и генетическую конструкцию, кодирующую слитый белок, состоящий из целевого антигена и молекулярного адъюванта. Такой способ стимуляции иммунитета позволяет перенаправить иммунный ответ именно на целевой трансген, оказывая минимальное влияние на формирование иммунитета против самого rAd. Кроме того, некоторые исследования показывают, что стимуляция врожденного иммунитета векторным капсидом снижает экспрессию трансгена АПК в лимфатических узлах и, как следствие, приводит к ослаблению целевого иммунного ответа [21]. Таким образом, введение адъювантов в виде генетической конструкции в составе rAd позволит избежать нежелательного усиления иммунного ответа на rAd и неблагоприятного влияния на иммуногенность трансгена. Кроме того, в качестве адъювантов в составе вакцин на основе генетических конструкций можно использовать не только агонисты паттерн-распознающих рецепторов, но и последовательности, улучшающие презентацию антигена в комплексе с молекулами главного комплекса гистосовместимости (Major Histocompatibility Complex - MHC), позволяющие мультимеризовать се-кретируемые антигены и др.
1. Адъюванты, улучшающие презентацию антигена в комплексе с молекулами MHC
В этом разделе будут рассмотрены адъюванты, входящие в состав rAd-вакцин в виде генетических конструкций, улучшающих презентацию антигена иммунной системе. Примерами таких адъювантов являются кальретикулин [22-25], домен олигомеризации C4bp [26, 27] и инвариантная цепь, ассоциированная с MHC класса II [21, 27-34].
1.1. Кальретикулин в качестве адъюванта в составе rAd-вакцин
Кальретикулин - это высококонсервативный Ca2+-связывающий белок массой 60 кДа, который повсеместно встречается в клетках млекопитающих и преимущественно располагается в просвете эндо-плазматического ретикулума [35]. Кальретикулин выполняет различные биологические функции: шаперон-ная активность, регуляция гомеостаза Ca2+ и передача сигналов клеточной адгезии. Перенос кальретикулина из эндоплазматического ретикулума на поверхность
клетки является ключевым этапом в распознавании и удалении апоптотических клеток путем фагоцитоза [36]. На поверхности апоптотических клеток кальре-тикулин может распознаваться дендритными клетками (ДК) или другими АПК, что приводит к фагоцитозу апоптотических клеток. Показано, что кальретикулин на поверхности раковых клеток представлен в комплексе с антигеном рака молочной железы муцином 1 (MUC1), а ДК, трансдуцированные rAd, экспрессирующим генетическую конструкцию MUd-кальретикулин, активировали пролиферацию Т-клеток и продукцию цитоки-нов [22]. Адъювантные свойства кальретикулина также определяются его способностью связываться с молекулами MHC класса I. Кальретикулин взаимодействует с Р2-микроглобулином в молекулах MHC и является частью комплекса, включающего также транспортер, связанный с процессингом антигена (TAP). Кальрети-кулин напрямую связывает антигенные пептиды при их транспорте в просвет эндоплазматического ретикулума. Кроме того, внеклеточный кальретикулин, связанный с пептидными антигенами, может захватываться АПК, что также приводит к презентации антигенов в комплексе с MHC класса I и стимуляции CD8+-Т-клеток (рис. 1) [37].
Кальретикулин был использован в качестве адъ-юванта при разработке противоопухолевой вакцины на основе rAd5. Такой Ad экспрессировал ген слитого с кальретикулином онкобелка папилломавируса человека HPV-17 E7 и использовался в качестве буста при праймировании вектором на основе Lactococcus lactis, также экспрессирующим ген E7. В результате такая стратегия вакцинации была признана эффективной и способной индуцировать клеточно-опосредованную цитотоксичность [23].
Также были описаны rAd, экспрессирующие генетическую конструкцию, кодирующую антиген M. tuberculosis, слитый с кальретикулином [24], и генетическую конструкцию, кодирующую слитый с кальретикулином поверхностный антиген вируса гепатита B (HBV) [25].
1.2. C4-связывающий белок в качестве адъюванта в составе rAd-вакцин
C4-связывающий белок (C4bp - С4 binding protein) -это белок плазмы крови, действующий как ингибитор комплемента и представляющий собой олигомер с центральной ножкой и семью разветвленными а-цепями. При слиянии с целевыми антигенами C4bp может обеспечивать их олигомеризацию (рис. 2), увеличивая время циркуляции антигена и повышая его иммуноген-ность [37].
Так, иммунизация мышей высококонсервативным поверхностным белком Neisseria gonorrhoeae MtrE, слитым с олигомеризующим доменом C4bp, приводила к индукции высоких титров антител, способных распознавать MtrE, экспрессируемый на поверхности N. gonorrhoeae, и проявляющих высокую MtrE-зави-симую бактерицидную активность [38]. Кандидатная ДНК-вакцина, несущая гены секретируемых E1 и E2
Рис. 1. Механизм действия кальретикулина в качестве адъюванта
1 - взаимодействие антигена, слитого с кальретикулином, с В-клеточным рецептором; 2 - слитый белок кальретикулин-анти-ген транспортируется в антиген-презентирующую клетку (АПК) посредством связывания с поверхностным рецептором (например СБ91) и способствует высвобождению антигена из эндосом в цитозоль, после чего антигены разрушаются и транспортируются в просвет эндоплазматического ретикулума (ЭПР) в комплексе с молекулами МНС класса I (МНС-1).
Рис. 2. Механизм действия С4-связывающего белка в качестве адъюванта
Домен олигомеризации С4Ьр при слиянии с антигеном образует антиген-гептамеры. 1 - представление гептамерного белка-мишени В-клеткам; 2 - гептамеры, попавшие в АПК, разлагаются в кислых эндосомах и презентируются в комплексе с молекулами МНС класса II (МНС-11) на поверхности АПК СБ4+-Т-клеткам; 3 - антигенный комплекс покидает эндосомы и перекрестно презентируется в комплексе с молекулами МНС класса I (МНС-1) СВ8+-Т-клеткам.
(бЕ1 и бЕ2) белков оболочки вируса гепатита С (ИСУ), собирающихся в олигомеры путем слияния с доменом олигомеризации С4Ь, эффективно индуцировала гуморальный и клеточный иммунный ответ против белков оболочки вируса, а также способствовала выработке вирус-нейтрализующих антител [39].
ЯА^ несущие гены антигенов малярийного плазмодия, слитых с олигомеризующим доменом С4Ьр, были способны эффективно индуцировать как гуморальный, так и клеточный иммунный ответ, превышающий иммунный ответ на антигены малярийного плазмодия, не связанные с олигомеризующим доменом С4Ьр [26, 27]. Однако, согласно этим публикациям, олигомери-зующий домен С4Ьр повышает иммуногенность не всех антигенов, поэтому объяснить адъювантные свойства С4Ьр только способностью к олигомеризации нельзя [26, 27].
1.3. MHC-П-ассоциированная инвариантная цепь в качестве адъюванта в составе rAd-вакцин
Инвариантная цепь (И) представляет собой интегральный мембранный белок типа II, который временно ассоциируется с МНС класса II во время синтеза в эн-доплазматическом ретикулуме. Там происходит обмен части И, известной как СЫР-пептид, на фрагмент антигена. Образовавшийся комплекс пептид-МНС-П транспортируется в клеточную мембрану, где фрагмент антигена презентируется иммунной системе в комплексе с МНС класса II [37] (рис. 3).
В 2008 г. P.J. Holst и соавт. впервые использовали Ii в качестве генетического адъюванта в составе rAd-вакцины [28], причем они обнаружили улучшение презентации антигена как в комплексе с MHC класса II, так и в комплексе с MHC класса I, что приводило к повышению клеточного иммунитета [28]. С тех пор Ii использовалась в целом ряде кандидатных вакцин против различных патогенов [29-34]. Кандидатная вакцина на основе rAd, экспрессирующего ген гликопротеина вируса лимфоцитарного хориоменингита (Lymphocytic Choriomeningitis Virus - LCMV), слитого с Ii, стимулировала образование CD4+- и CD8+-Т-клеток in vitro и in vivo. Кроме того, иммунизированные кандидат-ной вакциной мыши были защищены от летального вирус-индуцированного хориоменингита и системной инфекции высокоинвазивным штаммом. При терапевтической противоопухолевой вакцинации кандидат-ная rAd-вакцина показала ту же эффективность, что и вакцина на основе аттенуированного LCMV. При этом животные, вакцинированные rAd, экспрессиру-ющим немодифицированный гликопротеин LCMV, хоть и были защищены от системной инфекции, но защита от летального хориоменингита была временной, а эффективность при терапии опухолей существенно снижена [29].
RAd шимпанзе в сочетании с рекомбинантным вирусом осповакцины, несущие ген малярийного антигена ME-TRAP, слитый с Ii, показали способность индуцировать высокие уровни как CD4+-, так и CD8+-T-
Рис. 3. Механизм действия инвариантной цепи И в качестве адъюванта
Антиген, слитый с И, образует тримерный комплекс, связывающийся с молекулами МНС класса II (МНС-11). К презентации антигенов в комплексе с МНС-11 приводят 2 пути: 1 - прямой транспорт в эндосомы, где антиген переносится к МНС-11; 2 - непрямой транспорт через транс-отдел комплекса Гольджи к внешней мембране АПК. Отсюда комплекс интернализуется и повторно попадает на путь презентации антигена. 3 - целевой антиген дополнительно способен презентироваться в комплексе с молекулами МНС класса I (МНС-1) в результате убиквитинилирования и разрезания иммунопротеасомами.
клеточного иммунного ответа у лабораторных мышей. Исследования на приматах подтвердили способность Ii увеличивать уровни ME-TRAP-специфических CD8+-и CD4+-T-KreTOK примерно в 6 и в 2 раза, соответственно, по сравнению с рекомбинантными векторами, не содержащими Ii [30].
Иммунизация обезьян rAd, несущим гены вируса иммунодефицита обезьян (SIV) tat, vif, rev и vpr, слитые с геном Ii, вызывала индукцию Т-клеточного иммунитета и приводила к частичной защите от заражения [31].
Кандидатная вакцина широкого спектра действия против HPV разработана на основе консервативных последовательностей белков E1 и E2 из существующих онкогенных штаммов HPV. Вакцина представляет собой rAd шимпанзе, несущий генетическую последовательность, кодирующую белок слияния, состоящий из E1 и E2, а также человеческой инвариантной цепи изо-формы 2 (HIi2). Кандидатная вакцина показала свою эффективность на мышах и макаках [21].
Ad шимпанзе 3-го серотипа (ChAd3) и модифицированный вектор MVA, несущие генетическую последовательность, кодирующую Ii человека, слитую с неструктурными антигенами (NS) HCV, применялись у людей в режиме гетерологичной прайм-буст-иммунизации. Кандидатная вакцина хорошо переносилась и увеличивала пролиферативную активность Т-лимфоцитов, пиковую величину и широту и Т-клеточного иммунного ответа против HCV по сравнению с вакциной, в состав которой Ii не входила. В модели на мышах и в экспериментах in vitro было показано, что Ii, слитая с NS, увеличивает иммунный ответ на HCV за счет усиленного убиквитинирования и протеасомной деградации [32].
Однако следует отметить, что, согласно литературным данным, применение полноразмерной Ii человека в качестве адъюванта может привести к образованию аутоиммунных антител. Было показано, что антитела к CLIP-домену инвариантной цепи человека ассоциированы с осевым спондилитом [40], поэтому безопасность применения Ii человека в качестве молекулярного адъюванта находится под вопросом. Для решения этой проблемы были разработаны 2 стратегии: применение усеченного варианта Ii, а также использование инвариантной цепи, происходящей из других организмов. Оказалось, что для сохранения адъювантных свойств и эффективной активации Т-клеточного иммунитета было достаточно трансмембранного домена Ii, состоящего всего из 26 аминокислотных остатков. Было показано, что активация у мышей CD8+-Т-клеточного ответа на малярийный антиген с помощью rAd, несущего ген малярийного антигена, слитого с трансмембранным доменом Ii, была в 2-3 раза выше, чем индуцированная с помощью полноразмерной Ii. Также было показано, что включение в состав rAd участков Ii форели, акулы и курицы приводило к индукции высоких уровней ОТ8+-Т-клеточного ответа [33].
К настоящему времени на стадии клинических испытаний безопасности находится кандидатная вакцина от малярии на основе rAd шимпанзе и рекомбинантного
MVA, несущие генетическую конструкцию, кодирующую антиген малярийного плазмодия LS2, слитый с трансмембранным доменом Ii акулы (ClinicalTrials.gov Identifier: NCT03203421). На II фазе клинических испытаний находится вакцина против HCV на основе rAd шимпанзе и рекомбинантного MVA, несущих гены антигенов HCV и Ii человека (ClinicalTrials.gov Identifier: NCT03688061).
1.4. MHC-II-ассоциированная инвариантная цепь с сайтом разрезания для фуриновой протеазы
в качестве адъюванта в составе rAd-вакцин
Во всех исследованиях, описанных ранее, научные коллективы стремились с помощью слияния целевого антигена с Ii увеличить Т-клеточный ответ на канди-датную вакцину. Однако было показано, что Ii может существенно улучшать и антительный иммунный ответ при отсутствии ее влияния на правильную укладку антигена.
Антиген, связанный с Ii, может как презентироваться в комплексе с молекулами MHC класса II, так и транспортироваться через комплекс Гольджи в виде три-мера на поверхность клетки. Если в состав белка слияния включить сайт разрезания фуриновой протеазой, то в комплексе Гольджи происходит разрезание пептида слияния и отделение тримеризующего домена, связанного с антигеном, от инвариантной цепи. Далее тример целевого антигена будет секретироваться во внеклеточный компартмент. Это повысит доступность антигена для В-клеток, при этом сохранится увеличение уровня презентации антигена в комплексе с молекулами MHC класса II и MHC класса I [37] (рис. 4).
Действительно, при включении в состав белка слияния, несущего антигены Plasmodium falciparum и Ii, сайта разрезания для фуриновой протеазы, rAd, экспрессиру-ющий генетическую конструкцию, кодирующую такой белок слияния, значительно увеличивал способность индуцировать образование антител к целевым антигенам с сохранением всех адъювантных свойств Ii [34].
1.5. Лиганд CD40L в качестве адъюванта в составе rAd-вакцин
Лиганд CD40 (CD40L), мембранный белок типа II, является ключевой костимулирующей молекулой и важным регулятором иммунной системы. Эта молекула быстро экспрессируется на активированных CD4+-Т-клетках. Рецептор CD40L - молекула CD40 - представлена на всех АПК. Взаимодействие рецептора CD40 с его лигандом индуцирует активацию АПК [37].
Таким образом, молекула CD40L обладает потенциальными адъювантными свойствами. Показана ее эффективность в составе векторных вакцин, экспрес-сирующих секретируемые антигены, слитые с CD40L, что позволяет направить секретируемый антиген в АПК и эффективно их активировать. Потенциал CD40L как молекулярного адъюванта был исследован различными научными группами, в том числе в составе генетических конструкций, кодирующих целевые антигены, слитые с CD40L и экспрессируемые rAd.
Рис. 4. Механизм действия инвариантной цепи с сайтом расщепления для фуриновой протеазы П-йшп в качестве адъюванта 1 - интеграция сайта расщепления в инвариантной цепи (В) не влияет на прямой путь презентации антигена в комплексе с молекулой МНС класса II (МНС-11); 2 - при непрямом пути презентации молекула И расщепляется в транс-отделе комплекса Гольджи резидентной фуриновой эндопротеазой. Антиген, связанный с последовательностью тримеризации И, высвобождается в виде тримера во внеклеточное пространство, где встречается с В-клетками и индуцирует образование антител. 3 - целевой антиген дополнительно способен презентироваться в комплексе с молекулой МНС класса I (МНС-I) в результате убиквитинилирова-ния и разрезания иммунопротеасомами.
Так, показал свою эффективность и способность индуцировать иммунный ответ широкого спектра действия гА^ экспрессирующий секретируемую НА2-субъединицу гемагглютинина вируса гриппа, слитую с лигандом СБ40Ь мыши [41]. экспрессирующий генетическую конструкцию, кодирующую слитый белок, состоящий из глобулярного эктодомена 8-белка коронавируса ближневосточного респираторного синдрома (МЕЯ8-СоУ) и СБ40Ь мыши, продемонстрировал существенное повышение иммуногенности по сравнению с гА^ лишенным СБ40Ь, и показал свою эффективность даже при однократной иммунизации. При этом кандидатная вакцина обеспечивала полную защиту животных от гибели после заражения МЕЯЕ-СоУ, предотвращала репликацию вируса, а также моно-цитарную и лимфоцитарную инфильтрацию легких по сравнению с контрольной группой [42].
2. Цитокины в качестве адъювантов в составе гЛ^вакцин
Цитокины - это небольшие белки, предназначенные для передачи сигналов иммунными клетками. Цитокины являются многообещающими кандидатами в качестве адъювантов в составе генетических вакцин.
Умеренная и устойчивая экспрессия цитокинов, ограниченная местом инъекции генетической вакцины, помогает добиться длительной циркуляции цитокинов, обладающих коротким периодом полужизни, сводя к минимуму риск системного «цитокинового шторма». В качестве адъювантов для вакцин на основе генетических конструкций цитокины сначала начали использоваться в составе ДНК-вакцин. Например, интерлейкин(ИЛ)-2, индуцирующий пролиферацию Т- и НК-клеток, показал свои адъювантные свойства в составе Д НК-вакцины против Mycoplasma pneumoniae [43] и хронической миелоидной лейкемии [44]. ИЛ-12 -провоспалительный цитокин, секретируемый ДК и моноцитами, использовался в качестве адъюванта в составе кандидатных ДНК-вакцин против инфекции Yersinia pestis [45], HBV [46], HCV [47], Toxoplasma gondii [48] и ВИЧ [49]. ИЛ-15 индуцирует пролиферацию НК- и T-клеток. Синергический адъювантный эффект ИЛ-15 и ИЛ-21 был использован в ДНК-вакцине против инфекции T. gondii [50]. Последовательное введение в состав ДНК-вакцины против ящура генов, кодирующих ИЛ-6, ИЛ-7 и ИЛ-15, усиливало образование СБ4+-Т-клеток [51]. Гранулоцитарно-макро-фагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ) рекрутирует АПК в сайт иммунизации, способствует
созреванию ДК и успешно использовался в составе кан-дидатных ДНК-вакцин, в том числе против вируса иммунодефицита обезьян [52, 53].
Введение в состав rAd-вакцин генов, кодирующих различные цитокины, тоже описано в литературе, хотя оно встречается реже, чем их введение в состав в ДНК-вакцин. Так, при иммунизации макак реплицирующимся одноцикловым rAd, экспрессирующим гены антигенов ВИЧ, дополнительное введение rAd, экспрессирующих гены, кодирующие белок 4-1BBL, являющийся рецептором АПК, ГМ-КСФ, ИЛ-21 или фрагменты токсина Clostridoides difficile, приводило к усилению гуморального иммунного ответа [54]. Интраназальная иммунизация мышей rAd, экспрессирующими гены антигенов вируса гриппа А гемагглютинина и нуклеопротеина, в комбинации с векторами на основе rAd, экспрессиру-ющими гены, кодирующие ИЛ-ip и ИЛ-18, значительно увеличила иммуногенность rAd-вакцин, особенно муко-зальный гуморальный иммунный ответ [55].
3. Белки теплового шока в качестве адъювантов в составе rAd-вакцин
Белки теплового шока (HSP - Heat Shock Protein) наиболее известны своей функцией шаперонов, помогающих в правильном сворачивании белков, особенно во время клеточного стресса. HSP играют роль в доставке антигенов к молекулам MHC класса I и их презентации Т-клеткам [56]. Механизм влияния HSP на презентацию антигена в комплексе с молекулами MHC аналогичен действию кальретикулина (см. рис. 1).
Также они способны активировать TLR4 [57], т. е. вполне подходят на роль молекулярных адъювантов. Показано, что интраназальная иммунизация мышей гибридным белком, представляющим собой слитый белок из четырех эктодоменов ионного канала вируса гриппа М2 и белка теплового шока Hsp70 M. tuberculosis 4M2e-mHsp70, вызывала значимые уровни гуморального и клеточного иммунного ответа, причем Т-клеточный ответ имел Thl-направленость с последующим усилением продукции интерферона(ИФН)-у, IgG и IgA [58]. Таким образом, создание вирусных векторов, несущих генетические конструкции, кодирующие слитые белки, включающие антигены-мишени и молекулами HSP, перспективно с точки зрения разработки эффективных вакцинных препаратов. Введение различных антигенов, слитых с HSP, мышам, сначала в виде рекомбинантных белков [59, 60], а позже в составе ДНК-векторов [61], продемонстрировало увеличение уровней гуморального и клеточного иммунного ответа по сравнению с введением антигенов без слияния с HSP.
L. Cheng и соавт. сконструировали rAd, экспрес-сирующий генетическую конструкцию, кодирующую C-концевой участок Hsp70 (Hsp70C), слитый с С-концом белка S0.7 вируса Хантаан. По сравнению с rAd, экспрессирующим только S0.7, без Hsp70C, добавление HSP увеличивало титр вирус-нейтрализую-щих антител и существенно улучшало протективные свойства rAd. При этом Т-клеточный ответ был сдвинут
в сторону Thl-клеток, секретировавших ИФН-у и ИЛ-2, но не ИЛ-4 и ИЛ-10 [62]. RAd, несущие гены антигенов возбудителя африканской чумы свиней, слитые с фла-геллином FlaB из Vibrio vulnicus или белком теплового шока Hsp70 M. tuberculosis (mHsp70), при иммунизации свиней показали значительно более высокие уровни антиген-специфического IgA в носовых смывах, смывах из трахеи и легких, чем при иммунизации rAd, несущим только гены антигенов возбудителя африканской чумы свиней. По сравнению с иммунизацией rAd-Flab-Fl, иммунизация rAd-F1-Hsp70 индуцировала значительно более высокие уровни IgA на слизистых оболочках. При этом уровни IgA коррелировали с присутствием в легочном лаваже животных ИЛ-4, ИЛ-10 и ИФН-а [63].
4. Агонист ^R5 флагеллин в качестве адъюванта в составе rAd-вакцин
Флагеллин, компонент жгутиков бактерий, является лигандом для TLR5 и вызывает большой интерес в качестве адъюванта в составе генетических вакцин, так как его просто экспрессировать, в том числе с помощью rAd. К тому же он стабильно и эффективно активирует врожденный иммунный ответ. Высокий уровень экспрессии TLR5 на поверхности эпителиальных клеток легких, кишечника, моноцитов/макрофагов и ДК позволяет флагеллину быть эффективным адъювантом для активации иммунного ответа на слизистых оболочках. Кроме уже упомянутой работы H. Lu и соавт. [63], был проведен ряд других исследований о возможности использования флагеллина в качестве адъюванта в составе rAd-вакцин. Показано, что rAd, несущий генетическую конструкцию, кодирующую гликопротеин вируса бешенства, слитый с флагеллином Salmonella typhimurium (FliC), при внутримышечном, но не пероральном введении, вызывал более сильные иммунный ответ и обеспечивал более высокий уровень защиты от бешенства, чем rAd, экспрессирующий только ген гликопротеина вируса бешенства [64]. Однако H.F. Rady и соавт. продемонстрировали, что при прайм-буст-иммунизации мышей ДНК или аденовирусным вектором, несущим ген, кодирующий антиген M. tuberculosis Ag85A, введение в состав ДНК или rAd гена, кодирующего FliC, слитый с антигеном, приводит к появлению очагов воспаления в легких и временной потере массы тела иммунизированных животных, а также к заметному снижению уровней CD4+- и СБ8+-Т-клеточного ответа на слизистой при применении схемы прайм-буст-иммунизации (внутримышечное введение ДНК-вектора/интраназальное введение rAd). Эти данные показывают, что адъювант-ная активность флагеллина сильно зависит от способа введения и состава генетической вакцины, а его включение в состав генетических вакцин может приводить к появлению нежелательных побочных эффектов [65].
Заключение
В данном обзоре описывается введение адъювантов в состав rAd-вакцин в качестве генетических конструкций. Здесь рассматриваются различные генетические
конструкции, способствующие повышению иммуно-генности и защитных свойств вакцин против инфекционных заболеваний. Основными типами таких «генетических» адъювантов являются молекулы, улучшающие презентацию антигена иммунным клетками в комплексе с молекулами MHC (кальретикулин, C4-связывающий белок, MHC-II-ассоциированная инвариантная цепь, лиганд CD40L), молекулы, стимулирующие иммунные клетки (цитокины), а также молекулы, активирующие паттерн-распознающие рецепторы врожденного иммунного ответа (белки теплового шока, лиганды TLRs).
Все эти молекулы показали себя достаточно перспективными в качестве адъювантов в виде генетических конструкций, включенных в состав rAd. Однако очень часто их эффективность зависит от свойств самого антигена и патогена, вводимой при иммунизации дозы rAd и др. Таким образом, невозможно признать какой-либо из описываемых подходов универсальным, для каждой разрабатываемой вакцины на основе rAd необходимо проводить подбор генетической конструкции, способной повысить ее иммуногенность и вызвать активацию необходимого для данной вакцины звена иммунитета.
■ Литература
1. Шмаров М.М., Никонова А.Э., Седова Е.С., Логунов Д.Ю. Рекомбинантные аденовирусы человека как платформа для создания новых эффективных и безопасных вакцин. Педиатрия. Журнал имени Г.Н. Сперанского. 2020; 99 (6): 52-6.
2. Шмаров М.М., Седова Е.С., Никонова А.Э., Елаков А.Л. и др. Иммуногенные и защитные свойства рекомбинантного аденовируса человека 5-го серотипа, экспрессирующего ген гликопротеина G вируса бешенства вакцинного штамма РВ-97. Иммунология. 2020, 41 (4): 312-325. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2020-41-4-312-325
3. Dolzhikova I.V., Zubkova O.V., Tukhvatulin A.I., Dzharul-laeva A.S. et al. Safety and immunogenicity of GamEvac-Combi, a heterologous VSV- and Ad5-vectored Ebola vaccine: an open phase I/II trial in healthy adults in Russia. Hum. Vaccin. Immunother. 2017; 13 (3): 613-20. DOI: https://doi.org/10.1080/21645515.2016.1238535
4. Гудима Г.О., Хаитов Р.М., Кудлай Д.А., Хаитов М.Р. Моле-кулярно-иммунологические аспекты диагностики, профилактики и лечения коронавирусной инфекции. Иммунология. 2021; 42 (3): 198-210. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-3-198-210
5. Logunov D.Y., Dolzhikova I.V., Zubkova O.V., Tukhvatullin A.I. et al. Safety and immunogenicity of an rAd26 and rAd5 vector-based heterologous prime-boost COVID-19 vaccine in two formulations: two open, non-randomised phase 1/2 studies from Russia. Lancet. 2020; 396 (10 255): 887-97. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)31866-3
6. Logunov D.Y., Dolzhikova I.V., Shcheblyakov D.V., Tukhvatulin A.I. et al. Safety and efficacy of an rAd26 and rAd5 vector-based heterologous prime-boost COVID-19 vaccine: an interim analysis of a randomised controlled phase 3 trial in Russia. Lancet. 2021; 397 (10 275): 671-81. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(21)00234-8
7. Zhu F.C., Li Y.H., Guan X.H., Hou L.H. et al. Safety, tolerabil-ity, and immunogenicity of a recombinant adenovirus type-5 vectored COVID-19 vaccine: a dose-escalation, open-label, non-randomised, firstin-human trial. Lancet. 2020; 395 (10 240): 1845-54. DOI: https://doi. org/10.1016/S0140-6736(20)31208-3
8. Solforosi L., Kuipers H., Jongeneelen M., Rosendahl Huber S.K. et al. Immunogenicity and efficacy of one and two doses of Ad26.COV2.S COVID vaccine in adult and aged NHP. J. Exp. Med. 2021; 218 (7): e20202756. DOI: https://doi.org/10.1084/jem.20202756
9. ChAdOx1-S vaccine for prevention of COVID-19. Aust. Prescr. 2021; 44 (2): 59-61. DOI: https://doi.org/10.18773/austprescr.2021.012
10. Atasheva S., Yao J., Shayakhmetov D.M. Innate immunity to ad-enovirus: lessons from mice. FEBS Lett. 2019; 593 (24): 3461-83. DOI: https://doi.org/10.1002/1873-3468.13696
11. Hollingdale M.R., Sedegah M., Limbach K. Development of replication-deficient adenovirus malaria vaccines. Expert Rev. Vaccines. 2017; 16 (3): 261-71. DOI: https://doi.org/10.1080/14760584.2016.1228 454
12. Afkhami S., Yao Y., Xing Z. Methods and clinical development of adenovirus-vectored vaccines against mucosal pathogens. Mol Ther Methods Clin Dev. 2016; 27 (3): 16030. DOI: https://doi.org/10.1038/ mtm.2016.30
13. Li L., Petrovsky N. Molecular mechanisms for enhanced DNA vaccine immunogenicity. Expert Rev. Vaccines. 2016; 15 (3): 313-29. DOI: https://doi.org/10.1586/14760584.2016.1124762
14. Diaz-San Segundo F., Dias C.C., Moraes M.P., Weiss M. et al. Poly ICLC increases the potency of a replication-defective human adenovi-
rus vectored foot-and-mouth disease vaccine. Virology. 2014; 468: 283-92. DOI: https://doi.org/10.1016/j.virol.2014.08.012
15. Erdos G., Balmert S.C., Carey C.D., Falo G.D. et al. Improved cutaneous genetic immunization by microneedle array delivery of an adju-vanted adenovirus vaccine. J. Invest. Dermatol. 2020; 140 (12): 2528-31. DOI: https://doi.org/10.1016/jjid.2020.03.966
16. Rhee E.G., Kelley R.P., Agarwal I., Lynch D.M. et al. TLR4 li-gands augment antigen-specific CD8+ T lymphocyte responses elicited by a viral vaccine vector. J. Virol. 2010; 84 (19): 10 413-9. DOI: https://doi. org/10.1128/JVI.00928-10
17. Lebedeva E., Bagaev A., Pichugin A., Chulkina M. et al. The differences in immunoadjuvant mechanisms of TLR3 and TLR4 agonists on the level of antigen-presenting cells during immunization with recombinant adenovirus vector. BMC Immunol. 2018; 19 (1): 26. DOI: https://doi. org/10.1186/s12865-018-0264-x
18. Багаев А.В., Пичугин А.В., Лебедева E.C, Лысенко А. А. и др. Влияние TLR-агонистов на экспрессию в антигенпрезентирующих клетках целевого белка-антигена, закодированного в аденовирусном вектор. Иммунология. 2015; 36 (4): 188-95.
19. Багаев А.В., Рыбинец А.С., Федорова А.А., Ушакова E.H. и др. Синергизм агонистов TLR3 и TLR4 при перепрограммировании макрофагов в противоопухолевое состояние. Иммунология. 2021; 42 (6): 615-630. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-6-615-630
20. Milicic A., Rollier C.S., Tang C.K., Longley R. et al. Adjuvanting a viral vectored vaccine against pre-erythrocytic malaria. Sci. Rep. 2017; 7 (1): 7284. DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-017-07246-0
21. Ragonnaud E., Andersson A.C., Mariya S., Pedersen A.G. et al. Therapeutic vaccine against primate papillomavirus infections of the Cervix. J. Immunother. 2017; 40 (2): 51-61. DOI: https://doi.org/10.1097/ CJI.0000000000000153
22. Wang J., Gao Z.P., Qin S., Liu C.B. et al. Calreticulin is an effective immunologic adjuvant to tumor-associated antigens. Exp. Ther. Med. 2017; 14 (4): 3399-406. DOI: https://doi.org/10.3892/etm.2017.4989
23. Rangel-Colmenero B.R., Gomez-Gutierrez J.G., Villatoro-Hernández J., Zavala-Flores L.M. et al. Enhancement of Ad-CRT/E7-me-diated antitumor effect by preimmunization with L. lactis expressing HPV-16 E7. Viral Immunol. 2014; 27 (9): 463-7. DOI: https://doi.org/10.1089/ vim.2014.0055
24. Esparza-González S.C., Troy A., Troudt J., Loera-Arias M.J. et al. Recombinant adenovirus delivery of calreticulin-ESAT-6 produces an antigen-specific immune response but no protection against a Mycobac-terium tuberculosis challenge. Scand. J. Immunol. 2012; 75 (3): 259-65. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1365-3083.2011.02655.x
25. Ma C.-L., Wang G.-B., Gu R.-G., Wang F. Construction and characterization of calreticulin-HBsAg fusion gene recombinant adenovirus expression vector. World J. Gastroenterol. 2010; 16: 3078-82. DOI: https:// doi.org/10.3748/wjg.v16.i24.3078
26. Draper S.J., Moore A.C., Goodman A.L., Long C.A. et al. Effective induction of high-titer antibodies by viral vector. Nat. Med. 2008; 14: 819-21. DOI: https://doi.org/10.1038/nm.1850
27. Forbes E.K., de Cassan S.C., Llewellyn D., Biswas S. et al. T cell responses induced by adenoviral vectored vaccines can be adju-vanted by fusion of antigen to the oligomerization domain of C4b-binding
protein. PLoS One. 2012; 7: e44943. DOI: https://doi.org/10.1371/journal. pone.0044943
28. Holst P.J., Sorensen M.R., Mandrup Jensen C.M., Orskov C. et al. MHC class II-associated invariant chain linkage ofantigen dramatically improves cell-mediated immunity induced by adenovirus vaccines. J. Immunol. 2008; 180: 3339-46. DOI: https://doi.org/10.4049/jimmu-nol.180.5.3339
29. Holst P.J., Christensen J.P., Thomsen A.R. Vaccination against lymphocytic choriomeningitis virus infection in MHC class II-deficient mice. J. Immunol. 2011; 186: 3997-4007. DOI: https://doi.org/10.4049/ jimmunol.1001251
30. Spencer A.J., Cottingham M.G., Jenks J.A., Longley R.J. et al. Enhanced vaccine-induced CD8+ T cell responses to malaria antigen ME-TRAP by fusion to MHC class ii invariant chain. PLoS One. 2014; 9 (6): e100538. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0100538
31. Xu H., Andersson A.M., Ragonnaud E., Boilesen D. et al. Mucosal vaccination with heterologous viral vectored vaccine targeting subdominant SIV accessory antigens strongly inhibits early viral replication. EBioMedicine. 2017; 18: 204-15. DOI: https://doi.org/10.1016/j. ebiom.2017.03.003
32. Esposito I., Cicconi P., D'Alise A.M., Brown A. et al. MHC class II invariant chain-adjuvanted viral vectored vaccines enhances T cell responses in humans. Sci. Transl. Med. 2020; 12 (548): eaaz7715. DOI: https://doi.org/10.1126/scitranslmed.aaz7715
33. Halbroth B.R., Sebastian S., Poyntz H.C., Bregu M. et al. Development of a molecular adjuvant to enhance antigen-specific CD8+ T cell responses. Sci. Rep. 2018; 8 (1): 15020. DOI: https://doi.org/10.1038/ s41598-018-33375-1
34. Fougeroux C., Turner L., Bojesen A.M., Lavstsen T. et al. Modified MHC class II-associated invariant chain induces increased antibody responses against plasmodium falciparum antigens after adenoviral vaccination. J. Immunol. 2019; 202 (8): 2320-31. DOI: https://doi.org/10.4049/ jimmunol.1801210
35. Verneret M., Tacnet-Delorme P., Osman R., Awad R. et al. Relative contribution of c1q and apoptotic cell-surface calreticulin to macrophage phagocytosis. J. Innate Immun. 2014; 6: 426-34. DOI: https://doi. org/10.1159/000358834
36. Kuraishi T., Manaka J., Kono M., Ishii H. et al. Identification of calreticulin as a marker for phagocytosis of apoptotic cells in Drosophila. Exp. Cell Res. 2007; 313: 500-10. DOI: https://doi.org/10.1016/j.yex-cr.2006.10.027
37. Neukirch L., Fougeroux C., Andersson A.C., Holst P.J. The potential of adenoviral vaccine vectors with altered antigen presentation capabilities. Expert Rev. Vaccines. 2020; 19 (1): 25-41. DOI: https://doi.org/10. 1080/14760584.2020.1711054
38. Wang S., Xue J., Lu P., Ni C. et al. Gonococcal MtrE and its surface-expressed Loop 2 are immunogenic and elicit bactericidal antibodies. J. Infect. 2018; 77 (3): 191-204. DOI: https://doi.org/10.1016/j. jinf.2018.06.001
39. Masavuli M.G., Wijesundara D.K., Underwood A., Christiansen D. et al. A hepatitis C virus DNA vaccine encoding a secreted, oligomerized form of envelope proteins is highly immunogenic and elicits neutralizing antibodies in vaccinated mice. Front. Immunol. 2019; 10: 1145. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2019.01145
40. Baerlecken N.T., Nothdorft S., Stummvoll G.H., Sieper J. et al. Autoantibodies against CD74 in spondylarthritis. Ann. Rheum. Dis. 2014; 73 (6): 1211-4. DOI: https://doi.org/10.1136/annrheumdis-2012-202208
41. Fan X., Hashem A. M., Chen Z., Li C. et al. Targeting the HA2 subunit of influenza A virus hemagglutinin via CD40L provides universal protection against diverse subtypes. Mucosal Immunol. 2015; 8 (1): 211-20. DOI: https://doi.org/10.1038/mi.2014.59
42. Hashem A.M., Algaissi A., Agrawal A.S., Al-Amri S.S. Highly immunogenic, protective, and safe adenovirus-based vaccine expressing Middle East respiratory syndrome coronavirus S1-CD40L fusion protein in a transgenic human dipeptidyl peptidase 4 mouse model. J. Infect. Dis. 2019; 220 (10): 1558-67. DOI: https://doi.org/10.1093/infdis/jiz137
43. Zhu C., Yu M., Gao S., Zeng Y. et al. Protective immune responses induced by intranasal immunization with Mycoplasma pneumoniae P1C-IL-2 fusion DNA vaccine in mice. Chin. J. Cell. Mol. Immunol. 2013; 29 (6): 585-8.
44. Qin Y., Tian H., Wang G., Lin C. et al. A BCR/ABL-hIL-2 DNA vaccine enhances the immune responses in BALB/c mice. Biomed. Res. Int. 2013; 2013: 136492. DOI: https://doi.org/10.1155/2013/136492
45. Yamanaka H., Hoyt T., Yang X., Golden S. et al. A nasal interleu-kin-12 DNA vaccine coexpressing Yersinia pestis F1-V fusion protein confers protection against pneumonic plague. Infect. Immun. 2008; 76 (10): 4564-73. DOI: https://doi.org/10.1128/IAI.00581-08
46. Yang S.H., Lee C.G., Park S.H., Im S.J. et al. Correlation of antiviral T-cell responses with suppression of viral rebound in chronic hepatitis B carriers: a proof-of-concept study. Gene Ther. 2006; 13 (14): 1110-7. DOI: https://doi.org/10.1038/sj.gt.3302751
47. Naderi M., Saeedi A., Moradi A., Kleshadi M. et al. Interleukin-12 as a genetic adjuvant enhances hepatitis C virus NS3 DNA vaccine immu-nogenicity. Virol. Sin. 2013; 28 (3): 167-73. DOI: https://doi.org/10.1007/ s12250-013-3291-z
48. Zhao H.G., Huang F. Y., Guo J.L., Tan G.H. Evaluation on the immune response induced by DNA vaccine encoding MIC8 co-immunized with IL-12 genetic adjuvant against Toxoplasma gondii infection. Zhong-guo ji sheng chong xue yu ji sheng chong bing za zhi = Chinese Journal of Parasitology & Parasitic Diseases. 2013; 31 (4): 284-9.
49. Kalams S.A., Parker S.D., Elizaga M., Metch B. et al. Safety and comparative immunogenicity of an HIV-1 DNA vaccine in combination with plasmid interleukin 12 and impact of intramuscular electropora-tion for delivery. J. Infect. Dis. 2013; 2088 (5): 818-29. DOI: https://doi. org/10.1093/infdis/jit236
50. Li Z.Y., Chen J., Petersen E., Zhou D.H. et al. Synergy of mIL-21 and mIL-15 in enhancing DNA vaccine efficacy against acute and chronic Toxoplasma gondii infection in mice. Vaccine. 2014; 32 (25): 3058-65. DOI: https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2014.03.042
51. Su B., Wang J., Zhao G., Wang X. et al. Sequential administration of cytokine genes to enhance cellular immune responses and CD4 (+) T memory cells during DNA vaccination. Hum. Vaccin. Immunother. 2012; 8 (11): 1659-67. DOI: https://doi.org/10.4161/hv.22105
52. Hellerstein M., Xu Y., Marino T., Lu S. et al. Co-expression of HIV-1 virus-like particles and granulocyte-macrophage colony stimulating factor by GEO-D03 DNA vaccine. Hum. Vaccin. Immunother. 2012; 8 (11): 1654-8. DOI: https://doi.org/10.4161/hv.21978
53. Lena P., Villinger F., Giavedoni L., Miller C.J. et al. Co-immunization of rhesus macaques with plasmid vectors expressing IFN-gam-ma, GM-CSF, and SIV antigens enhances anti-viral humoral immunity but does not affect viremia after challenge with highly pathogenic virus. Vaccine. 2002; 20 (suppl 4): A69-79. DOI: https://doi.org/10.1016/s0264-410x(02)00391-2
54. Matchett W.E., Malewana G.B.R., Mudrick H., Medlyn M.J. et al. Genetic Adjuvants in replicating single-cycle adenovirus vectors amplify systemic and mucosal immune responses against HIV-1 envelope. Vaccines (Basel). 2020; 8 (1): 64. DOI: https://doi.org/10.3390/vaccines8010064
55. Lapuente D., Storcksdieck Genannt Bonsmann M., Maaske A., Stab V. et al. IL-1ß as mucosal vaccine adjuvant: the specific induction of tissue-resident memory T cells improves theheterosubtypic immunity against influenza A viruses. Mucosal Immunol. 2018; 11 (4): 1265-78. DOI: https://doi.org/10.1038/s41385-018-0017-4
56. Breloer M., Fleischer B., von Bonin A. In vivo and in vitro activation of T cells after administration of Ag-negative heat shock proteins. J. Immunol. 1999; 162: 3141-7.
57. Palliser D., Huang Q., Hacohen N., Lamontagne S.P. et al. A role for Toll-like receptor 4 in dendritic cell activation and cytolytic CD8+ T cell differentiation in response to a recombinant heat shock fusion protein. J. Immunol. 2004; 172 (5): 2885-93. DOI: https://doi.org/10.4049/jimmu-nol.172.5.2885
58. Dabaghian M., Latifi A.M., Tebianian M., NajmiNejad H. et al. Nasal vaccination with r4M2e.HSP70c antigen encapsulated into N-tri-methyl chitosan (TMC) nanoparticulate systems: preparation and immuno-genicity in a mouse model. Vaccine. 2018; 36 (20): 2886-95. DOI: https:// doi.org/10.1016/j.vaccine.2018.02.072
59. Suzue K., Young R.A. Adjuvant-free hsp70 fusion protein system elicits humoral and cellular immune responses to HIV-1 p24. J. Immunol. 1996; 156: 873-9.
60. Suzue K., Zhou X., Eisen H.N., Young R.A. Heat shock fusion proteins as vehicles for antigen delivery into the major histocompatibility complex class I presentation pathway. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1997; 94: 13 146-51. DOI: https://doi.org/10.1073/pnas.94.24.13146
61. Li J.,Ye Z.X., Li K.N., Cui J.H. et al. HSP70gene fused with Hantavi-rus S segment DNA significantly enhances the DNA vaccine potency against hantaviral nucleocapsid protein in vivo. Vaccine. 2007; 25: 239-52. DOI: https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2006.07.040
62. Cheng L., Yu L., Wu X., Li K. et al. Induction of specific humoral and cellular immune responses in a mouse model following gene fusion of HSP70C and Hantaan virus Gn and S0.7 in an adenoviral vector. PLoS One. 2014; 25: 239-52. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0088183
63. Lu H., Zhou X., Wu Z., Zhang X. et al. Comparison of the mucosal adjuvanticities of two Toll-like receptor ligands for recombinant adenovirus-delivered African swine fever virus fusion antigens. Vet. Immunol. Immuno-pathol. 2021; 239: 110307. DOI: https://doi.org/10.1016/j.vetimm.2021.110307
64. Xiao X., Zhang Y., Wei Q., Yin X. Flagellin FljB as an adjuvant to the recombinant adenovirus rabies glycoprotein vaccine increases immune responses against rabies in mice. Arch. Virol. 2017; 162 (9): 2655-65. DOI: https://doi.org/10.1007/s00705-017-3413-2
65. Rady H.F., Dai G., Huang W., Shellito J.E. et al. Flagellin encoded in gene-based vector vaccines is a route-dependent immune adjuvant. PLoS One. 2016; 11 (2): e0148701. DOI: https://doi.org/10.1371/journal. pone.0148701
и References
1. Shmarov M.M., Nikonova A.E., Sedova E.S., Logunov D.Y. Recombinant human adenoviruses as a platform for the creation of new effective and safe vaccines. Pediatriya. Zhurnal imeni G.N. Speranskogo. 2020; 99 (6): 52-6. (in Russian)
2. Shmarov M.M., Sedova E.S., Nikonova A.E., Elakov A.L., et al. Immunogenic and protective properties of the recombinant human adenovirus serotype 5 expressing the glycoprotein G gene of the rabies virus vaccine strain RV-97. Immunologiya. 2020; 41 (4): 312-25. DOI: 10.33029/0206-4952-2020-41-4-312-325 (in Russian)
3. Dolzhikova I.V., Zubkova O.V., Tukhvatulin A.I., Dzharul-laeva A.S., et al. Safety and immunogenicity of GamEvac-Combi, a heterologous VSV- and Ad5-vectored Ebola vaccine: an open phase I/II trial in healthy adults in Russia. Hum. Vaccin. Immunother. 2017; 13 (3): 613-20. DOI: https://doi.org/10.1080/21645515.2016.1238535
4. Gudima G.O., Khaitov R.M., Kudlay D.A., Khaitov M.R. Molecular immunological aspects of diagnostics, prevention and treatment of coronavirus infection. Immunologiya. 2021; 42 (3): 198-210. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-3-198-210 (in Russian)
5. Logunov D.Y., Dolzhikova I.V., Zubkova O.V., Tukhvatullin A.I., et al. Safety and immunogenicity of an rAd26 and rAd5 vector-based het-erologous prime-boost COVID-19 vaccine in two formulations: two open, non-randomised phase 1/2 studies from Russia. Lancet. 2020; 396 (10 255): 887-97. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(20)31866-3
6. Logunov D.Y., Dolzhikova I.V., Shcheblyakov D.V., Tukhva-tulin A.I., et al. Safety and efficacy of an rAd26 and rAd5 vector-based heterologous prime-boost COVID-19 vaccine: an interim analysis of a randomised controlled phase 3 trial in Russia. Lancet. 2021; 397 (10 275): 671-81. DOI: https://doi.org/10.1016/S0140-6736(21)00234-8
7. Zhu F.C., Li Y.H., Guan X.H., Hou L.H., et al. Safety, tolerability, and immunogenicity of a recombinant adenovirus type-5 vectored CO-VID-19 vaccine: a dose-escalation, open-label, non-randomised, firstin-human trial. Lancet. 2020; 395 (10 240): 1845-54. DOI: https://doi. org/10.1016/S0140-6736(20)31208-3
8. Solforosi L., Kuipers H., Jongeneelen M., Rosendahl Huber S.K., et al. Immunogenicity and efficacy of one and two doses of Ad26.COV2.S COVID vaccine in adult and aged NHP. J. Exp. Med. 2021; 218 (7): e20202756. DOI: https://doi.org/10.1084/jem.20202756
9. ChAdOx1-S vaccine for prevention of COVID-19. Aust. Prescr. 2021; 44 (2): 59-61. DOI: https://doi.org/10.18773/austprescr.2021.012
10. Atasheva S., Yao J., Shayakhmetov D.M. Innate immunity to ad-enovirus: lessons from mice. FEBS Lett. 2019; 593 (24): 3461-83. DOI: https://doi.org/10.1002/1873-3468.13696
11. Hollingdale M.R., Sedegah M., Limbach K. Development of replication-deficient adenovirus malaria vaccines. Expert Rev. Vaccines. 2017; 16 (3): 261-71. DOI: https://doi.org/10.1080/14760584.2016.1228454
12. Afkhami S., Yao Y., Xing Z. Methods and clinical development of adenovirus-vectored vaccines against mucosal pathogens. Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 2016; 27 (3): 16030. DOI: https://doi.org/10.1038/ mtm.2016.30
13. Li L., Petrovsky N. Molecular mechanisms for enhanced DNA vaccine immunogenicity. Expert Rev. Vaccines. 2016; 15 (3): 313-29. DOI: https://doi.org/10.1586/14760584.2016.1124762
14. Diaz-San Segundo F., Dias C.C., Moraes M.P., Weiss M., et al. Poly ICLC increases the potency of a replication-defective human adenovi-rus vectored foot-and-mouth disease vaccine. Virology. 2014; 468: 283-92. DOI: https://doi.org/10.1016Zj.virol.2014.08.012
15. Erdos G., Balmert S.C., Carey C.D., Falo G.D., et al. Improved cutaneous genetic immunization by microneedle array delivery of an adju-vanted adenovirus vaccine. J. Invest. Dermatol. 2020; 140 (12): 2528-31. DOI: https://doi.org/10.1016/jjid.2020.03.966
16. Rhee E.G., Kelley R.P., Agarwal I., Lynch D.M., et al. TLR4 ligands augment antigen-specific CD8+ T lymphocyte responses elicited by a viral vaccine vector. J. Virol. 2010; 84 (19): 10 413-9. DOI: https://doi. org/10.1128/JVI.00928-10
17. Lebedeva E., Bagaev A., Pichugin A., Chulkina M., et al. The differences in immunoadjuvant mechanisms of TLR3 and TLR4 agonists on the level of antigen-presenting cells during immunization with recombinant adenovirus vector. BMC Immunol. 2018; 19 (1): 26. DOI: https://doi. org/10.1186/s12865-018-0264-x
18. Bagaev A.V., Pichugin A.V., Lebedeva E.S., Lysenko A.A., et al. Influence of TLR-agonists on expression by antigen-presenting cells of the target protein antigen encoded in adenoviral vector. Immunologiya. 2015; 36 (4): 188-95 (in Russian)
19. Bagaev A.V., Rybinets A.S., Fedorova A.A., Ushakova E.I., et al. Synergism of TLR3 and TLR4 agonists during reprogramming of macrophages to antitumor state. Immu nologiya. 2021; 42 (6): 615-30. DOI: https://doi.org/10.33029/0206-4952-2021-42-6-61 (in Russian)
20. Milicic A., Rollier C.S., Tang C.K., Longley R., et al. Adjuvant-ing a viral vectored vaccine against pre-erythrocytic malaria. Sci. Rep. 2017; 7 (1): 7284. DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-017-07246-0
21. Ragonnaud E., Andersson A.C., Mariya S., Pedersen A.G., et al. Therapeutic vaccine against primate papillomavirus infections of the Cervix. J. Immunother. 2017; 40 (2): 51-61. DOI: https://doi.org/10.1097/ CJI.0000000000000153
22. Wang J., Gao Z.P., Qin S., Liu C.B., et al. Calreticulin is an effective immunologic adjuvant to tumor-associated antigens. Exp. Ther. Med. 2017; 14 (4): 3399-406. DOI: https://doi.org/10.3892/etm.2017.4989
23. Rangel-Colmenero B.R., Gomez-Gutierrez J.G., Villatoro-Hernán-dez J., Zavala-Flores L.M., et al. Enhancement of Ad-CRT/E7-mediated antitumor effect by preimmunization with L. lactis expressing HPV-16 E7. Viral Immunol. 2014; 27 (9): 463-7. DOI: https://doi.org/10.1089/vim.2014.0055
24. Esparza-González S.C., Troy A., Troudt J., Loera-Arias M.J., et al. Recombinant adenovirus delivery of calreticulin-ESAT-6 produces an antigen-specific immune response but no protection against a Mycobac-terium tuberculosis challenge. Scand. J. Immunol. 2012; 75 (3): 259-65. DOI: https://doi.org/10.1111/j.1365-3083.2011.02655.x
25. Ma C.-L., Wang G.-B., Gu R.-G., Wang F. Construction and characterization of calreticulin-HBsAg fusion gene recombinant adenovirus expression vector. World J. Gastroenterol. 2010; 16: 3078-82. DOI: https:// doi.org/10.3748/wjg.v16.i24.3078
26. Draper S.J., Moore A.C., Goodman A.L., Long C.A., et al. Effective induction of high-titer antibodies by viral vector. Nat. Med. 2008; 14: 819-21. DOI: https://doi.org/10.1038/nm.1850
27. Forbes E.K., de Cassan S.C., Llewellyn D., Biswas S., et al. T cell responses induced by adenoviral vectored vaccines can be adju-vanted by fusion of antigen to the oligomerization domain of C4b-binding protein. PLoS One. 2012; 7: e44943. DOI: https://doi.org/10.1371/journal. pone.0044943
28. Holst P.J., Sorensen M.R., Mandrup Jensen C.M., Orskov C., et al. MHC class II-associated invariant chain linkage ofantigen dramatically improves cell-mediated immunity induced by adenovirus vaccines. J. Immunol. 2008; 180: 3339-46. DOI: https://doi.org/10.4049/jimmunol.180.5.3339
29. Holst P.J., Christensen J.P., Thomsen A.R. Vaccination against lymphocytic choriomeningitis virus infection in MHC class II-deficient mice. J. Immunol. 2011; 186: 3997-4007. DOI: https://doi.org/10.4049/ jimmunol.1001251
30. Spencer A.J., Cottingham M.G., Jenks J.A., Longley R.J., et al. Enhanced vaccine-induced CD8+ T cell responses to malaria antigen ME-TRAP by fusion to MHC class ii invariant chain. PLoS One. 2014; 9 (6): e100538. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0100538
31. Xu H., Andersson A.M., Ragonnaud E., Boilesen D., et al. Mu-cosal vaccination with heterologous viral vectored vaccine targeting subdominant SIV accessory antigens strongly inhibits early viral replication. EBioMedicine. 2017; 18: 204-15. DOI: https://doi.org/10.1016/j. ebiom.2017.03.003
32. Esposito I., Cicconi P., D'Alise A.M., Brown A., et al. MHC class II invariant chain-adjuvanted viral vectored vaccines enhances T cell responses in humans. Sci. Transl. Med. 2020; 12 (548): eaaz7715. DOI: https://doi.org/10.1126/scitranslmed.aaz7715
33. Halbroth B.R., Sebastian S., Poyntz H.C., Bregu M., et al. Development of a molecular adjuvant to enhance antigen-specific CD8+ T cell responses. Sci. Rep. 2018; 8 (1): 15020. DOI: https://doi.org/10.1038/ s41598-018-33375-1
34. Fougeroux C., Turner L., Bojesen A.M., Lavstsen T., et al. Modified MHC class II-associated invariant chain induces increased antibody responses against plasmodium falciparum antigens after adenoviral vaccination. J. Immunol. 2019; 202 (8): 2320-31. DOI: https://doi.org/10.4049/ jimmunol.1801210
35. Verneret M., Tacnet-Delorme P., Osman R., Awad R., et al. Relative contribution of c1q and apoptotic cell-surface calreticulin to macrophage phagocytosis. J. Innate Immun. 2014; 6: 426-34. DOI: https://doi. org/10.1159/000358834
36. Kuraishi T., Manaka J., Kono M., Ishii H., et al. Identification of calreticulin as a marker for phagocytosis of apoptotic cells in Dro-sophila. Exp. Cell Res. 2007; 313: 500-10. DOI: https://doi.org/10.1016/j. yexcr.2006.10.027
37. Neukirch L., Fougeroux C., Andersson A.C., Holst P. J. The potential of adenoviral vaccine vectors with altered antigen presentation capabilities. Expert Rev. Vaccines. 2020; 19 (1): 25-41. DOI: https://doi.org/10 .1080/14760584.2020.1711054
38. Wang S., Xue J., Lu P., Ni C., et al. Gonococcal MtrE and its surface-expressed Loop 2 are immunogenic and elicit bactericidal antibodies. J. Infect. 2018; 77 (3): 191-204. DOI: https://doi.org/10.1016/j. jinf.2018.06.001
39. Masavuli M.G., Wijesundara D.K., Underwood A., Christiansen D., et al. A hepatitis C virus DNA vaccine encoding a secreted, oligo-merized form of envelope proteins is highly immunogenic and elicits neutralizing antibodies in vaccinated mice. Front. Immunol. 2019; 10: 1145. DOI: https://doi.org/10.3389/fimmu.2019.01145
40. Baerlecken N.T., Nothdorft S., Stummvoll G.H., Sieper J., et al. Autoantibodies against CD74 in spondyloarthritis. Ann. Rheum. Dis. 2014; 73 (6): 1211-4. DOI: https://doi.org/10.1136/annrheumdis-2012-202208
41. Fan X., HashemA.M.,Chen Z., Li C., et al.Targeting the HA2subunit of influenza A virus hemagglutinin via CD40L provides universal protection against diverse subtypes. Mucosal Immunol. 2015; 8 (1): 211-20. DOI: https://doi.org/10.1038/mi.2014.59
42. Hashem A.M., Algaissi A., Agrawal A.S., Al-Amri S.S. Highly immunogenic, protective, and safe adenovirus-based vaccine expressing Middle East respiratory syndrome coronavirus S1-CD40L fusion protein in a transgenic human dipeptidyl peptidase 4 mouse model. J. Infect. Dis. 2019; 220 (10): 1558-67. DOI: https://doi.org/10.1093/infdis/jiz137
43. Zhu C., Yu M., Gao S., Zeng Y., et al. Protective immune responses induced by intranasal immunization with Mycoplasma pneumoniae P1C-IL-2 fusion DNA vaccine in mice. Chin. J. Cell. Mol. Immunol. 2013; 29 (6): 585-8.
44. Qin Y., Tian H., Wang G., Lin C., et al. A BCR/ABL-hIL-2 DNA vaccine enhances the immune responses in BALB/c mice. Biomed. Res. Int. 2013; 2013: 136492. DOI: https://doi.org/10.1155/2013/136492
45. Yamanaka H., Hoyt T., Yang X., Golden S., et al. A nasal interleu-kin-12 DNA vaccine coexpressing Yersinia pestis F1-V fusion protein confers protection against pneumonic plague. Infect. Immun. 2008; 76 (10): 4564-73. DOI: https://doi.org/10.1128/IAI.00581-08
46. Yang S.H., Lee C.G., Park S.H., Im S.J., et al. Correlation of antiviral T-cell responses with suppression of viral rebound in chronic hepatitis B carriers: a proof-of-concept study. Gene Ther. 2006; 13 (14): 1110-7. DOI: https://doi.org/10.1038/sj.gt.3302751
47. Naderi M., Saeedi A., Moradi A., Kleshadi M., et al. Interleu-kin-12 as a genetic adjuvant enhances hepatitis C virus NS3 DNA vaccine immunogenicity. Virol. Sin. 2013; 28 (3): 167-73. DOI: https://doi. org/10.1007/s12250-013-3291-z
48. Zhao H.G., Huang F.Y., Guo J.L., Tan G.H. Evaluation on the immune response induced by DNA vaccine encoding MIC8 co-immunized with IL-12 genetic adjuvant against Toxoplasma gondii infection. Zhong-
guo ji sheng chong xue yu ji sheng chong bing za zhi = Chinese Journal of Parasitology & Parasitic Diseases. 2013; 31 (4): 284-9.
49. Kalams S.A., Parker S.D., Elizaga M., Metch B., et al. Safety and comparative immunogenicity of an HIV-1 DNA vaccine in combination with plasmid interleukin 12 and impact of intramuscular electropora-tion for delivery. J. Infect. Dis. 2013; 2088 (5): 818-29. DOI: https://doi. org/10.1093/infdis/jit236
50. Li Z.Y., Chen J., Petersen E., Zhou D.H., et al. Synergy of mIL-21 and mIL-15 in enhancing DNA vaccine efficacy against acute and chronic Toxoplasma gondii infection in mice. Vaccine. 2014; 32 (25): 3058-65. DOI: https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2014.03.042
51. Su B., Wang J., Zhao G., Wang X., et al. Sequential administration of cytokine genes to enhance cellular immune responses and CD4 (+) T memory cells during DNA vaccination. Hum. Vaccin. Immunother. 2012; 8 (11): 1659-67. DOI: https://doi.org/10.4161/hv.22105
52. Hellerstein M., Xu Y., Marino T., Lu S., et al. Co-expression of HIV-1 virus-like particles and granulocyte-macrophage colony stimulating factor by GEO-D03 DNA vaccine. Hum. Vaccin. Immunother. 2012; 8 (11): 1654-8. DOI: https://doi.org/10.4161/hv.21978
53. Lena P., Villinger F., Giavedoni L., Miller C.J., et al. Co-immunization of rhesus macaques with plasmid vectors expressing IFN-gamma, GM-CSF, and SIV antigens enhances anti-viral humoral immunity but does not affect viremia after challenge with highly pathogenic virus. Vaccine. 2002; 20 (suppl 4): A69-79. DOI: https://doi.org/10.1016/s0264-410x(02)00391-2
54. Matchett W.E., Malewana G.B.R., Mudrick H., Medlyn M.J., et al. Genetic Adjuvants in replicating single-cycle adenovirus vectors amplify systemic and mucosal immune responses against HIV-1 envelope. Vaccines (Basel). 2020; 8 (1): 64. DOI: https://doi.org/10.3390/vaccines8010064
55. Lapuente D., Storcksdieck Genannt Bonsmann M., Maaske A., Stab V., et al. IL-1ß as mucosal vaccine adjuvant: the specific induction of tissue-resident memory T cells improves theheterosubtypic immunity against influenza A viruses. Mucosal Immunol. 2018; 11 (4): 1265-78. DOI: https://doi.org/10.1038/s41385-018-0017-4
56. Breloer M., Fleischer B., von Bonin A. In vivo and in vitro activation of T cells after administration of Ag-negative heat shock proteins. J. Immunol. 1999; 162: 3141-7.
57. Palliser D., Huang Q., Hacohen N., Lamontagne S.P., et al. A role for Toll-like receptor 4 in dendritic cell activation and cytolytic CD8+ T cell differentiation in response to a recombinant heat shock fusion protein. J. Immunol. 2004; 172 (5): 2885-93. DOI: https://doi.org/10.4049/jimmunol.172.5.2885
58. Dabaghian M., Latifi A.M., Tebianian M., NajmiNejad H., et al. Nasal vaccination with r4M2e.HSP70c antigen encapsulated into N-tri-methyl chitosan (TMC) nanoparticulate systems: preparation and immuno-genicity in a mouse model. Vaccine. 2018; 36 (20): 2886-95. DOI: https:// doi.org/10.1016/j.vaccine.2018.02.072
59. Suzue K., Young R.A. Adjuvant-free hsp70 fusion protein system elicits humoral and cellular immune responses to HIV-1 p24. J. Immunol. 1996; 156: 873-9.
60. Suzue K., Zhou X., Eisen H.N., Young R.A. Heat shock fusion proteins as vehicles for antigen delivery into the major histocompatibility complex class I presentation pathway. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 1997; 94: 13 146-51. DOI: https://doi.org/10.1073/pnas.94.24.13146
61. Li J., Ye Z.X., Li K.N., Cui J.H., et al. HSP70 gene fused with Hantavirus S segment DNA significantly enhances the DNA vaccine potency against hantaviral nucleocapsid protein in vivo. Vaccine. 2007; 25: 239-52. DOI: https://doi.org/10.1016/j.vaccine.2006.07.040
62. Cheng L., Yu L., Wu X., Li K., et al. Induction of specific humoral and cellular immune responses in a mouse model following gene fusion of HSP70C and Hantaan virus Gn and S0.7 in an adenoviral vector. PLoS One. 2014; 25: 239-52. DOI: https://doi.org/10.1371/journal.pone.0088183
63. Lu H., Zhou X., Wu Z., Zhang X., et al. Comparison of the mu-cosal adjuvanticities of two Toll-like receptor ligands for recombinant adenovirus-delivered African swine fever virus fusion antigens. Vet. Immunol. Immunopathol. 2021; 239: 110307. DOI: https://doi.org/10.1016/j. vetimm.2021.110307
64. Xiao X., Zhang Y., Wei Q., Yin X. Flagellin FljB as an adjuvant to the recombinant adenovirus rabies glycoprotein vaccine increases immune responses against rabies in mice. Arch. Virol. 2017; 162 (9): 2655-65. DOI: https://doi.org/10.1007/s00705-017-3413-2
65. Rady H.F., Dai G., Huang W., Shellito J.E., et al. Flagellin encoded in gene-based vector vaccines is a route-dependent immune adjuvant. PLoS One. 2016; 11 (2): e0148701. DOI: https://doi.org/10.1371/journal. pone.0148701
Сведения об авторах
Седова Елена Сергеевна - канд. биол. наук, науч. сотр. лаб. молекулярной биотехнологии ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-6959-9988
Первойкина Кристина Алексеевна - лаборант-исследователь лаб. молекулярной биотехнологии ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-0780-5998
Щербинин Дмитрий Николаевич - канд. биол. наук, науч. сотр. лаб. молекулярной биотехнологии ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-8518-1669
Шмаров Максим Михайлович - д-р биол. наук, зав. лаб. молекулярной биотехнологии ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России; доцент каф. ин-фектологии и вирусологии ФГАОУ ВО Первый МГМУ имени И.М. Сеченова (Сеченовский Университет) Минздрава России, Москва, Российская Федерация E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-5268-1296
Authors' information
Elena S. Sedova - PhD, Researcher of the Molecular Biotechnology Lab. of the N.F. Gamaleya FRCEM of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0001-6959-9988
Kristina A. Pervoykina - Research Lab. Assistant of the Molecular Biotechnology Lab. of the N.F. Gamaleya FRCEM of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0003-0780-5998
Dmitriy N. Shcherbinin - PhD, Researcher of the Molecular Biotechnology Lab. of the N.F. Gamaleya FRCEM of the MOH of Russia, Moscow, Russian Federation E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-8518-1669
Maksim M. Shmarov - Dr. Sci., Head of the Molecular Biotechnology Lab. of the N.F. Gamaleya FRCEM of the MOH of Russia; Assistant Professor of the Infectology and Virology Chair of the I.M. Sechenov First MSMU of the MOH of Russia (Sechenov University), Moscow, Russian Federation
E-mail: [email protected] https://orcid.org/0000-0002-5268-1296
