CC BY
32
росы, которые включают оптимизацию лабораторной службы, открытие специализированного отделения, разработку оптимальных временных сроков применения хирургических методов лечения.
Литература
1. Дорожкова И.Р., Попов С.А., Медведева И.М. // Пробл. туберкулеза. 2000. №5. С. 19-22.
2. Дорожкова И.Р., Медведева И.М. // Туберк. и экология. 1997. №2. С. 25-28.
3. Степашин Ю.Г., Степашина В.Н., Шемякин И.Г. //Журнал микробиол., эпидемиол. и иммунол. 1999. №3. С. 84-89.
4. WHO. Global Tuberculosis Programme anti-Tuberculosis Drag resistence in the world. Geneva, 1997.
□ □□
УДК 616.98 :579.842.14] - 36.1
А.В. Раков, Ф.Н. Шубин, Н.А. Кузнецова, В.А. Хорошко
ФЕНОТИПИЧЕСКАЯ И ПЛАЗМИДИАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ШТАММОВ РЕДКО ВЫЯВЛЯЕМЫХ СЕРОВАРОВ САЛЬМОНЕЛЛ, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ БОЛЬНЫХ В ПРИМОРСКОМ КРАЕ
Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии СО РАМН, Центр Санэпиднадзора Тихоокеанского флота, г. Владивосток
В настоящее время проблема сальмонеллеза продолжает оставаться актуальной. В России наибольшее этиологическое значение получили серовары Salmonella enteritidis и S. typhimurium. Вместе с тем в США и в ряде стран Юго-Восточной Азии кроме вышеупомянутых существенное этиологическое значение имеют серовары сальмонелл групп В, С, и С2 — S. heidelberg, S. choleraesuis, S. infantis, S. newport, S. muenchen и др. [4]. Внутрисероварная дифференциация сальмонелл призвана совершенствовать эпидемиологический анализ. С этой целью широко используются методы типирования, основанные на определении биоваров, фаготипов и антибиотикограмм [6]. В последние годы для типирования сальмонелл используется плазмидный анализ, который является высокоинформативным методом [6, 7]. Вместе с тем, внутривидовое типирование осуществляется лишь для широко распространенных сероваров сальмонелл [6,7]. Типирование редко выявляемых сероваров, связанных в основном со спорадической заболеваемостью, представляет определенные трудности.
Целью нашего исследования являлось изучение штаммов редко выявляемых сероваров, их фенотипических характеристик и спектра плазмид для выбора наиболее обоснованного метода их внутривидового типирования и оценки степени гетерогенности.
Материалы и методы
Исследован 341 штамм сальмонелл, выделенных в различных районах Приморского края от больных. Идентификацию сальмонелл проводили стандартными методами. Биохимические особенности всех штаммов оценивали по ферментации глюкозы, лактозы, маннита, рамнозы, дульцита, ксилозы, адони-та, целлобиозы, сорбита, инозита, мелицитозы, эс-кулина, раффинозы, по гидролизу желатина и мочевины, росту на цитратной и ацетатной средах, наличию (3-галактозидазной активности, расщеплению лизина и аргинина, продукции индола, сероводорода, отношению к глицерину по Штерну и подвижности. Чувствительность к 30 антибиотикам (пеницил-линам, цефалоспоринам, аминогликозидам, тетра-циклинам, полимиксинам и фторхинолонам) у 108 штаммов оценивали методом диффузии в агаре с помощью бумажных дисков. Поиск плазмид проводили по известному методу [5]. Молекулярную массу плазмид определяли по их подвижности в агарозном геле в сравнении с плазмидами рСТ105 (7,5 MDa), рСТИО (6,5 MDa), R446b (47 MDa), S-a (26 MDa), pBR322 (2,8 MDa) и плазмидами pVM82 (82 MDa), p4,4 (4,34 MDa) штаммов Yersinia pseudotuberculosis [2].
Результаты и обсуждение
В мае 1995 г. в Приморском крае было принято решение об организации централизованного микробиологического мониторинга за возбудителями сальмонеллеза, в соответствии с которым культуры сальмонелл, выделенные в крае от людей, направлялись в НИИ эпидемиологии и микробиологии для дальнейшего изучения их плазмидных характеристик [3].
В Приморском крае в этиологии сальмонеллезов, так же как и во всей России, доминируют два серовара сальмонелл — Б. ейегШсНз и Б. 1урЫтипит. Этиологическая значимость других сероваров сальмонелл, принадлежащих к серогруппам В, С, Б, Е, которые обозначены нами как редко выявляемые, за весь период наблюдения составила 10,2%. Однако наше внимание привлекло разнообразие таких сероваров. С 1995 по 2005 г. на территории Приморского края (19 городов и районов) от больных изолирован 341 штамм сальмонелл, принадлежащий к 85 сероварам. Хотя число заболеваний, связанных с редко выявляемыми серова-рами, невелико, их выделение представляет эпидемиологический интерес [1]. Все серовары сальмонелл разделены на две группы: к 1 группе мы отнесли 42 серовара, каждый из которых был представлен только одним штаммом микроба; 2 группу составили штаммы 43 сероваров, каждый из которых представлен несколькими штаммами — от 2 до 12.
Плазмидный анализ показал, что 70 культур (20,5%), относящихся к 20 (23,5%) сероварам, из 341 были бесплазмидными, а следовательно, были нети-пируемы с помощью плазмидного анализа. Тем не менее, большая часть исследуемых штаммов (79,5%) имела различное количество плазмид (от 1 до 5), представленных внехромосомными элементами различной молекулярной массы (от 1 до 150 МБа).
Среди штаммов 1 группы 27 (64,3%) содержали от 1 до 4 плазмид молекулярной массы от 1,1 до 130 МБа. Различную устойчивость к антибиотикам проявили 9 штаммов микроба. К одному антибиотику оказались устойчивыми 5 штаммов, к двум антибиотикам — 2 штамма, к трем — 2 штамма. Все антибиотикорезистентные штаммы, кроме Б. Ьгес1епеу плазмидовара 60 : 1,6 МБа, были бесплазмидными. Следовательно, можно говорить о том, что устойчивость к антибактериальным препаратам у этих штаммов имеет хромосомную природу.
Больший интерес имеют серовары сальмонелл 2 группы, представленные двумя и более культурами. Штаммы четырех сероваров не содержали плазмид. Штаммы шести сероваров оказались гомогенными по плазмидному спектру. Тем не менее, штаммы большинства сероваров сальмонелл (33 из 43) оказались гетерогенными по составу плазмид. Это позволило в соответствии с содержащимися в них плазмидами дифференцировать внутри 33 сероваров микроба различные плазмидные варианты (плазмидовары). Характеристика 24 сероваров, представленных от 3 до 12 штаммами микроба, показана в таблице.
Штаммы большинства изученных сероваров сальмонелл гетерогенны по спектру плазмид. Однако степень гетерогенности штаммов отличается у различных сероваров микроба. Так, наиболее гетерогенны-
Резюме
Этиологическая значимость редко выявляемых сероваров сальмонелл за 1995-2005 гг. составила 10,2%. Плазмиды различной молекулярной массы выявлены у 79,5% исследованных штаммов микроба. Штаммы большинства изученных сероваров сальмонелл гетерогенны по спектру плазмид. Полученные результаты свидетельствуют об эффективности плазмидного анализа для внутривидового типирования редко выявляемых сероваров сальмонелл в процессе длительного централизованного микробиологического мониторинга за сальмонеллами.
A.V. Rakov, F.N. Shubin, N.A. Kuznetsova,
V.A. Horoshko
PHENOTYPICAL AND PLASMID CHARACTERISTICS OF RARELY ISOLATED SALMONELLA STRAINS IN PATIENTS IN THE PRIMORYE REGION
Research Institute of Epidemiology and Microbiology of the Russian Academy of Medical Sciences, Sibenan Branch, Sanitary and epidemiology supewision center of the Pacific fleet, Vladivostok
Summary
The etiological importance of rarely isolated Salmonella serovars in 1995-2005 was 10,2%. In 79,5% of studied strains plasmids of various molecular weights were found . Strains of the majority of investigated Salmonella serovars are heterogeneous on plasmid profile. The received results indicate efficiency of the plasmid analysis for intraspecific typing of rarely revealed Salmonella serovars during a long centralized microbiological monitoring for Salmonella infection.
ми оказались штаммы, относящиеся к сероварам S. remo (В), S. heidelberg (В), S. agama (В) и S. montevideo (С,), все штаммы которых имеют индивидуальные наборы плазмид. Наиболее гетерогенными по плазмидному профилю были штаммы серовара S. гето, все 7 штаммов которого дали по 7 различных плазмидных профилей. Такое распределение наблюдалось и у штаммов сероваров S. heidelberg и S. agama, однако число их штаммов было меньше — по 4 и 3 штамма соответственно. Представленная плазмидная характеристика сероваров сальмонелл позволяет дифференцировать штаммы внутри сероваров на различные плазмидовары микроба.
Напротив, серовары S. Stanley (В), S. saint-paul (В), S. isangi (С,), S. galiema (С,), S. thompson (С,) и
S. narashino (С2) характеризовались тем, что часть штаммов имела однотипный спектр плазмид, но их наборы у каждого серовара были индивидуальными. Так, 11 штаммов серовара S. saint-paul распределились на шесть плазмидоваров, среди которых плазмидный вариант микроба, маркированный плазмидами 38 : 2,1:1,4 MDa, представлен четырьмя штаммами, а плазмидовары 1,7 : 1,4 MDa и 66 : 38 : 1,4 MDa — двумя штаммами, остальные три плазмидовара представлены по одному штамму каждый.
Биохимическая характеристика штаммов внутри сероваров в основном совпадала, но были и исключения. Штамм S. isangi, не содержащий плазмид, в от-
Плазмидная характеристика штаммов редко выявляемых сероваров, выделенных от людей
Серовар Кол-во штаммов Плазмидовар (МВа)
1 2 3
S. гегао (В) 1 6,5 : 6,1 : 2,3
1 6,5 :4,3 : 1,7
1 6,5 : 4,3
1 6,1 : 2,3
1 4,3: 1,7
1 4,3
1 29
S. Stanley (В) 2 51
1 без плазмид
S. agona (В) 2 3,5
2 3,0
1 без плазмид
S. saint-paul (В) 1 73 : 34 : 2,3 : 1,4
4 38:2,1 : 1,4
2 66:38 : 1,4
2 1,7:1,4
1 3,8 : 3,0
1 48
S. Chester (В) 1 38: 1,4
1 34 : 1,4
1 без плазмид
S. derby (В) 1 34 : 3,7 : 2,9 : 2,3
1 4,6 : 3,3
1 115
без плазмид
S. brandenburg (В) 1 80 : 6,4 : 4,0
1 38:2,1
1 без плазмид
S. heidelberg (В) 1 55 :26
1 119:3,0
1 96
1 2,0
S. agama (В) 1 80:28
1 54 : 1,7
1 60
S. montevideo (С,) 1 82 : 48 : 5,7 : 3,8 : 3,2 : 2,7
1 58: 1,4
1 93
1 2,7
без плазмид
S. isangi (С,) 1 3,2:2,5 : 1,7: 1,5
3,0 : 2,6
1 3,2
1 без плазмид
Продолжение таблицы
1 2 3
8. Ьгае1и1егир (С,) 2 2,5 :2,2: 1,8
1 3,5 : 2,6
1 2,2
Б. galiema (С,) 2 47: 10:4,0
2 47 : 4,0
Б. со1Ма1е (С,) 1 60 : 3,5
2 42
3 без плазмид
5. тГап^Б (С,) 1 70:65
2 95
1 61
2 без плазмид
Б. Йютрэоп (С,) 3 90
2 без плазмид
5. пагазЫпо (С2) 3 1,9:1,7:1,4:1,3
8. тапЬаЦап (С2) 1 38 : 4,0: 1,9
1 30
2 без плазмид
Б. пешроЛ (С2) 1 2,2 : 2,0
2 без плазмид
Б. tshiongwe (С2) 1 5,4 : 4,6 : 3,6
2 1,4:1,3
9 без плазмид
Б. glostrup (С2) 1 2,6: 2,5: 1,5
3 2,6 : 2,5
1 2,9
1 2,3
Б. 1еИ11 (С2) 1 20 : 4,5 : 1,8
2 2,7
Б. dublin (О,) 2 50 : 2,3
1 40
Б. senftenberg (Е4) 1 3,9 : 2,4
8 без плазмид
Всего штаммов: 132
личие от остальных шести штаммов с различным набором плазмид, ферментировал инозит. Один штамм Б. Ьгаепс1егир плазмидовара 2,2 МБа, в отличие от остальных, также ферментировал инозит, а один штамм Б. 1опс1оп плазмидовара 61 МБа не ферментировал дульцит.
Антибиотикорезистентными оказались штаммы двух сероваров: две культуры Б. 1запф (одна плазми-довара 3,0 : 2,6 МБа и одна — бесплазмидного штамма) были устойчивы к тетрациклину, а ампициллин-резистентным оказался один из двух штаммов плазмидовара 2,5 : 2,2 : 1,8 1УГОа€еровара Б. Ьгаепс1етр.
Таким образом, большинство штаммов редко выявляемых сероваров сальмонелл, выделенных от людей, содержали плазмиды. Более того, штаммы сальмонелл оказались в значительной степени гетерогенными по составу плазмид. Внутри серовара штаммы дифференцированы на плазмидовары, содержащие индивидуальные для каждого серовара наборы плазмид. Дифференциация штаммов сальмонелл внутри сероваров по их биохимическим особенностям оказалась менее эффективной, поскольку штаммы одного плазмидовара всегда проявляют однотипные биохимические свойства. В связи с тем, что большинство штаммов сальмонелл оказались чувствительными к антибактериальным препаратам, антибиотикограмма не может быть использована для внутривидового типирования микроба. Полученные результаты свидетельствуют об эффективности плазмидного анализа для внутривидового типирования редко выявляемых сероваров сальмонелл в процессе длительного централизованного микробиологического мониторинга при сальмонеллезах.
Выводы
1. Большинство штаммов всех сероваров сальмонелл содержат плазмиды. Штаммы всех сероваров микроба высокогетерогенны по плазмидным харак-
теристикам. Это позволяет разделить штаммы всех сероваров микроба на плазмидовары.
2. Фенотипические методы, такие как определение биотипа и антибиотикограмма, не могут быть использованы для внутривидового типирования редко выявляемых сальмонелл.
3. Плазмидный анализ является эффективным методом для длительного централизованного микробиологического мониторинга при сальмонеллезной инфекции.
Литература
1. Ковальчук Н.И., Шубин Ф.Н., Хорошко В.А. и др. // Журн. микробиол. 1997. №5. С. 88-91.
2. Шубин Ф.Н., Китаев В.М., Ревина Г.В. и др. // Экология патогенных бактерий. Новосибирск, 1994. С. 75-88.
3. Шубин Ф.Н., Ковальчук Н.И., Кузнецова Н.А. и др. // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2002. №1. С. 36-40.
4. Chiu С.-Н., Su L.-H., Chu С. // Clin. Microbiol. Rev. 2004. Vol. 17, №2. P. 311-322.
5. Kado C.I., Liu S.T. //J. Bacteriol. 1981. Vol. 145, №.3. P. 1365-1373.
6. Rychlik I., Svestkova A., Karpiskova R. // Vet. Microbiol. 2000. Vol. 74. P. 217-225.
7. Suh D.K., Song J.C. //]. Vet. Sci. 2006. Vol. 7, №1. P. 37-41.
□ □□
УДК616.98: 612.017.1
А.В. Кузнецова, И.П. Кольцов, С.С. Рудь
ПРОСПЕКТИВНОЕ ПРОГНОЗИРОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ТЕРАПИИ ХРОНИЧЕСКОЙ НСУ-ИНФЕКЦИИ НА ОСНОВАНИИ ДАННЫХ ИММУННОГО СТАТУСА
Государственное учреждение здравоохранения “Центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями” министерства здравоохранения Хабаровского края; Дальневосточный государственный медицинский университет, г. Хабаровск
На сегодняшний день актуальным вопросом ведения пациентов с хронической НСУ-инфекцией, получающих специфическую этиопатогенетическую терапию, является своевременное принятие решения о назначении, а также продолжении или прекращении лечения на основании предикторов эффективности [1,2,8,11].
Существующие рекомендации по использованию в качестве предиктора эффективности лечения феномена негативации ПЦР через 3 мес. после начала терапии не могут быть пЬЛностью экстраполированы для ведения сложных категорий пациентов, к которым, безусловно, относятся потребители наркоги-
