CC BY
41
рукописи в печать.
Декларация о финансовых и иных взаимодействиях. Все
авторы принимали участие в разработке концепции и ди-
зайна исследования и в написании рукописи. Окончательная версия рукописи была одобрена всеми авторами. Авторы не получали гонорар за исследование.
Работа поступила в редакцию: 28.02.2015 г.
ЛИТЕРАТУРА
1. Абаев Ю.К. Справочник хирурга. Раны и раневая инфекция. - Ростов-на-Дону: Феникс, 2006. - 427 с.
2. Мирович В.М., Федосеев А.П., Федосеева Г.М. и др. Биолого-фармакологическое действие настоек из растений представителей рода Rhododendron L. // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2003. - Т. 27. №5. - С.70-75.
3. Государственный реестр лекарственных средств 2014 г. / http://grls.rosminzdrav.ru/grls.aspx.
4. Горшков А.Г., Мурашкина И.А., Верещагин А.Л. и др. Количественное определение биологически активных компонентов растения Rhododendron aureum Georgi методом ВЭЖХ // Химико-фармацевтический журнал. - 2000. - Т. 34. №12. - С.30-32.
5. Леонидов Н.Б., Воронина Т.А., Скачилова С.Я. и др. Развитие фармацевтической промышленности и национальная безопасность России // Производство лекарственных средств. - 2014. - №2(3). - С.50-56.
6. Мурашкина И.А., Гордеева В.В., Горячкина Е.Г. Оптимизация технологии сухого экстракта побегов рододендрона золотистого // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2013. - №3.- С.100-102.
7. Сырчина А.И., Мурашкина И.А., Ушаков И.А. и др. Компонентный состав фенольных соединений Rhododendron aureum G. // Растительные ресурсы. - 2000. - Т. 36. Вып. 3. -С.52-55.
REFERENCES
1. Abaev Y.K. Handbook of the surgeon. Wounds and wound infection. - Rostov-on-Don: Fenix, 2006. - 427 p. (in Russian)
2. Mirovich V.M., Fedoseev A.P., Fedoseeva G.M., et al. Biological and pharmacological effects of infusions of the plants, representatives of Rhododendrons L. genus // Sibirskij medicinskij zurnal (Irkutsk). - 2003. - Vol. 40. №5. - P.69-71. (in Russian)
3. Gosudarstvennyj reestr lekarstvennyh sredstv 2014 / http:// grls.rosminzdrav.ru/grls.aspx. (in Russian)
4. Gorshkov A.G., Murashkina I.A., Vereshhagin A.L., et al. The quantitative determination of biologically active components of plants Rhododendron aureum Georgi by HPLC // Pharmaceutical Chemistry Journal. - 2000. - Vol. 34. №12. - P.30-32. (in Russian)
5. Leonidov N.B., Voronina T.A., Skachilova S. Ya., et al. Pharmaceutical industry development and national security of Russia // Drug Development and Registration. - 2014. - №2 (3). -P.50-56. (in Russian)
6. Murashkina, I.A., Gordeeva V.V., Goryachkina E.G. Technology optimization of dry extract shoots of Rhododendron aureum G // Sibirskij medicinskij zurnal (Irkutsk). - 2013. - №3.-P. 100-102. (in Russian)
7. Syrchyina A.I., Murashkina I.A., Ushakov I.A., et al. Component composition of phenol compounds of Rhododendron aureum Georgi // Rastitel'nye resursy. - 2000. - Vol. 36. I.3. - P.52-55. (in Russian)
Информация об авторах:
Цыренжапов Арсен Владимирович - к.м.н., младший научный сотрудник, 664003, г. Иркутск, ул. Борцов Революции, д.1, тел. 8 (3952) 290354, e-mail: [email protected]; Мурашкина Ирина Анатольевна - к.ф.н., доцент кафедры технологии лекарственных форм, 664003, г. Иркутск, ул. Красного Восстания, 1, тел. 8 (3952) 243447; Мирович Вера Михайловна -д.ф.н., заведующая кафедрой фармакогнозии и ботаники, 664003, Иркутск, ул. Карла Маркса, 10, тел. 8 (3952) 24-34-47, e-mail: [email protected]; Гольдберг Олег Аронович - к.м.н., ведущий научный сотрудник, 664003, г. Иркутск, ул. Борцов Революции, д.1, тел. 8 (3952) 290354; Васильев Игорь Борисович - к.ф.н., ассистент кафедры. 664003, г. Иркутск,
ул. Красного Восстания, 1, тел. 8 (3952) 24-34-47.
Information About the Authors:
Tsyrenzhapov Arsen V. - Ph.D., Researcher, 1, B. Revolutsii, Irkutsk< Russia, tel. 8 (3952) 290354, e-mail: [email protected]; Murashkina Irina A. - PhD Pharmacy, Associate Professor of department Technology of drugs. 664003, 10, K. Marks str., Irkutsk, Russia, tel. 8 (3952) 243447; Mirovich Vera M. - Ph.D., Head of the Department of Pharmacognosy. 10, K. Marks str., Irkutsk, Russia, tel. 8 (3952) 24-34-47, e-mail: [email protected]; Goldberg Oleg A. - Ph.D., Researcher. 1, B. Revolutsii, Irkutsk< Russia, tel. 8 (3952) 290354; Vasilyev Igor B. - PhD Pharmacy, assistant professor of department Technology of drugs. 664003, 10, K. Marks str.,
Irkutsk, Russia, tel. 8 (3952) 243447.
© АЖУНОВА Т.А., ЛУБСАНДОРЖИЕВА П.-Н.Б. - 2015 УДК: 615.322
фармакотерапевтическая эффективность растительного средства при нарушениях гемостаза, вызванных циклофосфамидом
Татьяна Александровна Ажунова, Пунцык-Нима Базыровна Лубсандоржиева (Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, Улан-Удэ, директор - д.б.н., проф. Л.Л. Убугунов)
Резюме. 5-компонентное растительное средство, в состав которого входят экстракты сухие из листьев Urtica dioica L., травы Polygonum aviculare L., Achillea millefolium L., мелкоизмельченные порошки корневищ Zingiber officinale Roscoe и коры Cinnamomum cassia L. оказывает регулирующее влияние на основные звенья системы гемостаза: тромбоцитарное, коагуляционное и фибринолитическое при циклофосфановой интоксикации лабораторных животных; оказывает положительное влияние на клеточный гомеостаз периферической крови при повреждающем действии циклофосфана.
Ключевые слова: растительное средство, Urtica dioica, Polygonum aviculare, Achillea millefolium, Zingiber officinale, Cinnamomum cassia, циклофосфамид, гемостаз.
pharmacotherapeutic efficiency of herbal remedy in cyclophospha
MIDE INDUCED HEMOSTASIS DAMAGE
T.A. Azhunova, P.B. Lubsandorzhieva (Institute of General and Experimental Biology SB RAS, Ulan-Ude, Russia)
Summary. 5-component herbal remedy, consist of dry extracts from the leaves of Urtica dioica L., herb Polygonum aviculare L., Achillea millefolium L., crude powdered rhizome Zingiber officinale Roscoe and bark Cinnamomum cassia L. has a regulating effect on the basic elements of the system hemostasis: platelet, coagulation and fibrinolytic during cyclophosphamide induced toxicity of laboratory animals; positive effect on cellular homeostasis of peripheral blood in cyclophosphamide induced damage.
Key words: herbal remedy, Urtica dioica, Polygonum aviculare, Achillea millefolium, Zingiber officinale, Cinnamomum cassia, cyclophosphamide, hemostasis.
Применение химиотерапевтических препаратов и развитие злокачественных новообразований в организме сопровождается мембранотоксическим действием, связанным с интенсификацией процессов липопероксидации, генераций свободных радикалов [2,5]. Формирование свободных радикалов и продуктов перекисного окисления липидов приводит к значительным нарушениям гемостатического потенциала, что проявляется токсическим повреждением тромбоцитов, снижением их способности к агрегации, резкому дефициту факторов свертывания крови, снижению концентрации фибриногена, повреждению сосудистых эндотелиальных клеток, снижению фибринолитической активности, уменьшению синтеза простагландинов, оказывающих антикоагу-лянтное действие, разрушению клеточных мембран и повышению их проницаемости, выходу факторов свертывания крови, подавлению деления и регенерации клеток (антифиброзный эффект), развитию острого и подострого синдрома ДВС-синдрома [4].
На основании вышесказанного разработано растительное средство (условное название «Эритрофит»), в состав которого входят сухие экстракты из листьев Urtica dioica L., травы Poligonum aviculare L., Achillea millefolium L. и мелкоиз-мельченные порошки корней и корневищ Zingiber officinalis Roskol., коры Cinnamomum cassia.
Цель работы - установить возможность фармакологической коррекции растительным средством побочного действия циклофосфамида на систему гемостаза.
Материалы и методы
Растительное сырье и пряности приобретены в аптечной и торговой сети. Экстракты сухие из U. dioica, P. aviculare, A. millefolium получали последовательной экстракцией спиртом этиловым (80% и 40%) и водой горячей (100оС) для более полного извлечения биологически активных веществ. Экстракты смешивали с мелкоизмельченными порошками Z. officinale и C. cassia для получения средства «Эритрофит». Для опытов готовили отвар (1:10) «Эритрофита», который использовали в виде водной суспензии со шротом.
Эксперименты проведены на 45 крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой 160-170 г. Животные находились в стандартных условиях содержания, на обычном для указанного вида животных рационе при свободном доступе к воде и пище. Эксперименты на животных осуществляли в соответствии с требованиями Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986). Протокол Исследования согласован с этическим комитетом Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (протокол № 5 от 03.02.2009 г.).
Определение острой токсичности растительного средства «Эритрофит» проводили согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» [3].
Для моделирования цитостатической болезни у белых крыс использовали циклофосфамид, который непосредственно перед применением растворяли в физиологическом растворе и вводили лабораторным животным внутрибрю-шинно в максимально переносимой дозе (МПД), равной 7 мг/ кг 1 раз в сутки в течение 10 дней [3]. «Эритрофит» животным опытной группы вводили per os в форме водной суспензии в экспериментально-терапевтической дозе 50 мг/кг и объеме 10 мл/кг 1 раз в день в течение всего эксперимента. Крысы контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме. Исследования проводились через 10 суток от начала эксперимента.
Показатели периферической крови определяли на автоматическом гематологическом анализаторе «Абакус» со стандартными реактивами. Исследование системы гемостаза проводили с использованием набора высокостандартизован-ных реагентов, прошедших предварительное тестирование на эталонных образцах плазмы фирмы «Технология-стандарт». Влияние «Эритрофита» на сосудисто-тромбоцитарное звено системы гемостаза оценивали по количеству тромбоцитов в периферической крови, агрегационнной активности и адгезии тромбоцитов (Кушкин, 2012). Определяли активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), протром-биновое время (ПВ), активированное время рекальцифика-ции плазмы (АВР), протромбиновое (тромбопластиновое) время (ПВ).
Перед проведением статистического анализа все исходные данные были проверены на нормальность и однородность с использованием метода Шапиро-Уилка. Для обработки результатов исследований использованы программы 81а118Иеа 6.0. Различия между экспериментальными группами по исследуемым параметрам считали значимыми при стандартном для медико-биологических экспериментов при р<0,05.
Результаты и обсуждение
При введении циклофосфамида (контроль) содержание гемоглобина в крови снижается на 32%, эритроцитов - на 47%, на 22% уменьшается количество лейкоцитов по сравнению с показателями у крыс интактной группы (табл. 1).
Таблица 1
Влияние «Эритрофита» на показатели периферической крови на фоне введения циклофосфамида
Показатели Группы животных
Интактная (n=10) Контрольная (циклофосфамид + Н2О) (n=8) Опытная (циклофосфамид + «Эритрофит») (n=8)
Гемоглобин, г/л 149,40±5,21 102,80 ± 9,93 136,00 ± 3,21*
Эритроциты, 1012 /л 5,91±0,17 3,75 ± 0,31 6,44 ± 0,17*
Лейкоциты, 109/л 8,00±0,30 6,30 ± 0,18 7,88 ± 0,20*
Гематокрит, % 35,56±0,71 20,64 ± 2,50 35,75 ± 1,50*
Лимфоциты, абс. 13,5±0,22 6,70± 0,30 9,50± 0,10*
Моноциты, абс. 1,00± 0,10 2,60± 0,20 0,90± 0,05*
Примечание: * здесь и далее разница значима при р<0,05; п - количество животных в группе.
Курсовое ведение животным «Эритрофита» сопровождается предупреждением развития анемии и лейкопении: количество эритроцитов и лейкоцитов, содержание гемоглобина в крови повышается на 32%, лимфоцитов - на 41% по сравнению с данными в контроле, что очевидно связано с миграцией лимфоцитов из лимфоидных органов, как проявление компенсаторной реакции на миелосупрессию, вызванную введением цитостатика. Таким образом, «Эритрофит» оказывает заметное положительное влияние на клеточный гомеостаз периферической крови при повреждающем действии циклофосфамида.
Обнаружено значительное угнетение плазменно-коагуляционного звена гемостаза при введении циклофос-фана (табл. 2), что доказывается значимым удлинением времени свертывания крови на 36%. При исследовании тромбо-цитарного звена у крыс, получавших только циклофосфа-мид, показано, что количество тромбоцитов увеличивается на 28%, протромбиновое время возрастает на 43%, тромби-новое время - на 72%, АЧТВ - более чем в 2 раза, протром-биновый индекс снижается на 24%, что подтверждает нарушение как «внешнего», так и «внутреннего» пути активации свертывания крови.
Используя базисные показатели системы гемостаза,
исследовали влияние «Эритрофита» на состояние тром-боцитарного и коагуляционного звеньев гемостаза и фи-бринолиза. Циклофосфамид оказывает непосредственное влияние на количественный дефект фибриногена, что подтверждается снижением содержания фибриногена на 46% по сравнению с данными у интактных крыс. Курсовое введение «Эритрофита» сопровождается снижением количества тромбоцитов на 25%, протромбинового времени - на 22%, тромбинового времени - на 33% и АЧТВ - на 24 %, содержание фибриногена возрастает на 50% по сравнению с показателями в контроле (табл. 2).
Влияние «Эритрофита» на показатели системы гемостаза у белых крыс на фоне введения циклофосфамида
Показатели Группы животных
Интактная (n=6) Контрольная (циклофосфамид + Н2О) (n=5) Опытная (циклофосфамид + «Эритрофит») (n=6)
Время свертывания, мин 4,90±0,06 6,66± 0,33 5,65± 0,20
Тромбоциты, 109/л 243,00±3,40 310,12 ± 15,11 233,20 ±10,15*
Протромбиновое время, с 18,20±0,10 26,20±1,10 20,45±1,70
Тромбиновое время, с 11,60±1,12 29,30±1,00 19,65±1,15*
Протромбиновый индекс, % 100,2±1,90 76,74±1,30 89,90±3,44*
Фибриноген, г/л 3,67±0,12 2,00±0,12 3,00±0,20*
Агрегация тромбоцитов с АДФ, сек 11,94±0,30 16,33±1,10 12,10± 1,11*
АЧТВ, с 17,11±0,91 36,55±2,10 28,00±1,10*
Таким образом, «Эритрофит» способствует сохранению сопряженности реакций между процессами свертывания крови и фибринолиза. Исследование влияния растительного
средства на конечную стадию свертывания крови - переход фибриногена в фибрин под действием тромбина показало замедление образования сгустка фибрина.
В целом, «Эритрофит» в экспериментально-терапевтической дозе оказывает экранирующее действие при циклофосфамидной интоксикации, нормализует сосудисто-тромбоцитарные механизмы, что проявляется в сохранности самих кровяных пластинок и их свойств, восстанавливает коагуляционные и фибринолитические свойства крови, уменьшает выраженность гематотоксического синдрома, что может быть основанием использования «Эритрофита» при нарушениях системы гемостаза, вы-шмща 2 званных циклофосфамидом.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Прозрачность исследования. Исследование не имело спонсорской поддержки. Исследователи несут полную ответственность за предоставление окончательной версии рукописи в печать.
Декларация о финансовых и иных взаимодействиях. Все авторы принимали участие в разработке концепции и дизайна исследования и в написании рукописи. Окончательная версия рукописи была одобрена всеми авторами. Авторы не получали гонорар за исследование.
Работа поступила в редакцию: 18.02.2015 г.
ЛИТЕРАТУРА
1. Кушкин А.А. Клиническая лабораторная диагностика. - М., 2012. - 720 с.
2. Микуляк Н.И., Кинзирская Ю.А., Захаркин А.Г. Значение стабилизации процессов липопероксидации новым производным 3-оксипиридина этилметилгидроксипиридина гемсук-цинатом в механизмах восстановления гемостатических нарушений, вызванных циклофосфаном // Кубанский научный медицинский вестник. - 2009. - №2. - С.102-106.
3. Руководство по экспериментальному (доклиническо-
му) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2005. - 832 с.
4. Сомонова О.В. Маджуга А.В., Елизарова А.П. Тромботические осложнения и их профилактика в онкологии. // Новые возможности лекарственного лечения онкологических больных: Материалы школы по онкологии (химиотерапия опухолей) // XIV Российский конгресс «Человек и лекарство». - М., 2007. - С.135-137.
5. Griffiths H. Antioxidant and protein oxidation. // Free Rad. Res. - 2000. - Vol. 33. - P.47-58.
REFERENCES
1. Koshkin A.A. Clinical laboratory diagnostics. - Moscow, 2012. - 720 p. (in Russian)
2. Miculak N.I., Kinzirskaya U.A., Zaharkin A.G. The importanse of process stabilization of lipid peroxidation with new derivative 3-oxypiridine of ethylmethylhydroxypiridine hemisuccinate in restoration mechanisms of hemostasic disorders caused by cyclophosphan. // Kubanskij Nauchnij Meditsinskij Vestnik. - 2009. - №2. - P.102-106. (in Russian)
3. Manual on experimental (preclinical) study of new
pharmacological substances. - Moscow, 2005. - 832 p. (in Russian)
4. Smirnova O.V., Madzhuga A.V., Nazarov A.P. Thrombotic complications and their prevention in oncology // New in drug treatment of cancer patients: Materials scho ols in oncology (cancer chemotherapy) // XIV Russian Congress "Man and medicine." -Moscow, 2007. - P.135-137. (in Russian)
5. Griffiths H. Antioxidant and protein oxidation. // Free Rad. Res. - 2000. - Vol. 33. - P.47-58.
Информация об авторах:
Ажунова Татьяна Александровна - д.б.н., в.н.с. лаборатории безопасности биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН, 670047, Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6. ИОЭБ СО РАН, ОБАВ, тел. (3012) 433463, [email protected]; Лубсандоржиева Пунцык-Нима Базыровна - к.ф.н., с.н.с. лаборатории медико-биологических исследований ИОЭБ СО РАН.
Information About the Authors:
Azhunova T.A. - PhD, DSc, leading scientist Institute of General and Experimental Biology, SB RAS. Ulan-Ude, Sakhyanova str., 6. ph. 433713, [email protected]; Lubsandorzhieva P.B. - PhD, senior scientific researcher, laboratory of medical
and biological research.
