CC BY
13
Иванова Е. В., Никитюк Д. Б., Шидин В. А.
ФГБОУ ВО Тюменский ГМУ Минздрава России, г. Тюмень ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии», г. Москва
ФЕНОМЕН КОНВЕРГЕНЦИИ ПРИ РАЗВИТИИ ЖЕНСКОЙ ГОНАДЫ ЧЕЛОВЕКА И ФОРМИРОВАНИИ КОЖНОГО РЕГЕНЕРАТА
В научной литературе при анализе гисто- и органогенезов недостаточно освещены вопросы хронологии при формировании сложных многоклеточных структур за счет элементов различных эмбриональных закладок. Изучены процессы эмбрионального органогенеза и формированиерепаративныхрегенератов. Показано, что они сопряжены с хроновектором конвергенции клеток производных дифферонов эпителиального и мезенхимального генезов.
Ключевые слова: эмбриональный органогенез, человек, репаративный регенерат, эксперимент, феномен конвергенции.
Актуальность. Исследования эмбриональных морфогенезов на примере развития ряда органов зародыша человека (12-23 стадии Карнеги) показали, что процессы становления и последующей органотипической дифференцировки зачатка сопровождается миграцией клеток мезенхимального и эпителиального генезов и их включением в состав формирующихся клеточных коопераций (Гузенкова Д. В., 2016; Шидин В. А., 2017; Соловьев Г. С., 2018). В работах Маркеловой П. П. (2014), Ивановой Н. В. (2015), Идрисова Р. А. (2016) установлены хронологические стадии развития производных жаберного аппарата, промежуточного мозгового пузыря и стомодеума человека в эмбриональном периоде пренатального онтогенеза, а также этапы при формировании регенерата кожи после термических и химических ожогов в условиях эксперимента на животных. В частности, было показано, что время формирования межтканевых контактов нейроэктодермы промежуточного мозгового пузыря с кожной эктодермой и эпителием стомодеума следует рассматривать в качестве критического периода эмбрионального развития, своеобразного показателя эпигенеза.
В условиях эксперимента были получены сведения о динамике соотношения клеток производных дифферонов различного генеза в составе кожного регенерата. Оригинальным явлением в репаратив-ной регенерации было также отмечено различное состояние структурной организации эпителиального и соединительно-тканного компонентов регенерата и итоговые «реституция» либо «субституция». Все вышеотмеченное побудило к выполнению настоящего исследования.
Цель исследования: выявить значение феномена конвергенции на этапах эмбриогенеза человека и формирования кожного регенерата после термического и химического ожогов.
Материал и методы. Для анализа закономерностей развития яичника человека были изучены 118 эмбрионов и 28 плодов, полученных после проведения медицинского аборта по социальным показаниям от анамнестически здоровых женщин с их информированного согласия в лечебных учреждениях г. Тюмени. Процедура забора материала соответствовала действующему законодательству РФ.
На каждый срок исследования брали не менее 3 зародышей. С помощью данных акушерского анамнеза, визуальной оценки тела зародыша, проведения морфометрии и сопоставления полученных результатов с классическими таблицами линейных размеров и описаний объектов эпигенеза определяли возраст зародыша.
Для изучения феномена конвергенции на этапах формирования кожного регенерата провели эксперимент в зимне-весенний период года на аутбредных лабораторных мышах-самцах массой 20-30 г (всего 55 животных). Термический ожог формировали аппаратом «Терцик» Я8-232С (Россия) с выносным металлическим модулем 1 см2, при 1 = 80 °С и экспозицией 3 минуты. Отмеченный режим вызывал ожог кожи II степени (Иванова Н. В., 2015). Химический ожог вызывали путем втирания в кожу спины животного спиртово-ацетонового раствора 2,4-динитрохлорбен-зола (2,4-ДНХБ) один раз в сутки в течение 5 дней. После термического ожога и через 5 суток после втирания 2,4-ДНХБ на пораженные участки наносили гель «Эйковит» производства Салехардского рыбоконсервного комбината (ТУ 9158-001-34458166-95).
Материал забирали после декапитации животных под эфирным наркозом на 3, 7, 20, 30 сутки опыта. Материал эмбриогенеза человека и кожные регенераты фиксировали в 10% нейтральном формалине, заливали в парафин. Серийные гистологические срезы окрашивали гематоксилином Майера и эозином, ШИК-реакцией по Мак-Манусу.
Иммуногистохимические исследования проводили на парафиновых срезах. Срезы, покрытые полилизином, помещали на адгезивные стекла (Мепге1-01а88ег, Германия). Иммуногистохимический анализ проводили с использованием непрямого иммунопероксидазно-го метода в соответствии с рекомендациями фирмы-изготовителя. При постановке иммуногистохимической реакции для выявления антигена Ю-67 - маркер ядер пролиферирующих клеток в эпителиальных структурах - эпидермис, волосяной фолликул, сальная железа - и тканях мезенхимного генеза кожного регенерата, СБ3+ - маркера Т-лимфоцитов и СБ1а+ - маркера клеток Лангерганса - использовали антитела и реактивы фирмы КеоМагкегеБгетоП:, США.
При приготовлении срезов для иммуногистохи-мического исследования выполняли ряд требований, необходимых для успешного проведения реакции: срезы были ровные, толщиной 4 мкм, расправлялись в теплой дистиллированной воде (+25 °С) и не подвергались перегреванию, так как температура выше +56 °С может разрушить антиген, что приведет к ложному результату реакции. Срезы после постановки гистохимической реакции докрашивали гематоксилином Майера, подвергали дегидратации, заключали в канадский бальзам.
Результаты. Развитие яичника человека сопровождается оригинальным механизмом органогенеза - формированием эмбрионального мезонефраль-но-гонадного комплекса (МГК). Эмбриональный органокомплекс - это структура сложного генеза, которая сочетает в малом объеме, что весьма важно для эмбриона, компоненты двух органов - гонады и первичной почки. Морфогенетические и ростовые процессы в женской гонаде завершаются изоляцией гонадного компонента от мезонефрального с построением яичника и мезонефроса. В основе исследования феномена конвергенции при развитии яичника лежат наблюдения за перемещением первичных половых клеток овоцитарного дифферона в организме развивающейся девочки. На 12 СК МГК имеют вид удлиненных тяжей, выступающих во вторичную полость, по бокам от центральной линии тела зародыша. Основание комплексов без резких г аниц переходит в мезенхиму туловищного отдела. Поверхность МГК выстилается целомическим эпителием. В основе МГК находятся мезонефральный проток (Вольфов проток) и промежуточная мезонефральная мезодерма (мезенхима по Terminología Histológica 2014), и формирующиеся структурно-функциональные единицы первичной почки - мезонефроны. В наружном (подэ-пителиальном отделе МГК) на 12 СК обнаруживаются первичные половые клетки овоцитарного дифферона. Характер расположения первичных половых клеток -дискретный. Они располагаются либо в мезенхиме, либо в составе покровного эпителия. Первичные половые клетки характеризуются высокой миграционной способностью, транспортируются из энтодермы желточного мешка по мезенхиме и сосудам дорзаль-ной брыжейки, прерывая свой путь на уровне МГК или же проникает в полость целома.
К 16 СК МГК содержит по длиннику мезонефро-ны, находящиеся на разных стадиях органотипиче-ской дифференцировки в краниальных, центральных и каудальных отделах комплекса. Гонадный компонент МГК характеризуется кластерным вариантом локализации первичных половых клеток, что мы рассматриваем как один из критических периодов развития яичника.
К 21 СК в теле зародыша формируется единый мезо-мета-эпинефрально-гонадный комплекс, органы которого объединены оболочками либо связками. В гонадном компоненте МГК строятся тяжи фолликулярного эпителия, которые обрастают кластеры
клеток овоцитарного дифферона, начинается фолли-кулогенез, и выселение первичных половых клеток в целомическую полость - «провизорная овуляция» -прекращается. В растущем яичнике определяются корковая и мозговая зоны, прослойки интерстиция мезонефроса бурно разрастаются и мигрируют в межуточную основу яичника. В корковой зоне нарастает содержание ШИК-позитивных первичных половых клеток, что указывает на снижение их миграционных потенций и обеспечивает оформление «банка» клеток овоцитарного дифферона, без чего невозможно было бы дальнейшее становление гетерохронного органа (рис. 1).
Wr
Рис. 1. Эмбрион человека. 21 стадия Карнеги. ШИК-позитивные клетки овоцитарного дифферона (1); покровный эпителий (2); целом (3). Фиксация: 10% нейтральный формалин. ШИК-реакция по Мак-Манусу. 40x10
Анализ материалов по изучению развития женской гонады человека показал, что органогенез гете-рохронного органа характеризуется неодинаковой активностью миграционной способности первичных половых клеток на стадиях эмбрионального периода пренатального онтогенеза, формированием различных вариантов их миграционных потоков (дискретный, кластерный), хроновектором конвергенции в состав мезонефрально-гонадного комплекса.
Процессы восстановления кожи в зоне пораженного участка после действия ожогового фактора представляют результат сочетания реализации биологических потенций тканей сложного по составу и структурной организации органа, каким является кожа, их способности к реализации эпигенетических показателей, а также от состояния локальных и дистантных вариантов регуляции клеток тканевотипиче-ских и органотипических признаков формирующегося регенерата. Следует отметить, что репарация кожи характеризовалась особенностями в опытной серии с использованием «Эйковита» и контрольной серии, где отмеченный препарат не применялся.
К завершению 3 суток опыта в зоне дефекта при гистологическом исследовании выявляли эпителиальные разрастания, исходящих из краевых участков пораженного эпидермиса или сохранившихся в зоне
Рис. 2. Состояние кожного регенерата после химического ожога. Стадия 7 суток. СБ3 позитивные клетки (коричневое окрашивание) в эпителиальном и соединительно-тканном компонентах регенерата. Фиксация: 10% нейтральный формалин. Визуализация при помощи пероксидазы, докраска гематоксилином Майера. 10x100
дефекта переживающих островков. В эпидермисе намечается граница отторжения между зернистым и ороговевшими слоями. Вместе с эпителием слущи-ваются компоненты волосяных воронок и внутреннего корневого эпителиального влагалища, в том числе секрет сальных железа. Вокруг волосяных фолликулов выявляются очаги отека и участки изоляции сумки волоса от соединительной ткани сосочкового слоя дермы. Воспаление начинает трансформироваться в продуктивную стадию.
На 7-е сутки эксперимента обнаруживаются тяжи погружного роста, число которых было значительно больше в регенератах опытной серии. В это же время в регенератах начинают выявляться зачатки сальных желез, не связанные с волосяными фолликулами. В последующем из них образуются свободно открывающиеся на поверхность регенерата сальные железы.
К 20-м суткам отмечается кератинизация эпителиальных клеток покровного слоя регенерата. Формируется «вторая волна» сальных желез за счет новообразованных волосяных фолликулов.
На конечных стадиях эксперимента регенерация кожи характеризуется состоянием реституции в опытной серии и зачастую состоянием субституции в контрольной. В опытной серии восстановленный участок достигает уровня органотипической характеристики. В нем выявляются эпидермис, сосочковый и сетчатый слои дермы, гиподерма, определяются дериваты - волосы и сальные железы. Морфологические преобразования кожного регенерата сопровождались динамикой пролиферативной активности эпителиального и мезенхимального генеза (динамика Ю-67 - маркер пролиферации клеток), миграцией СБ1а-позитивных клеток в состав эпителиального пласта и дериватов кожи, а также миграцией СБ3 по-
зитивных клеток в эпителиальные и соединительнотканные компоненты. Проявления органотипической дифференцировки регенерата начинались со стадии 7 суток эксперимента, что соответствовало срокам выявления СБ 1а и СБ3 в эпидермисе, дериватах и соединительно-тканных компонентах регенерата (рис. 2).
Выводы. Изучив репаративную регенерацию кожи, мы пришли к убеждению, что восстановительные процессы в зоне дефекта сопровождаются миграцией клеток производных эктодермального и ме-зенхимального генезов. Итоговое состояние кожного регенерата (реституция, субституция) коррелирует с хроновектором конвергенции клеток различных дифферонов на стадиях регенераторного процесса.
Литература
1. Гузенкова Д. В. Мезонефральногонадный комплекс человека в эмбриональном периоде пренатального онтогенеза / Д. В. Гузенкова, А. А. Вотинцев, Г. С. Соловьев, С. М. Пантелеев, В. Л. Янин, Л. В. Вихарева, О. Г. Соловьева, А. В. Маргарян, В. А. Шидин, Д. А. Мухамедья-ров // Медицинская наука и образование Урала. 2016. Т. 17, № 1 (85). С. 41-45.
2. Соловьев Г. С. Дивергентная теория эволюционирования тканей академика Н. Г. Хлопина и дивергенция органогенеза при формировании провизорных структур / Соловьев Г. С., Янин В. Л., Пантелеев С. М., Баженов Д. В., Вихарева Л. В., Шидин В. А., Молокова О. А., Соловьева О. Г., Маргарян А. В., Иванов И. В., Иванова Е. В., Истомина О. Ф., Морозова Е. В., Мкр-тычева К. К., Мухамедьяров Д. А., ГарчукИ. В., Вотинцев А. А., Хадиева Е. Д., Алексеева Ю. В., Сазонова Н. А., Анищенко О. А., Карпова Я. А., Соловьев В. Г., Аптекарь И. А., Бондаренко О. М., Шидин А. В., Спирина Ю. С., Гузенкова Д. В. // Вопросы морфологии XXI века. Выпуск 5. Сборник трудов: «Гистогенез, реактивность и регенерация тканей». СПб.: «Издательство ДЕАН», 2018. С. 53-64.
3. Шидин В. А. Дивергенция органогенеза на этапах витального цикла провизорного органа и провизорной стадии формирования кожного регенерата /
B. А. Шидин, А. В. Маргарян, Г. С. Соловьев, В. Л. Янин,
C. М. Пантелеев, А. В. Шидин // Материалы международной научной конференции «Актуальные вопросы морфологии», посвященной 70-летию Государственного медицинского и фармацевтического университета им. Николая Тестемицану (г. Кишинэу, Республика Молдова, 2015). С. 415-418.
Сведения об авторах
Иванова Елена Викторовна, врач-дерматовенеролог, соискатель кафедры гистологии с эмбриологией ФГБОУ ВО Тюменский ГМУ Минздрава России, г. Тюмень. Никитюк Дмитрий Борисович, член-корреспондент РАН, д. м. н., профессор, директор ФГБУН «ФИЦ питания и биотехнологии», г. Москва.
Шидин Владимир Александрович, к. м. н., доцент кафедры гистологии с эмбриологией ФГБОУ ВО Тюменский ГМУ Минздрава России, г. Тюмень.
Ivanova E. V., Nikitiuk D. B., Shindin V. A.
THE PHENOMENON OF CONVERGENCE IN THE DEVELOPMENT OF FEMALE GONADS AND THE FORMATION OF SKIN REGENERATE
In the scientific literature, the analysis of histogenesis and organogenesis does not sufficiently cover the issues of chronology in the formation of complex multicellular structures due to the elements of various embryonic bookmarks. The processes of embryonic organogenesis and the formation of reparative regenerates were studied. It is shown that they are chrono-vector of convergence of the cells, derived from epithelial and mesenchymal differons.
Keywords: embryonic organogenesis, human, reparative regenerate, experiment, convergence phenomenon.
Курбанов М. А., Кузьмина А. Ю.
ФГБОУ ВО Тюменский ГМУ Минздрава России, г. Тюмень
АНАЛИЗ ХРОНИЧЕСКОЙ ОФТАЛЬМОЛОГИЧЕСКОЙ ПАТОЛОГИИ И ЭФФЕКТИВНОСТИ ДИСПАНСЕРИЗАЦИИ ПАЦИЕНТОВ
В статье представлен анализ распространённости и эффективности диспансеризации пациентов с хроническими офтальмологическими заболеваниями на территории городской поликлиники Тюмени. Изучена структура офтальмологической патологии у данной категории пациентов. Ежегодно увеличивается число пожилых людей, население страны стареет. В связи с этим повышается число заболеваний в популяции и инвалидность от них. Количество посещений к врачам возрастает год от года, необходимо проводить анализ эффективности работы с группой пациентов страдающих хроническими заболеваниями, для разработки дальнейших административных решений с целью улучшения оказания качества офтальмологической помощи. Ключевые слова: диспансеризация, хронической офтальмологическая патология, глаукома, диабетическая ней-роретинопатия, миопия высокой степени, центральная дистрофия сетчатки.
Актуальность. С каждым годом увеличивается число пожилых людей, население страны стареет. В связи с этим повышается число заболеваний в популяции (гипертоническая болезнь, ишемическая болезнь сердца, сахарный диабет, атеросклероз и др.), инвалидность от них [3, 4, 6] и офтальмологические проявления [8, 10, 12]. Кроме того, по данным ГБУЗ ТО «Центр профилактики и борьбы со СПИД» отмечается увеличение удельного веса ВИЧ-инфицированных пациентов за 12 месяцев 2016 г. на +6,0%, в 2015 году +8,6% [9]. Относительно высокий процент осложнений (70%) ВИЧ-инфекции приходится на орган зрения и может проявляться заболеваниями, как переднего, так и заднего отрезков глаза, с торпидным течением клинических симптомов [9]. Количество посещений к врачам возрастает год от года, поэтому пациенты порой не могут во время попасть на прием к офтальмологу [11]. Реализация на протяжении последних лет приоритетного национального проекта «Здоровье» и других федеральных, региональных и муниципальных отраслевых программ вносят позитивный вклад в решение ряда проблем, влияющих на здоровье населения. Повышается доступность медицинской помощи, уровень технической оснащенности учреждений здравоохранения, возвращается идеология диспансеризации [2, 5, 7]. Однако радикального изменения ситуации с состоянием здоровья населения в настоящее время не происходит [1, 5, 7, 13]. В этих условиях принципиально важным являет-
ся подход, основанный на повышении роли профилактики в оздоровлении населения, в том числе лиц с соматическими неинфекционными заболеваниями [1, 2, 6, 13].
Цель. Провести анализ распространённости хроническими офтальмологическими заболеваниями пациентов на территории городской поликлиники, оценить эффективность диспансеризации и лечения различных офтальмологических нозологий.
Материалы и методы. Исследование проводилось на базе ММАУ ГП № 14 г. Тюмени в течение 2 лет (2014-2015 гг.). Группу исследования составили 840 пациентов (1680 глаз) в возрасте 27-74 лет. Для выявления патологии глаз использовались стандартные офтальмологические методы исследования: визоме-трия, тонометрия, периметрия, биомикроскопия переднего отрезка глаза и стекловидного тела, офтальмоскопия глазного дна. Статистическая обработка результатов исследования проводилась при помощи программы 8ТЛТ18Т1КЛ 6. Использовались коэффициенты Стьюдента при уровне значимости р < 0,05. Данные описательной статистики представлены в виде М ± а (М-среднее значение, а -стандартное отклонение).
Результаты исследования. На территории ММАУ ГП № 14 за 2014 год выявлено 720 случаев хроническими заболеваниями органа зрения. В 2015 году эта цифра составила 840 пациента. Увеличение удельного веса заболевших на 16,7% можно объяснить старе-
