CC BY
108
УДК 582.998 + 581.19
ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ ГАЛЕНИИ РОГАТОЙ (HALENIA CORNICULATA (L.) CORNAZ)
© Т.М. Шишмарева, О.Г. Потанина, Л.М. Танхаева, Д.Н. Оленников
Институт общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук, ул. Сахьяновой, 6, Улан-Удэ, 670047 (Россия)
E-mail: [email protected]
Проведен фармакогностический анализ надземной части галении рогатой (Halenia corniculata, сем. Gentianaceae), в ходе которого выявлены диагностические признаки сырья. Установлено, что в состав надземной части H. corniculata входят различные группы БАВ: у-пироновые соединения (ксантоны, флавоноиды), дубильные вещества, алкалоиды, три-терпены, полисахариды, органические кислоты, кумарины, иридоиды. С целью стандартизации надземной части H. corni-culata выявлены действующие вещества, для которых разработаны методики качественного и количественного определения (у-пироновые соединения). В ходе товароведческого анализа определены числовые показатели сырья.
Сокращения
БАВ - биологически активное вещество; ТСХ - тонкослойная хроматография; ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография; ГХ/МС - газовая хромато-масс-спектрометрия; ГФ - гексановая фракция; ХФ - хлороформная фракция; ЭАФ - этилацетатная фракция; БФ - бутанольная фракция; ВФ - водная фракция; СФМ - спектрофотометрический метод; ГМ - гравиметрический метод.
Введение
Род Галения (Halenia L.) семейство Горечавковые (Gentianaceae) включает около 80 видов [1]. В России этот род представлен одним видом - галения рогатая (Halenia corniculata (L.) Comaz) [2].
H. corniculata - однолетнее растение, широко распространенное в европейской части России, Западной и Восточной Сибири, на Дальнем Востоке, в Монголии и Манчжурии [3] и встречающееся на лугах, лесных опушках, по берегам рек и ручьев, в ивняках и ерниках, на луговых склонах и в разреженных лесах [4].
Надземная часть H. corniculata применяется в тибетской медицине в качестве заменителя сырья «сэр-тиг», которое назначают для лечения «жара желчи и заразы» [5, 6]. Настои и настойку H. corniculata на водке рекомендуют в качестве средства, возбуждающего аппетит и регулирующего пищеварение, а также при гастритах, болях в области кишечника, желудка, заболеваниях печени, колитах, энтероколитах [7]. Полифе-нольный комплекс H. corniculata обладает антиоксидантным и гепатозащитным действием [8].
В растении обнаружены ксантоны: 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантон; 1,2,3-тригидрокси-5-метокси-ксантон; 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон; 1-гидрокси-2,3,4,7-тетраметоксиксантон; 1-гидрокси-
2.3.5.7-тетраметоксиксантон; 1,3 -дигидрокси-2,4,5,7-тетраметоксиксантон; 1,7-дигидрокси-2,3-диметокси-
ксантон; 1,7-дигидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон; 1 -гидрокси-2,3,4,5,7-пентаметоксиксантон; 1 -гидро-кси-2,7-диметокси-3-О-р-Б-глюкопиранозилксантон; 1-О-примверозил-2,3,5-триметоксиксантон; 1-О-
примверозил-2,3,7 -триметоксиксантон; 1 -О-примверозил-2,3,4,5-тетраметоксиксантон; 1 -О-примверозил-
2.3.4.7-тетраметоксиксантон; 1-О-примверозил-2,3,5,7-тетраметоксиксантон; 1-О-примверозил-2,3,4,5,7-
пентаметоксиксантон; 1 -О-примверозил-2,3,4,5-тетраметокси-7-гидроксиксантон; 1 -О-гентиобиозил-2,3,7-триметоксиксантон; 1-О-гентиобиозил-2,3,4,7-тетраметоксиксантон; 1-О-гентиобиозил-2,3,4,5,7-пента-
метоксиксантон; 1-О-гентиобиозил-2,3,4,5-тетраметокси-7-гидроксиксантон [9-15]; флавоноиды: лютеолин,
* Автор, с которым следует вести переписку.
цинарозид, ориентин и 7-О-примверозиллютеолин [9, 13, 16]; секоиридоиды (корникулозид) [13, 14]; алкалоиды, эфирные масла и дубильные вещества [17].
В Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН (Улан-Удэ) разработаны способы получения стандартных образцов 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона и 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона из надземной части H. corniculata, обладающих желчегонным и гепатопротекторным действием [1S,19].
В данной работе приводятся результаты фармакогностического анализа надземной части H. corniculata, в ходе которого проведены морфолого-анатомическое исследование, товароведческий анализ, качественный и количественный анализ БАВ.
Экспериментальная часть
Общие экспериментальные условия. Для проведения товароведческого анализа использовали сырье -надземную часть H. corniculata, собранную в районах Республики Бурятия (Селенгинский, Кабанский, Бар-гузинский, Закаменский, Окинский) и в Читинской области в период с 2001 по 2004 г. Анализ проводился в 5 параллельных опытах для цельного, измельченного и порошкованного видов сырья. Отбор проб и проведение анализа проводили в соответствии с требованиями ГФ XI [20]. Масса средней пробы составляла 400 г.
Внешние отличительные признаки устанавливали путем визуального осмотра, с помощью лупы (x10) и бинокуляра (xS, x16). Для анализа цельного растительного сырья готовили микропрепараты листа, стебля, лепестка и чашелистика с поверхности, поперечные срезы листа и стебля по стандартным методикам [20, 21]. При анализе измельченного растительного сырья из аналитической пробы для определения подлинности, измельченности и содержания примесей выбирали крупные кусочки листа, стебля, венчика и чашечки. Из оставшейся части, взятой на анализ пробы, отсеивали фракцию крупного порошка через сито с отверстиями диаметром 2 мм. Готовые препараты изучали под микроскопом МБИ-3 (увеличения 7x1,5x10; 7x1,5x20; 15x1,5x10; 15x1,5x20). Результаты документировали микрофотографиями с помощью фотоаппарата «Зенит» и микрофотонасадки МФН-12.
Качественный анализ проводили с использованием общепринятых методик [22, 23]. БX на бумаге FN-2, TCX - на пластинах Silufol с использованием систем растворителей: I - гексан-этилацетат 2 : 1; II - хлороформ-этанол 19 : 1; III - бензол-этилацетат 2 : 1; IV - хлороформ-этанол-вода 65 : 35 : 5; V - этанол-хлороформ 3 : 7; VI - гексан-этилацетат 7 : 3; VII - бензол-метанол 4 : 1; VIII - гексан-бензол-хлороформ-метанол 5 : 4 : 2 : 1.
Органические кислоты анализировали согласно [24, 25]. Xромaтогрaфический анализ проводили в следующих условиях: тритерпеновые соединения - TCX, сист. I, VII, VIII; кумарины - БX, сист. II; TCX, сист. II и III; иридоиды - TCX, сист. IV и V.
При количественном исследовании применяли следующие методы анализа: у-пироновые соединения - хро-мато-спектрофотометрический [26]; индивидуальные ксантоны, флавоны, тритерпеновые соединения - ВЭЖ^ и TX/MC [27]; органические кислоты - потенциотитриметрический [2S]; дубильные вещества - трилонометриче-ский; алкалоиды - гравиметрический [29]; полисахариды - спектрофотометрический и гравиметрический [30].
Метрологическую обработку результатов осуществляли согласно рекомендациям [20, 31, 32].
Обсуждение результатов
Внешние признаки надземной части H. corniculata. Цельное сырье. Смесь олиственных стеблей с цветками и плодами разной степени развития, отдельных стеблей, цельных и измельченных листьев, цветков, плодов. Стебли зеленовато-бледно-желтые длиной 15-40 см, простые или ветвистые. Прикорневая розетка листьев слабо выражена. Стебли с остатками листьев прикорневой розетки. Стеблевые листья простые, сидячие, с ровным краем, зеленовато-бледно-желтые продолговато-эллиптические. Соцветие широко пирамидально-метельчатое. Цветки четырехчленные длиной S-11 мм, расположенные на пазушных веточках и концах стеблей. Цветоножки неравные, большей частью длиннее цветков. Чашечки почти до основания раздельные, длиной 6-S мм, с ланцетными долями. Венчики ширококолокольчатые, зеленовато-бледно-желтые, до половины раздельные, с продолговатыми тупыми лопастями. Лопасти с длинными, полыми, горизонтально отклоненными нектарниками. Коробочка продолговатая. Запах слабый. Вкус водного извлечения горький.
Измельченное сырье. Кусочки надземной части различной формы, проходящие сквозь сито с диаметром отверстий 7 мм. Цвет зеленовато-бледно-желтый. Запах слабый. Вкус водного извлечения горький.
Порошкованное сырье. Растертое сырье, проходящее сквозь сито с диаметром отверстий 2,0 мм. Цвет зеленовато-бледно-желтый. Запах слабый. Вкус водного извлечения горький.
Микроскопическое исследование надземной части H. corniculata. Цельное сырье. При рассмотрении листа с поверхности с обеих сторон (рис. 1А, Б) видны клетки эпидермиса с прямыми, слабоизвилистыми и извилистыми стенками. С верхней стороны клетки имеют длину 41-133 мкм, ширину 20-67 мкм; с нижней стороны - длину 25-133 мкм, ширину 12-54 мкм. Над жилкой клетки вытянутые прямоугольные и прямоугольно-веретеновидные с прямыми стенками. С верхней стороны листа встречаются сосочковидные выросты, наиболее выраженные в области главной жилки и по краям листа высотой до 67 мкм. Кутикула продольно-морщинистая (с нижней стороны слабо выраженная), в местах сосочковидных выростов складчатость имеет направленность от основания к вершине сосочка. У основания листа по его краям (рис. 1В) помимо сосочковидных выростов (более вытянутых) наблюдаются простые тупоконусовидные 1-3 клеточные волоски до 83 мкм высотой с морщинистой кутикулой. Стенки клеток с верхней стороны местами четковидноутолщены. Устьица овальные, аномоцитного типа, окружены 2-4 околоустьичными клетками. С верхней стороны устьица длиной 33-46 мкм, шириной 25-31 мкм встречаются с частотой 0-26 на 1 мм2; с нижней стороны - длиной 29-42 мкм, шириной 25-31 мкм встречаются с частотой 87-209 на 1 мм2. Лист дорсо-вентрального строения. Мезофилл состоит из 1-2 рядов палисадной паренхимы и губчатой паренхимы, представленной клетками округлой и лопастной формы, образующих воздухоносные полости - аэренхиму. Черешок отсутствует, так как лист сидячий.
При рассмотрении препаратов с поверхности стебля видно, что клетки эпидермиса прямоугольной и прямоугольно-веретеновидной формы с прямыми стенками, вытянуты по длине стебля (длиной 58-233 мкм, шириной 21-42 мкм). Кутикула продольно-морщинистая. В области ребрышек на стебле имеются сосочковидные выросты, где морщинистость кутикулы направлена от основания к вершине сосочка. Устьица овальные аномоцитного типа (длиной 33-40 мкм, шириной 29-40 мкм), окружены 2-4 околоустьичными клетками, имеют частоту встречаемости 0-17 на 1 мм2. На поперечном срезе заметны в корковой паренхиме небольшие воздухоносные полости. Ксилема расположена в виде сплошного кольца и представлена склерен-химными клетками, трахеидами и сосудами. Склеренхима расположена относительно ровными радиальными рядами во вторичной ксилеме и беспорядочно в области первичной ксилемы. Спиральные, лестничные и сетчатые сосуды, перфорация которых обнаруживается на продольных срезах, по одному и группами расположены среди склеренхимных клеток и имеют диаметр 4-29 мкм. Над кольцом ксилемы заметны небольшие вкрапления флоэмы, отделенные от ксилемы камбием. Кроме того, небольшие участки флоэмы наблюдаются с внутренней стороны кольца ксилемы, вблизи от первичной ксилемы, в этом случае камбий отсутствует. Паренхима сердцевины разрушена.
При рассмотрении лепестка (рис. 1Г, Д) с верхней и нижней стороны видно, что клетки эпидермиса имеют прямые и слабоизвилистые стенки по краям и в верхней части лепестка, у основания лепестка стенки клеток ровные и вытянуты по длине лепестка. Длина клеток эпидермиса с верхней стороны 33-92 мкм, ширина - 25-67 мкм; с нижней стороны клетки длиной 25-83 мкм, шириной - 17-50 мкм. С нижней стороны лепестка встречаются устьица аномоцитного типа (длиной 29-33 мкм, шириной 21-29 мкм) с частотой 0-87 на 1 мм2, окруженные 2-4 околоустьичными клетками. На поверхности лепестка имеются сосочковидные выросты до 33 мкм высотой, которые наиболее выражены с верхней стороны и чаще встречаются по краям и у верхушки лепестка. Кутикула продольно-морщинистая, на сосочковидных выростах складчатость кутикулы направлена от основания к вершине сосочка. Структура эпидермиса «рогов» лепестков схожа со структурой всего лепестка, на вершине «рогов» наблюдается обилие сосочковидных выростов. Пыльца округлая и округло-трехгранная шероховатая трехпоровая, диаметром 33-42 мкм (рис. 1Е).
Клетки чашелистика вытянуты по его длине, прямоугольные и прямоугольно-веретеновидные с прямыми и слабоизвилистыми стенками. Длина клеток эпидермиса верхней стороны чашелистика 71-187 мкм, ширина 17-62 мкм. Клетки эпидермиса нижней стороны имеют длину 62-125 мкм, ширину 12-54 мкм. На поверхности чашелистика с обеих сторон и по его краям имеются сосочковидные выросты высотой до 108 мкм (более обильно сосочки встречаются с верхней стороны). Кутикула продольно-морщинистая, на сосочковидных выростах складчатость направлена от основания к вершине сосочков. С обеих сторон чашелистика присутствуют овальные аномоцитного типа устьица (длиной 33-42 мкм, шириной 21-33 мкм), окруженные 2-4 околоустьичными клетками. Частота встречаемости устьиц с верхней стороны 0-139 на 1 мм2, с нижней
- 70-279 на 1 мм2.
Рис. 1. Фрагменты анатомического строения надземной части H. corniculata: А - устьица на нижней эпидерме листа (ув^250); Б - редкие устьица и сосочковидные выросты на верхней эпидерме листа (ув^250); В - сосочковидные выросты по краю листа (ув^250); Г - устьица на нижней эпидерме лепестка цветка (ув^250)
Рис. 1. (Продолжение) Д - сосочковидные выросты по краю лепестка цветка (ув.х250); Е - пыльца (ув.х250)
Измельченное сырье. Наблюдаемые анатомические признаки аналогичны признакам цельного сырья (в микропрепаратах листьев, стеблей, цветков).
Порошкованное сырье. Микропрепараты порошкованного лекарственного сырья под микроскопом представляют собой смесь: обрывков эпидермиса листа с клетками с прямыми, слабоизвилистыми и извилистыми стенками, с устьицами аномоцитного типа, окруженными 2-4 околоустьичными клетками, продольноморщинистой кутикулой с сосочковидными выростами и без них; обрывков стебля с клетками эпидермиса прямоугольной и прямоугольно-веретеновидной формы, продольно-морщинистой кутикулой, с устьицами аномоцитного типа, окруженными 2-4 околоустьичными клетками; обрывков стебля с указанным строением и сосочковидными выростами; обрывков лепестка с клетками эпидермиса со слабоизвилистыми или ровными стенками, с продольно-морщинистой кутикулой и с сосочковидными выростами или без них, с аномо-цитного типа устьицами, окруженными 2-4 околоустьичными клетками или без них; пыльцы округлой трехгранной шероховатой трехпоровой, диаметром 33-42 мкм; обрывков чашелистика с вытянутыми клетками со слабоизвилистыми или прямыми стенками, с сосочковидными выростами или без них, с продольноморщинистой или ровной кутикулой, с овальными аномоцитного типа устьицами, окруженными 2-4 около-устьичными клетками или без них; обрывков края листа, чашелистика и лепестка указанного строения с сосочковидными выростами или одно-трехклеточными простыми тупоконусовидными волосками со складчатостью кутикулы, направленной от основания к вершине сосочков или волосков.
Товароведческий анализ надземной части Н. еоткиШа. На основании проведенного анализа установлены следующие показатели качества сырья (табл. 1).
Цельное сырье. у-пироновых соединений в пересчете на 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон не менее 5%; влажность не более 8%; золы общей не более 8%; золы, нерастворимой в 10% растворе кислоты хлороводородной, не более 4%; листьев побуревших и почерневших не более 4%; органической примеси не более 1%; минеральной примеси не более 0,5%.
Измельченное сырье. у-пироновых соединений в пересчете на 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон не менее 5%; влажность не более 8%; золы общей не более 8%; золы, нерастворимой в 10% растворе кислоты хлороводородной, не более 4%; листьев побуревших и почерневших не более 4%; частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм, не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 0,5 мм, не более 25%; органической примеси не более 1%; минеральной примеси не более 0,5%.
Порошкованное сырье. у-пироновых соединений в пересчете на 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон не менее 5%; влажность не более 8%; золы общей не более 8%; золы, нерастворимой в 10% растворе кислоты хлороводородной, не более 4%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм, не более 30%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 0,25 мм, не более 20%; органической примеси не более 1%; минеральной примеси не более 0,5%.
Фитохимический анализ БАВ надземной части Н. corniculata. При градиентной экстракции сырья были получены следующие извлечения: гексановое (ГФ, 3,35%), хлороформное (ХФ, 3,17%), этилацетатное (ЭАФ, 6,35%), бутанольное (БФ, 30,07%) и водное (ВФ, 8,11%).
При исследовании качественного состава комплекса трикарбоновых кислот хроматографический анализ показал, что он состоит из четырех компонентов, два из которых идентифицированы как яблочная и лимонная кислоты. Доминирующей кислотой является яблочная. Общее содержание органических кислот в надземной части Н. согпкиШа колеблется от 4,99 до 5,51%.
Таблица 1. Результаты товароведческого анализа надземной части Н. согтсиШа (измельченное сырье)
Район и год сбора Суммарное содержание у-пироновых соединений в пересчете на 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон, % Влажность, % Зола общая, % Зола, нерастворимая в 10% НС1, % Листья побуревшие и почерневшие, % Частицы, не проходящие сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм, % Частицы, проходящие сквозь сито с отверстиями диаметром 0,5 мм, % Органическая примесь, % % % Л с ме и пр 3 н ь ра
Селенгинский 2001 9,22 7,39 6,25 2,80 0,94 3,30 21,15 0,65 0,09
Селенгинский 2002 7,86 6,78 5,80 2,62 2,98 3,81 23,94 0,32 0,15
Кабанский 2002 5,96 6,66 4,73 1,96 3,45 4,02 17,65 0,58 0,26
Баргузинский 2002 8,58 7,30 5,52 2,53 1,69 3,64 23,82 0,52 0,24
Селенгинский 2003 5,80 7,25 5,33 2,13 3,16 3,88 19,56 0,35 0,13
Читинская область 2003 8,53 7,34 6,60 3,09 1,75 3,72 23,92 0,67 0,20
Окинский 2004 9,05 7,58 4,73 2,07 0,86 3,50 23,75 0,75 0,13
Закаменский 2004 10,69 7,20 5,44 2,37 0,58 2,68 20,97 0,39 0,08
БФ и ВФ дают положительные реакции осаждения с общими реактивами на дубильные вещества. Установлено наличие гидролизуемых дубильных веществ (положительная нитритная реакция) и конденсированных дубильных веществ (положительная реакция с железо-аммонийными квасцами). Содержание дубильных веществ в надземной части Н. сотгси1а(а составляет 0,98-1,15%.
Предварительный анализ надземной части Н. сотгси1а(а показал, что хлороформное и этанольное извлечения дают положительные реакции на алкалоиды (реакции осаждения с реактивами Бушарда, Драгендорфа и с растворами танина, пикриновой, фосфорномолибденовой, кремневольфрамовой кислот). В литературе известны случаи выделения алкалоидов в виде артефактов при обработке растительного сырья аммиаком [33-36], поэтому количественное определение алкалоидов в данном виде сырья проводили с использованием аммиака и гидроксида натрия. Установлено, что надземная часть Н. сотгси1а(а содержит 0,14-0,19% (при обработке сырья гидроксидом натрия) и 0,29-0,33% (при обработке аммиаком) алкалоидов.
С помощью методов ВЭЖХ и ГХ/МС установлено, что в состав ГФ, ХФ и ЭАФ Н. сот1сыШа входит не менее 13 компонентов у-пироновой природы, и определено количество доминирующих ксантонов и флаво-ноидов (табл. 2). Содержание у-пиронов в надземной части Н. сотгси1а(а колеблется от 5,80 до 10,69%.
ХФ и БФ Н. согпкиШа дают положительную реакцию на тритерпеновые соединения. Хроматографический анализ показал, что в состав данных фракций входит олеаноловая кислота (Я/ 0,55, сист. I). Установлено (ГХ/МС), что надземная часть Н. сотгси1а(а содержит 1,30-1,50% олеаноловой кислоты.
Полисахариды Н. сотгси1а(а выделяли по схеме Бэйли-Кизеля [37]. В результате получены фракции спирторастворимых углеводов, водорастворимых полисахаридов, пектиновых веществ и гемицеллюлоз. Данные количественного анализа полисахаридов в надземной части Н. согпкиШа спектрофотометрическим и гравиметрическим методами представлены в таблице 2.
ХФ дает положительную реакцию Паули, щелочную и лактонную пробы на присутствие кумаринов. Хроматографический анализ показал, что в ХФ Н. согпкиШа присутствует не менее 6 веществ кумариновой природы, три из которых идентифицированы как умбеллиферон (Я/0,34, сист. II; Я/ 0,36, сист. III), скополетин (Я/0,46, сист. II; Я/ 0,22, сист. III) и фраксинол (Я/ 0,70, сист. II; Я/ 0,52, сист. III).
Этанольное извлечение Н. сотгси1а(а дает положительные реакции Бэкон-Эдельмана и Година на ири-доиды. Методом ТСХ установили, что в данном извлечении присутствует не менее 3 компонентов, проявляющихся указанными реактивами (Я/ 0,22, 0,62, 0,85, сист. IV; Я/ 0,09, 0,33, 0,60, сист. V).
Результаты качественного и количественного анализа надземной части Н. согтсиЫа приведены в таблице 2.
Таблица 2. Химический состав БАВ надземной части Н. еогтеиіаґа
Группа БАВ Компоненты Содержание, % абс.-сухое сырье
яблочная, лимонная
Органические кислоты общее содержание свободные кислоты 4,99-5,51 2,20-2,44
связанные кислоты 2,78-3,08
Дубильные вещества 0,98- -1,15
Алкалоиды,
выделенные с МаОН 0,14-0,19
выделенные с МН3 0,29-0,33
общее содержание 5,80-10,69
1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон 1,64-2,11
у-пироновые соединения 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантон лютеолин 0,87-1,08 2,42-2,49
апигенин 0,38-0,40
цинарозид 0,20-0,22
Тритерпеновые соединения олеаноловая кислота 1,30- -1,50
СФМ ГМ
спирторастворимые углеводы 12,45-13,45
Полисахариды водорастворимые полисахариды 2,53-2,92 2,90-3,33
пектиновые вещества 3,56-3,71 5,44-6,08
гемицеллюлозы 0,50-0,57 5,61-6,61
Кумарины умбеллиферон, скополетин, фраксинол
Иридоиды, каротиноиды обнаружены
Антраценпроизводные, сердечные гликозиды не обнаружены
Стандартизация надземной части Н. еогпжаШа. Согласно требованиям к нормативной документации на растительное сырье фармакопейная статья должна предлагать методики качественного обнаружения и количественного определения БАВ.
Проведенные фармакологические исследования индивидуальных ксантонов и флавонов надземной части Н. сотгси1а(а показали их выраженную желчегонную и гепатопротекторную активность [38], поэтому в качестве действующих веществ нами были выбраны у-пироновые соединения.
Для определения подлинности надземной части Н. согпкиШа предложено хроматографическое определение ксантонов (ТСХ, сист. VI, детектор: 5% раствор А1С13 в 95% спирте этиловом - на хроматограмме должно быть не менее четырех пятен желтого цвета - Я/ 0,20, 0,29, 0,42, 0,50).
Для количественного определения суммарного содержания у-пироновых соединений нами разработан хроматоспектрофотометрический метод. В качестве стандартного вещества выбран 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон
- доминирующий компонент у-пироновых соединений, максимум полосы поглощения УФ-спектра которого (260±1 нм) близок к таковым доминирующих 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона (257±2 нм), лютеолина (253±1 нм) и максимуму спиртового извлечения сырья после гидролиза (254±1 нм) (рис. 2).
Рис. 2. Спектры поглощения 1-гидрокси-
2.3.4.5-тетраметоксиксантона (1), 1-гидрокси-
2.3.5-триметоксиксантона (2), лютеолина (3) и спиртового извлечения из надземной части
Н. согпкиШа после гидролиза (4)
В качестве аналитической длины волны была выбрана точка при 254 нм, располагающаяся между значениями экстремальных точек УФ-спектров ксантонов, флавона и спиртового извлечения.
Метрологические характеристики методики представлены в таблице 3.
По материалам проведенных исследований разработана и составлена следующая нормативная документация: проекты фармакопейных статей предприятия на сырье, а также на стандартные образцы 1-гидрокси-
2,3,5-триметоксиксантона и 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона.
Таблица 3. Метрологические характеристики методики количественного определения суммарного содержания у-пироновых соединений в надземной части H. comiculata
f x S2 Sx P t(p,f) ±Д x E
9 6,53 Q,1156 Q,1Q75 95% 2,26 Q,24 3,72
Выводы
В ходе исследования надземной части галении рогатой (Halenia corniculata; сем. Gentianaceae) впервые проведен ее морфологический и микроскопический анализ. Установлены морфолого- и анатомодиагностические признаки. Характерными стабильными анатомо-диагностическими признаками являются характер клеток эпидермиса листа, стебля, лепестка, чашелистика; сосочковидные выросты с продольноморщинистой кутикулой на эпидермисе листа, стебля, лепестка, чашелистика; вытянутые сосочковидные выросты, а также простые тупоконусовидные 1-3 клеточные волоски с морщинистой кутикулой по краю листа; устьица овальные, аномоцитного типа, расположенные на эпидермисе листа, стебля, чашелистика с обеих сторон и на эпидермисе лепестка с нижней стороны; дорсовентральное строение листа; наличие аэренхимы в структуре листа и стебля.
Установлено, что в состав надземной части H. corniculata входят различные группы БАВ: у-пироновые соединения (ксантоны, флавоноиды), дубильные вещества, алкалоиды, тритерпеновые соединения, полисахариды, органические кислоты, кумарины, иридоиды.
В ходе товароведческого анализа определены числовые показатели сырья.
Разработана нормативная документация на надземную часть H. corniculata.
Список литературы
1. Recio-Iglesias M.-C., Marston A., Hostettmann K. Xanthones and secoiridoid glucosides of Halenia corniculata // Phytochemistry. 1992. V. 31. P. 1387-1389.
2. Растительные ресурсы СССР. Т. 5: Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства Caprifociaceae - Plantaginaceae. Л., 1990. 328 с.
3. Гроссгейм А.А. Семейство Горечавковые - Gentianaceae. Флора СССР. М.; Л., 1952. 103 с.
4. Грубов В.И. Определитель сосудистых растений Монголии. Л., 1982. 303 с.
5. Данзан-Пунцок. Шэлпхрэнг. Ксилограф на тибетском языке. Агинский дацан, 1763.
6. Дэсрид Санчжай-Чжамсо. Вайдурья-онбо. Ксилограф на тибетском языке. Агинский дацан, 1688-1689.
7. Телятьев В.В. Целебные клады. Иркутск, 1991. 400 с.
8. Кудрин А.Н., Николаев С.М., Лоншакова К.С., Самбуева З.Г. Мембраностабилизирующее действие раститель-
ных фенолов // Тез. докл. 5-го съезда фармакологов УССР. Запорожье, 1985. С. 86-87.
9. Танхаева Л.М., Николаева Г.Г., Глызин В.И., Пинчук И.Н. Производные гамма-пирона // Химия природных соединений. 1984. №6. С. 788-789.
10. Танхаева Л.М., Пуреб О., Комиссаренко Н.Ф., Николаева Г.Г., Одонтуяа Г. Ксантоны Halenia corniculata (L.)
Cornaz из Монголии // Растительные ресурсы. 1995. Т. 31. Вып. 1. С. 57-61.
11. Purev O., Odontuya G., Oyun H., Tankhaeva L.M., Nasreen A., Atta-ur-rahman. Xanthones of Halenia corniculata. Part I // Natural Product Letters. 1995. V. 5. P. 261-268.
12. Odontuya G., Purev O., Davaa-sambuu G., Nasreen A., Atta-ur-rahman Xanthones of Halenia corniculata. Part II // Natural Product Letters. 1995. V. 5. P. 269-273.
13. Rodriguez S., Wolfender J.-L., Odontuya G., Purev O., Hostettmann K. Xanthones, secoiridoids and flavonoids from Halenia corniculata // Phytochemistry. 1995. V. 40. P. 1265-1272.
14. Rodriguez S., Wolfender J.-L., Hostettmann K., Odontuya G., Purev O. Corniculoside, a new biosidic ester secoiridoid from Halenia corniculata // Helvetica Chimica Acta. 1996. V. 79. P. 363-370.
15. Odontuya G., Kojima K., Rodriguez S., Purev O., Ogihara Y., Hostettmann K. Xanthones from Halenia corniculata // Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 1998. V. 46. P. 1827-1828.
16. Пуреб О., Одонтуяа Г., Хишгээ Д., Оюун Х., Танхаева Л.М., Николаева Г.Г., Комиссаренко Н.Ф. Флавоноиды Halenia corniculata (L.) Comaz и Lomatogonium rotatum (L.) Fries ex Fem. (Монголия) // Растительные ресурсы. 1994. Т. 30. Вып. 1-2. С. 148-151.
17. Карпович В.Н. Фитохимическое исследование забайкальских видов Горечавковых // Вопросы фармакогнозии. 1960. Т. 12. С. 201-208.
18. Патент № 2264211 РФ. Способ получения 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона, обладающего желчегонным и гепатопротекторным действием / Михайлова Т.М., Танхаева Л.М., Самбуева З.Г., Оленников Д.Н., Цыренжа-пов А.В., Николаева Г.Г., Николаев С.М., Бодоев Н.В. // 20.11.2005 г.
19. Патент № 2178302 РФ. Способ получения 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона, обладающего желчегонным и гепатопротекторным действием / Танхаева Л.М., Николаева Г.Г., Даргаева Т.Д., Цыренжапов А.В., Николаев С.М., Убеева И.П., Самбуева З.Г. // 20.01.2002 г.
20. Государственная фармакопея СССР. XI издание. Т. 1. М., 1987.
21. Долгова А.А., Ладыгина Е.Я. Практикум по фармакогнозии. М., 1966. 312 с.
22. Методы биохимического анализа растений / Ред. В.В. Полевой, Г.Б. Максимов. Л., 1978. 401 с.
23. Методы биохимического исследования растений / Ред. А.И. Ермаков. Л., 1987. 355 с.
24. Оленников Д.Н., Танхаева Л.М., Михайлова Т.М., Samuelsen A.B. Органические кислоты лекарственных растений. 1. Plantago major L. // Химия природных соединений. 2005. №4. С.354-355.
25. Оленников Д.Н., Танхаева Л.М., Николаева Г.Г., Николаев С.М., Рохин А.В., Кушнарев Д.Ф. Биологически активные вещества листьев Cacalia hastata L. Сообщение 3. Органические кислоты // Химия природных соединений. 2004. №3. С.270-271.
26. Михайлова Т.М., Оленников Д.Н., Танхаева Л.М. Ксантоны Halenia corniculata. Сообщение 2. Методика количественного определения суммарного содержания у-пироновых соединений в надземной части Halenia cornicu-lata // Химия природных соединений. 2005. №3. С. 245-247.
27. Михайлова Т.М., Шульц Э.Э., Танхаева Л.М., Николаева Г.Г., Бодоев Н.В., Толстиков Г.А. Биологическая активность фенольных соединений, выделенных из галении рогатой (Halenia corniculata (L.) Cornaz) // Химия в интересах устойчивого развития. 2005. №3. С. 411-415.
28. Оленников Д.Н., Танхаева Л.М., Николаева Г.Г., Маркарян А.А. Методика количественного определения суммарного содержания органических кислот в растительном сырье // Растительные ресурсы. 2004. Т. 40. Вып. 3. С. 112-117.
29. Химический анализ лекарственных растений / Ред. Н.И. Гринкевич, Л.Н. Сафронич. М., 1983. 221 с.
30. Оленников Д.Н., Танхаева Л.М. Разработка технологии получения экстракта подорожника большого сухого // Химия растительного сырья. 2006. №1. С. 49-54.
31. Александров Ю.И., Беляков В.И. Погрешность и неопределенность результата химического анализа // Журнал аналитической химии. 2002. Т.57. №2. С.118-129.
32. Дерффель К. Статистика в аналитической химии. М., 1994. 267 с.
33. Толкачев О. Н., Шавлинский А.Н. Алкалоиды - артефакты и условия, способствующие их образованию // Сборник научных трудов ВИЛР, Москва, 1983.
34. Govindachari T.R., Sathe S.S., Viswanathan N. Gentianine, an artifact in Enicostemma littorale // Indian Journal of Chemistry. 1966. V. 4. №4. P. 201-202.
35. Kubota T., Tomita V. Derivation of gentianin from swertiamarin // Tetrahedron Letters. 1961. №14. P. 453-454.
36. Kubota T., Kamikawa. Derivation of gentianin from gentiopicrin // Bulletin of Chemical Society of Japan. 1962. V. 35. №6. P. 1046.
37. Оленников Д.Н., Танхаева Л.М., Николаева Г.Г., Цыренжапов А.В., Николаев С.М., Чехирова Г.В. Биологически активные вещества листьев Cacalia hastata L. Сообщение 1. Углеводы листьев Cacalia hastata L. и их ги-погликемическая активность // Химия природных соединений. 2004. №1. С.4-9.
38. Самбуева З.Г., Цыренжапов А.В., Николаев С.М., Убеева И.П. и др. Сравнительная характеристика желчегонных и гепатопротекторных свойств отвара и ксантоновых соединений Halenia corniculata (L.) Cornaz и зависимость эффективности последних от их структуры // Растительные ресурсы. 2000. Т. 36. Вып. 3. С. 70-77.
Поступило в редакцию 4 июля 2006 г.
После переработки 8 августа 2006 г.
