CC BY
86
children by gas chromatography/mass spectrometry. // Med Sci Monit. — 2010. — Vol. 16(10). — CR488-492.
10.Main P.A., Angley M.T., Thomas P., et al. Folate and methionine metabolism in autism: a systematic review. // Am. J. Clin. Nutr. — 2010. — Vol. 91(6). — P. 1598-1620.
11.Moreno H., Borjas L., Arrieta A., et al. Clinical heterogeneity of the autistic syndrome: a study of 60 families // Invest Clin. — 1992. — Vol. 33(1). — P. 13-31.
12.Ohtsuki S., Terasaki T. Contribution of carrier-mediated transport systems to the blood-brain barrier as a supporting
and protecting interface for the brain; importance for CNS drug discovery and development. // Pharm. Res. — 2007. — Vol. 24(9). — P. 1745-1758.
13.Shinohe A., Hashimoto K., Nakamura K., et al. Increased serum levels of glutamate in adult patients with autism. // Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. — 2006. — Vol. 30(8). — P. 1472-1477.
14.Stewart M.E., Barnard L., Pearson J., et al. Presentation of depression in autism and Asperger syndrome: a review. // Autism. — 2006. — Vol. 10(1). — P. 103-116.
Информация об авторах: 664003, Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, e-mail: [email protected] Колесниченко Лариса Станиславовна — заведующая кафедрой химии, профессор, д.м.н.; Горина Анна Сергеевна — к.б.н., научный сотрудник Sick Children Hospital, Research Institute, Toronto, ON M5G Canada, 555 University Ave,
© ТЫЖИГИРОВА В.В., ЛАПШИНА М.П. — 2011 УДК 615.2:616-073.524
ФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ДИФЕНГИДРАМИНА ГИДРОХЛОРИДА В ЛЕКАРСТВЕННОМ ПРЕПАРАТЕ
АНТИГРИППИН-АНВИ
Валентина Викторовна Тыжигирова, Марина Павловна Лапшина (Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра фармацевтической и токсикологической химии, зав. — д.х.н., проф. Е.А. Илларионова)
Резюме. Разработана фотометрическая методика определения дифенгидрамина гидрохлорида в капсулах Антигриппин-АНВИ, основанная на реакции лекарственного вещества с кислотным красителем бромтимоловым синим. Изучены оптимальные условия образования окрашенного комплекса и его спектральные характеристики. Установлена линейность методики в диапазоне концентраций 50-100 мкг/мл (коэффициент корреляции 0,9981). Методика не отягощена систематической ошибкой, коэффициент вариации не превышает 2%, что подтверждает валидность предлагаемой методики.
Ключевые слова: дифенгидрамина гидрохлорид, фотометрическое определение, бромтимоловый синий, вали-дация.
PHOTOMETRIC DEFINITION OF DIPHENHYDRAMINE HYDROCHLORIDE IN A MEDICAL PRODUCT ANTIGRIPPIN-ANVI
V.V. Tyzhigirova, M.P. Lapshina (Irkutsk State Medical University)
Summary. The photometric technique of definition Diphenhydramine hydrochloride in capsules Antigrippin-ANVI based on reaction of medicinal substance with acid dye Bromothymol blue has been developed. Optimum conditions of formation of the painted complex and its spectral characteristics have been e studied. Linearity of the technique in a range of concentration of 50-100 mkg/ml has been established (correlation coefficient is 0,9981). The results do not have systematic fault, the coefficient of a variation does not exceed 2% that confirms a validity of technique.
Key words: diphenhydramine hydrochloride, photometric definition, bromothymol blue, validation.
Комбинированный лекарственный препарат Антигриппин-АНВИ применяется в качестве симптоматического средства для лечения гриппа и ОРВИ у взрослых. Препарат выпускается в форме капсул А и Б. В состав капсул А входят лекарственные вещества: аскорбиновая кислота 300 мг, ацетилсалициловая кислота 250 мг, рутозид 20 мг; капсул Б — метамизол натрия 250 мг, кальция глюконат 100 мг, дифенгидрамина гидрохлорид 20 мг. Разделение компонентов по двум разным капсулам позволяет избежать фармацевтическую несовместимость аскорбиновой и ацетилсалициловой кислот с дифенгидрамина гидрохлоридом и существенно продлить срок годности лекарственного препарата.
В соответствии с нормативной документацией (НД) количественное определение компонентов капсул проводится в основном химическим методом [4]. Выбор химического метода не вызывает сомнения, так как его достоинства общеизвестны. Метод является абсолютным, не требует сравнения со стандартными образцами. Кроме того, химические методы экспрессны, просты в исполнении, экономичны. Поэтому применение химических методов в анализе макрокомпонентов лекарственного препарата вполне обосновано.
Однако методика количественного определения ди-фенгидрамина гидрохлорида, содержащегося в лекарственном препарате в микроколичествах (20 мг), требу-
ет совершенствования. Она недостаточно чувствительна и специфична. Кроме того, определение проводится не по активной части молекулы дифенгидрамина, а по иону хлора аргентометрическим методом с использованием бромфенолового синего в качестве индикатора. Метрологическая оценка методики на модельных смесях показала, что она отягощена систематической ошибкой, завышающей результаты анализа (табл. 2, 3). Об этом свидетельствует критерий Стьюдента: вычисленное значение (1 =2,47) больше табличного (^а6=2,36). Источником систематической погрешности, как установлено нами, являются сопутствующие компоненты — метамизол натрия и кальция глюконат, которые мешают фиксированию точки конца титрования вблизи точки эквивалентности.
Цель настоящего исследования заключалась в разработке новой методики количественного определения дифенгидрамина гидрохлорида в капсулах Антигриппин-АНВИ фотометрическим методом.
Материалы и методы
В работе использовали фармацевтическую субстанцию дифенгидрамина гидрохлорида, удовлетворяющую требованиям НД [5]. Титрованный раствор серебра нитрата, индикаторы и реактивы готовили и стандартизо-
вали в соответствии с требованиями Государственной Фармакопеи [1]. Для разработки методики использовали высокочувствительный фотометрический метод. Оптическую плотность растворов регистрировали на спектрофотометре СФ-26 и фотоколориметре КФК-2. Величину рН буферных растворов измеряли с помощью универсального иономера ЭВ-74. Валидность разработанной методики устанавливали в соответствии с требованиями ОФС «Валидация аналитических методик» [3].
Результаты и обсуждение
Была изучена возможность анализа дифенгидрами-на гидрохлорида непосредственно в УФ области спектра после извлечения его в хлороформ. Проведенные исследования показали, что определению мешает входящий в состав лекарственного препарата метамизол натрия. В связи с данным обстоятельством исследования проводили в видимой области спектра после переведения дифенгидрамина в окрашенное соединение. В качестве цветореагента был выбран кислотный краситель бром-тимоловый синий, образующий с дифенгидрамином ионный ассоциат. Последний хорошо экстрагируется хлороформом и окрашивает его в интенсивный желтый цвет. Спектр поглощения окрашенного продукта имеет максимум при длине волны 412±2 нм. Молярный коэффициент поглощения составляет 1,52-103.
Были изучены условия образования и экстрагирования ионного ассоциата: рН водной фазы, соотношение водной и органической фаз, объем буферного раствора, кратность и время экстракции, влияние сопутствующих компонентов. Как было установлено, дифенгидра-мин образует ионный ассоциат в широком интервале значений рН от 5,0 до 8,0. В качестве оптимального был выбран буферный раствор с рН 7,4, при котором в хлороформный слой не извлекается краситель. Это позволило в дальнейшем использовать в качестве раствора сравнения хлороформ.
Изучение времени экстрагирования показало, что максимальная экстракция комплекса достигается в течение 2 минут. Окрашенный комплекс устойчив во времени. Объём буферного раствора должен быть не менее 3 мл, а полнота экстракции окрашенного комплекса достигается при соотношении водной и органической фаз 1:2. Двукратная экстракция по 5 мл хлороформа или однократная экстракция 10 мл хлороформа обеспечивают полное извлечение комплекса. Сопутствующие компоненты — метамизол натрия и кальция глюконат — не взаимодействуют с бромтимоловым синим и не мешают определению.
Проведённые исследования позволили разработать фотометрическую методику определения дифенгидра-мина гидрохлорида в капсулах Антигриппин-АНВИ.
Таблица 1
Результаты фотометрического определения дифенгидрамина гидрохлорида в модельных смесях
О
0,5
0,4
0,3
50 60 70 80 90 100 С, мкг/мл
Рис.1. Зависимость оптической плотности окрашенного комплекса от содержания дифенгидрамина в пробею
Около 0,15 г (точная навеска) содержимого капсул Б помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 20-30 мл воды очищенной и взбалтывают в течение 2 минут, доводят содержимое колбы водой до метки, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые порции фильтрата.
1 мл полученного фильтрата переносят в делительную воронку прибавляют 3 мл буферного раствора с рН 7,4, 1 мл 0,04% раствора бромтимолового синего, 10 мл хлороформа, экстрагируют в течение 2 минут. Хлороформное извлечение отделяют и фотометрируют на КФК-2 при 400 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм относительно хлороформа.
Параллельно проводят испытание с 1 мл раствора Б рабочего стандартного образца дифенгидрамина гидрохлорида с содержанием 80 мкг/мл.
Оценку пригодности разработанной методики для аналитических целей проводили посредством процедуры валидации по таким параметрам, как линейность, правильность и сходимость результатов анализа, специфичность, диапазон применения [3].
Для определения линейности готовили модельные смеси лекарственных веществ, входящих в состав капсул Б. Приготовленные модельные смеси с точным содержанием дифенгидрамина гидрохлорида анализировали фотометрическим методом по разработанной методике на шести уровнях концентраций по 3 опыта на каждом в диапазоне от 50 до 100 мкг/мл. Выбранный диапазон концентраций охватывает оптимальное содержание дифенгидрамина гидрохлорида в аликвоте (80 мкг/мл).
Полученные экспериментальные данные обрабатывали методом наименьших квадратов и получали уравнение регрессии: у = 0,004771-х + 0,03335, связывающее оптическую плотность окрашенного ассоциата (у) и содержание дифенгидрамина в пробе (х). Графическая за-
Таблица 2
Результаты определения дифенгидрамина гидрохлорида аргентометрическим методом в модельных смесях
Взято дифен Оптическая плотность Найдено
гидрамина г/х, мкг мкг %
Нижний уровень
64 0,360 63,82 99,7
64 0,354 62,76 98,1
64 0,366 64,89 101,4
Средний уровень
80 0,410 79,61 99,5
80 0,418 81,17 101,5
80 0,410 79,61 99,5
Верхний уровень
96 0,471 94,59 98,5
96 0,482 96,80 100,8
96 0,483 97,00 101,0
Взято дифенгидрамина г/х, г Объем титранта, мл Найдено
г %
Нижний уровень
0,0160 5,80 0,0169 105,6
0,0160 5,70 0,0166 103,8
0,0160 5,70 0,0166 103,8
Средний уровень
0,0200 6,96 0,0203 101,5
0,0200 7,06 0,0206 103,0
0,0200 6,96 0,0203 101,5
Верхний уровень
0,0240 8,16 0,0238 99,2
0,0240 8,36 0,0244 101,7
0,0240 8,36 0,0244 101,7
Таблица 3
Метрологические характеристики методик определения дифен-гидрамина гидрохлорида в модельных смесях (п=9, Р=95%)
Метод анализа Метрологические характеристики
X , % S SXrn ДХ RSD, % t t . £ , % б
Фотометрия 100,0 1,24 0,41 0,98 1,2 0 2,36 0,98 0
Аргентометрия 102,4 2,92 0,97 2,30 2,9 2,47 2,36 2,2 2,4
висимость, описываемая уравнением регрессии, представлена на рисунке 1.
Вычисленный коэффициент корреляции, являющийся критерием линейности, составляет 0,9981. Достаточно высокое значение коэффициента корреляции свидетельствует о выполнении линейности в исследуемом диапазоне концентраций.
Для определения правильности и повторяемости (сходимости) методики строили трёхуровневый эксперимент по 3 опыта на каждом уровне в диапазоне 80120% от оптимального содержания дифенгидрамина в аликвоте (80 мкг/мл). Исследование проводили на модельных смесях с точным содержанием дифенгидрами-на. Результаты анализа представлены в табл. 1.
Параллельно проводили валидационную оценку методики аргентометрического титрования дифенги-
драмина гидрохлорида, изложенной в НД [4]. Результаты анализа представлены в табл. 2.
Полученные данные подвергали статистической обработке в соответствии с требованиями ОФС «Статистическая обработка результатов химического эксперимента и биологических испытаний» [2]. Метрологические характеристики приведены в табл. 3.
Как видно из табл. 3, коэффициент вариации (RSD) для разработанной методики не превышает 2%, что свидетельствует о вполне удовлетворительной сходимости результатов анализа. Аргентометрическая методика отличается худшей сходимостью повторных определений, ее коэффициент вариации составляет 2,9%. Кроме того, она не является правильной, так как отягощена систематической ошибкой (6=2,4%). Предлагаемая методика свободна от систематической погрешности, для нее реализуется неравенство: 1выч<1таб.
Таким образом, процедура валидации показала, что разработанная фотометрическая методика является пригодной для аналитических целей и может быть рекомендована для оценки качества комбинированного препарата Антигриппин-АНВИ. При испытании методики на двух сериях лекарственного препарата были получены результаты, удовлетворяющие требованиям НД [4].
ЛИТЕРАТУРА
1. Государственная Фармакопея РФ. — XII изд. — М.: Изд-во «Научный центр экспертизы средств медицинского применения», 2008. — Ч.1. — 704 с.
2. Государственная Фармакопея СССР. Общие методы анализа / МЗ СССР. — XI изд. — М.: Медицина, 1987. — Вып.1. — 336 с.
3. ОФС 42-0113-09. Валидация аналитических методик // Государственная Фармакопея РФ. — 12-е изд. — М.: Медицина, 2010. — Ч.2. — С. 85-87.
4. ФСП 42-0125031200. Антигриппин-АНВИ, капсулы.
5. ФСП 42-0008402503. Димедрол.
Информация об авторах: 664003, г. Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, тел.: (3952) 24-34-47; e-mail: [email protected] Тыжигирова Валентина Викторовна — к.ф.н., доцент; Лапшина Марина Павловна — интерн.
© ФОКИН А.А., ФАЙЗУЛЛИН К.Р. — 2011 УДК 616.133
СРАВНЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ХИРУРГИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ИНСУЛЬТА У РАЗЛИЧНЫХ КАТЕГОРИЙ БОЛЬНЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ ОСТРОЕ ИШЕМИЧЕСКОЕ НАРУШЕНИЕ КРОВООБРАЩЕНИЯ ГОЛОВНОГО МОЗГА
Алексей Анатольевич Фокин, Константин Рамилевич Файзуллин (Уральская государственная медицинская академия дополнительного образования, г. Челябинск, Россия, ректор — д.м.н., проф. А.А. Фокин, кафедра сердечно-сосудистой, торакальной хирургии и трансфузиологии,
зав. — д.м.н., проф. А.А. Фокин)
Резюме. Цель исследования: дать сравнительную оценку непосредственным и отдаленным результатам хирургической коррекции критических стенозов сонных артерий у двух групп больных: пациентов с транзиторными ишемическими атаками (ТИА) и пациентов, перенесших ишемический инсульт (ИИ). Материал и методы: проведен анализ операций на сонных артериях, выполненных пациентам с ТИА (n=105), и пациентам после ИИ (n=304), за период с 1 января 2004 по 31 декабря 2008 года. Результаты: Частота периоперационного инсульта у пациентов с ИИ была значима (p=0,008) выше и составила 5,6%. Процент повреждения черепных нервов у пациентов с ИИ (16,2%), в 4,2 раза был выше, чем у пациентов с ТИА (3,8%), p<0,001. В отдаленном периоде смертность в группе с ИИ (11,5%) также выше, чем в группе с ТИА (2,9%), p=0,047.
Ключевые слова: степень сосудистой мозговой недостаточности, каротидная ендартеректомия, осложнения, отдаленные результаты.
COMPARISON OF THE SURGICAL PREVENTION EFFICIENCY OF STROKE AT THE VARIOUS CATEGORIES OF PATIENTS WHO HAVE SUFFERED ACUTE ISCHEMIC BRAIN CIRCULATION DISTURBANCE
A.A. Fokin, K.R. Fajzullin (Ural State Medical Academy of an Additional Education of Chelyabinsk)
Summary. The aim: to give a comparative estimation to the immediate and remote results of the surgical correction of critical stenosis carotid at two groups of patients: the patients with transient ischemic attacks (TIA) and the patients who have suffered an ischemic stroke (IS). Material and methods: the analysis of operations on the carotids, executed to patients with TIA (n=105), and to patients after IS (n=304), from January, 1st 2004 to December, 31st, 2008 is carried out. Results: Frequency of an intraoperative stroke at patients with IS was significant (P=0,008) above and has made 5, 6 %. The damage percentage cranial nerves at patients with IS (16,2%), was 4,2 times above than at patients with TIA (3,8%), p <0,001. In the remote period a mortality in group with IS (11, 5%) is also above than in group with TIA against (2,9%), p=0,047.
Key words: the severity distribution of cerebrovascular insufficiency, carotid endarterectomy, complications, remote results.
